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【発明の名称】 Ｔｈ１／Ｔｈ２生体反応インバランスを調節するための組成物
【発明者】 【氏名】桑原 正人

【氏名】榎本 国彦
【要約】 【課題】Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスあるいはアンバランスの調節、およびＴｈ病の予防および治療に有効な組成物を提供する。

【解決手段】シママンネンタケを含む、Ｔｈ１／Ｔｈ２反応調節用組成物、当該組成物を含むＴｈ病の治療・予防薬、および当該組成物を含むＴｈ２反応の恒常性の維持とこのような解析から得られる疾患の予防・予知を明らかにする診断薬の作用を有する経口摂取物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シママンネンタケを含む、Ｔｈ１／Ｔｈ２生体反応バランスを調節するための組成物。
【請求項２】
Ｔｈ１／Ｔｈ２生体反応インバランスを調整し正常とせしめるための、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
医薬用または経口摂取物用である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物を含む、Ｔｈ１あるいはＴｈ２病の治療または予防のための医薬。
【請求項５】
Ｔｈ２病が、アレルギー性疾患、炎症性腸疾患、自己免疫疾患、リンパ球性プラズマ細胞性疾患、易感染性、後天性免疫不全症候群からなる群から選択される、請求項４に記載の医薬。
【請求項６】
Ｔｈ２病が、リンパ球性プラズマ細胞性疾患である、請求項５に記載の医薬。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれかに記載の組成物を含む、Ｔｈ２病の改善または予防のための経口摂取物。
【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｔｈ１／Ｔｈ２生体反応インバランスを調節するための組成物、および同組成物を含むＴｈ２病などの治療または予防のための医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の免疫機構は種々の免疫担当細胞を中心に構成されているが、このうち、免疫バランスの制御に重要な役割を担う細胞群として、ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ細胞）がある。Ｔｈ細胞は、産生するサイトカインのパターンによりいくつかの種類に分類されているが（例えば、非特許文献１および２参照）、なかでもＴｈ１およびＴｈ２細胞は、生体内の免疫学的環境を方向付ける細胞として重要である。すなわち、Ｔｈ１細胞は、主たるはＩＦＮ−γと共同して、生体に反応するのに対し、Ｔｈ２細胞は主たるはＩＬ−４と共同して生体に反応する。正常な状態においては、両者はバランスをとって生体を制御しているが、このバランスが崩れると様々な疾患の発症の原因となる。
【０００３】
特に近年では、アトピー性皮膚炎や花粉症などの、Ｔｈ２型免疫反応の亢進に伴うＴｈ２病の有病率が増加傾向にあり、大きな問題となっている。Ｔｈ２病の治療には、従来ステロイド剤などの免疫を抑制する薬剤が用いられることが多かったが、かかる薬剤はＴｈ２反応を抑制するばかりでなくＴｈ１／Ｔｈ２比を低下させてしまう上に、長期投与により種々の副作用が生じることがあるため、このような欠点のないアプローチが求められていた。
【０００４】
こうした要請に応えるべく、これまでにＴｈ２病を治療するための数多くの試みがなされてきた。例えば、特許文献１には、トートマイシンまたはトートマイシンアナログを有効成分として含む、Ｔｈ２細胞選択的免疫抑制剤が、特許文献２には、ビオチンを含有するＴｈ２細胞分化抑制剤が、特許文献３には、カテキン類などを含むＴｈ２型サイトカインを抑制する化粧料および食品が、そして、特許文献４には、乳酸菌の菌体成分を主成分とするＴｈ１誘導剤がそれぞれ記載されている。しかしながら、上記のいずれの試みにおいても依然として満足できる効果は得られておらず、また、表現型あるいは細胞内左型Ｔｈ１／Ｔｈ２比から評価はされておらず、さらなる研究開発が求められていた。
【０００５】
【特許文献１】特開平８−１８８５３３号公報
【特許文献２】特開２００１−１８７７３４号公報
【特許文献３】特開２００４−７５６１９号公報
【特許文献４】特開２００３−１３７７９５号公報
【非特許文献１】J. Immunol.,1986, 136(7), 2348-57
【非特許文献２】Science, 1994, 265(5176), 1237-40
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、Ｔｈ２優位な状態を抑制すると同時にＴｈ１反応を増加させるのに有効な組成物、およびＴｈ２病の効果的な治療または予防のための医薬の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記目的のために鋭意研究を重ねた結果、驚くべきことにシママンネンタケを含む組成物が、顕著なＴｈ２生体反応を抑制するとともに、Ｔｈ１反応を改善し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、シママンネンタケを含む、Ｔｈ２を抑制しながら同時にＴｈ１を優位にするための組成物に関する。
さらに、本発明は、Ｔｈ１／Ｔｈ２比を調整し正常とせしめるための、上記組成物に関する。
さらにまた、本発明は、医薬用または経口摂取物用である上記組成物に関する。
【０００９】
本発明はまた、上記組成物を含む、Ｔｈ２あるいはＴｈ３優位病の治療または予防のための医薬に関する。
本発明はさらに、Ｔｈ２病が、アレルギー性疾患、炎症性腸疾患、自己免疫疾患、Ｔｈ２反応優位を呈するＴｈ３病であるリンパ球性プラズマ細胞性疾患、易感染性、後天性免疫不全症候群からなる群から選択される上記医薬に関する。
本発明はさらにまた、リンパ球性プラズマ細胞性疾患の治療または予防のための上記医薬に関する。
また、本発明は、上記組成物を含む、Ｔｈ２反応の優位性の抑制または予防のための経口摂取物に関する。
さらに、本発明は、上記組成物を含む、Ｔｈ２反応の恒常性の維持とこのような解析から得られる疾患の予防・予知を明らかにする診断薬の作用を有する経口摂取物にも関する。
【００１０】
シママンネンタケが抗癌活性およびＩＬ−１２産生誘導活性を有することは、特開２００１−３３５５０７号公報や再表０１／７０２５１号公報などに記載されているが、同成分がＴｈ１／Ｔｈ２のインバランスを調節し、Ｔｈ２病を予防または治療し得ることは全く知られていなかった。また、八木田ら（Biotherapy, 2002, 16(6), 581-586）によれば、ＩＬＸおよびＰＳＫの投与を受けている癌患者にシママンネンタケを追加投与したところ、臨床的には有意な改善が見られたが、Ｔｈ１／Ｔｈ２比に投与前後で有意な差が見られなかったことが報告されている。したがって、シママンネンタケを含む本発明の組成物がＴｈ１／Ｔｈ２インバランスを調節し、Ｔｈ２優位な疾病を治療し得ることは、当業者の予測し得ない、驚くべき効果であるといえる。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の組成物は、生体内のＴｈ１／Ｔｈ２インバランスを調節することができるため、現在社会的問題となっているアトピー性皮膚炎や花粉症などのＴｈ２病やＴｈ３病を治療または予防することや、Ｔｈ１型免疫反応を増強し、ウイルスや細菌に対する感染抵抗性を高めることなどが可能となる。さらに、本発明は、長期投与しても副作用がないため、慢性的な経過をたどることの多いＴｈ２病の治療や予防に特に有用であり、また、テーラーメイド療法（個別治療）の立案が容易となるなど、ヒト医療、獣医療、ヒトおよび動物の保健衛生などの諸分野において多大な貢献が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の一態様は、シママンネンタケを含む、Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランス調節のための組成物に関する。
ここで、Ｔｈ１／Ｔｈ２比とは、典型的には全身または局所におけるＴｈ１細胞反応（サイトカインであるＩＦＮ−γを含む）とＴｈ２細胞反応（サイトカインであるＩＬ−４を含む）との比率のことをいう。Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、種々の方法により測定することができる。例えば、Ｔｈ１／Ｔｈ２比は、ＣＤ４陽性細胞の細胞内に存在するＴｈ１型サイトカインおよびＴｈ２型サイトカインを染色し、フローサイトメトリー法（特開２００２−３４０３号公報参照）や免疫組織化学的手法で解析することにより測定可能である。
【００１３】
本発明において、Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスの調節とは、Ｔｈ２反応の優位性を低下せしめることであり、これには、低下したＴｈ１のインバランスを優位な状態にすることと、アナジーにあるＴｈ１／Ｔｈ２比を正常値に上昇させることとが含まれる。Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスとは、Ｔｈ１／Ｔｈ２比が正常値から乖離した状態をいい、例えば、Ｔｈ１とＴｈ２の反応（％）が正常値の１５０％以上もしくは７５％以下、または２００％以上もしくは５０％以下などの状態を包含するものとする。Ｔｈ１とＴｈ２の正常値は、生物種間および個体間で生体反応としての特徴があると考えられるため、健康な状態における各個体のＴｈ１とＴｈ２の生体反応を基準とすることが望ましく、当業者であれば前記の方法などを用いてかかる値を容易に決定する（生体反応のインバランスをシフトする）ことができる。
【００１４】
Ｔｈ１とＴｈ２反応の調節の程度としては、例えば、アナジーにあるＴｈ１とＴｈ２反応を増大させる場合、本発明の組成物を投与した後のＴｈ１／Ｔｈ２のバランスを、投与前のＴｈ１／Ｔｈ２インバランスに対して１５％以上、５０％以上、１５０％以上、さらには２１０％以上シフトさせることを含むものとする。
【００１５】
本発明の組成物に用いるシママンネンタケは特に限定されず、天然由来のものでも、培養によるものでもよいが、含有成分の均一性や生体への安全性などを考慮すると、培養によるものが好ましい。使用する部位は、有効成分がより高濃度で含まれている菌糸体画分が好ましい。本発明に用いる場合、シママンネンタケは、培養した菌糸体を乾燥し、粉末化したものが特に好ましい。かかる加工がなされたシママンネンタケ加工食品は、「克元勝」として市販されており（株式会社セイシン企業）、これを本発明に用いてもよい。シママンネンタケ菌糸体画分の培養・保存方法は特開２００３−６１６４４号公報などに記載されている。
【００１６】
また、本発明の組成物は、医薬および、食品添加物、食品、飲料などの経口摂取物をはじめとする種々の用途に用いることができ、用途に応じて、シママンネンタケ以外に、公知の種々の好適な成分を配合することができる。例えば、医薬用の組成物には、賦形剤、崩壊剤、結合剤、潤沢剤、矯味剤、着色剤、香料、安定剤、殺菌剤、防腐剤などの種々の好適な添加物を配合することができる。本発明の組成物におけるシママンネンタケの配合割合は特に制限されないが、後述の用量を有効に投与することができるような割合とするのが好ましく、例えば、組成物全体に対して１〜１００質量％の任意の割合でシママンネンタケを配合することができる。
【００１７】
本発明の組成物には、上記の外、１種または２種以上のさらなる有効成分を含むことができる。かかる成分は特に制限されないが、抗生剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、消化管作用剤、止瀉剤、気管支拡張剤、鎮痛剤、ビタミン剤、および、シママンネンタケ以外のキノコ成分やサメ軟骨等の生物学的活性を有する種々の動植物成分などが挙げられる。これらの有効成分は、通常それぞれの成分の効果が有効なＴｈバランスをもたらす量で配合され、かかる量は当業者によく知られている。例えば、サメ軟骨を配合する場合は、サメ軟骨は好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ／日以上、より好ましくは８０ｍｇ／ｋｇ／日以上投与できるような量で配合され、シママンネンタケとの質量比は好ましくは１：１〜１：５０、より好ましくは１：２〜１：２０である。
【００１８】
本発明の別の態様は、上記の組成物を含むＴｈ病の治療または予防のための医薬、および、該疾患の改善または予防のための、食品、飲料、食品添加物などの経口摂取物に関する。
ここで、Ｔｈ病とは、Ｔｈ１〜３型免疫反応が優位な、あるいは低下した状態を伴う疾患群であって、Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスあるいはアンバランス（不均衡）の調節により治療し得るものを指し、例えば、Ｔｈ２型免疫反応の亢進によるアレルギー性の胃炎、関節炎、下痢、喉頭炎、皮膚炎、鼻炎、喘息、結膜炎、気管支炎、肺炎、アトピー性皮膚炎、気道アレルギー、花粉症、枯草熱などのアレルギー性疾患、全身性エリマトーデス、ループス腎炎などの自己免疫疾患、炎症性腸疾患、ならびに、Ｔｈ１型反応の減弱とＴｈ２の低下を伴う易感染性、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）などが包含される。また、Ｔｈ３反応が優位なＴｈ病としてリンパ球性プラズマ細胞性膝関節炎、リンパ球性プラズマ細胞性口内炎、リンパ球性プラズマ細胞性肢端皮膚炎などのリンパ球性プラズマ細胞性疾患があげられる。
【００１９】
本発明の医薬の剤形は特に限定されないが、経口投与に適したものが好ましく、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、ドロップ剤などに製剤してもよい。また、本発明の経口摂取物は、経口的に摂取されるものであれば特に制限されず、例えば、任意の種類および形態の食品、飲料、食品添加物などを包含するものとする。
本発明の組成物を配合した医薬および経口摂取物の製造にあたっては、当業者に既知の任意の方法を用いることができる。
本発明の組成物および医薬の投与量、または経口摂取物の摂取量は、有効な効果発現を考慮すれば、シママンネンタケとして好ましくは５ｍｇ／ｋｇ／日以上、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ／日以上であり、経口的に投与するのが好ましい。上記用量は、１日分を１回に投与もしくは摂取してもよいし、または１日量を複数回に分けて投与もしくは摂取してもよい。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの記載に何ら限定されるものではない。
対象の処置
本発明の組成物を投与する対象として、Ｔｈ２あるいはＴｈ３反応優位なリンパ球性プラズマ細胞性膝関節炎（ＬＰＧＡ）と診断されたイヌ（フラットコーテッド・レトリバー、雄、１０ヶ月齢）を用いた。同対象は、７ヶ月齢頃から左後肢の跛行が見られ、臨床検査、Ｘ線・ＭＲ検査、病理組織学的検査などを行ったところＬＰＧＡと診断されたものである（日獣会誌, 2004, 57, 521-524参照）。
対象には、シママンネンタケとサメ軟骨とを１：４の質量比で含む、「ベターシャーク＋克元勝（ペット用）」（株式会社セイシン企業）を、１袋（１．５ｇ）／日の用量で６ヶ月間投与した。投与開始前と、投与開始後３日目に、対象の罹患関節液を、また、投与開始後１、３、５および７日目に対象の末梢血をそれぞれ採取した。また、処置期間中、対象の全身状態および跛行の状態を観察した。
【００２１】
Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスの測定
Ｔｈ１／Ｔｈ２インバランスは、フローサイトメトリー法を用い、ＣＤ４陽性で細胞内ＩＦＮ−γタンパク質を有する細胞（Ｔｈ１反応呈示細胞）、および、ＣＤ４陽性で細胞内に存在あるいは蓄積して存在するＩＬ−４タンパク質を有する細胞（Ｔｈ２反応細胞）の発現を求めることにより評価した。
なお、Ｔｈ１比およびＴｈ２比は、測定細胞全体に対するＴｈ１反応細胞およびＴｈ２反応細胞の発現率をそれぞれ示し、Ｔｈ３は、細胞内ＴＧＦ−β発現細胞（Ｔｈ３細胞）の測定細胞全体に対する割合を示す。
【００２２】
【表１】


図１および表１から分かるとおり、処置前の関節液試料におけるＴｈ１／Ｔｈ２インバランスは０．０１４と、Ｔｈ２優位のＴｈ１／Ｔｈ２インバランスの状態にあったが、本発明の組成物を投与した後のＴｈ１／Ｔｈ２インバランスは１２．３と、Ｔｈ１優位の状態に劇的に変化した。これは、本発明の組成物がＴｈ１／Ｔｈ２インバランスを調節したことを明白に示すものである。上記のとおり、シママンネンタケがＴｈ１／Ｔｈ２インバランスを有意に変化させることは知られていなかったところ、同成分の投与によりＴｈ２が減少しＴｈ１がこれほどまで顕著に増大したことは全く驚くべきことである。
【００２３】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞活性の測定
ＮＫ細胞活性は、イヌのリンパ球性白血病細胞（ＣＬ−１）に対する細胞傷害作用に基づいて評価した。上記で採取した対象の血液試料をＣＬ−１細胞と混合培養し、試料中に含まれるＮＫ細胞が標的細胞であるＣＬ−１細胞を傷害した程度を、化学発光（ＣＬ）法によるＣＬ活性（ｃｐｍ／ウェル）で評価した。図２に示す結果から明らかなように、本発明の組成物の投与により、ＮＫ細胞の活性は顕著に増加した。
【００２４】
処置後の臨床経過
対象の跛行は、処置開始後３日目から改善し始め、６ヶ月後には殆ど見られなくなった。
以上の結果から、リンパ球性プラズマ細胞性膝関節炎がＴｈ２アナジーの状態を伴うこと、および、本発明の組成物がかかるリンパ球性プラズマ細胞性膝関節炎を治療し得ることが初めて明らかとなった。
【００２５】
なお、リンパ球性プラズマ細胞性膝関節炎などのリンパ球性プラズマ細胞性疾患には、免疫学的機序が関与していることは示唆されていたものの、実際の病因は依然不明であり、これまで有効な治療法は見出されていなかったところ（日獣会誌, 2004, 57, 521-524参照）、本発明者らの上記発明は、かかる難病のメカニズムを解明するとともに、有効な治療・予防法の開発に直結するものであり、学術的にも、臨床的にも極めて意義深いものであるといえる。
【産業上の利用可能性】
【００２６】
上記のとおり、本発明の組成物は、現在社会的問題となっている生体反応による疾患形成（Ｔｈインバランスあるいはアンバランス反応）を治療または予防することや、細菌に対する感染抵抗性を高めることが可能であることから、ヒト医療、獣医療、ヒトおよび動物の保健衛生などの諸分野において多大な貢献が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】本発明の組成物による処置の前後における、対象の罹患関節液中のＴｈ１／Ｔｈ２生体反応を示したグラフである。
【図２】本発明の組成物による処置中のＮＫ細胞活性の推移を示したグラフである。
【出願人】 【識別番号】５９１１２７９１７
【氏名又は名称】株式会社セイシン企業
【出願日】 平成１７年５月３１日（２００５．５．３１）
【代理人】 【識別番号】１００１０２８４２
【弁理士】
【氏名又は名称】葛和 清司
【公開番号】 特開２００６−３３５６５６（Ｐ２００６−３３５６５６Ａ）
【公開日】 平成１８年１２月１４日（２００６．１２．１４）
【出願番号】 特願２００５−１５９３２３（Ｐ２００５−１５９３２３）