小胞体ストレス抑制剤

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【発明の名称】	小胞体ストレス抑制剤
【発明者】	【氏名】西野徹【氏名】名取貴光【氏名】長井薫【氏名】久保田健夫
【要約】	【課題】老人性痴呆症（アルツハイマー病）やパーキンソン病、ハンチントン病に代表される神経変性疾患の予防および／または治療に有効なキノコ由来の新規な小胞体ストレス抑制剤を提供すること。【解決手段】桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする小胞体ストレス抑制剤。
【請求項２】
桑黄が、メシマコブ、キコブタケ、エゾキコブタケ、マツノカタワタケから選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする請求項１記載の小胞体ストレス抑制剤。
【請求項３】
桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする神経変性疾患予防治療剤。
【請求項４】
桑黄が、メシマコブ、キコブタケ、エゾキコブタケ、マツノカタワタケから選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする請求項３記載の神経変性疾患予防治療剤。
【請求項５】
桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする小胞体ストレス抑制組成物。
【請求項６】
桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする小胞体ストレス抑制食品。

【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、老人性痴呆症（アルツハイマー病）やパーキンソン病、ハンチントン病に代表される神経変性疾患の予防および／または治療に有効な小胞体ストレス抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老人性痴呆症（アルツハイマー病）やパーキンソン病、ハンチントン病に代表される神経変性疾患は、今だもって明確な治療法が存在しない難病であり、現在、多くの研究および探索がその治療法の確立のために行われている。神経変性疾患に対する現時点において最も有効とされている治療法は、アルツハイマー病患者の脳内で観察されるアセチルコリンの低下という現象を阻害する薬剤（ドネペジルなど）を用いたものである。しかしながら、このような薬剤での治療は対症療法に過ぎない。従って、真に疾病の発症を予防したり進行を阻止したりできる薬剤の出現が待ち望まれている。
神経変性疾患は、脳内に異常タンパク質が蓄積することにより発症すると考えられている。即ち、この異常タンパク質の蓄積が、細胞内の核の周辺に存在する小胞体に物理的あるいは化学的なストレスをかけ、細胞のアポトーシスを誘導する。その結果、脳内において神経細胞が死滅し、神経疾患を引き起こす。
このような疾患発症メカニズムに鑑み、小胞体にストレスがかかることを抑制する活性を持つ天然物由来の物質や成分を探索する試みが行われている。
ところで、キノコの中には、人体に有効な薬理活性を持つ物質や成分を含むものが数多く存在し、既に、キノコ由来の種々の物質や成分が薬剤などとして利用されている。例えば、カワラタケからはクレスチン、シイタケからはレンチナン、スエヒロタケからはシゾフィランという多糖体が単離され、抗ガン剤として利用されている。また、ヤマブシタケからは、神経成長因子を誘導産生するヘリセノンやエリナシンが単離されている。従って、キノコの中に、小胞体ストレス抑制活性を持つ物質や成分を含むものが存在することも大いに期待され、現に、特許文献１には、ヤマブシタケ由来の脂溶性抽出成分にこの活性があることが報告されている。しかしながら、キノコ由来の小胞体ストレス抑制剤についての報告はこれ以外には存在しない。
【特許文献１】特開２００３－２１２７９０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
そこで本発明は、老人性痴呆症（アルツハイマー病）やパーキンソン病、ハンチントン病に代表される神経変性疾患の予防および／または治療に有効なキノコ由来の新規な小胞体ストレス抑制剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記の技術背景をもとに鋭意研究を重ねた結果、桑黄に由来する脂溶性抽出成分が、小胞体ストレス抑制活性に基づいて神経細胞のアポトーシス（プログラム細胞死）を抑制することを見出した。
【０００５】
上記の知見に基づいてなされた本発明の小胞体ストレス抑制剤は、請求項１記載の通り、桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする。
また、請求項２記載の小胞体ストレス抑制剤は、請求項１記載の小胞体ストレス抑制剤において、桑黄が、メシマコブ、キコブタケ、エゾキコブタケ、マツノカタワタケから選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする。
また、本発明の神経変性疾患予防治療剤は、請求項３記載の通り、桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とする。
また、請求項４記載の神経変性疾患予防治療剤は、請求項３記載の神経変性疾患予防治療剤において、桑黄が、メシマコブ、キコブタケ、エゾキコブタケ、マツノカタワタケから選ばれる少なくとも１つであることを特徴とする。
また、本発明の小胞体ストレス抑制組成物は、請求項５記載の通り、桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする。
また、本発明の小胞体ストレス抑制食品は、請求項６記載の通り、桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分として含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、老人性痴呆症（アルツハイマー病）やパーキンソン病、ハンチントン病に代表される神経変性疾患の予防および／または治療に有効なキノコ由来の新規な小胞体ストレス抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の小胞体ストレス抑制剤は、桑黄由来の脂溶性抽出成分を有効成分とすることを特徴とするものである。本発明の小胞体ストレス抑制剤は、その小胞体ストレス抑制活性に基づき、神経変性疾患の予防および／または治療に有効である。なお、本発明において、小胞体ストレスとは、細胞内部に存在する粗面小胞体における機能異常を指し、タンパク質構造に異常をきたすことにより引き起こされる異常タンパク質の蓄積ストレスを意味する。そして、この小胞体ストレスを抑制する活性を小胞体ストレス抑制活性と規定する。また、本発明において、神経変性疾患とは、神経細胞がアポトーシス（プログラム細胞死）を起こし、神経が正常な状態を維持できなくなることに起因する疾患を意味する。具体的には、例えば、老人性痴呆症（アルツハイマー病）、パーキンソン病、ハンチントン病、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、プリオン病、その他の各種痴呆疾患（例えば、脳血管性痴呆、正常圧水頭症、脳外傷後痴呆、慢性硬膜下血腫、脳腫瘍）が挙げられる。神経細胞のアポトーシスは、主に小胞体ストレスによって引き起こされる。従って、本発明の小胞体ストレス抑制剤は、その小胞体ストレス抑制活性に基づいて、小胞体ストレスにより引き起こされる神経細胞のアポトーシスを抑制する活性を有する。
【０００８】
本発明において、桑黄とは、広葉樹寄生する担子菌類であるキコブタケ属（Ｐｈｅｌｌｉｎｕｓ属）のキノコを意味する。具体的には、メシマコブ、キコブタケ、エゾキコブタケ、マツノカタワタケなどが挙げられる。キコブタケ属のキノコは、漢方薬として古くから利用されており、近年、その抗腫瘍効果などの機能性が注目されているが、神経変性疾患に対する作用についてはこれまで報告されたことはない。脂溶性抽出成分を得るために用いる桑黄は、子実体であっても菌糸体であってもよい。また、これらは、天然物であっても栽培物または培養物であってもよい。桑黄由来の脂溶性抽出成分は、桑黄の子実体や菌糸体、またはこれらの乾燥体の破砕物や粉砕物から有機溶媒を用いた抽出操作を経て得ることができる。有機溶媒としては、エタノール、メタノール、イソプロパノール、ブタノールなどのアルコールの他、ヘキサン、クロロホルム、ベンゼン、フェノール、酢酸エチル、ジエチルエーテル、アセトン、トルエン、ジクロロメタンなどを用いることができる。有機溶媒は単独で用いてもよいし、複数種類を混合して用いてもよい。また、複数種類の有機溶媒を連続して用いて抽出操作を行ってもよい。有機溶媒の使用量は、使用する有機溶媒の種類や抽出効率などに基づいて適宜決定すればよい。抽出操作方法の一例としては、クロロホルム：メタノールを７：３～９：１の割合で混合して調製した溶媒を、桑黄の乾燥粉末１重量部に対して５重量部～５０重量部用いて行う方法が挙げられる。脂溶性抽出成分は、このような抽出操作によって得られる抽出液を必要に応じて濾過を行った後、減圧濃縮などをすることで得ることができる。また、脂溶性抽出成分は、得られた抽出液をさらに分画精製して得られる脂溶性抽出画分であってもよい。
【０００９】
桑黄由来の脂溶性抽出成分は、自体公知の方法によって顆粒剤や錠剤やカプセル剤などに製剤化し、服用することで、優れた小胞体ストレス抑制活性に基づく神経変性疾患の予防薬や治療薬などとして機能する。その服用量は、服用者の年齢、性別、体重、体調などによって適宜決定することができる。また、桑黄由来の脂溶性抽出成分は、種々の形態の食品（サプリメントを含む）に、小胞体ストレス抑制活性を発揮するに足る有効量を添加することで、神経変性疾患に対する予防効果や治療効果をもたらす機能性食品として食してもよい。
【実施例】
【００１０】
以下、本発明の小胞体ストレス抑制剤について実施例によって更に詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１１】
実施例１：
（１）桑黄由来の脂溶性抽出成分の調製
キコブタケ子実体の乾燥粉末１重量部に対し、クロロホルム：メタノールを９：１の割合で混合して調製した溶媒を１０重量部加え、室温で２４時間振とうさせて脂溶性成分を抽出した。得られた抽出液を減圧下で濃縮し、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分を乾燥粉末１ｇあたり４．１ｍｇ得た。
【００１２】
（２）桑黄由来の脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果の評価（その１）
（１）で得たキコブタケ由来の脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果の評価を特許文献１の記載の方法に準じて以下のようにして行った。Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞（ヒューマンサイエンス研究資源バンク、ＩＦＯ５００８１）を神経細胞モデルとして使用した。培養培地には、１０％ウシ胎仔血清を添加したダルベッコ改変イーグル培地を使用した。細胞の培養は３７℃、ＣＯ₂濃度は５％で行った。なお、小胞体ストレスモデルには、糖鎖の生合成を阻害し細胞死を誘導することが知られているツニカマイシン（ナカライテスク社製）を使用した。小胞体ストレス抑制効果の評価は、０．５μｇ／ｍＬツニカマイシンとキコブタケ由来の脂溶性抽出成分の存在下で、細胞を４８時間培養した時の細胞生存率から、細胞死緩和効果を評価することで行った。細胞生存率は、生細胞定量法のＭＴＴ（同仁化学社製）を用いるＭＴＴアッセイにより定量した。具体的には次のようにして行った。上記培養の終了後、培地を除去し細胞を２５０μｇ／ｍＬのＭＴＴの存在下でさらに２時間培養した。次いで反応停止液（２０％ＳＤＳおよび５０％ジメチルホルムアミドを含む）を加え反応を停止させた。生成物と細胞とを可溶化した後、５７０ｎｍでの吸光度を測定した。なお、コントロールとしては、Ｎｅｕｒｏ－２ａ細胞をツニカマイシンおよびキコブタケ由来の脂溶性抽出成分の非存在下で培養したものを用いた。これから得られた値を１００とし、ツニカマイシンおよびキコブタケ由来の脂溶性抽出成分の存在下での細胞生存率を比較した。なお、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分の濃度は１００ｐｇ／ｍＬで行った。結果を図１に示す。なお、図１には、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分と同様にして得た、アガリクス由来の脂溶性抽出成分（子実体乾燥粉末１ｇあたり４３．２ｍｇ取得）、カバノアナタケ由来の脂溶性抽出成分（子実体乾燥粉末１ｇあたり１２．９ｍｇ取得）を、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分のかわりに用いて評価を行った結果と、ツニカマイシンのみを用いて評価を行った結果をあわせて示す。図１から明らかなように、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分は、ツニカマイシンによって誘導される細胞死を緩和したことから、その小胞体ストレス抑制効果が確認できた。
【００１３】
実施例２：桑黄由来の脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果の評価（その２）
桑黄に属するエゾキコブタケ由来の脂溶性抽出成分と、マツノカタワタケ由来の脂溶性抽出成分を、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分と同様にして得た。前者の脂溶性抽出成分は子実体乾燥粉末１ｇあたり６．７ｍｇ得られ、後者の脂溶性抽出成分は子実体乾燥粉末１ｇあたり７．０ｍｇ得られた。これらの脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果の評価を、キコブタケ由来の脂溶性抽出成分とともに、実施例１の評価と同様にして行った。結果を図２に示す。図２から明らかなように、いずれの脂溶性抽出成分にも小胞体ストレス抑制効果が確認できたが、その効果は、特にキコブタケ由来の脂溶性抽出成分において優れていた。
【００１４】
実施例３：桑黄由来の脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果の評価（その３）
実施例１の（１）で得たキコブタケ由来の脂溶性抽出成分７００ｍｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分画した。２×３０ｃｍのガラスクロマト管にシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ社製：Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ₂₅₄）を約２０ｇ詰め、展開溶媒にはクロロホルム－アセトンおよびアセトン－メタノールを用いた。なお、展開溶媒の混合比は順次変えて行った。即ち、まず、クロロホルム－アセトンを１０：０、９：１、８：２、７：３、６：４、２：８、０：１０の割合で混合した溶媒をそれぞれ２００ｍｌ、２００ｍｌ、７０ｍｌ、１５０ｍｌ、５０ｍｌ、７０ｍｌ、１５０ｍｌずつ用いて展開した。その後、さらに、アセトン－メタノールを９：１、７：３の割合で混合した溶媒をそれぞれ２００ｍｌ、３００ｍｌずつ用いて展開した。分画液を約２０ｍｌずつ集め、その分画物をＴＬＣ（Ｍｅｒｃｋ社製：Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ６０Ｆ₂₅₄）で展開し、類似成分とみなしうるスポットを含む分画物を混合して同一の粗精製画分とした。以上の操作により、実施例１の（１）で得たキコブタケ由来の脂溶性抽出成分７００ｍｇから、ＴＬＣ（同上）にスポットし、ジエチルエーテル：メタノール＝９：１の割合で混合した溶媒で展開してリンモリブデン酸試薬により発色させることで、Ｒｆ値が０．３８、０．５１である２つの異なるスポットを有する、メタノールによって溶出される粗精製画分２４ｍｇを得た。この粗精製画分の小胞体ストレス抑制効果の評価を、実施例１の評価と同様にして行った（ただしその濃度は１０ｐｇ／ｍＬとした）。その結果、図３に示したように、この粗精製画分は優れた小胞体ストレス抑制効果をもつことが確認できた。
【００１５】
実施例４：桑黄由来の脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果の評価（その４）
キコブタケ子実体のかわりにメシマコブ子実体を用いること以外は実施例１と同様にしてメシマコブ由来の脂溶性抽出成分の小胞体ストレス抑制効果を確認した。
【００１６】
製剤例１：錠剤
キコブタケ由来の脂溶性抽出成分４ｇ、乳糖７６ｇ、ステアリン酸マグネシウム２０ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って錠剤とした。
【００１７】
製剤例２：顆粒剤
メシマコブ由来の脂溶性抽出成分１６ｇ、澱粉２９ｇ、乳糖５５ｇ、合計１００ｇを均一に混合し、常法に従って顆粒剤とした。
【００１８】
製剤例３：ビスケット
薄力粉３２ｇ、全卵１８ｇ、バター１４ｇ、砂糖２４ｇ、水１０ｇ、ベーキングパウダー１ｇ、マツノカタワタケ由来の脂溶性抽出成分１ｇ、合計１００ｇを用い、常法に従ってビスケットとした。
【産業上の利用可能性】
【００１９】
本発明は、老人性痴呆症（アルツハイマー病）やパーキンソン病、ハンチントン病に代表される神経変性疾患の予防および／または治療に有効なキノコ由来の新規な小胞体ストレス抑制剤を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例１における評価の結果を示すグラフである。
【図２】実施例２における評価の結果を示すグラフである。
【図３】実施例３における評価の結果を示すグラフである。

【出願人】	【識別番号】５９５１７５３０１【氏名又は名称】株式会社応微研【識別番号】３０４０２３９９４【氏名又は名称】国立大学法人山梨大学
【出願日】	平成１７年６月７日（２００５．６．７）
【代理人】	【識別番号】１０００８７７４５【弁理士】【氏名又は名称】清水善廣【識別番号】１０００９８５４５【弁理士】【氏名又は名称】阿部伸一【識別番号】１００１０６６１１【弁理士】【氏名又は名称】辻田幸史
【公開番号】	特開２００６－３４２０７７（Ｐ２００６－３４２０７７Ａ）
【公開日】	平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【出願番号】	特願２００５－１６７４７８（Ｐ２００５－１６７４７８）