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【発明の名称】 アディポネクチン産生促進剤
【発明者】 【氏名】太田 光熙

【氏名】谷口 雅彦

【氏名】小笠原 和也

【氏名】大西 克典

【氏名】井上 賢一
【要約】 【課題】優れたアディポネクチン産生促進剤を提供すること。

【構成】本発明は、カルコン類を有効成分とするアディポネクチン産生促進剤を提供する。カルコン類としてアシタバ黄汁を用いることが特に好ましい。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルコン類を有効成分とする、アディポネクチン産生促進剤。
【請求項２】
カルコン類を含有するアシタバ黄汁を有効成分とする、アディポネクチン産生促進剤。
【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、アディポネクチン産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
アディポネクチン（Ａｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎ）は、２４４個のアミノ酸からなる脂肪組織から分泌されるホルモンであり、骨格筋および肝臓において、ＡＭＰキナーゼ（ＡＭＰ-activated protein kinase：ＡＭＰＫ）を活性化することによって、脂肪の燃焼および糖の取り込みを促進することが知られている。このアディポネクチンは、小型脂肪細胞において多く分泌されるが、脂肪細胞が肥大化すると、その分泌量が減少することが知られている。
【０００３】
アディポネクチンはまた、動脈硬化を抑制する善玉アディポサイトカインとして知られている。アディポサイトカインには、上記善玉アディポサイトカインの他、ＰＡＩ−１、ＴＮＦ−αなどの動脈硬化を促進させる悪玉アディポサイトカインがある。正常な状態においては、これらの善玉および悪玉アディポサイトカインの分泌量はバランスが保たれている。しかし、肥満などにより、脂肪細胞が肥大化すると、善玉アディポサイトカインの分泌量が減少する一方、悪玉アディポサイトカインが過剰に分泌される。その結果、両者のバランスが崩れ、２型糖尿病、動脈硬化症などの生活習慣病を発症する原因になると考えられている。
【０００４】
このように、アディポネクチンは、肥満および肥満に伴う生活習慣病に関与し、このアディポネクチンを活性化することが、生活習慣病の予防または治療に有効であると考えられている。さらに、アディポネクチンは、肝線維化抑制効果、正常肝細胞増殖促進効果（特許文献１）、抗炎症効果（特許文献２）などを有することも知られている。
【０００５】
このような背景の下、アディポネクチンの産生を促進する薬剤として、チアゾリジン誘導体が知られている。しかし、このチアゾリジン誘導体は、下痢、便秘、吐き気などの消化器症状、肝臓障害などの副作用を伴う場合がある。
【０００６】
さらに、アディポネクチンの産生を促進する化合物または成分がいくつか提案されている。例えば、特許文献３には、Ｎ−アセチルシステインが脂肪細胞のアディポネクチンの発現量を増加させること、そしてアポサイニンが血漿中のアディポネクチン濃度を上昇させ、かつ脂肪組織中のアディポネクチンの発現量を増加させることが開示されている。特許文献４にはジンゲロール化合物が、そして特許文献５にはアムラー果実またはその抽出物がアディポネクチンの産生を増強させることが開示されている。しかし、これらのアディポネクチン産生促進効果は十分とはいえない。
【０００７】
これら以外にも、優れたアディポネクチンの産生を促進する物質が望まれている。
【特許文献１】特開２００２−３６３０９４号公報
【特許文献２】特開２０００−２５６２０８号公報
【特許文献３】特開２００５−２３２０５９号公報
【特許文献４】特開２００６−４５２１０号公報
【特許文献５】特開２００６−５６８３６号公報
【非特許文献１】馬場きみ江ら、Foods & Food Ingredients Journal of Japan, １９９８年、Ｎｏ．１７８、ｐ．５２−６０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、優れたアディポネクチン産生促進剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、優れたアディポネクチン産生促進効果を有する物質について鋭意検討した結果、カルコン類、特にアシタバに由来するカルコン類が、アディポネクチン産生促進効果に優れることを見出して、本発明を完成するに至った。
【００１０】
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とする。
【００１１】
本発明のアディポネクチン産生促進剤はまた、カルコン類を含有するアシタバ黄汁を有効成分とする。
【発明の効果】
【００１２】
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とし、優れたアディポネクチン産生促進効果を有する。この効果は、他のポリフェノール化合物（例えば、エピカテキンガレート、カテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレートなど）に比べて特に優れている。本発明のアディポネクチン産生促進剤は、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状、例えば、糖尿合併症（糖尿病網膜症、糖尿病神経障害、糖尿病性腎症など）、脳梗塞、心筋梗塞、腎硬化症などの改善、治療、または予防に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とする。カルコン類とは、植物に含有される天然色素であって、ベンザルアセトフェノンオキシ誘導体に属する黄色色素である。カルコン類としては、キサントアンゲロールまたは４−ヒドロキシデリシンが特に好適に用いられる。カルコン類は、単独で用いてもよく、２以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１４】
カルコン類は、カルコン類を含有する植物、例えばアシタバから上記キサントアンゲロール、４−ヒドロキシデリシンなどのカルコン類を単離し、またはこのような化合物を合成して用いられる。あるいは、カルコン類を含有する植物、この植物からの樹液、抽出液、それらの加工品などをそのまま利用してもよい。カルコン類を含有する植物として、キサントアンゲロールおよび４−ヒドロキシデリシンを多く含む点から、アシタバが好適に用いられる。アシタバの樹液（特にアシタバ黄汁）を用いることが特に好ましい。
【００１５】
アシタバ（Angelica keiskei）は、わが国固有のセリ科の植物であり、房総半島、伊豆半島、三浦半島、伊豆諸島、大島、八丈島などに自生している。アシタバは、大きな羽状の三つ葉を有し、茎は太く、栽培を開始してから３年目の白い花が咲く頃には、１５０ｃｍほどの高さに成長する。なお、本明細書および特許請求の範囲において、「アシタバ」というときは、セリ科Angelica属に属し、上記形質および性質を有しており、「明日葉」、「あしたば」などと標記される植物も含む。
【００１６】
本発明において、アシタバ黄汁とは、発芽してから開花前までのアシタバの茎から滲出してくる黄色の樹液をいう。この色は上記カルコン類に由来する。アシタバ黄汁は、例えば、開花前のアシタバの茎を切断して滲出した樹液を回収することによって得られる。このアシタバ黄汁には、キサントアンゲロール、４−ヒドロキシデリシンなどの約１０種類のカルコン類が約０．５〜１１質量％含まれている。特にキサントアンゲロールおよび４−ヒドロキシデリシンが合計で０．５〜１０質量％含まれている。これらのアシタバ黄汁由来のカルコン類は、抗菌作用、抗潰瘍・胃酸分泌抑制作用、トロンボプラスチンＡ２生成阻害作用、抗アレルギー作用などを有することが報告されている（非特許文献１）。
【００１７】
上記アシタバ黄汁は、必要に応じて、濾過、加熱殺菌などの処理を行ってもよい。加熱殺菌処理としては、当業者が通常行う方法が適用される。例えば、熱湯中に樹液が入った容器を浸漬し、容器内の樹液の温度が熱湯の温度と同じになってから数時間放置してもよく、あるいはオートクレーブで処理してもよい。加熱処理によりアディポネクチン産生促進効果は低下しないので、保存を考慮すると、加熱殺菌処理は有用である。
【００１８】
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、上記カルコン類を有効成分とし、必要に応じて種々の添加剤を含有する。本発明のアディポネクチン産生促進剤は、医薬品、食品、飼料などとして利用される。
【００１９】
本発明のアディポネクチン産生促進剤を医薬品として用いる場合、その形態は特に制限されない。経口投与剤（経口固形製剤および経口液状製剤）および非経口投与剤のいずれにおいても利用可能である。
【００２０】
上記経口固形製剤としては、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、除放剤などが挙げられる。このような経口固形製剤は、例えば、賦形剤（デキストリン、乳糖、結晶セルロース、二酸化ケイ素、環状オリゴ糖、デンプン、乳糖、白糖、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムなど）、結合剤（デンプン、アラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、アルギン酸、ゼラチン、ポリビニルピロリドンなど）、滑沢剤（ステアリン酸、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸カルシウムなど)、崩壊剤（カルボキシメチルセルロース、タルクなど）などと混合して常法により調製することができる。例えば、アシタバ黄汁と賦形剤とを、好適には、質量比で７：３〜５：５の割合で混合し、乾燥することによりカルコン類含有粉末（散剤）を得ることができる。混合には、均一な混合を行うために、エタノールなどの適当な溶媒を加えることも可能である。さらに、必要に応じて、オートクレーブ中で１２０℃程度の温度で２０分程度殺菌してもよい。
【００２１】
上記経口液状製剤としては、乳化剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。この経口液状製剤は、例えば、カルコン類、アシタバ黄汁、上記カルコン類含有粉末などを、水または水以外の薬学的に許容し得る溶媒に溶解または分散させ、必要に応じて、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、安定剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤などを添加し、通常の方法により調製される。
【００２２】
上記非経口投与剤としては、注射剤、経皮吸収製剤、坐剤などが挙げられる。例えば、注射剤の場合、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（オリーブ油）、アルコール類（エチルアルコール）、ポリソルベート８０などで希釈し、必要に応じて、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解補助剤などを添加して調製される。
【００２３】
本発明のアディポネクチン産生促進剤を医薬品として利用する場合の投与量はその目的、投与対象者により適宜設定される。例えば、成人の体重１ｋｇに対して、カルコン類が、好ましくは０．０００１〜１０ｍｇ／日、より好ましくは０．０１〜１ｍｇ／日の割合となるように設定される。特に経口投与剤の場合は０．１〜１０ｍｇ／日、非経口投与剤の場合は０．０１〜１ｍｇ／日の割合となるように設定することが好ましい。
【００２４】
本発明のアディポネクチン産生促進剤を食品として利用する場合、その形態は、溶液、懸濁物、粉末、固体成形物などの経口摂取可能であればよく、特に制限されない。具体的には、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ用食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレーシチューなどの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；冷凍食品、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品などの水産加工品；畜肉ハム・ソーセージなどの畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆、シリアルなどの農産加工品；栄養食品；錠剤；カプセル剤などが挙げられる。
【００２５】
食品の調製は、例えば、上記カルコン類またはアシタバの樹液（特にアシタバ黄汁）を飲料に含有させるか、あるいはビスケットのような固形の食品に含有させて健康食品あるいは機能性食品などとすることにより行われる。必要に応じて、栄養成分、希釈剤（油脂、エタノール、プロピレングリコール、グリセリンなど）、バインダー（アラビアガム、デキストリンなど）、安定剤、保存料などが用いられる。
【００２６】
上記栄養成分としては、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ナイアシン（ニコチン酸）、パントテン酸、葉酸などのビタミン類；リジン、スレオニン、トリプトファンなどの必須アミノ酸；カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、銅などのミネラル類；α−リノレン酸；ＥＰＡ；ＤＨＡ；月見草油；オクタコサノール；カゼインホスホペプチド（ＣＰＰ）；カゼインカルシウムペプチド（ＣＣＰ）；水溶性食物繊維；不溶性食物繊維；オリゴ糖などが挙げられる。栄養成分は単独で用いてもよく、２以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２７】
本発明のアディポネクチン産生促進剤を食品として利用する場合の摂取量は、例えば、成人の体重１ｋｇに対して、カルコン類が、０．１〜１０ｍｇ／日の割合となるように設定することが好ましい。上記摂取量は、体調および食品の形態に応じて、１日当たり１回の割合で摂取してもよいし、あるいは数回にわけて摂取してもよい。
【００２８】
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、糖質代謝、脂質代謝などの重要な調節因子である、アディポネクチンの分泌を促進させ、体内、特に血中のアディポネクチン量を増加させる。このアディポネクチン産生促進効果は、他のポリフェノール化合物（例えば、エピカテキンガレート、カテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレートなど）に比べて特に優れている。本発明のアディポネクチン産生促進剤は、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状、例えば、糖尿合併症（糖尿病網膜症、糖尿病神経障害、糖尿病性腎症など）、脳梗塞、心筋梗塞、腎硬化症などの改善、治療、または予防に有効である。本発明のアディポネクチン産生促進剤は、医薬品、食品などとして利用される。
【実施例】
【００２９】
以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明はこの実施例に制限されることはない。
【００３０】
（調製例：キサントアンゲロールおよび４−ヒドロキシデリシンの調製）
アシタバ黄汁１０ｇに、酢酸エチル１０ｇを加えてよく振盪した後、静置して水層と酢酸エチル層とに分離した。酢酸エチル層を分取し、エバポレーターにて減圧濃縮して約１ｇの濃縮物を得た。この濃縮物を液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析したところ、１３．７分付近に４−ヒドロキシデリシンの鋭いピークが見られ、１６．２分付近にキサントアンゲロールの鋭いピークが見られた。これらのカルコン類の含有量を算出したところ、４−ヒドロキシデリシンが１２６．６１ｍｇ／ｇ濃縮物およびキサントアンゲロールが２５０．２４ｍｇ／ｇ濃縮物であった。なお、ＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。
【００３１】
（液体クロマトグラフィーの条件）
カラム： ＳＴＲ−ＯＤＳＩＩ（４．６ｍｍ Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ Ｌ、信和化工株式会社）
移動相： ８０％（ｖ／ｖ）メタノール
カラム温度： ５０℃
流速： ０．９ｍＬ／分
インジェクション量：１０μＬ
【００３２】
得られた濃縮物を、５ｍＬのｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの混合液（容量比（容積比）５：１）に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて４−ヒドロキシデリシンおよびキサントアンゲロールを分離した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件は以下のとおりである。
【００３３】
（シリカゲルカラムクロマトグラフィーの条件）
カラムサイズ：２５ｍｍ Ｉ．Ｄ．×８００ｍｍ Ｌ
シリカゲル： ＰＳＱ１００Ｂ（富士シリシア化学株式会社）
移動相： ｎ−ヘキサンと酢酸エチルとの混合液（容量比（容積比）５：１）
流速： ８ｍＬ／分（自然落下）
温度： 室温
【００３４】
得られた４−ヒドロキシデリシンの画分は、乾燥質量で１１８ｍｇであり、キサントアンゲロールの画分は、乾燥質量で２４６ｍｇであった。
【００３５】
さらに、これらの画分を、ＳＣＬ−１０Ａシステム（株式会社島津製作所）を用いてＯＤＳカラムクロマトグラフィーで精製した。ＯＤＳカラムクロマトグラフィーの条件は以下のとおりである。
【００３６】
（ＯＤＳカラムクロマトグラフィーの条件）
カラム： ＳＴＲ−ＯＤＳＩＩ（２０．０ｍｍ Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ Ｌ、信和化工株式会社）
移動相： ４−ヒドロキシデリシン分離時は９０％（ｖ／ｖ）メタノール、キサントアンゲロール分離時は８５％（ｖ／ｖ）メタノールを使用
カラム温度： ５０℃
流速： ８．０ｍＬ／分
インジェクション量：１００μＬ
【００３７】
得られた精製物をロータリーエバポレーターにて乾固し、４−ヒドロキシデリシン精製物６６ｍｇおよびキサントアンゲロール精製物１３８ｍｇを得た。これらの精製物をＨＰＬＣで上記と同様の条件で分析したところ、純度はいずれも９９％以上であった。
【００３８】
（実施例１：キサントアンゲロールによるアディポネクチン産生促進効果の検討）
（１）３Ｔ３−Ｌ１細胞の培養および継代培養
３Ｔ３−Ｌ１細胞（マウス繊維芽細胞）を、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコ改変イーグル培地（ＦＣＳ−ＤＭＥＭ）で集蜜的な状態（confluent）に達するまで培養した後、培養シャーレ内の培地を除去し、ＰＢＳ（−）で２回洗浄した。その後、0.1%trypsin-EDTA溶液を加えて細胞をシャーレ底面より剥離し、この剥離した細胞および0.1%trypsin-EDTA溶液を遠沈管に移した。これに等容量の１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭを加え、１１００ｒｐｍにて５分間遠心分離を行った。上清をデカンテーションで除去し、新しい１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭを加え、さらに１１００ｒｐｍにて５分間遠心分離を行う操作を２回繰り返した。その後、細胞を１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭ中に均一化させ、シャーレに播種し、ＣＯ２インキュベーターに入れて５％ＣＯ２条件下、３７℃にて培養した。
【００３９】
（２）脂肪細胞への分化誘導
３Ｔ３−Ｌ１細胞を１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭ中で培養し、集蜜的な状態（confluent）に達した日から２日後に、分化培地１に培地交換してさらに２日間培養した。次いで、分化培地２に培地交換して２日間培養した後、さらに１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭに培地交換し、９０％以上の細胞に油滴が確認される状態になるまで４〜６日間培養して分化を誘導した。なお、分化培地１および２およびこれらの調製方法は、以下の通りである。
【００４０】
分化培地１は、１０％ＦＣＳ、０．５ｍＭイソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）、１μＭデキサメタゾン（ＤＥＸ）、および１μＭインスリンを含むＤＭＥＭである。分化培地１の調製は、１００μＭインスリンと、５００ｍＭ ＩＢＭＸと、１ｍＭ ＤＥＸとの混液を１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭで希釈することによって行った。
【００４１】
分化培地２は、１０％ＦＣＳおよび１μＭインスリンを含むＤＭＥＭである。分化培地２の調製は、１００μＭインスリンを１０％ＦＣＳ−ＤＭＥＭで希釈することによって行った。
【００４２】
（３）アディポネクチン産生促進効果の評価
脂肪細胞への分化が完了した後、０．５％ＢＳＡ−ＤＭＥＭに培地交換して、２４時間培養した。その後、調製例で得られたキサントアンゲロール精製物を希釈系列（０μＭ、０．０１５９μＭ、０．１５９μＭ、および１．５９μＭ）で添加して、さらに３７℃にて２４時間インキュベートした。培養上清を採取して、上清中のアディポネクチン量を以下のアディポネクチンＥＬＩＳＡ測定法を用いて測定した。
【００４３】
まず、洗浄緩衝液（５０ｍＭトリス塩酸塩、２００ｍＭ塩化ナトリウム、１０ｍＭ塩化カルシウム、および０．２％トリトンＸ１００含有（ｐＨ７．０））、ブロッキング緩衝液（１０ｍＭ炭酸水素ナトリウム、１０ｍＭ炭酸ナトリウム、および０．５％ＢＳＡ含有（ｐＨ９．３））、および試料緩衝液（ＢＳＡを１％含む洗浄緩衝液）を調製した。
【００４４】
次いで、９６穴マイクロタイタープレートの各ウェルに、固相化抗アディポネクチンＩｇＧ抗体溶液（Ｒ＆Ｄ社、１０ｍＭ炭酸緩衝液で０．２５μｇ／ｍＬに希釈）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら２時間保持して吸着させた。ウェルをブロッキング緩衝液２００μＬ／ｗｅｌｌで２回洗浄した後、さらにブロッキング緩衝液２００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて室温にて緩やかに振盪させながら１時間保持して非特異的結合部分をブロックした。ブロッキング緩衝液を捨て、上記培養上清を、試料緩衝液で希釈した希釈検体を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら２時間反応させた。ウェルを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ビオチン標識抗体希釈溶液（Ｒ＆Ｄ社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら１時間反応させた。ウェルを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ストレプトアビジン−ＨＲＰ希釈溶液（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス株式会社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて、室温にて緩やかに振盪させながら１時間反応させた。そしてウェルを洗浄緩衝液で４回洗浄した後、ＴＭＢ発色液（Kirkegaad & Perry Laboratories社）を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて約２０分間反応させた。その後、１．７Ｍ リン酸を１００μＬ／ｗｅｌｌずつ加えて反応を停止させ、プレートリーダーを用いて４５０ｎｍおよび６２０ｎｍ（ブランク用）の波長にて吸光度を測定した。
【００４５】
得られた希釈検体の吸光度からアディポネクチン量を算出した。なお、算出に際して、上記希釈検体の代わりに、スタンダード溶液（Pepro Tech社、アディポネクチン０〜４０００ｐｇ／ｍＬ）を用いて吸光度を測定し、これらの吸光度から作成した検量線を用いた。上記測定を４回行い、アディポネクチン量の平均値および標準偏差を求めた。結果を図１に示す。
【００４６】
（実施例２：４−ヒドロキシデリシンによるアディポネクチン産生促進効果の検討）
キサントアンゲロールの代わりに、調製例で得られた４−ヒドロキシデリシン精製物を０μＭ、０．０１８５μＭ、０．１８５μＭ、および１．８５μＭの希釈系列で用いたこと以外は、実施例１と同様にして、培養上清中のアディポネクチン量を測定し、平均値および標準偏差を求めた。結果を図２に示す。
【００４７】
（比較例１〜４）
キサントアンゲロールの代わりに、エピカテキンガレート、カテキン、エピガロカテキン、およびエピガロカテキンガレートをそれぞれ各希釈系列で用いたこと以外は、実施例１と同様にして、培養上清中のアディポネクチン量を測定し、平均値および標準偏差を求めた。結果を図３〜６に示す。
【００４８】
図１から明らかなように、キサントアンゲロールを０．０１５９μＭ以上となるように添加した場合のアディポネクチン量（０．９１３μｇ／ｍＬ以上）は、キサントアンゲロールを添加しない場合のアディポネクチン量（０．１０７μｇ／ｍＬ）に比べて、約８．５倍以上多かった。特にキサントアンゲロールが１．５９μＭ添加した場合のアディポネクチン量は、添加しない場合の約２２倍に達した。
【００４９】
図２から明らかなように、４−ヒドロキシデリシンを０．０１８５μＭ以上となるように添加した場合のアディポネクチン量（０．８５３μｇ／ｍＬ以上）は、キサントアンゲロールを添加しない場合のアディポネクチン量（０．３００μｇ／ｍＬ）に比べて、約２．８倍以上多かった。特にキサントアンゲロールが０．１８５μＭの添加した場合のアディポネクチン量は、添加しない場合の約３．７倍に達した。
【００５０】
これに対して、図３〜６から明らかなように、カルコン類と同じポリフェノールに属するエピカテキンガレート、カテキン、エピガロカテキン、またはエピガロカテキンガレートの場合、それぞれ最大で８．８９μＭ〜１３．８μＭの範囲で添加したが、添加しない場合と比べてアディポネクチン産生量に大きな差がなかった。すなわちエピカテキンガレートを用いる場合（図３）、無添加の場合に比べて高々１．２倍であった。カテキンおよびエピガロカテキンの場合（図４および図５）、無添加の場合と差がなかった。そしてエピガロカテキンガレートの場合（図６）、無添加の場合に比べて高々１．４倍であった。さらにこれらのアディポネクチン産生量の増加について濃度依存性は見られなかった。
【００５１】
図１〜図６の結果から、カルコン類（キサントアンゲロールまたは４−ヒドロキシデリシン）を添加することによって、アディポネクチン産生が促進されることがわかる。このアディポネクチン産生促進効果は、他のポリフェノール（エピカテキンガレート、カテキン、エピガロカテキン、またはエピガロカテキンガレート）では得られない優れた効果である。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明のアディポネクチン産生促進剤は、カルコン類を有効成分とし、優れたアディポネクチン産生促進効果を有する。この効果は、他のポリフェノール化合物（例えば、エピカテキンガレート、カテキン、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレートなど）に比べて特に優れている。本発明のアディポネクチン産生促進剤は、糖尿病、肥満、動脈硬化症、およびこれらに起因する症状、例えば、糖尿合併症（糖尿病網膜症、糖尿病神経障害、糖尿病性腎症など）、脳梗塞、心筋梗塞、腎硬化症などの改善、治療、または予防に有効である。本発明のアディポネクチン産生促進剤は、医薬品、食品などとして利用される。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】キサントアンゲロールの添加濃度に対する脂肪細胞のアディポネクチン産生量の変化を示すグラフである。
【図２】４−ヒドロキシデリシンの添加濃度に対する脂肪細胞のアディポネクチン産生量の変化を示すグラフである。
【図３】エピカテキンガレートの添加濃度に対する脂肪細胞のアディポネクチン産生量の変化を示すグラフである。
【図４】カテキンの添加濃度に対する脂肪細胞のアディポネクチン産生量の変化を示すグラフである。
【図５】エピガロカテキンの添加濃度に対する脂肪細胞のアディポネクチン産生量の変化を示すグラフである。
【図６】エピガロカテキンガレートの添加濃度に対する脂肪細胞のアディポネクチン産生量の変化を示すグラフである。
【出願人】 【識別番号】３９７０２６４５８
【氏名又は名称】株式会社日本生物科学研究所
【出願日】 平成１８年７月２８日（２００６．７．２８）
【代理人】 【識別番号】１００１０４６７３
【弁理士】
【氏名又は名称】南條 博道
【公開番号】 特開２００８−３１０７６（Ｐ２００８−３１０７６Ａ）
【公開日】 平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【出願番号】 特願２００６−２０５７０８（Ｐ２００６−２０５７０８）