| 【発明の名称】 |
アクロレイン付加体形成阻害剤、及びそれを含有する皮膚抗老化外用剤および抗老化飲食品 |
| 【発明者】 |
【氏名】末次 一博
【氏名】辻 恵子
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| 【要約】 |
【課題】本発明の課題は、既に生成されたアクロレインや４−ヒドロキシノネナールを直接捕捉する作用を有する成分、つまり、アクロレインや４−ヒドロキシノネナールと生体内のタンパク質との付加体形成を阻害する阻害剤、及びそれを含有する皮膚抗老化外用剤や抗老化用飲食品の提供を課題とする。
【構成】アクロレインや４−ヒドロキシノネナールと生体内のタンパク質との付加体形成を阻害する効果に優れたカテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェ酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインの少なくとも一種を含有することにより、皮膚抗老化外用剤や抗老化用飲食品の提供を可能とした。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェイン酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインの少なくとも一種を含有することを特徴とするアクロレイン付加体形成阻害剤。
【請求項２】
請求項１記載の成分の少なくとも１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とする皮膚抗老化外用剤。
【請求項３】
請求項１記載の成分の少なくとも１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とする抗老化用飲食品。
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【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、アクロレインのアミノ酸やタンパク質との付加体形成阻害剤であり、その付加体形成阻害剤を含有する皮膚抗老化外用剤や抗老化用飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、老化を抑制する抗老化剤としては、種々のものが開発されている。生体の老化は、２つの生物学的要因により起こることが知られている。
【０００３】
１つは生理的老化で、他の１つは紫外線等の被爆部に生じる光老化と呼ばれるものである。生理的老化は、生体内で生成した活性酸素が影響し、血管や皮膚の主な構成因子であるコラーゲン線維の変性や生理機能に係わりの深い酵素の変質による活性の低下などに関わる。光老化に感しては、紫外線への暴露が原因であるため原則的に皮膚に限られる。
【０００４】
生理的老化において、活性酸素種を除去することが主に検討され、スーパーオキサイドアニオン、ヒドロキシラジカル、一重項酸素、パーオキシナイトライト等に対する除去剤が提示されている。近年、活性酸素以外の老化因子としてアクロレインや４−ヒドロキシノネナールの関与が注目されている。
【０００５】
アクロレインや４-ヒドロキシノネナールはα,β-不飽和アルデヒドで反応性が高く、タンパク質（酵素やコラーゲン）の変性や細胞毒性に関わり、その細胞毒性は類縁のアルデヒドであるアセトアルデヒド、ホルムアルデヒド、アクロレインを比較するとアクロレインが最も強く、次いでホルムアルデヒドそしてアセトアルデヒドの順である。アクロレインの細胞毒性は、活性酸素の要因となりうる過酸化水素に比べても非常に強いことが報告されている（Kenneth Ramos、etal、Toxicology and Applied Pharmacology、Vol.95、61-71 (1988)）。
【０００６】
アクロレインは、生体内ではポリアミンから生成することが（Gunnar Houen、etal、Acta Chemia Scandinavica、Vol.48、52-60 (1994)）知られており、また、アクロレインや４−ヒドロキシノネナールは、脂質の過酸化反応の過程で生成する（内田浩二、日本油化学会誌、Vol.47、No.11、29-37（1998））ことが知られている。また、アクロレインや４−ヒドロキシノネナールはプラスティックの燃焼、たばこの煙の中に存在したり、排気ガスや油脂の加熱によって生成される環境汚染物質の一つである。
そして、アクロレインから生体を守る検討では、ポリアミンにポリアミンオキシダーゼが作用しアクロレインを生成することから、ポリアミンオキシダーゼを阻害する特許(特開２００２−２８１９９９)とリポキシゲナーゼによる酸化過程でアクロレインが生成することからリポキシゲナーゼを阻害する特許(特開２００２-１３８０１３)が提示されている。しかし、これらによってアクロレインの生成が完全に抑えられるものではなく、たばこの煙の中のアクロレインのような場合は、生成過程を抑えるのではなく、既に生成されたアクロレインを直接捕捉する作用を持つ成分が望まれている。
【非特許文献１】KennethRamos、etal、Toxicology and Applied Pharmacology、Vol.95、61-71 (1988)
【非特許文献２】GunnarHouen、etal、Acta Chemia Scandinavica、Vol.48、52-60 (1994)
【特許文献１】特開２００２−２８１９９９号公報
【特許文献２】特開２００２−１３８０１３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の課題は、既に生成されたアクロレインや４−ヒドロキシノネナールを直接捕捉する作用を有する成分、つまり、アクロレインや４−ヒドロキシノネナールと生体内のタンパク質との付加体形成を阻害する阻害剤、及びそれを含有する皮膚抗老化外用剤や抗老化用飲食品の提供である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者等は、このような課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、カテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェイン酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインが、アクロレインや４−ヒドロキシノネナールと生体内のタンパク質との付加体形成する過程を阻害するという作用を見出すことで本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、生体内で生成したアクロレインがタンパク質と付加体を形成する反応を抑えることによるアクロレイン不加体形成抑制剤であるカテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェイン酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインを皮膚外用剤及び飲食品に含有させることにより、安全性の高い皮膚抗老化外用剤および抗老化用飲食品の提供が可能となり、皮膚抗老化外用剤に関してはシワ、タルミ等の発生を抑制する効果、抗老化用飲食品に関しては生体中の動脈硬化を抑制する効果をそれぞれ有することを可能とした。
【００１０】
本発明におけるアクロレインを直接捕捉する方法は、内田らのアセチルリジンとアクロレインの付加生成物をHPLCで測定する方法（J.Biol.Chem.、Vol.273、No.26、Issue of June26、16058-16066(1998)）を改変して行った。本発明では、アクロレインとアセチルリジンとの反応で評価を行っているが、４−ヒドロキシノネナールとリジンに関しても同様な反応が起こることが分かっていることから本発明は４−ヒドロキシノネナールとの付加体形成にも有効である。
【００１１】
すなわち、0.1Mリン酸緩衝液（pH7.4）に100mMのN-アセチルリジンを溶解し、同様に0.1Mリン酸緩衝液（pH7.4）に10mMのアクロレインを溶解し、それぞれ450μLずつ取り、37℃で24時間反応させる。そこに被検試料を100μL加えて、反応液をHPLCで分析し、アクロレインとN-アセチルリジンの付加生成物を分析し、その生成量から抑制率を算出する。
【００１２】
本発明における被検試料は、アクロレインがタンパク質との付加体を生成する過程を抑制するアクロレイン付加体生成抑制剤であり、カテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェイン酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインの少なくとも一種を含有させたことを特徴とする。
【００１３】
また、本発明は、カテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェイン酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインの少なくとも一種または二種以上を含有させた皮膚抗老化外用剤および抗老化用飲食品である。
【発明実施の最良の形態】
【００１４】
本発明に使用する「カテキン」、「没食子酸及びその誘導体」、「カフェイン酸」、「グルタチオン」、「チオプロリン」、「チオタウリン」及び「システイン」は、工業原料をそのまま使用することもできるが、これらの化合物を含有する動植物エキスをそのまま使用することも、精製したものもを使用することもできる。
【００１５】
カテキンは、多量に含有する茶、ガンビールやリンゴ、ブドウ、カキ等に含まれる。没食子酸は、五倍子（ヌルデの虫こぶ）、ハマメリス、樫の樹皮など多くの植物に含まれる。カフェイン酸は、コーヒー中にクロロゲン酸として配糖体の形で存在する。グルタチオンは、酵母エキス中に多く含まれる。チオプロリンは、タラなどを加熱することで生成することがわかっている。
【００１６】
即ち、本発明に係る化合物を得るための精製法は、まず、水や各種極性有機溶媒及びそれらの混液を用いて抽出を行い、次いで、様々な方法を用いて精製される。各種イオン交換樹脂を用いる方法や各種活性炭、スチレン−ジビニルベンゼン系合成吸着剤（ＨＰ−２０：三菱化成社製）、オクタデシルシラン処理シリカ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ：富士シリシア化学製）により吸着させ、適当な溶媒で溶出する方法が簡便でかつ実用的である。
【００１７】
また、本発明に係る化合物の各種皮膚外用剤に対する配合量は、皮膚外用剤の実施態様、皮膚外用剤の使用形態等に応じて変動させることができるので特に限定されない。原則的には、有効量存在すれば良いことになるが、一般的には組成物中、乾燥重量に換算して０．０００１〜１００．０質量％が利用でき、好ましくは０．０１〜１０．０質量％、更に好ましくは０．１〜５．０質量％である。特に、用時調製のパウダー状の製剤等は、この本願発明に係る抽出物が１００質量％を含めた高配合率で利用されることが想定できる。
【００１８】
本発明に係る皮膚外用剤の適用範囲は、特に限定されない。つまり、この発明の有効成分が有する作用効果に応じて各作用効果を利用できる全ての皮膚外用剤に適用できる。
【００１９】
例えば、本発明に係る有効成分を各種皮膚外用剤基剤等に配合して、クリーム、乳液、化粧水、パック剤、洗顔料等に対して適用できる。また、前記各種皮膚外用剤の実施態様は、ローション、エマルジョン、軟膏、ゾル、ゲル、パウダー、スプレー、固形等の各種態様で適用できる。
【００２０】
また、本発明に係る化合物の抗老化用飲食品に対する配合量は、抗老化用飲食品の実施態様、抗老化用飲食品の使用形態等に応じて変動させることができるので特に限定されない。原則的には、有効量存在すれば良いことになるが、一般的には組成物中、乾燥重量に換算して０．０００１〜１０．０質量％が利用でき、好ましくは０．０１〜５．０質量％、更に好ましくは０．１〜１．０質量％である。
【００２１】
本発明に係る抗老化用飲食品の適用範囲は、特に限定されない。つまり、この発明の有効成分が有する作用効果に応じて各作用効果を利用できる全ての抗老化用飲食品に適用できる。
【００２２】
例えば、本発明に係る抗老化用飲食品は、ドリンク剤、ジェル状、粉末製剤、錠剤等の各種態様で適用できる。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２４】
〔実施例１〕
本実施例は、本発明のアクロレインとN−アセチルリジンとの付加体形成阻害剤について、具体的な抽出例を示したものである。
【００２５】
被検体としては、試薬として市販されているビタミンC、エピカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレート、没食子酸、没食子酸プロピル、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン、L−システイン、L−シスチン、カフェイン酸、プロカテク酸、p−ヒドロキシ安息香酸、ゲンチシン酸、クエルセチン、ルチン、ミリシトリン及びナリンゲニンを用いた。
【００２６】
〔実施例２〕
本実施例は、本発明のアクロレインとN-アセチルリジンとの付加体形成阻害剤について、抑制効果を試験したものである。
〔実験例３〕アクロレインとN-アセチルリジンの付加体形成阻害率の測定
（１）実験方法
50mM N-アセチルリジン４５０μL（５０mMPBS（pH７.４））、１０mMアクロレイン４５０μL（５０ｍＭＰＢＳ（ｐＨ７.４））、試料１００μLを混合し、３７℃で２４時間放置後、HPLCで分析を行った。陽性対照として、類似の反応と思われる糖とアミノ酸やタンパク質と起こるメイラード反応の阻害剤としてとして知られるアミノグアニジンを用いて比較を行った。試料濃度は１０ｍM、５ｍMの溶液を用いて行った。
【００２７】
（２）ＨＰＬＣ条件
・カラム：ＤＡＩＳＯＰＡＫ-ＳＰ１２０ ＯＤＳ-ＢＰ（１５0ｍｍ×６ｍｍ）
・温度：室温
・移動相：５％ＭｅＯＨ ｉｎ ０.１％ＴＦＡ
・検出：ＵＶ２２７ｎｍ
・注入量：５μＬ
・流量：１.５ｍＬ/ｍｉｎ
【００２８】
表１にアクロレイン付加体形成阻害作用効果（抑制率）を示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】
表１の結果より、カテキン、没食子酸及びその誘導体、カフェイン酸、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインのアクロレインとN-アセチルリジンとの付加体の形成を阻害する作用が強いことを確認した。
【００３１】
以下に本発明の処方例を挙げる。
＜処方例１＞化粧水
（成分名） （質量％）
エピカテキン ０．１
ヒアルロン酸Ｎａ ０．０１
グリセリン ５．０
ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（２０Ｅ．０） １．５
エタノール ８．０
クエン酸トリエチル ２．０
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
【００３２】
＜処方例２＞化粧用クリーム
（成分名） （質量％）
チオタウリン ５．０
ミツロウ ２．０
ステアリルアルコール ５．０
ステアリン酸 ８．０
スクワラン １０．０
自己乳化型グリセリルモノステアレート ３．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） １．０
グリセリン ５．０
水酸化カリウム ０．３
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
【００３３】
＜処方例３＞乳液
（成分名） （質量％）
没食子酸 ０．０１
スクワラン ８．０
ワセリン ２．０
ミツロウ ０．５
ソルビタンセスキオレエート ０．８
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．０） １．２
カルボキシビニルポリマー ０．２
グリセリン １．５
水酸化カリウム ０．１
エタノール ７．０
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
【００３４】
＜処方例４＞パック剤
（成分名） （質量％）
チオプロリン ０．０００１
酢酸ビニル樹脂エマルジョン １５．０
ポリビニルアルコール １０．０
ホホバ油 ３．０
グリセリン ５．０
酸化チタン ８．０
カオリン ７．０
エタノール ５．０
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
【００３５】
＜処方例５＞軟膏
（成分名） （質量％）
没食子酸プロピル １０．０
酢酸トコフェロール ０．５
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル ４．０
ブチルメトキシベンゾイルメタン ４．０
ステアリルアルコール １８．０
モクロウ ２０．０
グリセリンモノステアリン酸エステル ０．３
ワセリン ３３．０
香料 適量
防腐剤・酸化防止剤 適量
精製水 残部
【００３６】
＜処方例６＞ドリンク剤Ｉ
茶カテキン １．０
クエン酸 ０．１
ビタミンC 適量
精製水 残部
【００３７】
＜処方例７＞ドリンク剤II
システイン ０．１
クエン酸 ０．１
ビタミンC 適量
精製水 残部
【００３８】
＜処方例８＞粉末製剤
カフェイン酸 ５．０
卵殻カルシウム １０．０
乳糖 １５．０
セルロース
残部
【００３９】
＜処方例９＞錠剤
グルタチオン １０．０
卵殻カルシウム １０．０
乳糖 ２０．０
澱粉 ７．０
デキストリン ８．０
硬化油 ５．０
セルロース
残部
【産業上の利用可能性】
【００４０】
本発明によれば、生体内で生成したアクロレインがタンパク質と付加体を形成する反応を抑制する作用を有するカテキン、没食子酸及びその誘導体、グルタチオン、チオプロリン、チオタウリン及びシステインを含有することにより、安全性の高い皮膚抗老化外用剤や抗老化用飲食品に応用が期待できる。
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| 【出願人】 |
【識別番号】５９１２３０６１９
【氏名又は名称】株式会社ナリス化粧品
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| 【出願日】 |
平成１８年７月１８日（２００６．７．１８） |
| 【代理人】 |
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| 【公開番号】 |
特開２００８−２４６００（Ｐ２００８−２４６００Ａ） |
| 【公開日】 |
平成２０年２月７日（２００８．２．７） |
| 【出願番号】 |
特願２００６−１９５３５８（Ｐ２００６−１９５３５８） |
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