| 【発明の名称】 |
紫外線による皮膚障害防御用組成物 |
| 【発明者】 |
【氏名】高橋 隆幸
【氏名】岡本 正志
【氏名】井岡 信彦
【氏名】石丸 純一
【氏名】アイカラッチ・ケタワン
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| 【要約】 |
【課題】紫外線による皮膚障害の防御作用に優れ、且つ安定性・安全性の高い紫外線による皮膚障害防御用組成物、および当該組成物を含有する皮膚外用剤を提供する。
【解決手段】紫外線による皮膚障害防御剤としてコエンザイムＱ10を、好ましくは０. |
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コエンザイムＱ10を含有することを特徴とする紫外線による皮膚障害防御用組成物。
【請求項２】
コエンザイムＱ10の含量が０.０００１〜１０質量％である請求項１記載の組成物。
【請求項３】
抗酸化剤、紫外線遮断剤、角層剥離剤、界面活性剤、香料、色素、防腐剤、ｐＨ調整剤、キレート剤からなる群から選択される少なくとも１種を含有する請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
請求項１〜３の何れか１項に記載の組成物を含有する皮膚外用剤。
【請求項５】
皮膚外用剤の形態が、ローション、軟膏、クリーム、乳液、貼付剤、およびジェルから選択される、請求項４記載の皮膚外用剤。
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【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、コエンザイムＱ10を含有する紫外線による皮膚障害防御用組成物に関する。詳細には、紫外線による皮膚障害の防御作用に優れ、且つ安定性・安全性の高い紫外線による皮膚障害防御用組成物、および当該組成物を含有する化粧品および／または医薬部外品等の皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線による皮膚障害は、シミ、ソバカス、シワなどの皮膚の老化のみならず、皮膚ガンの原因の一つとして問題となっている。近年、特にシミ、ソバカスを防ぎ、肌を白く保つことが所望されており、紫外線による皮膚障害は深刻な肌の悩みの一つになっている。
【０００３】
従来の紫外線による皮膚障害を防御する手段としては、紫外線吸収剤（サンスクリーン剤）の使用が最も一般的である。しかしながら、これらの紫外線吸収剤は、紫外線が皮膚に到達することを防ぐ目的で用いられており、皮膚の細胞自体の紫外線障害を防御するものではない。また、紫外線による皮膚障害を防御する成分として、インドール−３−アルデヒド、３−ヒドロキシアセチルインドールなどのインドール化合物（特開平７−４８２３９）、テトラヒドロクルクミン（特開平６−１２８１３３）、イソフラボン誘導体（特開平６−４０８７６）を皮膚外用剤に配合することが提案されている。しかし、これらの化合物は、紫外線による防御作用が十分でなかったり、また安全性の問題が生じる可能性がある。このため、紫外線による皮膚障害の防御作用に優れ、且つ安定性・安全性の高い紫外線による皮膚障害防御用組成物が所望されている。
【０００４】
一方、コエンザイムＱ10は、ユビキノン類と総称される、２,３−ジメトキシ−５−メ
チル−６−ポリプレニル−１,４−ベンゾキノンの側鎖のイソプレン単位が１０のユビキ
ノンである。このコエンザイムＱ10は、ユビデカレノンまたは補酵素Ｑ10とも呼ばれ、日本薬局方に記載されている。またコエンザイムＱ10は、生体内で電子伝達系および抗酸化システムに関与し、各種疾病に対して優れた薬理効果を示す物質である。例えば、免疫機能を向上させることにより心臓病、高血圧、リウマチ性弁疾患に対する有効性等が確認されている。また歯槽の炎症に対する有効性、皮膚外用剤としての老化防止に対する有効性も期待されている。このようにコエンザイムＱ10は高い生理活性を持ち、且つ生体内に存在する安全性の高い物質であるため、近年、食品への適用が認められた。また、還元型のコエンザイムＱ10がメラニンチロシナーゼを阻害することも知られている（特開昭６１−２７９０９）。しかしながら、コエンザイムＱ10が紫外線による皮膚障害の防御作用に優れることは全く知られていない。
【特許文献１】特開平７−４８２３９号公報
【特許文献２】特開平６−１２８１３３号公報
【特許文献３】特開平６−４０８７６号公報
【特許文献４】特開昭６１−２７９０９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、紫外線による皮膚障害の防御作用に優れ、且つ安定性・安全性の高い紫外線による皮膚障害防御用組成物、および当該組成物を含有する皮膚外用剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明者等は、鋭意研究を重ねた結果、紫外線による皮膚細胞の障害が、コエンザイムＱ
10によって防御できることを発見し、本発明を完成するに至った。
したがって、本発明は、
［１］コエンザイムＱ10を含有することを特徴とする紫外線による皮膚障害防御用組成物；
［２］コエンザイムＱ10の含量が０.０００１〜１０質量％である上記［１］記載の組成
物；
［３］抗酸化剤、紫外線遮断剤、角層剥離剤、界面活性剤、香料、色素、防腐剤、ｐＨ調整剤、キレート剤からなる群から選択される少なくとも１種を含有する上記［１］または［２］記載の組成物；
［４］上記［１］〜［３］のいずれかに記載の組成物を含有する皮膚外用剤；並びに
［５］皮膚外用剤の形態が、ローション、軟膏、クリーム、乳液、貼付剤およびジェルから選択される、上記［４］記載の皮膚外用剤；
に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、紫外線による皮膚障害の防御作用に優れ、且つ安定性・安全性の高い紫外線による皮膚障害防御用組成物、および当該組成物を含有する皮膚外用剤が提供される。本発明のコエンザイムＱ10を含有する組成物は、顕著な紫外線による皮膚障害防御効果を奏し、且つ自体が生体に存在する非常に安全性の高い物質であるため、本発明の皮膚外用剤は、日常的に使用して紫外線による皮膚障害の防御することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
コエンザイムＱ10は、日本において医薬品として３０年近い使用実績があり、重篤な副作用は報告されておらず、また海外でも健康食品として使用されているが問題となる有害事象は報告されていない。さらに、コエンザイムＱ10は、皮膚刺激作用が無いことも知られている。
【０００９】
一方、皮膚の細胞は紫外線により障害を受け、その結果、細胞内カルシウム濃度が上昇し、細胞内容物［例えば乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）］の細胞外への漏出、細胞内でのチオバルビツール酸反応性物質（ＴＢＡＲＳ）として測定される過酸化物質濃度の上昇、およびＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性の低下などが観察される。そして、紫外線による障害の程度が大きいと、細胞は壊死し、その結果局所で炎症性の反応を惹起しさらなる皮膚組織障害を引き起こす。
しかしながら、コエンザイムＱ10が通常のレベルより多く存在すると、細胞内カルシウム濃度の上昇、細胞内容物の細胞外への漏出およびＴＢＡＲＳ産生の増加が抑制されると同時に、細胞のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性が顕著に促進され、その結果として皮膚の細胞障害が顕著に防御される。このため、本発明のコエンザイムＱ10を含有する組成物は、紫外線による皮膚障害から細胞を防御することができる。
【００１０】
本発明の紫外線による皮膚障害防御用組成物において、コエンザイムＱ10の含量は、組成物の形態により異なるが、通常は０.０００１〜１０質量％、好ましくは０.００１〜５質量％の範囲である。コエンザイムＱ10の含量が０.０００１質量％未満であると十分な
防御効果が期待できず、１０質量％より多く配合しても奏される効果は増加しない。
【００１１】
本発明の紫外線による皮膚障害防御用組成物としては、コエンザイムＱ10を上記の量で含有するものであれば特に限定されないが、コエンザイムＱ10が水に難溶性であることから、植物性油、動物性油等の非親水性有機溶媒に溶解するか、または乳化剤、分散剤もしくは界面活性剤等を用いて水性溶液中に分散・乳化させた組成物であるのが好ましい。例えば、コエンザイムＱ10を水性溶液中に分散・乳化させたコエンザイムＱ10水溶化組成物としては、日清ファルマ株式会社製のアクアＱ10Ｌ１０、アクアＱ10Ｐ５などを好ましく
用いることができる。
【００１２】
また、コエンザイムＱ10を含有する皮膚外用剤の剤型としては、ローション（例えばＷ／Ｏ型ローション、Ｏ／Ｗ型ローション）、軟膏、クリーム（例えばＷ／Ｏ型クリーム、Ｏ／Ｗ型クリーム）、乳液（例えば粘稠マイクロエマルジョンエッセンスまたはＯ／Ｗ型エッセンス）、貼付剤、およびジェルから選択される。
【００１３】
本発明の組成物および皮膚外用剤は、製剤化のために、例えば大豆油、サフラー油、オリーブ油、胚芽油、ヒマワリ油、牛脂、イワシ油などの動植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトールなどの多価アルコール、ソルビタン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステルなどの界面活性剤、精製水、乳糖、澱粉、結晶セルロース、Ｄ−マンニトール、レシチン、アラビアガム、ソルビトール液、糖液などの賦形剤、色素、ｐＨ調整剤、香料などを含有することができる。さらに、本発明の組成物および皮膚外用剤は、製剤上許容し得る他の薬剤、添加剤および／または基剤と組合せられる。添加剤としては、抗酸化剤、紫外線遮断剤、角層剥離剤、防腐剤、キレート剤から選択されるが、抗酸化剤および／または紫外線遮断剤と組合わせることが好ましい。また、皮膚外用剤の有効性を向上させる角層剥離剤、経皮吸収性を向上させる天然系界面活性剤と組合わせることも好ましい。
【００１４】
本発明において用いる抗酸化剤は、製剤上許容し得るものであれば特に限定はされないが、例えば、トコフェロールまたはその誘導体、水溶性抗酸化剤として低濃度のアスコルビン酸またはその誘導体、チオタウリン、グルタチオン等の含硫アミノ酸、ローズマリーエキス、セージエキス等の抗酸化生薬抽出エキス、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール等の合成抗酸化剤を挙げることができ、これらの１種または２種以上を組み合わせて適宜配合することができる。
【００１５】
本発明において用いる紫外線遮断剤には、紫外線吸収剤および紫外線反射剤が包含される。紫外線吸収剤の例には、オクチルシンナメート、グリセリルモノ−２−エチルヘキサノイル−ジパラメトキシシンナメート等の桂皮酸エステル誘導体、パラアミノ安息香酸オクチルエステル、Ｎ,Ｎ−ジメチル−安息香酸オクチルエステル等の安息香酸エステル誘
導体、２,４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２,２′−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩等のベンゾフェノン、その他の紫外線吸収剤として、３−（４′−メチルベンジリデン）−ｄ,ｌ−カンファー、３−ベンジリデン−ｄ,ｌ−カンファー、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、４−メトキシ−４′−ｔ−ブチル−ジベンゾイルメタン等が挙げられる。紫外線反射剤としては、酸化チタン、酸化亜鉛、雲母チタン等が挙げられる。
【００１６】
角層剥離剤としてはクエン酸、グリコール酸等のα−ヒドロキシ−カルボン酸、エチレンジアミンテトラカルボン酸モノ、ジおよびトリナトリウム塩、並びにトリメチルグリシン、ヒドロキシプロリン等のアミノ酸等が挙げられる。
【００１７】
天然系界面活性剤としては、特にモノアルキロイルホスファチジルコリン等のリゾレシチン、ジアルキロイルホスファチジルコリン、ジアルキロイルホスファチジルエタノールアミン等のレシチン類を挙げることができる。
【００１８】
本発明の皮膚外用剤には、通常、化粧品に用いられる成分（例えば、油性成分、保湿成分、増粘剤、乳化剤および各種添加剤）を配合することができる。例えば、油性成分としては炭化水素類、各種合成エステル類、ロウ類、油脂類、高級脂肪酸類、高級アルコール
類、シリコーン類等が挙げられる。
保湿成分としては、プロピレングリコール、１,３−ブチレングリコール、イソプレン
グリコール、グリセリン、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、加水分解コラーゲンペプチド、エラスチンペプチド、ケラチンペプチド、ステロール配糖体等が挙げられる。
増粘剤としては、水溶性合成高分子化合物であるカルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースまたはその塩等、水溶性天然高分子化合物であるクインスシード抽出物、グアーガム、キサンタンガム、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。
使用しうる界面活性剤・乳化剤は、ノニオン乳化剤としては各種高級アルコールのポリオキシエチレン付加物等、各種高級脂肪酸ポリオキシエチレングリコールモノ・ジエステル等およびグリセリン・ソルビタンのモノ・ジエステル等、アニオン乳化剤としては各種高級脂肪酸石鹸等、並びにカチオン乳化剤としてはα−オレオロイルグリセロールα′−ホスファチジルコリン（リゾレシチン）、大豆レシチンおよび卵黄レシチン等を挙げることができる。また、添加剤として、香料、色素、防腐剤、ｐＨ調整剤、キレート剤等を挙げることができ、これらを組み合わせて適宜配合することができる。
【００１９】
次に、本発明における皮膚外用剤の製造例を示す。なお、下記の配合量は全て質量％である。
製造例１ コエンザイムＱ10を含有するクリームの調製
Ａ スクワラン ２０.０
オリーブ油 ８.０
精製蜜蝋 ５.０
グリセリンモノステアレート ３.０
セトステアリルアルコール ２.０
コエンザイムＱ10 ２.０
Ｂ ポリオキシエチレン硬化ひまし油 ３.０
グリセリン １０.０
精製水 ４７.０
（製法）Ａ液とＢ液を８０℃に加温する。攪拌しながらＡ液にＢ液を加え、ミキサーを用いて均一になるまで乳化させ、クリームを調製する。
【００２０】
製造例２ コエンザイムＱ10を含有するＷ／Ｏ型ローションの調製
マイクロクリスタリンワックス １.０
精製蜜蝋 ２.０
オリーブ油 ２.０
スクワラン １０.０
流動パラフィン １９.０
コエンザイムＱ10 １.０
１,３−ブチレングリコール ４.０
グリセリン ３.０
ソルビタンセスキオレイン酸エステル ３.０
リゾレシチン １.０
ポリオキシエチレン硬化ひまし油 １.０
α−トコフェロール ０.０２
精製水 ５２.９８
（製法）保湿剤として１,３−ブチレングリコール、グリセリンを精製水に添加し、７０
℃まで加熱する。これとは別にマイクロクリスタリンワックス、精製蜜蝋、オリーブ油、スクワランおよび流動パラフィンを７０℃まで加熱して溶解させた後、７０℃に保持ながらコエンザイムＱ10、乳化剤としてソルビタンセスキオレイン酸エステル、リゾレシチンおよびポリオキシエチレン硬化ひまし油、並びにα−トコフェロールを添加し、混合する
。この油相に、先に調製した水相を攪拌しながら徐々に添加して予備乳化させる。次いで、ホモミキサーで乳化し、脱気、冷却し、ローションを調製する。
【００２１】
製造例３ コエンザイムＱ10を含有するマイクロエマルジョン化粧水の調製
１,３−ブチレングリコール ６.０
グリセリン ５.０
ポリエチレングリコール ３.０
ピーナツ油 ０.５
コエンザイムＱ10 ０.３
α−トコフェロール ０.０２
ポリオキシエチレン硬化ひまし油 １.８
エタノール １０.０
香料 適量
ｐＨ調整剤 適量
キレート剤 適量
精製水 ７３.３８
（製法）保湿剤として１,３−ブチレングリコール、グリセリンおよびポリエチレングリ
コール、ｐＨ調整剤およびキレート剤を精製水に添加して室温で溶解させる。これとは別にコエンザイムＱ10、α−トコフェロール、ピーナツ油、乳化剤としてポリオキシエチレン硬化ひまし油および香料をエタノールに添加して室温にて溶解させる。先に調製した水相にこのアルコール相を添加して、ホモミキサーにて均質化して、マイクロエマルジョンを調製する。
【００２２】
製造例４ Ｏ／Ｗ型紫外線遮断剤含有エッセンスの調製
ステアリン酸 ３.０
エタノール １.０
コレステリル−１２−ヒドロキシステアレート ３.０
流動パラフィン ５.０
２−エチルヘキシルパルミテート ３.０
１,３−ブチレングリコール ５.０
ポリオキシエチレン(２０モル)セチルアルコールエーテル ２.０
グリセリルモノステアレート ２.０
グリセリルモノ−２−エチルヘキサノイル−ジパラメトキシ
シンナメート ４.０
４−メトキシ−４′−ｔ−ブチル−ジベンゾイルメタン ４.０
コエンザイムＱ10 ０.６
α−トコフェロール ０.０２
シリコーン表面処理微粒子酸化亜鉛 ２.０
デカメチルシクロメチコン ２.０
トリエタノールアミン ０.８
香料 適量
精製水 ６２.５８
（製法）１,３−ブチレングリコール、トリエタノールアミンを精製水に添加し、７０℃
まで加熱する。ステアリン酸、コレステリル−１２−ヒドロキシステアレート、流動パラフィンおよび２−エチルヘキシルパルミテートを７０℃まで加熱して溶解させた後、乳化剤としてポリオキシエチレン（２０モル）セチルアルコールエーテルおよびグリセリルモノステアレート、紫外線吸収剤としてシンナメートおよび４−メトキシ−４′−ｔ−ブチル−ジベンゾイルメタン、コエンザイムＱ10、α−トコフェロール、並びに香料を添加し、７０℃まで加熱する。この油相を先に調製した水相に攪拌しながら添加し、予備乳化させる。その後、温度を４０℃以下に冷却し、シリコーン表面処理微粒子酸化亜鉛とデカメチルシクロメチコン分散液を添加しながらホモミキサーで乳化して均質化し、脱気、冷却してエッセンスを調製する。
【実施例】
【００２３】
以下の方法によりコエンザイムＱ10による紫外線障害防御効果を測定した。
１．正常成人皮膚繊維芽細胞の調製
正常成人皮膚繊維芽細胞は、旭テクノグラスより入手し、３７℃、飽和湿度、５％ＣＯ2含有空気下で、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）を含有したイーグル最小培地にて維持した
。繊維芽細胞を３５mmの組織培養用ディシュ（培養皿）に、０.５×１０6cell／mlの濃度で播植し、コンフルエントになるまで培養した。
【００２４】
２．紫外線照射実験
コンフルエントな状態に達した後、ＦＢＳからのコエンザイムＱ10の混入を防ぐため照射実験開始１日前にＦＢＳフリーのイーグル最小培地に変更した。１０mMのコエンザイムＱ10または対照溶媒を添加し、２４時間培養を続けた。コエンザイムＱ10を１０mM添加したコエンザイムＱ10含有培地、またはコエンザイムＱ10を含有しない対照培地中の繊維芽細胞に、２Ｊ／cm2のＵＶ−Ｂを照射した。１８時間後までに培地中に漏出された乳酸脱
水素酵素（ＬＤＨ；ＥＣ１.１.１.２７）活性、細胞内のチオバルビツール酸反応性物質
（ＴＢＡＲＳ）量、細胞内遊離カルシウム量、ならびにＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性の変化を測定した。
【００２５】
３．培地中へ漏出されたＬＤＨ活性の測定
培地中ＬＤＨは、Ｍｏｌｄｅｕｓらの方法（Moldeus P et al. Isolation and use of liver cells. Methods Enzymol, 52, 60-71 (1978)）に従い次のように測定した。１００mlの培養液に、１１００mlの２％牛血清アルブミン含有ハンクス培地、１５０mlの２mM ＮＡＤＨを加え混和した後、３０℃で１０分間保温する。１５０mlの１４mMピルビン酸を加えて反応を開始し、３４０nmの吸収を測定した。
蛋白質濃度はＬｏｗｒｙらの方法（Lowry OH et al. Protein measurement with folin
phenol reagent. J Biol Chem, 193, 265-275 (1951)）によって測定した。
【００２６】
４．細胞内のＴＢＡＲＳの測定
ＴＢＡＲＳの測定は、ＢｕｅｇｅとＡｕｓｔの方法（Buege JA, Aust SD. Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol, 52, 302-310 (1978)）に従い、次のように行っ
た。
細胞を１０mlのＰＢＳ（１３７mM ＮａＣｌ, ２.６８mM ＫＣｌ, １.４７mM ＫＨ2ＰＯ4, ７.８mM Ｎａ2ＨＰＯ4）で１回洗浄した後、プレートに０.５mlの０.１Ｍ 水酸化ナトリウム溶液を加え、細胞をラバー・ポリスマンにて掻き取った。掻き取った可溶化細胞液に０.５ mlの０.１Ｍ ＨＣｌを加え中和し、ＴＢＡＲＳの測定に用いた。中和後の細胞可溶化液に、３mlの蒸留水、１mlのチオバルビツール酸試薬（８.８mM 酢酸、０.３３５％(w／v) ２−チオバルビツール酸、０.０４％ (w／v) ２,６−ジ−tert−ブチル−ｐ−クレゾール）を加えて混和した後、沸騰水上で６０分間加温する。反応液を室温にまで放冷したのち、反応液を３mlのｎ−ブタノールで抽出し、励起波長５１５nm、測定波長５５３nmでＴＢＡＲＳの蛍光を測定した。ＴＢＡＲＳ測定の標準品として、１,１,３,３−テトラエトキシプロパンを用いた。
【００２７】
５．細胞内遊離カルシウム（[Ｃａ2+]i）量の測定
細胞内遊離カルシウム（[Ｃａ2+]i）量は、Ｌｕｅｃｋｈｏｆｆらの方法（Lueckhoff A. Measuring cytosolic free calcium concentration in endothelial cells with indo
1: The pitfall of using the ratio of two fluorescence intensities recorded at different wavelengths. Cell Calcium, 7, 233-248 (1996)）に準じて測定した。繊維芽
細胞に０.５mM Ｉｎｄｏ−１ＡＭを添加し、５％ＣＯ2含有空気下、３７℃で３０分間保
温した。その後、細胞をBalanced salt solution（ＢＳＳ）（１１６mM ＮａＣｌ, １５.４mM ＫＣｌ, １.８mM ＣａＣｌ2, １.０mM ＭｇＳＯ4, ５.６mM グルコース, １０.０mM ＨＥＰＥＳ, ｐＨ７.３）で洗浄し、さらに培養液を２mLのＢＳＳに置き換えて、３７℃で３０分間保温し、蛍光シグナルを測定した。
【００２８】
６．細胞中のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性の測定
５mlの２５mM ２−メルカプトエタノール、５mlの ０.５Ｍ ＭｇＣｌ2、５mlの１０mM ＮＡＤＰＨ, ５mlの４％ Triton X-100、５mlの２.５mM ＣｏＱ10、さらに５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ ７.４を加えて全量２４０mlの反応液とした。ここ２０mlの酵素液を加え反応を開始させ、３７℃、１０分間インキュベートした後、３.５mlのエタノール／ｎ
−ヘキサン（２：５，v／v）を加えて反応を停止する。反応液中に生じたＣｏＱ10Ｈ2を
ｎ−ヘキサンで抽出した後、岡本らの報告（Takahashi T, Okamoto T, Mori K, Sayo T, Kishi T. Distribution of ubiquinone and ubiquinol homologues in rat tissues and subcellular fractions. Lipits, 28, 803-809 (1993)）に従ってＨＰＬＣにて測定した
。
ＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性は、１mg蛋白質が１分間あたりに還元するＣｏＱ10量（mg／min／mg protein）として表した。
【００２９】
７．実験結果
（１）培地中へのＬＤＨの漏出
ＵＶＢ照射前後の培地中のＬＤＨ濃度は、図１に示すとおりである。図中ＵＶＢ（−）はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射しないもの、ＵＶＢ（＋）はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射したもの、ＵＶＢ（＋）＋ＣｏＱ10はＣｏＱ10を含む試験培地に紫外線照射したものを表す。ＣｏＱ10の添加によって培地中へのＬＤＨの漏出が顕著に抑制された。６時間、１２時間後では、ＣｏＱ10を添加した試験培地の場合、ＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射した場合に比べて統計的に有意の差があった（Ｐ＜０.０
０１）。
【００３０】
（２）細胞中のＴＢＡＲＳの量
ＵＶＢ照射前後の細胞中のＴＢＡＲＳ量は、図２に示すとおりであった。図中一番左はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射しないもの、真中はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射したもの、右側はＣｏＱ10を含む試験培地に紫外線照射したものである。この３者について照射開始前、照射開始後６時間および１２時間後のＴＢＡＲＳの量を測定した。ＣｏＱ10を添加した試験培地の場合、添加しない対照培地に紫外線照射した場合に比べて、ＴＢＡＲＳの産生は有意に抑制された（６時間後ではＰ＜０.００１、１２時
間後ではＰ＜０.０５）。
【００３１】
（３）細胞中の細胞内カルシウムの量
ＵＶＢ照射前後の細胞内カルシウム濃度は、図３に示すとおりであった。図中一番左はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射しないもの、真中はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射したもの、右側はＣｏＱ10を含む試験培地に紫外線照射したものである。この３者について照射開始前、照射開始後６時間および１２時間後のカルシウムの量を測定した。ＣｏＱ10を添加した試験培地の場合、添加しない対照培地に紫外線照射した場合に比べて、細胞内カルシウムの増加が有意に抑制された（６時間後ではＰ＜０.００１、
１２時間後ではＰ＜０.０５）。
【００３２】
（４）細胞中のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性
ＵＶＢ照射前後の細胞のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性は、図４に示すとおりである。図中一番左はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射しないもの、左から二番目
はＣｏＱ10を含まない対照培地に紫外線照射したもの、左から三番目はＣｏＱ10を含む培地に紫外線照射しなかったもの、右側はＣｏＱ10を含む試験培地に紫外線照射したものである。この４者について照射開始前、照射開始後６時間および１２時間後のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性を測定した。ＣｏＱ10を添加した試験培地の場合、添加しない対照培地に紫外線照射した場合に比べて、細胞中のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性が有意に増加した（Ｐ＜０.００１）。
【００３３】
（５）試験結果の総括的考察
以上の結果より、ＣｏＱ10は、皮膚細胞の紫外線による障害を防御することが明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】紫外線照射による培地中へのＬＤＨの漏出量の変化を調べた試験結果を表す図である。
【図２】紫外線照射による繊維芽細胞中のＴＢＡＲＳ量の変化を調べた試験結果を表す図である。
【図３】紫外線照射による繊維芽細胞中のカルシウム量の変化を調べた試験結果を表す図である。
【図４】紫外線照射による繊維芽細胞中のＮＡＤＰＨ−ＣｏＱレダクテース活性の変化を調べた試験結果を表す図である。
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| 【出願人】 |
【識別番号】３０１０４９７４４
【氏名又は名称】日清ファルマ株式会社
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| 【出願日】 |
平成１６年１０月１８日（２００４．１０．１８） |
| 【代理人】 |
【識別番号】１０００９１７３１
【弁理士】
【氏名又は名称】高木 千嘉
【識別番号】１００１２７９２６
【弁理士】
【氏名又は名称】結田 純次
【識別番号】１００１０５２９０
【弁理士】
【氏名又は名称】三輪 昭次
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| 【公開番号】 |
特開２００６−１１１５９６（Ｐ２００６−１１１５９６Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１８年４月２７日（２００６．４．２７） |
| 【出願番号】 |
特願２００４−３０２５１５（Ｐ２００４−３０２５１５） |
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