消化管粘液の産生促進剤

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【発明の名称】	消化管粘液の産生促進剤
【発明者】	【氏名】林康弘【氏名】下豊留玲【氏名】目黒真一
【要約】	【課題】優れた消化管粘液産生促進剤の提供。【構成】（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維及び（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維を含有する消化管粘液の産生促進剤。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維及び（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維を含有する消化管粘液の産生促進剤。
【請求項２】
（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維が、水溶性酸性多糖類である請求項１記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項３】
（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維が、水溶性多糖類である請求項１又は２記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項４】
（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維が、低分子アルギン酸、カラギーナン、フコイダン、ポルフィラン、アガロペクチン、カラヤガム、ジェランガム、寒天、及びキサンタンガムから選ばれる１種又は２種以上である請求項１記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項５】
（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維が、難消化性デキストリン、アラビアガム、グアーガム、グアーガム分解物、プルラン、水溶性コーンファイバー、ヘミセルロース、低分子ヘミセルロース、ペクチン、低分子ペクチン、大豆食物繊維、ローカストビーンガム、コンニャクマンナン及びガードランから選ばれる１種又は２種以上である請求項１記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項６】
消化管内におけるムチン型糖蛋白質の産生を促進するものである請求項１～５のいずれか１項記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項７】
消化管内におけるムチン型コア蛋白質遺伝子の発現を増加させるものである請求項１～５のいずれか１項記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項８】
消化管内が結腸全域である請求項１～５のいずれか１項記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項９】
ムチン型コア蛋白質がＭＵＣ１、ＭＵＣ２又はＭＵＣ３である請求項７記載の消化管粘液の産生促進剤。
【請求項１０】
（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維及び（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維を含有し、消化管粘液の産生促進作用を有し、消化管の健康維持や疾患予防のために用いる旨の表示をした飲食品。

【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、胃や腸などの消化管粘液の産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
胃や腸など消化管管腔表面は、粘弾性的な粘液層に覆われており、粘液層は管腔内の苛酷な環境から保護する役割を果たしている。粘膜表面における粘液の重要性を示す例として、Velcichらによる研究が挙げられる。VelcichらはＭＵＣ２をノックアウトしたマウスを作製したところ、マウス小腸内での侵襲性腺癌にまで進展したアデノーマ及び直腸腫瘍の発現頻度の向上が認められたと報告している（非特許文献１）。
【０００３】
消化管粘液中に存在する糖蛋白質のムチンは粘液の粘弾性に寄与している。ムチンのコアタンパク質をコードするＭＵＣ遺伝子は現在までに１２種類が見出されており、それぞれの遺伝子の発現は部位によって異なる。ムチンには膜結合型、分泌型が存在し、ＭＵＣ１は膜結合型、ＭＵＣ２は分泌型である（非特許文献２）。ＭＵＣ３はｍＲＮＡスプライシングの違いにより結合型、遊離型の両方になりうる（非特許文献３）。
【０００４】
一方、食物繊維を摂取することにより、消化管粘液が増加することが報告されている（非特許文献４～８）。
【非特許文献１】Velcich et al. Science., 295：1726-1729, 2002
【非特許文献２】Corfield AP. et. al., Gut 47：589-594, 2000
【非特許文献３】Mack et al. Gut. 52：827-833, 2003
【非特許文献４】Shimotoyodome A et. al. Dig Dis Sci. 2001 46：1482-1489
【非特許文献５】Barcelo A et. al. Gut. 2000 46：218-224
【非特許文献６】Cabotaje LM et. al. Appl Environ Microbiol. 1994 60：1302-1307
【非特許文献７】Monsma DJ et. al. Appl Environ Microbiol. 1992 58：3330-3336
【非特許文献８】Vahouny GV et. al. Am J Clin Nutr. 1985 41：895-900
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、さらに優れた消化管粘液増加作用を有する組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記の食物繊維摂取による消化管粘液増加作用は、いずれも１種の食物繊維を摂取した場合だけが検討されているにすぎず、２種以上の食物繊維を併用した場合にどのような作用を生じるかについては全く知られていない。さらに、食物繊維の種類の相違による消化管粘液に及ぼす作用の相違についても全く知られていない。
【０００７】
そこで本発明者は、２種類以上の食物繊維を併用した場合の消化管粘液産生に及ぼす作用を検討してきたところ、発酵性食物繊維と難発酵性食物繊維とを組み合せて用いた場合に、極めて顕著な消化管粘液産生促進作用が得られることを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維および（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維を含有する消化管粘液の産生促進剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、１種の食物繊維を用いた場合に比べて顕著に得られた消化管粘液産生促進作用が得られる。その作用は、ムチン型コア蛋白質遺伝子であるＭＵＣ１、ＭＵＣ２又はＭＵＣ３の発現を増加させることにより生じるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に用いられる（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維は、厚生労働省通知「食新発第０２１７００２号」において、エネルギー換算係数として０ k cal/gが与えられている。一般的に大腸における発酵分解率が低くほとんどエネルギー源として利用されない食物繊維は、難発酵性食物繊維として知られている。
【００１１】
本発明に用いられる（Ａ）大腸における発酵分解率が２５％未満の食物繊維は、植物、海藻又は菌体から抽出、分解、精製工程を経て得られる。具体的には、低分子アルギン酸、カラギーナン、寒天、フコイダン、ポルフィラン、アガロペクチン、カラヤガム、ジェランガム、キサンタンガム、サイリウム種皮、セルロース及びこれらの塩類が挙げられる。当該食物繊維（Ａ）のうち、消化管粘液産生促進効果の点から、水溶性酸性多糖類が好ましい。好ましい水溶性酸性多糖類の例としては低分子アルギン酸、カラギーナン、寒天、フコイダン、ポルフィラン、アガロペクチン、カラヤガム、ジェランガム、キサンタンガムが挙げられる。このうち、消化管粘液産生促進効果の点から、低分子アルギン酸、カラギーナン、寒天、フコイダン、アガロペクチンが特に好ましい。ここで、水溶性とは、ＡＯＡＣ公定法による食物繊維定量法において所定の条件下で一連の酵素処理後の不溶性区分が濾別されないことをいう。
【００１２】
本発明に用いられる（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維は、厚生労働省通知「食新発第０２１７００２号」において、エネルギー換算係数として１又は２ k cal/gが与えられている。一般的に大腸において発酵、分解を受ける食物繊維は、発酵性食物繊維として知られている。
【００１３】
本発明に用いられる（Ｂ）大腸における発酵分解率が２５％以上の食物繊維は、植物、海藻又は菌体から抽出、分解、精製工程を経て得られる。具体的には、難消化性デキストリン、アラビアガム、グアーガム、グアーガム分解物、プルラン、水溶性コーンファイバー、ヘミセルロース、低分子ヘミセルロース、ペクチン、低分子ペクチン、大豆食物繊維、ローカストビーンガム、コンニャクマンナン、ガードラン、タマリンドシードガム、小麦胚芽等が挙げられる。当該食物繊維（Ｂ）のうち、消化管粘液産生促進効果の点から、水溶性食物繊維が好ましく、さらに水溶性多糖類が好ましい。好ましい水溶性食物繊維の例としては難消化性デキストリン、アラビアガム、グアーガム、グアーガム分解物、プルラン、水溶性コーンファイバー、ヘミセルロース、低分子ヘミセルロース、ペクチン、低分子ペクチン、大豆食物繊維、ローカストビーンガム、コンニャクマンナン、ガードラン、タマリンドシードガムが挙げられ、水溶性多糖類の例としては難消化性デキストリン、アラビアガム、グアーガム、グアーガム分解物、プルラン、水溶性コーンファイバー、ヘミセルロース、低分子ヘミセルロース、ペクチン、低分子ペクチン、大豆食物繊維、ローカストビーンガム、コンニャクマンナン、ガードラン、タマリンドシードガムが挙げられる。このうち、消化管粘液産生促進効果の点から、難消化性デキストリン、グアーガム、グアーガム分解物、ヘミセルロース、低分子ヘミセルロースが特に好ましい。
【００１４】
本発明の消化管粘液産生促進剤における食物繊維（Ａ）と食物繊維（Ｂ）の含有比率（質量比）は、消化管粘液産生促進効果及び腸管保護効果の点から１：５～５：１、さらに１：３～３：１、特に１：２～２：１が好ましい。
【００１５】
食物繊維（Ａ）は、過度の摂取によるビタミン、ミネラルの吸収阻害の恐れがあることから本発明消化管粘液産生促進剤中に０．１～５０質量％、さらに１～１０質量％、特に３～４質量％含有するのが好ましい。また、食物繊維（Ｂ）は、過度の摂取によって生成した短鎖脂肪酸が、結腸内で分解され、炭酸ガスを発生するので、膨満感などの不快感を生じやすいことから、本発明の消化管粘液産生促進剤中に０．１～５０質量％、さらに１～１０質量％、特に３～４質量％含有するのが好ましい。ここで、食物繊維（Ａ）及び（Ｂ）の含有量は、通常は酵素－重量法（プロスキー法）により定量でき、例えば難消化性デキストリンのようなアルコール可溶性多糖の場合は酵素－ＨＰＬＣ法によって定量することができる。
【００１６】
本発明の消化管粘液産生促進剤は、前記食物繊維（Ａ）と食物繊維（Ｂ）を併用することにより、これらをそれぞれ単独で摂取した場合に比べて顕著に優れた消化管粘液、特にムチン型糖蛋白質の産生促進作用を示す。この作用は、ムチン型コア蛋白質であるＭＵＣ１、ＭＵＣ２及びＭＵＣ３の発現を増加させることによるものである。また、本発明の消化管粘液産生促進剤は結腸全域に作用するが、特に近位結腸において顕著である。また、ムチン型糖蛋白質のうち、中性ムチンの産生を顕著に促進し、特に近位結腸の中性ムチンの産生促進効果が優れている。
【００１７】
本発明の消化管粘液産生促進剤には、前記食物繊維（Ａ）及び食物繊維（Ｂ）以外に、他の消化管粘液産生促進剤、例えばプログルミド、テプレノン、セクレチン、アルジオキサ等を含有させてもよい。また、他の薬効成分、特に消化管に作用する成分、例えば難発酵性オリゴ糖、プロバイオティクス菌を配合することもできる。
【００１８】
本発明の消化管粘液産生促進剤の形態は、経口で摂取できる形態であれば特に限定されず、医薬品、機能性食品、特定保健用食品等として使用することが出来る。さらに、消化管粘液産生促進剤を配合した医薬品、機能性食品、特定保健用食品等の製造のために使用することができる。また、本発明の消化管粘液産生促進剤は、消化管粘液産生促進効果を有し、消化管の健康維持や疾患予防をコンセプトして、消化管粘液産生促進作用を有し、消化管の健康維持や疾患予防のために用いる旨の表示をした飲食品として利用することができる。具体的な形態としては、経口液剤（飲料を含む）、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、クッキー状、フレーク状、ウエハー状等の形態が挙げられる。特に好ましい形態は経口液剤である。
【００１９】
本発明の消化管粘液産生促進剤には、前記２種の食物繊維以外に、デンプン、デキストリン、オリゴ糖、ショ糖等の糖類；カゼイン、大豆タンパク質、卵白等のタンパク質；炭酸カルシウム、乳酸鉄等のミネラル類；ビタミンＡ、Ｂ₁、Ｂ₂、Ｂ₁₂、Ｃ等のビタミン類；米、大麦、小麦、大豆、とうもろこし、各種野菜、果物、肉類、食用油、調味料、水等を適宜単独又は組み合わせて配合することができる。
【００２０】
本発明の消化管粘液産生促進剤の摂取量は、１回（１食）当たりの食物繊維量（（Ａ）＋（Ｂ）の合計）として１～２０ｇとするのが好ましい。
【実施例】
【００２１】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００２２】
実施例１
低分子アルギン酸Ｎａとしてソルギン（（株）カイゲン社製）、グアーガム分解物としてサンファイバーＲ（太陽化学(株)社製）を用いた。
【００２３】
雄性ＳＤラット（７週齢）を、１群１０匹とし、表１に示す配合で調製した食餌を用いて２週間飼育した。飼育後、ラットを屠殺し、盲腸近接部から３cmの近位結腸、及び直腸近接部から３cmの遠位結腸を摘出した。
【００２４】
【表１】

【００２５】
結腸組織からのＲＮＡ抽出は以下の手順に従った。すなわち、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン）８００mL注にてホモジナイズし、クロロホルム２００mLを加えて激しく攪拌した後、１５，０００rpm、１５分（４℃）にて遠心分離し、上清を得た。この操作をさらに２度繰り返して上清を回収し、イソプロパノールにより沈殿を生成させ、７０％エタノールによる洗浄を行った後、ＤＥＰＣ水に溶解し、ＲＮＡサンプルとした。逆転写反応には５mgのＲＮＡサンプルを鋳型とし、Super Script First-Strand Synthesis System for RT-PCR（インビトロジェン）を用いて行った。反応条件は４２℃５０分間、７０℃１５分間とした。
【００２６】
定量ＰＣＲは２×SYBR Green PCR Master Mix（アプライドバイオシステム）を用いて、逆転写反応によって得られたｃＤＮＡ(０．１ug Total ＲＮＡ相当)を鋳型とし、表２に示したプライマー（各１pmol）として、ABI PRISM 7700 Sequence Detector （パーキンエルマー）中にて反応（５０℃２分、９５℃１０分の後、変性温度９５℃１５秒、アニーリング伸張反応６０℃１分を１サイクルとして４０回繰り返す）を行った。作製した標準曲線から解析を行い、得られた解析結果は３６Ｂ４ｍＲＮＡの発現量を基準として補正し、無繊維食群の発現量を１００とした相対的ｍＲＮＡ発現量として表した。
【００２７】
【表２】

【００２８】
各項目の群間差については、分散分析後、Fisher's PLSDをPost Hoc Test として多重比較検定を行いｐ＜０．０５を統計学的に有意な差とした。
【００２９】
試験飼育１４日後の、近位結腸及び遠位結腸におけるムチン遺伝子発現を表３に示した。４％低分子アルギン酸Ｎａと３％グアーガム分解物を併用摂取した場合、近位結腸におけるＭＵＣ１、ＭＵＣ２、ＭＵＣ３遺伝子、さらに遠位結腸におけるＭＵＣ１、ＭＵＣ３遺伝子の発現増加が認められた。
【００３０】
【表３】

【００３１】
実施例２
低分子アルギン酸Ｎａとしてソルギン（（株）カイゲン社製）、グアーガム分解物としてサンファイバーＲ（太陽化学（株）社製）を用いた。
【００３２】
雄性ＳＤラット（７週齢）を、１群１０匹とし、表１に示す配合で調製した食餌を用いて２週間飼育した。飼育後、ラットを屠殺し、近位結腸（盲結腸移行部より４－７cm）、遠位結腸（直腸移行部より４－７cm）を摘出した。
【００３３】
結腸粘液は、既報(Tanabe. et al. J Nutr 2005;135:2431-2437.)を参考に定量した。すなわち、５０mM Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（pH７．４），１００mM ＤＴＴ，プロテアーゼ阻害剤で組織を破砕後、遠心上清（５μL）をＳＤＳ－ＰＡＧＥ（７．５％ゲル）にて分離した。近位結腸はＰＡＳ染色、遠位結腸はアルシアンブルーpH１．０染色により、それぞれ中性ムチン、スルホムチンを検出し、デンシトメトリーにより定量化した。
各項目の群間差については、分散分析後、Fisher'sPLSDをPost Hoc Test として多重比較検定を行いｐ＜０．０５を統計学的に有意な差とした。
【００３４】
２種食物繊維群では近位結腸における結腸粘液の有意な増加、及び遠位結腸における増加傾向が認められた（図１及び２）。特に近位結腸における影響が大きく、無繊維群に対して２倍近くにまで増加した。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】２種食物繊維併用による結腸粘液（近位結腸中性ムチン量）に及ぼす作用を示す図である。ＦＦ：無繊維食群、ＡＣＧ：７％低分子アルギン酸Ｎａ群、ＧＵＡＲ：７％グアーガム分解物群、ＤＤＦ：４％低分子アルギン酸Ｎａ＋３％グアーガム分解物群。
【図２】２種食物繊維併用による結腸粘液（遠位結腸スルホムチン量）に及ぼす作用を示す図である。ＦＦ：無繊維食群、ＡＣＧ：７％低分子アルギン酸Ｎａ群、ＧＵＡＲ：７％グアーガム分解物群、ＤＤＦ：４％低分子アルギン酸Ｎａ＋３％グアーガム分解物群。

【出願人】	【識別番号】００００００９１８【氏名又は名称】花王株式会社
【出願日】	平成１８年７月２４日（２００６．７．２４）
【代理人】	【識別番号】１１０００００８４【氏名又は名称】特許業務法人アルガ特許事務所【識別番号】１０００６８７００【弁理士】【氏名又は名称】有賀三幸【識別番号】１０００７７５６２【弁理士】【氏名又は名称】高野登志雄【識別番号】１０００９６７３６【弁理士】【氏名又は名称】中嶋俊夫【識別番号】１００１１７１５６【弁理士】【氏名又は名称】村田正樹【識別番号】１００１１１０２８【弁理士】【氏名又は名称】山本博人【識別番号】１００１０１３１７【弁理士】【氏名又は名称】的場ひろみ【識別番号】１００１２１１５３【弁理士】【氏名又は名称】守屋嘉高【識別番号】１００１３４９３５【弁理士】【氏名又は名称】大野詩木【識別番号】１００１３０６８３【弁理士】【氏名又は名称】松田政広【識別番号】１００１４０４９７【弁理士】【氏名又は名称】野中信宏
【公開番号】	特開２００８－２４６６９（Ｐ２００８－２４６６９Ａ）
【公開日】	平成２０年２月７日（２００８．２．７）
【出願番号】	特願２００６－２００７０４（Ｐ２００６－２００７０４）