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【発明の名称】 リパーゼ阻害剤
【発明者】 【氏名】有島 俊治
【住所又は居所】茨城県筑波郡谷和原村絹の台４丁目３番地 不二製油株式会社つくば研究開発センター内

【氏名】橘 伸彦
【住所又は居所】大阪府泉佐野市住吉町１番地 不二製油株式会社阪南事業所内
【要約】 【課題】本発明の目的は、脂肪の過剰摂取による肥満や肥満が原因で発生する疾病の予防や治療に寄与し得て、且つあらゆる油脂に添加し得る油溶性のリパーゼ阻害剤を提供することにある。

【解決手段】本発明は、ＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロール（Ｌは炭素数１６〜２２の長鎖飽和脂肪酸、Ｕは炭素数１６〜２２の不飽和脂肪酸より構成される非対称型トリアシルグリセロール）を有効成分とするリパーゼ阻害剤であり、脂質吸収阻害剤であり、抗肥満剤であり、または高脂血症改善剤であって、これらの剤を含有する食品であり、これらの剤を含有する医薬である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロール（Ｌは炭素数１６〜２２の長鎖飽和脂肪酸、Ｕは炭素数１６〜２２の不飽和脂肪酸より構成される非対称型トリアシルグリセロール）を有効成分とするリパーゼ阻害剤。
【請求項２】
請求項１記載の非対称型トリアシルグリセロールを有効成分とする脂質吸収阻害剤。
【請求項３】
請求項１記載の非対称型トリアシルグリセロールを有効成分とする抗肥満剤。
【請求項４】
請求項１記載の非対称型トリアシルグリセロールを有効成分とする高脂血症改善剤。
【請求項５】
請求項１乃至請求項４何れか1項記載の剤を含有する食品。
【請求項６】
請求項１乃至請求項４何れか1項記載の剤を含有する医薬。
【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、リパーゼ阻害剤及びそれを含有する食品に関する。さらに詳しくは、生体内での脂質の消化吸収をにない、肥満症、高脂血症の鍵となる膵臓リパーゼを有効に阻害してこれらの疾病の抑制や予防に寄与し得る安全性の高い油溶性のリパーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食事からの脂肪摂取の過剰による肥満と糖尿病・高脂血症・循環器疾患といった生活習慣病の関係が取り上げられ、問題とされている。これを改善する方法として、１．食品中の油脂含量の低下、２．油脂そのものの低カロリー化、３．油脂代替物での置換、４．代謝の促進、５．リパーゼ阻害剤などが提案されている。５．のリパーゼ阻害剤については、脂肪の膵臓リパーゼによる分解を阻害して肥満を抑制、予防する薬剤の開発が試みられている。
例えば、特許文献１では、紅景天、イワベンケイ、サボンソウ、ボルド、パスチャカ、トルメンチラ、エルカンプリ、ウコンイソマツ、チュチュウアシ、キャッツクロー、シナモン、山椒、センダングサ、ウコギ、ストロベリー、モージェ、バラ、柿、セイヨウオトギリソウ、杜仲及び白茶からなる植物の群より選ばれる少なくとも１種を含有するリパーゼ阻害剤が提案されている。
【０００３】
また、特許文献２では、ユッカ、高麗人参、ジャスミン茶、山査子、黄杞茶、ルイボス茶、大豆胚芽、生姜、および杜仲茶よりなる群から選択される少なくとも1種以上の素材からの抽出エキスを有効成分とするリパーゼ阻害剤が提案されている。
しかしながら、抽出物が殆ど水溶性のものであり油脂に混ぜることが出来なかったり、喫食時に服用させるしか方法がなく煩雑であったり、また抽出物の効果が不充分であったりしてその殆どが市場に出ていない。
一方、油脂に溶解できる油溶性の物質としては、特許文献３において、テトラヒドロリプスタチンを胃腸リパーゼ阻害剤として使用することが提案されている。この阻害剤はリパーゼそのものと直接共有結合して失活させるといわれており、その効果はかなり強力で一部には下痢症状も観られ、食品としては安全性の面での懸念が残り、よりマイルドに効果を発揮するような油溶性のリパーゼ阻害剤が望まれている。
【０００４】
【特許文献１】特開２００２−１７９５８６号公報
【特許文献２】特開２００２−２７５０７７号公報
【特許文献３】米国特許第４５９８０８９号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、脂肪の過剰摂取による肥満や肥満が原因で発生する疾病の予防や治療に寄与し得て、且つあらゆる油脂に添加し得る油溶性のリパーゼ阻害剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記の問題を解決するため鋭意研究をおこなった結果、グリセロールの１位が長鎖飽和脂肪酸、２位と３位が長鎖不飽和脂肪酸より構成される非対称型トリアシルグリセロール及びグリセロールの３位が長鎖飽和脂肪酸、１位と２位が長鎖不飽和脂肪酸より構成される非対称型トリアシルグリセロールが膵臓リパーゼの活性を阻害することを発見し、この非対称型トリアシルグリセロールをベース油脂中に少量含むことにより油脂全体の分解速度が緩和されることを見出したのである。
即ち本発明の第１は、ＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロール（Ｌは炭素数１８〜２２の長鎖飽和脂肪酸、Ｕは炭素数１６〜２２の不飽和脂肪酸より構成される非対称型トリアシルグリセロール）を有効成分とするリパーゼ阻害剤である。第２は、第１記載の非対称型トリアシルグリセロールを有効成分とする脂質吸収阻害剤である。第３は、第１記載の非対称型トリアシルグリセロールを有効成分とする抗肥満剤である。第４は、第１記載の非対称型トリアシルグリセロールを有効成分とする高脂血症改善剤である。第５は、第１乃至第４何れか1に記載の剤を含有する食品である。第６は、第１乃至第４何れか1に記載の剤を含有する医薬である。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールはリパーゼ活性を強力に阻害し、かつ油溶性でありあらゆる油脂に添加でき、脂肪の過剰摂取による肥満や肥満が原因で発生する疾病の予防や治療に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明における、リパーゼによる加水分解を遅延させる油溶性物質ＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールは、そのグリセロールの１位、又は３位に結合する脂肪酸が飽和脂肪酸で炭素数１６のパルミチン酸から炭素数２２のベヘン酸までのものであってより長鎖脂肪酸が好ましく、２位と３位（ＬＵＵ型の場合）又は１位と２位（ＵＵＬ型の場合）に結合する脂肪酸が炭素数１６のパルミトオレイン酸から炭素数２２のエルシン酸までの脂肪酸で構成されるもので、長鎖不飽和脂肪酸はモノ不飽和脂肪酸からポリ不飽和脂肪酸までのいずれでも良いが、実際に使用する場合の酸化安定性の観点からはモノ不飽和が好ましい。このようなＬＵＵ型、又はＵＵＬ型トリアシルグリセロールの一部例をあげるとＳＯＯ（１位がステアリン酸、２,３位がオレイン酸）、ＯＯＳ（３位がステアリン酸、１,２位がオレイン酸）、ＳＬｉＬｉ（１位がステアリン酸、２,３位がリノール酸）、ＳＬｎＬｎ（１位がステアリン酸、２,３位がリノレン酸）、ＢＯＯ（1位がベヘン酸、２,３位がオレイン酸）、ＢＬｉＯ（１位がベヘン酸、２位がリノール酸、３位がオレイン酸）などが例示でき、これらの中ではＢＯＯ（１位がベヘン酸、２,３位がオレイン酸）、ＯＯＢ（３位がベヘン酸、１,２位がオレイン酸）が好ましい。
【０００９】
このＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールの油脂は、そのグリセロールの１位、又は３位に結合する脂肪酸が長鎖飽和脂肪酸であるため、リパーゼによる加水分解を受け難い性質を有し、このＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールをベース油脂中に０．５〜３０重量％、好ましくは１〜１５重量％、最も好ましくは１〜１０重量％含むことで、リパーゼによる加水分解が緩和・遅延されるというものである。
油脂に対するリパーゼ阻害剤による加水分解の緩和・遅延程度としては、マイルドな阻害効果が好ましく、具体的には摂取油脂の1〜３割程度、好ましくは１〜２割程度が分解されにくい状態を理想とする。
また、ＬＬＵ型やＬＵＬ型トリアシルグリセロールのように長鎖飽和脂肪酸が分子内に２本導入されたものでは融点が上昇し体温付近では結晶化してしまうため、生体内でリパーゼの基質として認識されにくくなり、阻害効果が期待できない。
【００１０】
このＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールは一般的には動物・植物・魚由来の長鎖飽和脂肪酸を含む油脂あるいはそのエステル体と、長鎖不飽和脂肪酸を含む油脂とを任意の配合で混合した後、１，３位特異性のあるリパーゼを使用して公知の方法でエステル交換させることで得られる。植物油脂としては例えば、大豆油、菜種油、パーム油、綿実油、ヒマワリ油、コーン油、キャノーラ油などが挙げられ、動物油脂としては牛脂、豚脂、魚油などが挙げられる。また、非選択的エステル交換、例えばナトリウムメチラートなどのアルカリ系触媒を用いてつくることも可能ではあるが、位置異性体であるＵＬＵ、ＵＵＵ、ＬＬＵ、ＬＵＬ、ＬＬＬができるため、その後の濃縮操作が煩雑となり、あまり実用的ではない。かくして得られたＬＵＵ型及びＵＵＬ型油脂はその後、分別などの通常の加工処理を施して８０％前後まで濃縮することが出来る。
【００１１】
本発明のＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールはそのまま使用してもよいし、また任意に他のベース油脂にブレンドして使用してもよい。ブレンドされる比率は期待する効果や使用する系によって異なるが、ベース油脂は食用の動・植物油脂であればなんら制限はない。
【００１２】
本発明のＬＵＵ型及びＵＵＬ型トリアシルグリセロールは、通常油脂を含有する食品に広く使用することができる。例えばクリーム・マーガリン・マヨネーズ・ドレッシング・乳製品といった乳化食品、チョコレートに代表される菓子類、パン類、ハム・ソーセージ等の食肉加工品、かまぼこ・ちくわ等の水産加工食品などに添加して風味・食感を損なうことなく使用できる。
【００１３】
本発明のリパーゼ阻害剤、脂質吸収阻害剤、抗肥満剤、高脂血症改善剤及びこれらを含有する医薬の投与方法は、経口投与または非経口投与のどちらでよい。投与に際しては、有効成分を経口投与、直腸内投与、注射などの投与方法に適した固体または液体の医薬用担体と混合して、製剤の形態で投与することができる。
【実施例】
【００１４】
以下に本発明の実施例を示し本発明をより詳細に説明するが、本発明の精神は以下の実施例に限定されるものではない。なお、例中、％及び部は、いずれも重量基準を意味する。
【００１５】
製造例１
沃素価８４のハイオレイックヒマワリ油５０部と純度９５%のベヘン酸エチル５０部を混合し、１，３位特異性のリパーゼ（Novozaymes, Lipozyme RM-IM）を用いてエステル交換を行うことにより反応油を得、蒸留によりエステル類を除去した後、さらにヘキサン１００部を加え−５℃で晶析・分別を行うことにより純度７０％のＬＵＵ／ＵＵＬ画分２０部、純度７８％のＬＵＬ画分３０部を得た。
【００１６】
薬理試験１
この得られたＬＵＵ／ＵＵＬ画分を大豆油中１部（ＬＵＵ／ＵＵＬ純度約０．７％），５部（ＬＵＵ／ＵＵＬ純度約３．５％），１０部（ＬＵＵ／ＵＵＬ純度約７．０％）それぞれ置換した系やＬＵＵ／ＵＵＬ画分そのもの（ＬＵＵ／ＵＵＬ純度７０％）の系で、以下のリパーゼ活性測定を行った。各油脂８０mgをサンプリングし、ホスファチジルコリン（Sigma社）８０mg、タウロコール酸Na（和光純薬工業）5mg、０．１M NaClを含む０．１MTES緩衝液９ml（PH ７）を各加えた後、超音波発振子で１分間乳化したものを基質した。基質３００μlを採取し、ブタ膵臓リパーゼ（Sigma社）を５μl（5U）加え、３７℃で１時間反応後、３mlの抽出溶媒（クロロホルム／ヘプタン／メタノール＝４９部／４９部／２部で混合したもの）を加え良く攪拌した後、２５００rpmで５分間遠心分離を行い、上層を除去し、下層に銅試薬（トリエタノールアミン２．９８ｇ、硝酸銅２．４２ｇ、NaOH０．４８gを水２００ｍｌに溶解し、さらにNaClを６６ｇ加えたもの）を１ml加え、１０分間攪拌し、２５００rpmで１０分遠心分離し、上層１．５mlを採取し、発色試薬（バソクプロイン０．２g、ブチルヒドロキシアニソール０．１gをクロロホルム ２００mlに溶解したもの）１．５mlを加えて遊離した脂肪酸をOD４８０ での吸光度にて定量した。表−１に大豆油そのものの系に対する相対活性を示した。表１に示されるようにＬＵＵ／ＵＵＬで１部を置換した系で約１５％、５部を置換した系で約２５％活性が阻害されることが判明した。
【００１７】
比較薬理試験１
製造例１で得られたＬＵＬ画分を大豆油中１部（ＬＵＬ純度約０．８％），５部（ＬＵＬ純度約３．９％），１０部（ＬＵＬ純度約７．８％）それぞれ置換した系、及びＬＵＬ画分そのものの系（ＬＵＬ純度７８％）で先述の試験例と同様のリパーゼ活性測定を行った。表１に示されるようにＬＵＬの置換量が増加しても顕著な阻害効果は認められず、また結晶化による一部乳化破壊も確認され、リパーゼの加水分解抑制の効果は無いと判断された。
【００１８】
比較製造例１
沃素価１のトリベヘン４０部と純度９８％のオレイン酸エチル６０部、さらにヘキサン３００部を混合して１，３位特異性のリパーゼ（Novozymes, Lipozyme RM-IM）を用いてエステル交換を行うことにより反応油を得、脱溶剤して蒸留によりエステル類を除去した後、さらにヘキサン１００部を加え所定の温度で晶析・分別を行うことにより純度７２％のＬＬＵ／ＵＬＬ画分１５部、純度７０％のＵＬＵ画分１０部を得た。
【００１９】
比較薬理試験２
比較製造例１で得られたＬＬＵ／ＵＬＬ画分を大豆油中１部（ＬＬＵ／ＵＬＬ純度約０．７％），５部（ＬＬＵ／ＵＬＬ純度約３．６％），１０部（ＬＬＵ／ＵＬＬ純度約７．２％）それぞれ置換した系、及びＬＬＵ／ＵＬＬ画分そのものの系（ＬＬＵ／ＵＬＬ純度７２％）で先述の試験例と同様のリパーゼ活性測定を行った。表１に示されるように、ＬＬＵ／ＵＬＬの置換量が増えるとややリパーゼの加水分解抑制効果は認められるが、ＬＵＵ／ＵＵＬ程の効果は認められなかった。
【００２０】
比較薬理試験３
比較製造例１で得られたＵＬＵ画分を大豆油中１部（ＵＬＵ純度約０．７％），５部（ＵＬＵ純度約３．５％），１０部（ＵＬＵ純度約７．０％）それぞれ置換した系、及びＵＬＵ画分そのものの系（ＵＬＵ純度７０％）で先述の試験例と同様のリパーゼ活性測定を行った。表１に示されるように、ＵＬＵの置換量が増えても、顕著なリパーゼの加水分解抑制効果は認められなかった。
【００２１】
【表１】


【００２２】
マウスでの消化吸収試験
製造例１で得られたＬＵＵ／ＵＵＬ画分を使用して約２ヶ月間のマウスでの消化吸収試験を行った。使用したマウスはＣ５７ＢＬ／６Ｊで７週齢から１週間予備飼育後、食餌組成はＡＩＮ−９３Ｇ組成を一部改良した表２の配合飼料にて大豆油群をコントロールにして各群６匹で約２ヶ月間飼育し、体重変化・飼料効率・体脂肪率の測定を行った。体脂肪率の測定は、実験マウス専用エックス線骨密度測定装置、ＰＩＸＩｍｕｓ２（ＧＥ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。マウスでの５６日間の消化吸収試験の結果、ＳＵＵ／ＵＵＳ画分を使用した群では体重で約９％、飼料効率で１２％の低下が認められ、また体脂肪率では約１３％の低下が観られ、脂肪の過剰摂取による肥満にのＬＵＵ／ＵＵＬ微量添加が効果的であることが示唆された。これらの結果を表３に纏めた。
【００２３】
【表２】


【００２４】
【表３】


【産業上の利用可能性】
【００２５】
本発明により、リパーゼ活性を緩やかに阻害し、かつ油溶性であり、あらゆる食用油脂に添加でき、脂肪の過剰摂取による肥満や肥満が原因で発生する疾病の予防や治療に有効であるリパーゼ阻害剤、およびそれを含む油脂組成物を得ることが可能となったのである。
【出願人】 【識別番号】０００２３６７６８
【氏名又は名称】不二製油株式会社
【住所又は居所】大阪府大阪市中央区西心斎橋２丁目１番５号
【出願日】 平成１６年１１月３０日（２００４．１１．３０）
【代理人】
【公開番号】 特開２００６−１５１８７５（Ｐ２００６−１５１８７５Ａ）
【公開日】 平成１８年６月１５日（２００６．６．１５）
【出願番号】 特願２００４−３４５０９９（Ｐ２００４−３４５０９９）