| 【発明の名称】 |
リポキシン化合物 |
| 【発明者】 |
【氏名】チヤールズ・エヌ・サーハン
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| 【要約】 |
【課題】リポキシン類は、複数の疾患及び状態に生体内投与することができる効力のある小分子であるが、これらの分子は生体内で寿命が短い。天然のリポキシン類と同じ生物活性を有するが、もっと長い生体内半減期を有する化合物は、有益な薬である。
【解決手段】本発明は、天然のリポキシンと同じか又は類似の活性領域を有するが、生体内異化作用に対してより抵抗性の代謝的変換領域を有するリポキシン類似体を特徴とする。従って本開示リポキシン類似体は天然のリポキシン類の生物活性を有するが、より長い代謝半減期を有する。本開示リポキシン類似体のあるものはさらに、天然のリポキシン類と比較して増加した生体内力価、より高いリポキシンレセプターへの結合親和力、又は強化された生物活性を有することができる。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】
置換されたフェノキシ基がリポキシン類似体のＣ−１６炭素に結合しているリポキシン類似体（但し該置換されたフェノキシ基は１つ以上の置換基を含む）。
【請求項２】
フェノキシ基が５個の置換基で置換されている請求項１記載のリポキシン類似体。
【請求項３】
各置換基がハロゲン原子である請求項２記載のリポキシン類似体。
【請求項４】
各ハロゲン原子がフッ素原子である請求項３記載のリポキシン類似体。
【請求項５】
フェノキシ基が４個の置換基で置換されている請求項１記載のリポキシン類似体。
【請求項６】
各置換基がハロゲン原子である請求項５記載のリポキシン類似体。
【請求項７】
各ハロゲン原子がフッ素原子である請求項６記載のリポキシン類似体。
【請求項８】
フェノキシ基が３個の置換基で置換されている請求項１記載のリポキシン類似体。
【請求項９】
各置換基がハロゲン原子である請求項８記載のリポキシン類似体。
【請求項１０】
各ハロゲン原子がフッ素原子である請求項９記載のリポキシン類似体。
【請求項１１】
フェノキシ基が２個の置換基で置換されている請求項１記載のリポキシン類似体。
【請求項１２】
各置換基がハロゲン原子である請求項１１記載のリポキシン類似体。
【請求項１３】
各ハロゲン原子がフッ素原子である請求項１２記載のリポキシン類似体。
【請求項１４】
フェノキシ基が１個の置換基で置換されている請求項１記載のリポキシン類似体。
【請求項１５】
該置換基がハロゲン原子である請求項１４記載のリポキシン類似体。
【請求項１６】
該ハロゲン原子がフッ素原子である請求項１５記載のリポキシン類似体。
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【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然のリポキシンと同じか又は類似の活性領域を有するが、生体内異化作用に対してより抵抗性の代謝的変換領域を有するリポキシン類似体を特徴とする。
政府の支持
本発明に導く研究は米国政府からの１種以上の補助金により部分的に支持された。従って米国政府は本発明にある権利を有することができる。
【背景技術】
【０００２】
リポキシン類は、リポキシゲナーゼ酵素系の作用を介してアラキドン酸から誘導される生物活性媒介物の群である。（非特許文献１）。ヒトの細胞型における生成は５−リポキシ1ゲナーゼ又は１５−リポキシゲナーゼにより開始される。（非特許文献２）。単細胞型（ｓｉｎｇｌｅ−ｃｅｌｌ ｔｙｐｅ）は、エイコサノイドのヒト好中球−血小板及び好酸球経細胞生合成（ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｔｒａｎｓｃｅｌｌｕｌａｒ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）の間にナノグラムの量でリポキシン類を生成する。（非特許文献３）。リポキシン類は共役テトラエン−含有エイコサノイド類であり、それはいくつかの臓器系において細胞で起こる事を調節する。
【０００３】
リポキシンＡ４（ＬＸＡ４）及びリポキシンＢ４（ＬＸＢ４）は２つの主要なリポキシン類である。それぞれは１０ｎＭで、赤白血病細胞の核におけるプロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）活性を強化する（非特許文献４）。それぞれ、ｎＭの量で敏速な血管拡張を誘導する（非特許文献５）；（非特許文献６）。リポキシン類の血管拡張効果は十分に例証されている。例えば吸入を介してマイクロモルの量でＬＸＡ４を投与すると、喘息の患者の気管支収縮が妨害される。（非特許文献７）。
【０００４】
１０−１０Ｍの範囲でＬＸＡ４は、最適濃度以下の顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）と組み合わされて細胞増殖も刺激し、骨髄性骨髄コロニー形成を誘導する（非特許文献８）。ＬＸＡ４はヒト単核細胞コロニー形成も刺激する（非特許文献９）。
【０００５】
ＬＸＡ４は、多形核白血球の化学走性を阻害する（非特許文献１０）。リポキシン類の等モル量の組み合わせは、糸球体炎症（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）における多形核好中球−糸球体間質細胞相互作用を調節することが見いだされた。（非特許文献１１）。多形核好中球（ＰＭＮ）の活性化は、糸球体炎症の初期に伴う構造的及び機能的異常の媒介物の放出を含む。（非特許文献１２）。
【０００６】
リポキシン類は、炎症の媒介物であるロイコトリエン（ＬＴ）に対する拮抗剤として作用する。ＬＸＡ４は、喘息患者における気道のＬＴＣ４−誘導閉塞を調節する。（非特許文献１３）。ＬＸＡ４は、動物の生体内モデルにおいてＬＴＤ４−及びＬＴＢ４−媒介炎症を阻害する。（非特許文献１４）；（非特許文献１５）。先にＬＸＡ４（ｎＭ）に暴露すると、ＬＴＤ４の腎血管収縮作用が妨害される（非特許文献６）。ロイコトリエン−誘導炎症は、例えば関節炎、喘息、種々の型のショック、高血圧、腎疾患、アレルギー反応及び心筋梗塞を含む循環器疾患において起こる。
【０００７】
リポキシン類は、複数の疾患及び状態に生体内投与することができる効力のある小分子であるが、これらの分子は生体内で寿命が短い。天然のリポキシン類と同じ生物活性を有するが、もっと長い生体内半減期を有する化合物は、有益な薬である。
【非特許文献１】Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．ａｎｄ Ｓａｍｕｅｌｓｓｏｎ，Ｂ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：５３３５
【非特許文献２】Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇ．Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．２３：１０５
【非特許文献３】Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｋ．−Ａ．（１９９０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８５：７７２
【非特許文献４】Ｂｅｃｋｍａｎ，Ｂ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０１：１６９
【非特許文献５】Ｂｕｓｉｊａ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５６：Ｈ４６８
【非特許文献６】Ｋａｔｏｈ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６３（Ｒｅｎａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ Ｐｈｙｓｉｏｌ３２：Ｆ４３６
【非特許文献７】Ｃｈｒｉｓｔｉｅ，Ｐ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１４５：１２８１
【非特許文献８】Ｓｔｅｎｋｅ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８０：２５５
【非特許文献９】Ｐｏｐｏｖ，Ｇ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｂｕｌｌ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１０７：９３
【非特許文献１０】Ｌｅｅ，Ｔ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８０：１４１６
【非特許文献１１】Ｂｒａｄｙ，Ｈ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．８０９
【非特許文献１２】Ｗｉｌｓｏｎ，Ｃ．Ｂ．ａｎｄ Ｄｉｘｏｎ，Ｆ．Ｊ．（１９８６）Ｉｎ：Ｔｈｅ Ｋｉｄｎｅｙ，Ｂ．Ｍ．Ｂｒｅｎｎｅｒ ａｎｄ Ｆ．Ｃ．Ｒｅｃｔｏｒ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｓａｕｎｄｅｒｓ出版，ｐ．８００−８９１
【非特許文献１３】Ｃｈｒｉｓｔｉｅ，Ｐ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１４５：１２８１
【非特許文献１４】Ｂａｄｒ．Ｋ．Ｆ．ｅｔ ａ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６：３４３８
【非特許文献１５】Ｈｅｄｑｖｉｓｔ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．１３７：５７１
【発明の開示】
【０００８】
発明の概略
従って本開示リポキシン類似体は天然のリポキシン類の生物活性を有するが、より長い代謝半減期を有する。本開示リポキシン類似体のあるものはさらに、天然のリポキシン類と比較して増加した生体内力価、より高いリポキシンレセプターへの結合親和力、又は強化された生物活性を有することができる。
【０００９】
本発明は、開示化合物の好ましい製造法及び製造において有用な中間体、ならびに生物活性、生体内半減期、リポキシン代謝を阻害する能力に関してリポキシン化合物を特性化するために、及び／又はリポキシンレセプターへの結合親和力を決定するために有用なアッセイも特筆する。
【００１０】
本発明はさらに、リポキシンに基づく小分子薬剤、及び患者における不適当な、又は不相応なリポキシン媒介細胞応答に伴う疾患又は状態の処置又は予防におけるそれらの利用を特徴とする。１つの実施態様において、リポキシン類似小分子はロイコトリエン拮抗剤として作用し、従ってロイコトリエン誘導炎症などのロイコトリエン刺激から生ずる疾患又は状態の処置において有用である。他の実施態様の場合、リポキシン類似小分子は骨形成を開始し、従って骨髄抑制疾患（ｍｙｅｌｏｉｄ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）の処置に有用である。
【００１１】
天然のリポキシン類と同様に、本開示小分子は非常に効力が高く、生物適合性である（すなわち無毒性）。しかし天然のリポキシン類と異なり、リポキシン類似体は代謝を阻害、抵抗又はもっとゆっくり受け、従ってより長い薬理学的活性を有する。さらに本開示化合物は天然のリポキシン類より親油性であり、従って生体膜によりより容易に吸収される。
【００１２】
本発明はさらにリポキシン化合物の診断的及び研究的利用に関する。本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び請求の範囲から、より明らかになるであろう。
発明の詳細な記述
本発明で用いられる場合、以下の句及び用語は以下の通りに定義される：
「リポキシン類似体」は、「天然のリポキシン」の活性領域と同様に機能する「活性領域」を有するが、天然のリポキシンと異なる「代謝的変換領域」を有する化合物を意味する。リポキシン類似体は、天然のリポキシンに構造的に類似の化合物、同じレセプター認識部位を共有する化合物、リポキシンと同じ又は類似のリポキシン代謝的変換領域を共有する化合物、及びリポキシンの類似体であることが当該技術分野において認められる化合物を含む。リポキシン類似体はリポキシン類似代謝物も含む。本明細書に開示される化合物は、１つ又はそれ以上の不整中心を含むことができる。不整炭素が存在する場合、１つより多くの立体異性体が可能であり、すべての可能な異性体は、示される構造表示に含まれるものとする。光学活性（Ｒ）及び（Ｓ）異性体は、熟練者に既知の従来の方法を用いて分割することができる。本発明は可能なジアステレオマー、ならびにラセミ体及び光学的に分割された異性体を含むものとする。
【００１３】
「対応するリポキシン」及び「天然のリポキシン」という用語は、天然に存在するリポキシン又はリポキシン代謝物を言う。類似体がリポキシン−特異的レセプターに対する活性を有する場合、対応する、又は天然のリポキシンはそのレセプターに対する正常なリガンドである。例えば類似体が分化ＨＬ−６０細胞上のＬＸＡ４特異的レセプターに対する特異的活性を有するＬＸＡ４類似体である場合、対応するリポキシンはＬＸＡ４である。類似体が天然に存在するリポキシンにより拮抗される他の化合物（例えばロイコトリエン）に対する拮抗剤としての活性を有する場合、天然のリポキシンは対応するリポキシンである。
【００１４】
「活性領域」は、天然のリポキシン又はリポキシン類似体の、生体内細胞相互作用に伴う領域を意味する。活性領域は細胞のリポキシンレセプター、あるいは酵素及びその補因子を含む巨大分子又は巨大分子の複合体の「認識部位」に結合することができる。好ましいリポキシンＡ４類似体は、天然のリポキシンＡ４のＣ５−Ｃ１５を含む活性領域を有する。好ましいリポキシンＢ４類似体は、天然のリポキシンＢ４のＣ５−Ｃ１４を含む活性領域を有する。
【００１５】
「認識部位」又はレセプターという用語は、当該技術分野において認められており、一般にそれを用いてホルモン類、ロイコトリエン類及びリポキシン類などの細胞メッセンジャーのある群が、これらのメッセンジャーへの生物化学的及び生理学的応答が開始される前に最初に相互作用するべき機能性巨大分子又は巨大分子の複合体を言うものとする。本出願において用いられる場合、レセプターは無傷の、又は透過化（ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚｅｄ）細胞において、あるいは臓器を含む組織において単離することができる。レセプターは生存患者からのもの、又は生存患者中のものであることができ、あるいはそれをクローニングすることができる。レセプターは正常に存在することができ、あるいは疾患状態により、外傷により又は人工的手段により誘導することができる。本発明の化合物は認識部位の天然の基質に関して可逆的に、不可逆的に、競合的に、非競合的に、又は不競合的に結合することができる。
【００１６】
「代謝的変換領域」という用語は一般に、酵素又は酵素とその補因子が、リポキシンにおいて正常にその酵素又は酵素とその補因子が行う１つ又はそれ以上の代謝的変換を行おうとする、リポキシン、リポキシン代謝物又はリポキシン類似体代謝物を含むリポキシン類似体の部分を言うものとする。代謝的変換領域は、変換に感受性であることもでき、感受性でないこともできる。リポキシンの代謝的変換領域の非制限的例は、ＬＸＡ４における、Ｃ−１３，１４二重結合又はＣ−１５ヒドロキシル基、あるいは両者を含む部分である。
【００１７】
「検出可能標識分子」という用語は、検出可能標識分子が結合した化合物又はレセプター認識部位を追跡、探知又は同定するために用いられる蛍光、リン光及び放射性標識分子を含むものとする。標識分子は当該技術分野において既知のいくつかの方法のいずれかを用いて検出することができる。
【００１８】
「標識リポキシン類似体」という用語はさらに、これらに限られるわけではないがトリチウム（３Ｈ）、ジューテリウム（２Ｈ）、炭素（１４Ｃ）などの放射性同位体を用いて標識された、又は他の方法で（例えば蛍光により）標識された化合物を含むと理解される。本発明の化合物は、例えば速度論的結合実験のために、代謝経路及び酵素的機構をさらに解明するために、あるいは分析化学の分野において既知の方法による特性化のために標識又は誘導することができる。
【００１９】
「代謝を阻害する」という用語は、本来のリポキシンを代謝する酵素の活性の妨害又は減少を意味する。妨害又は減少は共有結合により、不可逆的結合により、事実上不可逆的結合の効果を有する可逆的結合により、又は酵素が通常の方法でリポキシン類似体代謝物を含むリポキシン類似体、リポキシン又はリポキシン代謝物に作用するのを防ぐ他の手段により行うことができる。
【００２０】
「代謝に抵抗する」という用語は、リポキシン類を代謝する酵素の少なくとも１つによる代謝的分解的変換の１つ又はそれ以上を行わないことを含むものとする。代謝に抵抗するＬＸＡ４類似体の２つの非制限的例は１）１５−オキソ形態に酸化されることができない構造、及び２）１５−オキソ形態に酸化されることができるが、１３，１４−ジヒドロ形態への酵素還元に感受性でない構造である。
【００２１】
「代謝をもっとゆっくり受ける」という用語は、もっと遅い反応速度論を有すること、又はリポキシンを代謝する１つ又はそれ以上の酵素による一連の代謝的変換の完了に、より長い時間を必要とすることを意味する。代謝をもっとゆっくり受けるＬＸＡ４類似体の非制限的例は、類似体がＣ−１６において立体障害があるために、Ｃ−１５脱水素に関してＬＸＡ４が有するより高い遷移状態エネルギーを有する構造である。
【００２２】
「組織」という用語は、無損傷の細胞、血液、血漿及び血清などの血液製剤（ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）、骨、関節、筋肉、平滑筋及び臓器を含むものとする。
【００２３】
「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素、又はフルオロ、クロロ、ブロモ及びヨードを含むものとする。
【００２４】
「製薬学的に許容し得る塩」という用語は、当該技術分野において認められた製薬学的に許容し得る塩類を含むものとする。これらの無毒性塩類は通常、生理学的条件下で加水分解され、有機及び無機塩基を含む。塩類の例はナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、銅及びアルミニウム、ならびに第１、第２及び第３アミン類、塩基性イオン交換樹脂、プリン類、ピペラジンなどを含む。この用語はさらに低級炭化水素基、例えばメチル、エチル及びプロピルのエステルを含むものとする。
【００２５】
「製薬学的組成物」という用語は、活性成分として１種又はそれ以上のリポキシン類似体、又はそれらの製薬学的に許容し得る塩（類）を含み、製薬学的に許容し得る担体及び場合により他の治療的成分も含むことができる。組成物は経口的、直腸内、眼内、肺内、鼻内、皮膚的、局所的、非経口的（皮下、筋肉内及び静脈内を含む）、又は吸入的投与に適した組成物を含む。いずれの特定の場合にも、最も適した経路は処置されるべき状態の性質及び重度、ならびに活性成分の性質に依存するであろう。組成物は単位投薬形態で存在することができ、薬学の分野で周知の方法のいずれかにより調製することができる。投薬計画は、治療応答を向上させる目的に合わせることができる。例えば１日数回の分割された投薬量を投与することができ、あるいは投薬量を時間を経て相対的に減少させることができる。当該技術における熟練者は通常、有効な投薬量及び適した計画を決定することができる。リポキシン類似体製薬学的組成物は、リポキシン類、リポキシン類似体、及び／又はリポキシン類似体の代謝物を含むリポキシン代謝物を含む組み合わせも言うことができる。組み合わせの非制限的例は、リポキシン類を代謝する１つの酵素を阻害し、場合によりリポキシンレセプター認識部位との特異的活性を有するリポキシン類似体ｘ、及びリポキシンレセプター認識部位との特異的活性を有し、場合によりリポキシン代謝を阻害又は抵抗する第２のリポキシン類似体ｙを含む混合物である。この組み合わせは、ｘがリポキシン類を代謝する酵素の１つを阻害するので、少なくともｙに関して、より長い組織半減期を生ずる。かくしてｙにより媒介される、又は拮抗されるリポキシン作用が強化される。
【００２６】
「患者」という用語は、炎症、炎症応答、血管収縮及び骨髄抑制によって起こる、又はそれらが寄与する状態又は疾患に感受性の生存生物を含むものとする。患者の例は、人間、犬、猫、牛、羊及びねずみが含まれる。患者という用語はさらに、形質転換された種を含むものとする。
リポキシン化合物
本発明は、リポキシン類が生体内においてある種の細胞により独特のやり方で急速に代謝されるという驚くべき発見に基づいている。他のリポキシゲナーゼ−誘導生成物（例えばロイコトリエン）はω−酸化及び続くβ−酸化により代謝されるが（Ｈｕｗｙｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２０６，８６９−８７９）、本発明は、リポキシン類がリポキシン分子のある部位に作用する一連の酸化及び還元反応により代謝されるという予想に反した発見に基づいている。例えばＬＸＡ４代謝は少なくとも部分的に、１５−オキソ−ＬＸＡ４を生成するＣ−１５ヒドロキシルの酸化、１３，１４−ジヒドロ−１５−オキソ−ＬＸＡ４を与えるＣ−１３，１４二重結合の還元、及びさらに１３，１４−ジヒドロ−ＬＸＡ４を与える還元を介して起こることが見いだされた。ＬＸＢ４及びその天然の異性体の場合、類似の酸化がＣ−５ヒドロキシルにおいて起こり、還元がＣ−６，７二重結合において起こる。
【００２７】
かくして本発明は、リポキシン活性を有するが、脱水素及び従って続く生体内における分解を防ぐように化学的に修飾されたリポキシン類似体を特筆する。これらの類似体においては、天然のリポキシンのＣ−１〜Ｃ−１３部分は保存されていることも、又は保存されていないこともできる。Ｃ−１〜Ｃ−１３部分の変形は、異なるシス又はトランス幾何学、ならびに置換を含む。開示化合物を下記に構造的種類により示し、それをさらに細分種類に分割する。以下の２つのＲ基のそれぞれに含まれる細分種類を、頁の左にローマ数字で示す。
【００２８】
両用語共本明細書に定義される通りの、「活性領域」及び「代謝的変換領域」を含む本リポキシン類は一般に以下の構造のものである：
【００２９】
【化１】
【００３０】
ここでＡは
【００３１】
【化２】
【００３２】
であることができ、
Ｂは
［式中、Ａは
【００３３】
【化３】
【００３４】
ここでＸはＲ１、ＯＲ１又はＳＲ１であり；
ここでＲ１は
（ｉ）水素；
（ｉｉ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｉｉｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｖ）炭素数が７〜１２のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００３５】
【化４】
【００３６】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１、−ＳＯ３Ｈ及び水素から成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｖｉｉ）検出可能標識分子；又は
（ｖｉｉｉ）炭素数が２〜８の直鎖状もしくは分枝鎖状アルケニル全体；
であり；
Ｑ１は（Ｃ＝Ｏ）、ＳＯ２又は（ＣＮ）であり；
Ｑ３はＯ、Ｓ又はＮＨであり；
Ｒ２及びＲ３の１つは水素であり、他は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｃ）炭素数が３〜６のシクロアルキル全体；
（ｄ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜８のアルケニル全体；
（ｅ）ＲａＱ２Ｒｂ
ここでＱ２は−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体である；
であり；
Ｒ４は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜６のアルキル全体；
である；
【００３７】
【化５】
【００３８】
ここでＲ１は
（ｉ）水素；
（ｉｉ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｉｉｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル；
（ｉｖ）炭素数が７〜１２のアラルキル；
（ｖ）フェニル；
（ｖｉ）置換フェニル
【００３９】
【化６】
【００４０】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１、水素及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｖｉｉ）検出可能標識分子；又は
（ｖｉｉｉ）炭素数が２〜８の直鎖状もしくは分枝鎖状アルケニル全体；
であり；
ｎ＝１〜１０全体であり；
Ｒ２、Ｒ３ａ及びＲ３ｂは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｃ）炭素数が３〜６のシクロアルキル全体；
（ｄ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜８のアルケニル全体；
（ｅ）ＲａＱ２Ｒｂ
ここでＱ２は−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体である；
から選ばれ；
Ｙ１又はＹ２は−ＯＨ、メチル又は−ＳＨであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルコキシ全体；であるか、
あるいはＹ１及びＹ２は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
である；
【００４１】
【化７】
【００４２】
ここでＲａは
（ａ）Ｈ；又は
（ｂ）炭素数が１〜８のアルキル；
から成る群より選ばれる；
【００４３】
【化８】
【００４４】
ここでＲａは
（ｉ）水素；
（ｉｉ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｉｉｉ）検出可能標識分；
であり；
ｎ＝１〜１０全体であり；
Ｙ２、Ｒ３ａ及びＲ３ｂは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｃ）炭素数が３〜６のシクロアルキル全体；
（ｄ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜８のアルケニル全体；
（ｅ）ＲａＱ２Ｒｂ
ここでＱ２は−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体である；
から選ばれ；
Ｙ２は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；である；
であり；
Ｂは
【００４５】
【化９】
【００４６】
ここでＹ１又はＹ２は−ＯＨ、メチル又は−ＳＨであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４のアルコキシ全体；
であるか、
あるいはＹ１及びＹ２は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
であり；
Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；又は
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００４７】
【化１０】
【００４８】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１、メトキシ及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱｂＲｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体であり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、Ｚは独立してハロゲンから成る群より選ばれ
（ｅ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル全体；
であり；
Ｒ６は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
（ｃ）ハロゲン；
である；
【００４９】
【化１１】
【００５０】
ここでＹ１又はＹ２は−ＯＨ、メチル、−Ｈ又は−ＳＨであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを含むハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４のアルコキシ全体；
であるか、
あるいはＹ１及びＹ２は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
であり；
Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；又は
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００５１】
【化１２】
【００５２】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１、メトキシ及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱｂＲｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体であり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；及び
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、Ｚは独立してハロゲンから成る群より選ばれる：
から成る群より選ばれ；
（ｅ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル全体；
である；
【００５３】
【化１３】
【００５４】
ここでＹ１又はＹ２はヒドロキシル、メチル、水素又はチオールであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲン［Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを含む］であり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４のアルコキシ全体；
であるか、
あるいはＹ１及びＹ２は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
であり；
Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００５５】
【化１４】
【００５６】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１、メトキシ及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱｂＲｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体であり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；及び
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、Ｚは独立してハロゲンから成る群より選ばれる：
から成る群より選ばれる；
である；
【００５７】
【化１５】
【００５８】
ここでＹ１又はＹ２は−ＯＨ、メチル又は−ＳＨであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４のアルコキシ全体；
であるか、
あるいはＹ１及びＹ２は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
であり；
Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；又は
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００５９】
【化１６】
【００６０】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１、メトキシ及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱｂＲｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体であり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；又は
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、Ｚは独立してハロゲンから成る群より選ばれる；
から選ばれ；
（ｅ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル全体；
であり；
Ｒ６は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
（ｃ）ハロゲン；
である；
【００６１】
【化１７】
【００６２】
ここでＹ３又はＹ４は−ＯＨ、メチル、水素又は−ＳＨであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルコキシ全体；であるか、
あるいはＹ３及びＹ４は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
であり；
Ｙ５又はＹ６は−ＯＨ、メチル、水素又は−ＳＨであり、他は
（ａ）Ｈ
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり；
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲンであり；
（ｃ）直鎖状もしくは分枝鎖状の炭素数が２〜４のアルキル全体；
（ｄ）炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルコキシ全体；であるか、
あるいはＹ５及びＹ６は一緒になって
（ａ）＝Ｎ；又は
（ｂ）＝Ｏ；
であり；
Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；又は
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００６３】
【化１８】
【００６４】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素、メトキシ及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱｂＲｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体又は置換フェニルであり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；又は
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、Ｚは独立してハロゲンから成る群より選ばれる；
から選ばれ；
（ｅ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル全体；
であり；
Ｃ−１位アミド類、Ｃ−１位アルカノエート類及び（５Ｓ，１４Ｒ，１５Ｓ）−トリヒドロキシ−６Ｅ，８Ｚ，１０Ｅ，１２Ｅ−エイコサテトラエン酸（ＬＸＢ４）の製薬学的に許容し得るＣ−１位塩類；ＬＸＢ４のＣ−５、Ｃ−６及びＣ−５位アルカノエート類を除外する；
【００６５】
【化１９】
【００６６】
ここでＲｂは
【００６７】
【化２０】
【００６８】
から成る群より選ばれる；
【００６９】
【化２１】
【００７０】
ここでＲｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）メチル又は−ＣＦ３及び−ＣＨ２Ｆを含むハロメチル類；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ
から成る群より選ばれ；
Ｒｄ及びＲｅは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）メチル又は−ＣＦ３及び−ＣＨ２Ｆを含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ全体；あるいは
（ｆ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜４のアルキル又はハロアルキル全体；
から成る群より選ばれる；
【００７１】
【化２２】
【００７２】
ここでＲｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）ＣＦ３を含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）炭素数が１〜３の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；あるいは
（ｆ）炭素数が１〜３のアルコキシ全体；
から成る群より選ばれ；
Ｒｄ及びＲｅは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）メチル又は−ＣＦ３及び−ＣＨ２Ｆを含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ全体；あるいは
（ｆ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜４のアルキル又はハロアルキル全体；
から成る群より選ばれる；
【００７３】
【化２３】
【００７４】
ここでＲｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）ＣＦ３及びＣＨ２Ｆを含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）炭素数が１〜３の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
（ｆ）炭素数が１〜３のアルコキシ全体；
から成る群より選ばれ；
Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；又は
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００７５】
【化２４】
【００７６】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素、メトキシ及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱｂＲｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体又は置換フェニルであり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；又は
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、Ｚは独立してハロゲンから成る群より選ばれる；
から選ばれ；あるいは
（ｅ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル全体；
であり；
しかしＣ−１位アミド類、Ｃ−１位アルカノエート類及び（５Ｓ，１４Ｒ，１５Ｓ）−トリヒドロキシ−６Ｅ，８Ｚ，１０Ｅ，１２Ｅ−エイコサテトラエン酸（ＬＸＢ４）の製薬学的に許容し得るＣ−１位塩類；ＬＸＢ４のＣ−５、Ｃ−６及びＣ−５位アルカノエート類を除外する。
【００７７】
本発明の他の実施態様において、リポキシン類似体は以下の構造式ＶＩを有する：
【００７８】
【化２５】
【００７９】
式中、Ｒａは
（ａ）Ｈ；又は
（ｂ）炭素数が１〜８のアルキル
の群から選ばれ；
式中、Ｒｂは：
【００８０】
【化２６】
【００８１】
から成る群より選ばれる。
【００８２】
本発明の他の好ましい実施態様の場合、リポキシン類似体は以下の構造式ＶＩＩを有する：
【００８３】
【化２７】
【００８４】
式中、Ｒａは
（ａ）Ｈ；又は
（ｂ）炭素数が１〜８のアルキル；
の群から選ばれ；
式中、Ｒｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）メチル又は−ＣＦ３及び−ＣＨ２Ｆを含むハロメチル類；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ；
の群から選ばれ；
式中、Ｒｄ及びＲｅは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）メチル又は−ＣＦ３及び−ＣＨ２Ｆを含むハロメチル類；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ；又は
（ｆ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜４のアルキル又はハロアルキル全体；
の群から選ばれ；
しかしＣ−１位アミド類、Ｃ−１位アルカノエート類、及び（５Ｓ，６Ｒ，１５Ｓ）−トリヒドロキシ−７Ｅ，９Ｅ，１１Ｚ，１３Ｅ−エイコサテトラエン酸（ＬＸＡ４）の製薬学的に許容し得るＣ−１位塩類、ＬＸＡ４のＣ−５、Ｃ−６及びＣ−１５位アルカノエート類を除外する。
【００８５】
本発明の他の好ましい実施態様において、リポキシン類似体は構造式ＶＩＩＩを有する：
【００８６】
【化２８】
【００８７】
式中、Ｒａは
（ａ）Ｈ；又は
（ｂ）炭素数が１〜８のアルキル；
の群から選ばれ；
式中、Ｒｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）ＣＦ３を含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）炭素数が１〜３の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；又は
（ｆ）炭素数が１〜３のアルコキシ全体；
の群から選ばれ；
式中、Ｒｄ及びＲｅは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）メチル又は−ＣＦ３及び−ＣＨ２Ｆを含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ全体；又は
（ｆ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜４のアルキル又はハロアルキル全体；
の群から選ばれる。
【００８８】
本発明の他の好ましい実施態様において、リポキシン類似体は構造式ＩＸを有する：
【００８９】
【化２９】
【００９０】
式中、Ｒａは
（ａ）Ｈ；又は
（ｂ）炭素数が１〜８のアルキル；
の群から選ばれ；
式中、Ｒｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）ＣＦ３及びＣＨ２Ｆを含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）炭素数が１〜３の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
（ｆ）炭素数が１〜３のアルコキシ全体；
の群から選ばれ；
式中、Ｒ５は
（ａ）炭素数が１〜９の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜４であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；又は
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００９１】
【化３０】
【００９２】
ここでＺｉ、Ｚｉｉｉ及びＺｖはそれぞれ独立して水素、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ１及び−ＳＯ３Ｈから成る群より選ばれ；
Ｚｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素、メトキシ及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱａＱｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体又は置換フェニルであり；
（ｄ）−Ｃ（Ｒｉｉｉ）（Ｒｉｖ）−Ｒｉ
ここでＲｉｉｉ及びＲｉｖは独立して
（ｉ）Ｈ；又は
（ｉｉ）ＣＨａＺｂ
から成る群より選ばれ、ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０＋３であり、
Ｚはハロゲンから成る群より選ばれ；あるいは
（ｅ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル；
である。
【００９３】
他の好ましい実施態様において、化合物は構造式Ｘを有する：
【００９４】
【化３１】
【００９５】
式中、Ｒａは
（ａ）Ｈ；又は
（ｂ）炭素数が１〜８のアルキル全体；
の群から選ばれ；
式中、Ｒｂ及びＲｃは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ヒドロキシル又はチオール；
（ｃ）例えばＣＦ３を含むハロメチル；
（ｄ）ハロゲン；
（ｅ）炭素数が１〜３の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
（ｆ）メトキシを含む炭素数が１〜３のアルコキシ全体；
の群から選ばれる。
【００９６】
他の好ましい実施態様において、化合物は構造式ＸＩを有する：
【００９７】
【化３２】
【００９８】
式中、Ｒａは
（ｉ）水素；
（ｉｉ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；又は
（ｉｉｉ）検出可能標識分子；
であり；
式中、ｎ＝１〜１０全体であり；
式中、Ｙ２、Ｒ３ａ及びＲ３ｂは独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜８のアルキル全体；
（ｃ）炭素数が３〜６のシクロアルキル全体；
（ｄ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が２〜８のアルケニル全体；又は
（ｅ）ＲａＱ２Ｒｂ
ここでＱ２は−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；Ｒｂは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜８のアルキル全体である；
から選ばれ；
式中、Ｙ１は−ＯＨ、メチル又は−ＳＨであり；
式中、Ｙ２は
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり
Ｚはハロゲンである；あるいは
（ｃ）炭素数が２〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
であり；
式中、Ｙ３及びＹ５は独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）ＣＨａＺｂ
ここでａ＋ｂ＝３、ａ＝０〜３、ｂ＝０〜３であり
Ｚはシアノ、ニトロ又はハロゲンである；あるいは
（ｃ）炭素数が２〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
から成る群より選ばれ；
式中、Ｙ４及びＹ６は独立して
（ａ）Ｈ；
（ｂ）炭素数が２〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルキル全体；
（ｃ）炭素数が１〜４の直鎖状もしくは分枝鎖状アルコキシ全体；あるいは
（ｄ）ヒドロキシル又はチオール；
から成る群より選ばれ；
式中、Ｒ５は
（ａ）直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が１〜９のアルキル；
（ｂ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｒｉ
ここでｎ＝０〜３であり、Ｒｉは
（ｉ）炭素数が３〜１０のシクロアルキル全体；
（ｉｉ）フェニル；
（ｉｉｉ）置換フェニル
【００９９】
【化３３】
【０１００】
ここでＺｉｉ及びＺｉｖはそれぞれ独立してハロゲン、メチル、水素、メトキシ及びヒドロキシルから成る群より選ばれ；
（ｃ）−ＲａＱａＱｂ
ここでＱａ＝−Ｏ−又は−Ｓ−であり；
Ｒａは直鎖状もしくは分枝鎖状であることができる炭素数が０〜６のアルキレン全体であり；
Ｒｂは
【０１０１】
【化３４】
【０１０２】
であり；
（ｄ）炭素数が１〜８であり、１〜６個のハロゲン原子を有する直鎖状もしくは分枝鎖状ハロアルキル全体；
であり、
しかしＣ−１位アミド類、Ｃ−１位アルカノエート類、及び（５Ｓ，６Ｒ，１５Ｓ）−トリヒドロキシ−６Ｅ，８Ｚ，１０Ｅ，１２Ｅ−エイコサテトラエン酸（ＬＸＢ４）の製薬学的に許容し得るＣ−１位塩類、ＬＸＢ４のＣ−５、Ｃ−６及びＣ−５位アルカノエート類（酢酸塩類）を除外する。
【０１０３】
最も好ましい本発明の実施態様において、本発明の化合物は以下の構造式を有する：
【０１０４】
【化３５】
【０１０５】
【化３６】
【０１０６】
式中、Ｒ’はＨ又はＣＨ３である。
【０１０７】
本発明の他の好ましい実施態様において、本発明の化合物は以下の構造式を有する：
【０１０８】
【化３７】
【０１０９】
リポキシン化合物の製造法
好ましい化合物は、以下の実施例１に特定的に記載する通りにして製造することができる。本発明の他の化合物は、選択的水素化、Ｐｄ（０）−Ｃｕ（Ｉ）カップリング、Ｗｉｔｔｉｇ−型カップリング、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓエポキシ化、ならびに下記及び文献に記載の主要な中間体のカップリングに続く非対称還元などの標準的な化学的方法を用いるリポキシン（ＬＸ）及びプロスタグランディン合成のための戦略を組み合わせることにより製造することができ、安定な本発明のＬＸ類似体を生成することができる。（Ｗｅｂｂｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１；Ｒａｄｕｅｃｈｅｌ，Ｂ．ａｎｄ Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．（１９８５）Ａｄｖ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｒｅｓ．１４：２６３；及びＮｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００）。幾何学的変更は、例えば米国特許第４，５７６，７５８号及びＮｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７に記載の通りに行うことができる。
【０１１０】
下記に示す通り、案Ｉにおける細分種類１を含むリポキシン類似化合物は３つの主な断片（Ａ、Ｂ及びＣ）として製造することができ、それを次いで組み合わせて分子全体を形成することができる。
案Ｉ
【０１１１】
【化３８】
【０１１２】
前駆体断片２のためのエポキシ−アルコールの合成は、水素、フェニル、ハロゲン又はメチルから選ばれる置換基Ｒ２、Ｒ３及びＲ４を有して生成することができる。これらのそれぞれのエポキシ−アルコールの各々を、ＰｈＮＣＯ、ピリミジン及びＣＨ２Ｃｌ２を用いて３としてフェニルウレタン誘導体に変換することができ、
【０１１３】
【化３９】
【０１１４】
その後ＳＮ２開環によるルイス酸触媒反応を行い、結合に必要な（Ｒ）立体配置におけるＣ−６、ならびに生物活性及び認識部位における結合のためにやはり確立される（Ｓ）立体配置におけるＣ−５において隣接ジオールを含む１，２環状カーボネートを得る。これらのアルコールを次に保護し、４として前駆体Ａ断片を生成する。
【０１１５】
【化４０】
【０１１６】
これでこれらのＡ断片は、Ｗｅｂｂｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１における通りにして断片Ｂ、中間体、ホスホニウムブロミド５にグラムの量でカップリングさせ、組み合わされたＡ＋Ｂ断片生成物６を生成することができる。
【０１１７】
【化４１】
【０１１８】
案Ｉからの断片Ｃ中間体はＡ−Ｂカップリングの製造と平行して生成される。これらのＣ断片において、Ｙ１及び／又はＹ２における置換はメチル、メトキシ、水素、シアノ、ニロト又はハロゲンである：特定的実施例３を参照されたい。かくして１５−メチル及び／又は、例えば１６−メチルもしくは１６−フェノキシを有する誘導体は、これらの置換−ＬＸＡ４類似体を脱水素に感受性でないようにすることができる。
【０１１９】
かくして酵素酸化及び／又は脱水素に対して好ましい抵抗性を有するＣ断片を、重要部位の保護、続く臭素化により変換し、６ｂのような断片Ｃのビニルブロミド生成物を得ることができ、それを触媒量のＰ（Ｐｈ３）４及びＣｕＩを用いることにより６にカップリングさせ、種類式ＩのＬＸＡ４類似体の完全な主鎖構造を生成することができる。この案を以下の実施例によりさらに例示する。
【０１２０】
【化４２】
【０１２１】
案ＩＩ
【０１２２】
【化４３】
【０１２３】
細分種類式ＩＩ及びＩＩＩに含まれる本発明の化合物は、類似の方法で合成することができる。
【０１２４】
種類ＩＩ及びＩＩＩにおける化合物は、最初に断片Ａの置換化合物を個別に製造し、それらをそれぞれ案Ｉにおけると同様に、個別に製造された断片Ｂにカップリングさせ、Ｘ、Ｑ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４において指示されている通りにそれぞれの置換を有する７又はＡ１＋Ｂ１断片を生成することにより生成することができる。
【０１２５】
【化４４】
【０１２６】
アセチレン基Ｃ−１４，１５及びω−Ｃ−２０末端置換を有するＣ１断片８はそれぞれ、構造６のプロスタグランディン類似体に関して上記に示した通りに生成することができ、（Ｋ．Ｃ．Ｎｉｃｏｌａｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７，７５１５（１９８５））におけると同様にして対応するビニルブロミド生成物に変換し、それぞれの個別に置換された断片Ｃ１又は８化学種の臭素化生成物を与え、それは触媒量のＰ（Ｐｈ３）４及びＣｕＩを用いて２０にカップリングさせ、アセチレン性−ＬＸＡ４類似体の種類の組み合わされた生成物を生成するのに適している。次いで最終生成物のそれぞれにつき、精製のために、ラピッドダイオードアレー検出（ｒａｐｉｄ ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）を用いた勾配ＲＰ−ＨＰＬＣを行う（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙにおけると同様）。ＬＸＡ４のＣ−１５からＣ−２０における修飾の存在は、立体障害を与えることによりデヒドロゲナーゼ及びオキシダーゼによる代謝を変更することができ、Ｃ−１５からω−末端置換を有する安定なプロスダランディン類似体が製造され、デヒドロゲナーゼにより代謝されない（Ｒａｄｕｅｃｈｅｌ，Ｂ．ａｎｄ Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．（１９８５）Ａｄｖ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｒｅｓ．１５：２６３及びＶｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｉｎ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄｓ（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｃｈｅｉｎｍａｎｎ，Ｆ．ｅｄｓ）．Ｏｘｆｏｒｄ：Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ）。
【０１２７】
種類式ＩＶに含まれる本発明のシクロ−ＬＸＡ４化合物は以下の方法で製造することができる。
案ＩＩＩ
【０１２８】
【化４５】
【０１２９】
この種類の親化合物も類似の全合成戦略に供され、構造３０において３つの主断片Ａ、Ｂ及びＣが指定される。断片Ａのための前駆体は、７−シス，１１−トランス−ＬＸＡ４メチルエステルの合成において１０の製造のためにＮｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７で用いられた経路により製造することができる。
【０１３０】
【化４６】
【０１３１】
３０における断片Ｂは、前駆体１１又は（Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｐ．３５３）において生成されたサリゲニン−（［Ｏ−ヒドロキシベンジルアルコール）を介して得ることができる。ベンジルアルコール１１をＤＭＦ中でＮａＨの存在下に、１０と反応させ（１：１）、１２を得る。この重要中間体をＢＳＴＦＡ中でシリル化し、続いてＣ前駆体のために設計されたそれぞれの断片とカップリングさせる。
【０１３２】
【化４７】
【０１３３】
次いで、臭素化前駆体を４．０当量のＡｇＮＯ３、次いで７．０当量のＫＣＮ、ＥｔＯＨ／ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１：１：１）、０→２５℃、２〜４時間により処理することにより、与えられたそれぞれの設計のビニルブロミネート断片Ｃに１３をカップリングさせることができ、次いでそれぞれの生成物をＣＨ２Ｃｌ２中で穏やかな選択的接触水添のためのＬｉｎｄｌａｒ触媒に２〜３時間供し、種類ＩＶに属するそれぞれの化合物を得る。それぞれをＬｉＯＨ／ＴＨＦ中でけん化し、ＲＰ−ＨＰＬＣによる単離の後に対応する遊離の酸を得ることができる。
【０１３４】
【化４８】
【０１３５】
種類ＩＶ化合物の本発明を下記の実施例、１５（±）メチル−シクロ−ＬＸＡ４メチルエステル及び対応する遊離の酸の合成によりさらに例示する。
【０１３６】
種類式Ｖに含まれる本発明の化合物は以下の方法で製造することができる。ＬＸＢ４を用いて研究されたいくつかの系は、天然の化合物内のいくつかの部位が生物活性に必要であることを示している（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｅｎｅｒｇ．ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｍｂｒ．２３：１０５）。これらの部位は（Ｒ）立体配置におけるＣ−１４アルコール及びシス立体配置におけるテトラエンのＣ−８，９の二重結合を含む。さらに結果として本発明を生ずる代謝研究に基づき、いくつかの重要付加部位がＬＸＢ４生物活性の保存に必要であることが同定された。これらはデヒドロゲナーゼ活性からのＣ−１５アルコールの保護（すなわち５−オキソ−ＬＸＢ４生成の妨害）；△８結合と１４（Ｒ）アルコールの両方の保持；ならびに△６−７二重結合の還元及び得られる化合物のβ／ω−酸化の予防を含む。
案ＩＶ
【０１３７】
【化４９】
【０１３８】
かくして種類Ｖ（１４）はＬＸＢ４の、その生物活性に必要な領域を保持しており、しかし代謝的分解に利用できる領域を修飾してある。この場合も逆合成分析が、１４において明示されている３つの重要断片Ａ、Ｂ及びＣに優先権を与えている。ＬＸＢ４類似体の種類のメンバーを生成するための重要中間体のカップリングは、ＬＸＡ４及びその類似体の場合に概述された標準的方法、すなわち選択的水素化（８−シス幾何学の生成のため）；独特の置換を有するＡ及びＢ断片の結合のためのＰｄ（０）−Ｃｎ（Ｉ）カップリング；必要な置換を有するＣ断片を結合するためのＷｉｔｔｉｇ−型カップリング、及び１４（Ｒ）隣接アルコールを得るためのＳｈａｒｐｌｅｓｓエポキシ化を用いる（参照文献Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００）、参照文献：Ｗｅｂｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１ Ｅｄ．Ｗｏｎｇ，Ｐ．Ｋ．ａｎｄ Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．）ならびにこれらに引用されている文献を参照）。かくしてＬＸＡ４類似体及び本来のＬＸＢ４の構築と類似の戦略を用いることにより、特定的な類似体を得ることができる。
【０１３９】
【化５０】
【０１４０】
Ｈ、ＣＨ３、ＯＣＨ３、フェニル、ハロ−置換フェニルであることができる置換をＲ２、Ｒ６、Ｒ７に有する１５のＡ断片は、例えばＣＨ２の鎖長が増加する１６から標準的方法により生成される。
【０１４１】
【化５１】
【０１４２】
化合物１６は（Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ３０：１１００−１６）におけると同様に、トリメチルシリルアセチレン性中間体１７を介し、それをピナニル−９ＢＢＮにより、次いでＴＨＦ中でｎ−ＢｕＮ４ＮＦにより還元し、１８を得、それをここでアルコールなどの必須の部分の保護の後に臭素化し、１５（断片Ａ）を得ることにより、ビニルブロミド１５に変換する。
【０１４３】
１４の断片Ｃは、指示される通りのＲ５置換を有する化合物１９から生成される。
【０１４４】
【化５２】
【０１４５】
次いでアセチレン性アルコール１９をＬＡＨ中で還元し、続いてＳｈａｒｐｌｅｓｓ非対称エポキシ化を行い、２０を生成し、それをＲＰ−ＨＰＬＣにより単離し、ＬＸＢ４類似体の、必要な（Ｒ）立体配置におけるＣ−１４アルコールの生成に用いられる（＋）異性体を得、化合物２０をＲ４及びＲ５における置換基の保護、ならびにメチレンクロリド中でＰＣＣを用いたアルコールの保護の後に対応するアルデヒド２１に変換する。（Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００）。
【０１４６】
【化５３】
【０１４７】
ホスホニウム塩２２は、参照文献における通りにして製造することができ（Ｗｅｂｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１，Ｅｄ．Ｗｏｎｇ，Ｐ．Ｋ．ａｎｄ Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．）、ここではＷｉｇｇ−型カップリングを介したＢ−Ｃ断片カップリングを生じ、Ｒ４及びＲ５が置換を有する２３の群において、設計された置換を有する２３を与えるために用いられる。２３のこのシス二重結合は、触媒としてＩ２を用いて異性化し、トランス異性体を与えることができ、１４の親前駆体の形態を２４として与えることができる。
【０１４８】
【化５４】
【０１４９】
【化５５】
【０１５０】
２４の１５へのカップリングはＰｄ（０）−Ｃｕ（Ｉ）カップリングにより行われ、２５と明示される１４のアセチレン性前駆体を与える。選択的Ｌｉｎｄｌａｒ接触水添に続き、それぞれのＬＸＢ４類似体を、それぞれの生成物の単離のための簡便な手段としてテトラエン骨格を用い、急速ダイオードアレー検出を用いたＲＰ−ＨＰＬＣを介してさらに精製することができる（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．８１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８７：１６７）。
効用
本発明の化合物は天然のリポキシン類の生物活性を有するが、分解に対してもっと抵抗性であるか、あるいは別の場合、天然のリポキシン類の分解を阻害する。従って開示化合物は、患者における不適切な、又は不相応なリポキシン媒介細胞応答に伴う複数の疾患又は状態の処置又は予防のための薬としての効用を有する。
【０１５１】
リポキシン類の細胞刺激作用に基づき、本発明は患者に有効量のリポキシン類似体を含む製薬学的組成物を投与することによる、骨髄抑制障害を有する患者の処置の方法を提供する。有効量は通常、標的細胞集団に十分な暴露を保証するのに必要な量である。そのような量は通常、類似体の性質、投与の様式、骨髄抑制の重度及び投与計画を決定する時に通常の熟練者が考慮する他の因子に依存するであろう。
【０１５２】
細胞増殖性リポキシン類似体の治療的利用は、患者からの細胞の取り出し、試験管内における細胞増殖の刺激、及び強化された細胞調剤を全部又は部分的に患者に再導入することを含む。追加の治療薬（例えばＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイン類）を場合により、刺激の間にリポキシンと一緒に、又は細胞調剤の導入と一緒に用いることができる。
【０１５３】
他の実施態様において、本発明の化合物は炎症又は炎症応答の処置又は予防に用いられる。ＬＸＡ４は炎症の媒介物である白血球の活性化を阻害する。ＬＸＡ４−誘導効果は、白血球移動の阻害、反応性酸素種の生成、及び組織腫脹（ｔｉｓｓｕｅ ｓｗｅｌｌｉｎｇ）に含まれる炎症前媒介物（ｐｒｏ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｍｅｄｉａｔｏｒｓ）の生成を含む（Ｒａｕｄ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３１４：１８５．Ｃｅｌｌ−Ｃｅｌｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ ｖｏｌ．３１４）。ＬＸＢ４は、マウスの造血幹細胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ）を用いた生体内アッセイにおいて、下痢及び運動失調の予防などの放射線保護作用を示す。（Ｗａｌｋｅｎ，Ｔ．Ｌ．Ｊｒ．，（１９８８）Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．２９：２５５）
白血球−媒介炎症又は炎症応答は、種々の形態の喘息及び関節炎を含む多様な疾患及び状態を引き起こすか、又はそれらに寄与する。身体的外傷、放射線暴露及び他などの身体的損傷への炎症応答は本発明の範囲内に含まれる。
【０１５４】
他の実施態様において、本発明の化合物はロイコトリエン類の作用に拮抗することによる炎症の処置又は予防に用いられる。ＬＸＡ４はＬＴＢ４−誘導炎症を阻害し、ハムスター頬窩（ｃｈｅｅｋ ｐｏｕｃｈ）の生体内アッセイにおいて、血漿漏出及び白血球移動の両方を妨害する（Ｈｅｄｑｖｉｓｔ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．１３７：５７１）。血漿漏出及び白血球移動は、傷の治癒及び炎症の両方における重要な事象である。ＬＸＡ４は又、ＬＴＤ４−誘導腎血管力学的作用に拮抗し、腎臓における血管力学の調節を部分的に担うＬＴＤ４の糸球体間質への結合を妨害する。（Ｂａｄｒ．Ｋ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：４３８）。
【０１５５】
本発明の化合物は、ＬＴＤ４、ＬＴＣ４及びＬＴＢ４などのスルフィドペプチドロイコトリエン類の作用に拮抗するために投与することができる。ロイコトリエン−媒介血管収縮応答は：喘息、アナフィラキシー反応、アレルギー反応、ショック、炎症、慢性関節リウマチ、通風、乾癬、アレルギー性鼻炎、成人呼吸困難症候群、クローン病、内毒素性ショック、外傷性ショック、出血性ショック、腸虚血性ショック、腎糸球体疾患、良性前立腺肥大、炎症性腸疾患、心筋虚血、心筋梗塞、循環器性ショック、脳損傷、全身性エリテマトーデス、慢性腎疾患、心臓血管疾患及び高血圧などの疾患を伴う。
【０１５６】
他の実施態様において、本発明の化合物は血管収縮応答又は状態の処置又は予防に用いられる。リポキシン類は内皮−依存性血管拡張（ＬＸＡ４）（Ｌｅｆｅｒ，Ａ．Ｍ．ｅｔ ａｌ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：８３４０）及び生体内において新生豚における脳小動脈の拡張（ＬＸＡ４及びＬＸＢ４）（Ｂｕｓｉｊａ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ ａ．（１９８９）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５６：４６８）を引き起こす。さらにＬＸＡ４は、生体内でハムスターの頬窩において（Ｄａｈｌｅｎ，Ｓ．−Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ａｃｔａ Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．１３０：６４３）、及びラットの腎血管力学（Ｂａｄｒ．Ｋ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１４５：４０８）において急速な小動脈拡張を引き起こす。
【０１５７】
血管収縮応答又は状態は、糸球体疾患を含む腎血管力学疾患、高血圧、心筋梗塞、心筋虚血及び血管性疾患を含む心臓血管疾患、ならびに胃腸疾患などの疾患及び状態を引き起こすか、それらに寄与するか、あるいはそれらを伴う。
【０１５８】
リポキシン類似体又は他の化合物をスクリーニングし、対応する天然のリポキシンより長い組織半減期を有するものを同定する方法も本発明により意図されている。この方法は、化合物が天然のリポキシンと比較して代謝を阻害、抵抗、又はもっとゆっくり受けるか否かを決定するために用いることができる。この方法は、リポキシン類を代謝する少なくとも１つの酵素を調製し、化合物を酵素調剤と接触させ、化合物が酵素による代謝を阻害、抵抗又はもっとゆっくり受けるか否かを決定することにより行われる。多形核好中球、末梢血単球及び分化ＨＬ−６０細胞などの、リポキシン認識部位を有する細胞は、酵素調剤のための適した源に含まれる。リポキシン認識部位は天然に存在することができ、あるいは疾患状態又は損傷により人工的に誘導することができる。人工的−誘導ＬＸＡ４認識部位の非制限的例は、分化ＨＬ−６０細胞におけるそのような部位である。
【０１５９】
１つの実施態様において酵素の調製は、細胞を収穫し、凍結−解凍リシスを３回行い、続いて超遠心により１００，０００ｇ上澄み液を得ることから成る。無細胞１００，０００ｇペレットも用いることができる。さらに酵素調剤は、天然のリポキシン代謝に関与しないが、自然にリポキシン類を代謝する酵素により行われる変換と類似の、又は同等の変換をリポキシン類に行う酵素を含むことができる。適した酵素の非制限的例は、１５−ヒドロキシプロスタグランディンデヒドロゲナーゼ、ヒト白血球からのシトクロムＰ−４５０モノゲナーゼ類及びラット及びヒト肝臓ミクロソームである。
【０１６０】
リポキシン代謝物の特性化は、抽出、クロマトグラフィー及び定量ＨＰＬＣ、ならびに続くトリメチルシリル誘導、Ｏ−メトキシム誘導及びガスクロマトグラフィー／質量スペクトル分析などの標準的方法を含んだ。この実施態様の実験的詳細は下記の実施例１に記載する。
【０１６１】
リポキシン類似体は、例えば化合物をレセプター認識部位と接触させ、化合物が結合するか否か、及びその程度を決定することにより、リポキシンレセプター認識部位との結合活性に関してもスクリーニングすることができる。速度論的結合アッセイの例は、相同置換、競合結合、等温及び平衡結合アッセイを含む。
【０１６２】
レセプター認識部位は通常存在するか、あるいはそれを疾患状態により、損傷により、又は人工的手段により誘導することができる。例えばレチノイン酸、ＰＭＡ又はＤＭＳＯを用い、ＨＬ−６０細胞における分化を誘導することができる。分化ＨＬ−６０細胞は、ＬＸＡ４−特異的レセプター認識部位を発現する。リポキシン特異性に関してスクリーニングすることができる他の細胞の例には、ＰＭＮ、上皮細胞及び末梢血単球が含まれる。
【０１６３】
競合リガンドの選択は認識部位の性質、天然の基質、当該技術分野で既知の天然の基質の構造的又は機能的類似体の構造、ならびにそのような決定を行う熟練者が考慮する他の因子に依存するであろう。そのようなリガンドには既知のレセプター拮抗剤も含まれる。本発明の化合物は、放射化学又は合成化学の分野において既知の標準的方法により、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ及び１４Ｃを含む同位体で放射性標識することができる。
【０１６４】
本方法の１つの実施態様において、誘導されたＬＸＡ４認識部位の構造的特異性をＬＸＢ４、ＬＴＣ４、ＬＴＢ４及びトリヒドロキシヘプタン酸メチルエステルを用いて評価した。この実施態様の実験的詳細を下記の実施例２において記載する。
【０１６５】
さらに本発明の化合物は、炎症及び損傷の場合の発生モデル（ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｍｏｄｅｌ）として特定の細胞型にある作用を与えるのに用いることができる。例えばＬＸＡ４は、細胞内Ｃａ２＋の動態化、脂質改造作用（ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）、及びヒトＰＭＮにおける凝集のない化学走性を刺激する（Ｐａｌｍｂｌａｄ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８７）１４５：１６８；Ｌｅｅ，Ｔ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ．Ｓｃｉ．（１９８９）７７：１９５；Ｎｉｇａｍ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９０）１４３：５１２；Ｌｕｓｃｉｎｓｋａｓ，Ｆ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３９：３５５）。ＬＸＡ４はＬＴＢ４及びＦＭＬＰ−誘導応答の両方、例えばＩＰ３生成も妨害する。ＬＸＢ４も、脂質改造作用を刺激する。ＬＸＡ４は単離されたＰＫＣを活性化し、脳及び脊髄に存在するＰＫＣのγ−亜種に関して特異的である。（Ｈａｎｓｓｏｎ，Ａ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．（１９８６）１３４：１２１５；Ｓｈｅａｒｍａｎ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．（１９８９）２４５：１６７）。Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９１）３０：１１００の文献及びそこに引用されている参照文献は、引用することにより明白に本明細書の内容となる。
【０１６６】
本発明をさらに以下の実施例により例示し、実施例はさらに制限であると理解されるべきではない。背景を含む本出願のすべての部分を通じて引用されたすべての参照文献及び公開特許は、引用することにより明白に本明細書の内容となる。
実施例
【実施例１】
【０１６７】
リポキシン類似化合物の合成
【０１６８】
【化５６】
【０１６９】
【化５７】
【０１７０】
化合物１のメチルエステル前駆体の製造：
ベンゼン（１．５ｍＬ）中の３−メチル−３−トリメチルシロキシ−１−ブロモ−１−オクテン（１３０ｍｇ、０．４４ミリモル）の溶液に、ｎ−プロピルアミン（０．０５ｍＬ、０．６１ミリモル）及びＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０ｍｇ、０．０２ミリモル）を加え、溶液を光から保護した。次いでそれを凍結−解凍法により脱ガスし、室温で４５分間撹拌した。（７Ｅ，９Ｅ，５Ｓ，６Ｒ）メチル５，６−ジ（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシロキシ）−ドデカ−７，９−ジエン−１１−イノエート（１８３ｍｇ、０．４４ミリモル）（化合物１２）及びヨウ化銅（１４ｍｇ、０．０７ミリモル）を加え、溶液をもう一度凍結−解凍法により脱ガスした。混合物を室温で３時間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液でクエンチし、エーテルで抽出した。次いでそれをブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、３％エーテルヘキサン）は、純粋な化合物を無色の液体として与えた（１７１ｍｇ、収率５７％）。
【０１７１】
ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の化合物（１７１ｍｇ、０．２５ミリモル）の溶液に、ｎ−ＢｕＮ４Ｆ（０．９ｍＬ、０．９０ミリモル）を加え、混合物を室温で撹拌した。反応は２時間で完了し、その時点でそれを水中に注ぎ、エーテルで抽出した。エーテル抽出物をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶媒を蒸発させた。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、４％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）はメチルエステル（２４ｍｇ）をいくらかの対応するラクトンと共に与えた。ＨＰＬＣ保持時間：９：３９分（ミクロソルブ（ｍｉｃｒｏｓｏｒｂ）逆相、４．６ｍｍＸ２５ｃｍ、Ｃ−１８カラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ７０：３０、流量１ｍｌ／分、３００ｎｍにおけるＵＶ検出器）。ＭｅＯＨ中におけるＵＶ：λｍａｘ２８３，２９４，３１１ｎｍ、１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ ＣＤＣｌ３）δ６．５３（ｄｄ，１５．２ １０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄｄ，Ｊ＝１７．５，２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８０（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．７２（ｄｄ，Ｊ＝１７．０，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１７（ｍ，１Ｈ），３．６８−３．６４（ｍ，４Ｈ），２．３５−２．３１（ｍ，２Ｈ），１．５１−．４８（ｍ，１Ｈ），１．４３−１．４２（ｍ，２Ｈ），１．３０−１．２３（ｍ，１５Ｈ），０．８５（ｔ，３Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ．ＣＤＣｌ３）δ１５０．０１，１４０．１８，１３２．９５，１３２．２６，１１２．４３，１０７．５０，７５．２３，７３．７６，４２．４９，３３．６７，３２．１７，３１．３６，２７．９６，２３．５６，２２．５８，２１．０３，１４．０３。
化合物２のメチルエステル前駆体の製造：
化合物１のメチルエステル前駆体の溶液（３ｍｇ、ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍｌ）中）をＬｉｎｄｌａｒ触媒（１ｍｇ）と混合し、水素雰囲気下に置いた。混合物を暗所において室温で、約８０％変換まで（１時間）、撹拌及び続くＨＰＬＣを行った。セライト上の濾過、溶媒の蒸発及びＨＰＬＣによる分離は純粋なメチルエステルを与えた。ＨＰＬＣ保持時間：１０：０２分（ミクロソルブ逆相。１０ｍｍＸ２５ｃｍ Ｃ−１８カラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ７０：３０ 流量４ｍｌ／分。３００ｎｍにおけるＵＶ検出器）。ＭｅＯＨ中におけるＵＶ：ηｍａｘ２８７，３１５ｎｍ。
化合物３のメチルエステル前駆体の製造：
この化合物は化合物１のメチルエステル前駆体の製造と同様にして（３−シクロヘキシル−３−トリメチルシロキシ−１−ブロモ−１−オクテンから）製造した。この化合物の脱シリル化も同様の方法で行い、メチルエステルを得た。ＨＰＬＣ保持時間８：０２分（ミクロソルブ逆相、４．６ｍｍＸ２５ｃｍ。Ｃ−１８カラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ７０：３０。流量１ｍｌ／分、３００ｎｍにおけるＵＶ検出器）。ＭｅＯＨ中におけるＵＶ：λｍａｘ２８２，２９３，３１１ｎｍ。１Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．５６（ｄｄ，１５．４，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，１０．９Ｈｚ，１Ｈ），６．１３（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，６．５Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．８０（ｄ，Ｊ＝１５．６Ｈｚ，１Ｈ），５．７３（ｄｄ，Ｊ＝１５．４，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．１５（ｂｒ，１Ｈ），３．９３−３．９０（ｍ，１Ｈ），３．６７（ｂｒ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．３４（ｔ，２Ｈ），１．８２−１．６５（ｍ，１０Ｈ），１．４６−１．３８（ｍ，３Ｈ），１．２６−１．０１（ｍ，５Ｈ）。
化合物４のメチルエステル前駆体の製造：
化合物３のメチルエステル前駆体の選択的水素化、続くＨＰＬＣ精製は、化合物４のメチルエステル前駆体を与えた。ＨＰＬＣ保持時間９．７２分（ミクロソルブ逆相、１０ｍｍＸ２５ｃｍ。Ｃ−１８カラム、ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ ７０：３０。流量４ｍｌ／分、３００ｎｍにおけるＵＶ検出器）。ＭｅＯＨ中におけるＵＶ：λｍａｘ２８８，３０１，３１５ｎｍ。１Ｈ ＮＭＲ（２５０ＭＨｚ，Ｃ６Ｄ６）δ６．６６−６．８９（ｍ，２Ｈ），５．９５−６．２４（ｍ，４Ｈ），５．５５−５．６６（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｍ，１Ｈ），３．７３（ｍ，１Ｈ），３．４１（ｍ，１Ｈ），３．３１（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ３），２．０８（ｔ，２Ｈ，ＣＨ２ＣＯＯ），１．００−１．８１（ｍ，１８Ｈ）。
【０１７２】
メチルエステル類は標準的方法を用いて対応するアルコール類に変換することができる。
１５（Ｒ）−１５−メチル−ＬＸＡ４及び１５（±）メチル−ＬＸＡ４の合成
ヘキサノイルクロリドを用いたビス（トリメチルシリル）アセチレンのＦｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓアシル化を用い、約１グラムのアセチレン性ケトンａを製造し、Ｗｅｂｂｅｒ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１；Ｎｉｃｏｌａｏｕ Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００；及びＶｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．：Ｉｎ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄｓ（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｃｈｅｉｎｍａｎｎ，Ｆ．ｅｄｓ．）．Ｏｘｆｏｒｄ：Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓにおける通りに、（−）−ピナニル−９−ＢＢＮを用いて還元し、ＣＨ３Ｎ２中で（Ｓ）アルコールを得、Ｃ−１５におけるメチルを生成する。
【０１７３】
【化５８】
【０１７４】
別の場合、Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．：Ｉｎ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｎｏｉｄｓ（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｓ．Ｍ．，Ｓｃｈｅｉｎｍａｎｎ，Ｆ．ｅｄｓ．）．Ｏｘｆｏｒｄ：Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓにおける通りにケト基をＣＨ３ＭｇＢｒ（６０→７０℃）で処理し、２，６−ルチジン（５．２ｍｌ）及びｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルトリフレート（６．９ｍｌ）を連続的に添加し、０℃において乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（〜２０ｍｌ）中でｂの１５（±）メチル（２〜５ｇ）を得ることができる。この反応物を１時間撹拌し、次いで水性抽出のために１００ｍｌのエーテルで希釈し、ＭｇＳＯ４を用いて乾燥する。
【０１７５】
【化５９】
【０１７６】
次いで生成物ｃを、
【０１７７】
【化６０】
【０１７８】
Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００；Ｎｉｃｏｌａｏｕ Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７及びＷｅｂｂｅｒ．Ｓ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２９：６１におけると同様にして生成されるｄとカップリングさせる。案Ｉの断片Ａからの構造ｄを、０〜２５℃においてＥｔＯＨ：ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（１：１：１）を含む４．０当量のＡｇＮＯ３、次いで７．０当量のＫＣＮ中に２時間懸濁させ、Ｃ−メチルエステル保護１５−メチル−ＬＸＡ４類似体を生成し、それを濃縮し、ＴＨＦ中でＬｉＯＨ（２滴、０．１Ｍ）を用い、４℃で１２〜２４時間けん化し、対応する遊離の酸を得る。
１６−ジメチル−ＬＸＡ４の合成
【０１７９】
【化６１】
【０１８０】
この化合物は類似の戦略を用い、上記ｄをｅとカップリングさせることにより、上記参照、又はｆとカップリングさせ、１５−フェニル−ＬＸＡ４類似体を生成する、あるいはｇとカップリングさせて１７−ｍ−クロロフェノキシ−ＬＸＡ４類似体を生成することにより生成される。
【０１８１】
【化６２】
【０１８２】
案Ｉにおける適宜のＣ断片（すなわちｅ、ｆ、ｇ、ｈ）はそれぞれ、Ｒａｄｕｅｃｈｅｌ，Ｂ．ａｎｄ Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．（１９８５）Ａｄｖ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｒｅｓ．１４：２６３において既知の対応するプロスタグランディン類似体に関して考察されている通りに製造される。ｈにおいて、Ｒ＝Ｈ；Ｃｌ、メトキシ又はハロゲンである。
１３，１４−アセチレン性−ＬＸＡ４及びハロゲン−含有類似体の合成
【０１８３】
【化６３】
【０１８４】
案ＩＩからのＡ２Ｂ２生成断片を用い、対応するＣ２断片をカップリングのために製造する。構造ｊ及びｋはＮｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７における通りに生成され、Ｒａｄｕｅｃｈｅｌ，Ｂ．ａｎｄ Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．（１９８５）Ａｄｖ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｒｅｓ．１４：２６３における通りにメチル化され、７にカップリングされ、これらのＬＸ類似体を与える。材料は精製のためにＲＰ−ＨＰＬＣに供することができる、上記参照。
【０１８５】
【化６４】
【０１８６】
１４，１５−アセチレン性−ＬＸＡ４の合成
【０１８７】
【化６５】
【０１８８】
明示されている組み合わされたＡ２Ｂ２断片は、断片Ｃ２へのカップリングのために、７又は４、上記参照、の構造を有する経路ＩＩに示される、断片Ａ１及びＢ１のカップリングから製造することができる。Ｃ２断片ｌのための前駆体は、プロスタグランディン類似体の場合のＲａｄｕｅｃｈｅｌ，Ｂ．ａｎｄ Ｖｏｒｂｒｕｅｇｇｅｎ，Ｈ．（１９８５）Ａｄｖ．Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｔｈｒｏｍｂｏｘａｎｅ Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｒｅｓ．１４：２６３におけると同様にして製造することができる。
【０１８９】
【化６６】
【０１９０】
前に製造された前駆体ｍ（Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７）を１．２当量において、ベンゼン中の０．０５当量のＰｄ（ＰＰｈ３）４、０．１６当量のＣｕＩ、ｎ−ＰｒＮＨ２に、Ｍｅ２Ａｌ−保有ｌと共に加え、室温で２〜３時間後、ｎを得る。
【０１９１】
【化６７】
【０１９２】
アルコール保護基ＴＢＤＭＳ＝Ｒを、１０当量のＨＦ−ｐｙｒ、ＴＨＦを用い、０〜２５℃（４時間）において除去し、続いて３．０当量のＥｔ３Ｎ、ＭｅＯＨに２５℃で１５分間暴露し、リポキシン類において通常Ｃ−１−カルボキシとＣ−５アルコールの間に生成される酸−誘導δ−ラクトンを開環する（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８７：１６７及びＮｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．（１９８９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５４：５５２７）。５重量％のＬｉｎｄｌａｒ触媒で穏やかに処理した後、抽出した材料をＴＨＦ中のＬｉＯＨけん化に供し、目的分子の遊離の酸を生成することができ、それをさらに（Ｓｅｒｈａｎ．Ｃ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８７：１６７）における通りにＲＰ−ＨＰＬＣ勾配可動相により精製することができる。
１５（±）メチル−シクロ−ＬＸＡ４の合成
【０１９３】
【化６８】
【０１９４】
ＳｉＭｅ３誘導体としての化合物ｏを、アルゴンを濃縮した雰囲気下における１００ｍｌの丸底フラスコ中で脱ガスしたベンゼン（２０ｍｌ）中に入れる（〜１グラム）ことができる。これに、３．０当量のビニルブロミド断片、上記参照、を加える。このカップリング反応は、触媒量のＰｄ（ＰＰｈ３）４及びＣｕＩ中で行われ、この懸濁液のアリコートをＲＰ−ＨＰＬＣ中に注入し、急速走査ダイオードを用いてＵＶ吸収により監視することにより、監視することができる。２３℃において１〜３時間の進行の後、材料を酢酸エチル：Ｈ２Ｏ ４：１（ｖ／ｖ）を用いて抽出し、回転蒸発により濃縮する。メチルエステルはＬｉＯＨ／ＴＨＦ中でけん化することができ、定量的収量の遊離のカルボン酸を得る。他の誘導体は、断片Ａを置換された種々の断片Ｂ部分と共に用い、上記の通りに製造することができ、例えばジメチル又は他の誘導体を得ることができる。これは容易に入手可能なケトンｐを用い、それをＣＨ３ＭｇＢｒ（６０℃）で処理し、ｑを生成し、それをＰｄ（０）−Ｃｕ（Ｉ）カップリングなどの従来の方法を用いて上記の通りに断片Ａにカップリングさせることにより得ることができる。Ｃ−１５からの鎖長の増加も得ることができる。
【０１９５】
【化６９】
【０１９６】
５−メチル−ＬＸＢ４及び４，４−ジメチル−ＬＸＢ４の合成
５−メチル−ＬＸＢ４は５−オキソ−ＬＸＢ４生成を妨げるか、又は遅延させる。上記に概述した一般的案を用い、ビニルブロミド前駆体において５−メチルを有するようにＡ断片を構築することができ、それを、結合したＢ＋Ｃ断片に、Ｐｄ（０）−Ｃｕ（Ｉ）カップリングによりカップリングさせる。
【０１９７】
【化７０】
【０１９８】
ビニルブロミドｒは、ジメチル又は水素置換をそのＣ−４位に含むｓから得ることができる。断片Ｂ＋Ｃを含む保護前駆体ｔは、参照文献に報告されている通りに生成される（Ｎｉｃｏｌａｏｕ Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３０：１１００−１６）。化合物ｔは、指示されているビニルブロミドとのカップリングによりｓ又は２８に変換される。かくしてｒを１．０当量（約１グラム）で、脱ガスされ、溶媒としてＥｔ２ＮＨを含む丸底フラスコに加え、ｔを１．２当量でＥｔ２ＮＨに注入し、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４を０．０２当量で加え、ｓの８（９）−含有アセチレン性前駆体メチルエステルを得ることにより、目的分子を生成することができる。
【０１９９】
材料を抽出し、回転蒸発させ、ＣＨ２Ｃｌ２中のキノリン（０．５当量）中に懸濁させ、（１０％；２５℃）でＬｉｎｄｌａｒ触媒及びＨ２ガス流を用いて水素化し、選択的に８位におけるアセチレン性二重結合を還元する。５−メチル−ＬＸＢ４のメチルエステル又は４−ジメチル−ＬＸＢ４メチルエステルのテトラエン成分の生成は、還元の完了を評価するＲＰ−ＨＰＬＣにより監視することができる（すなわち１〜３時間）。次に生成物を２５μｌのＨ２Ｏを加えたＴＨＦ中で、０→２４ｏにおいてＬｉＯＨを用い、８〜２４時間処理することにより、メチルエステルを対応する遊離の酸にけん化する。
【実施例２】
【０２００】
ヒト前骨髄球性白血病細胞及び単球によるリポキシンＡ４代謝：半減期アッセイ
ＨＬ−６０細胞はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入し、他の細胞培養試薬はＧＩＢＣＯ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入した。ベルセン（ＥＤＴＡ）はＷｈｉｔｔａｋｅｒ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から購入した。合成１１，１２−アセチレン性ＬＸＡ４メチルエステル及びリポキシン類はＣａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｒｅａｄｉｎｇ，Ｕ．Ｋ．）から購入した。１５（Ｓ）−１５−ｍ−ＰＧＥ１、ＰＧＥ１及び５−ＨＥＴＥはＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ａｎｎ．Ａｒｂｏｒ，ＭＩ）から購入した。［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４は、１１，１２−アセチレン性ＬＸＡ４からＬｉｎｄｌａｒ触媒を用い、通常のトリチウム化として製造した（ＮＥＴ−２５９、ロット０２７９３−２７５、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ．ＭＡ）。トリチウム化された生成物はＲＰ−ＨＰＬＣを用いて単離した（Ｆｉｏｒｅ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６１６８；Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８７：１６７）。メトキシアミン及びＮＡＤはＳｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。二酸化マンガン及びアダムス試薬（Ａｄａｍｓ ｒｅａｇｅｎｔ）はＡｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から購入した。
【０２０１】
ヒト多形核細胞（ＰＭＮ）は、健康なボランティアから、新しいヘパリン添加静脈血の勾配遠心により得た（Ｂｏｅｙｕｍ，Ａ．（１９８６）Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１：７７）。ＨＬ−６０細胞は、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μ／ｍｌ）、牛胎児血清（１０％）（Ｈｙｃｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を補足したＲＰＭＩ中に播種し、プラスチックの２５０ｍｌフラスコ中でインキュベートした（５％ＣＯ２雰囲気で３７℃）。５ｘ１０−７ＨＬ−６０細胞／ｍｌを含むそれぞれのフラスコをホルボール１２−ミリステート１３ホアセテート（ＰＭＡ）（１０又は１６ｎＭ、２４〜２７時間）の存在下又は不在下でインキュベートし、Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．（１９８７）Ｂｌｏｏｄ ７０：１２３３における通りにマクロファージ−様表現型の誘導に関して付着（ａｄｈｅｒｅｎｃｅ）を監視した。新しい単核細胞をグルコース（１ｍｇ／ｍｌ）と共にＰＢＳを含むプラスチックペトリ皿上に３７℃で１時間平板培養した後、末梢血単球を得た（Ｇｏｌｄｙｎｅ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９：８８１５）。非−付着細胞を除去し、付着単核細胞をベルセン（７ｍｌ／プレート）を用いて穏やかに懸濁させ、ＰＢＳ中で洗浄した。ＰＭＮ（＞９８％）、付着単球（＞９５％）及びＨＬ−６０細胞を光学顕微鏡により計数し、インキュベーションのためにＰＢＳ中に懸濁させ、それぞれの場合に＜２〜３％がトリパンブルーに透過性であった。いくつかの実験の場合、ＰＭＡ（１６ｎＭ）で２４〜７２時間処理したＨＬ−６０細胞から無細胞上澄み液を調製した。収穫後、分化細胞を洗浄し、次いで凍結−解凍リシス（３回繰り返す）に供し、超遠心（１００，０００ｇ、１時間）した。
【０２０２】
エイコサノイドを用いたインキュベーションは、ＰＧＢ２又は５−ＨＥＴＥを内部標準として含む冷メタノールを用いて停止した（５−ＨＥＴＥは、１５−オキソ−ＥＴＥの定量の場合に用いた）。生成物はＳｅｐ−ｐａｋ Ｃ１８を用いて抽出し、Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８７：１６７における通りに、慣例的にクロマトグラフィーにかけた。ＲＰ ＨＰＬＣ系は、Ａｌｔｅｘ Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ−ＯＤＳ（４．６ｍｍｘ２５ｃｍ）カラムを備えたＬＫＢ勾配デュアルポンプ（ｄｕａｌ ｐｏｍｐ）を含み、流量は１ｍｌ／分であり、メタノール／Ｈ２Ｏ／酢酸（６５：３５：０．０１）を用いて（０〜２０分）、及びメタノール／酢酸（９９．９９／０．１）を直線勾配で用いて（２０〜４５分）溶離し、それをＬＴＢ４のω−代謝物（すなわち２０−ＣＯＯＨ及び２０−ＯＨ−ＬＴＢ４）、ならびにＬＸＡ４の定量に用いた。内部標準の回収率は８２．２、７．９平均Ｓ．Ｄ．（ｎ＝１３）であった。化合物Ｉ−ＩＶはＡｌｔｅｘ Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ−ＯＤＳカラム（１０ｍｍｘ２５ｃｍ）を用いて分離し、３．０ｍｌ／分の流量でメタノール／Ｈ２Ｏ／酢酸（６０：４０：０．０１，ｖ／ｖ／ｖ）を用いて溶離した。１００，０００ｇ上澄み液による１５−オキソ−ＥＴＥの生成（Ａｇｉｎｓ，Ａ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎｓ ２１：３９７；Ｘｕｎ，Ｃ−Ｑ．ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７９：５５３；及びＳｏｋ，Ｄ−Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５６：５２４を参照）は、ＯＤＳカラム（４．６ｍｍｘ２５ｃｍ）を用い、メタノール／Ｈ２Ｏ／酢酸（７０：３０：０．０１，ｖ／ｖ／ｖ）を用いて１ｍｌ／分の流量で溶離し、２８０ｎｍにおいて監視されたＲＰ−ＨＰＬＣの後に定量した。単球−誘導生成物も、Ｈｙｐｅｒｓｉｌカラム（５ＩＬ、４ｍｍｘ３００ｍｍ）を用いてクロマトグラフィーにかけ、メタノール／Ｈ２Ｏ／酢酸（６０：４０：０．０１，ｖ／ｖ／ｖ）を用いて１ｍｌ／分の流量で溶離した。オン−ラインスペクトルを、ＨＰＬＣ３ＤＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎソフトウェア（ＤＯＳシリーズ）を備えたダイオードアレー検出器（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ １０４０ＭシリーズＩＩ）を用いて記録した。スペクトルはステップ４ｎｍ、ＢＷ＝１０ｎｍ、領域＝２３５〜３６０ｎｍを用い、１．２８秒のサンプリング間隔で得た。
【０２０３】
ＧＣ／ＭＳは、ＨＰＧ１０３０Ａワークステーション及びＧＣ ５８９０を備えたＨｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ５９７１Ａ質量選択的四極検出器（ｍａｓｓ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ）を用いて行った。カラムはＨＰＵｌｔｒａ２（架橋５％フェニルメチルシリコンゴム相；２５ｍｘ０．２ｍｍｘ０．３３μｍ）であり、注入はビス（ＴＭＳ）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）中において、スプリットレスモード（ｓｐｌｉｔｌｅｓｓ ｍｏｄｅ）で行った。温度プログラムは１５０℃で開始し、１０分で２５０℃に達し、２０分で３２５℃に達するものであった。標準的飽和脂肪酸メチルエステルＣ１６−Ｃ２６は以下の保持時間を与え（分：秒；ｎ＝６の平均）Ｃ１６，８．０３；Ｃ１８，９．７７；Ｃ２０，１２．２２；Ｃ２２，１６．１１；Ｃ２４，２０．７２；Ｃ２６，２３．６２、それをＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８７：１６７におけると同様にＬＸ−誘導代謝物のそれぞれのＣ値の算出に用いた。ジアゾメタンを製造し、メチルエステル生成物をＢＳＴＦＡ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＩＬ）で処理してＭｅ３Ｓｉ誘導体を得た。メチルエステルＯ−メトキシム誘導体は、Ｋｅｌｌｙ，Ｒ．Ｗ．ａｎｄ Ａｂｅｌ，Ｍ．Ｈ．（１９８３）Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．１０：２７６におけると同様に製造した。接触水添はメタノール（１ｍｌ）中でＡｄａｍｓ試薬（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）を用い、酸化白金ＩＶ（１〜２ｍｇ）を発泡水素流で飽和させることにより（２０分間、室温）行った。抽出後、材料をジアゾメタン、続いてＢＳＴＦＡで処理した（終夜、室温）。
結果
ＬＸＡ４の代謝：健康なドナーの末梢血からの無損傷の好中球は、外因性ＬＸＡ４を有意に代謝しなかったが、同一のドナーからの細胞はω−酸化を介してＬＸＡ４を急速に変換した。対照的に、単球／マクロファージ−様特性を示すＰＭＡ−処理ＨＬ−６０細胞は、急速にＬＸＡ４を変換した。暴露の最初の６０秒以内に、ＬＸＡ４の＞７０％が代謝された。ＰＭＡ処理をしないと、無損傷のＨＬ−６０細胞（未分化）もそれらの無細胞上澄み液（１００，０００ｘｇ）もＬＸＡ４を（不明）（ｎ＝３）。
【０２０４】
ＬＸＡ４と共にインキュベートされた分化ＨＬ−６０細胞は、このエイコサノイドを数種の生成物に変換した。標識ＬＸＡ４は、トリチウムを有する４つの主生成物に変換され（化合物Ｉ−ＩＶと表す）、それをさらに分析するために集めた。
【０２０５】
化合物Ｉ−ＩＶの構造 構造研究できる量のこれらの化合物を得るために、ＲＰ−ＨＰＬＣにおける保持時間を３Ｈ−標識溶離プロファイルを用いて確定し、境界を記し、数回のインキュベーションからプールした非標識試料をクロマトグラフィーにかけ、それぞれこれらの領域からＧＣ／ＭＳ分析用に集めた。ジアゾメタン及びＢＳＴＦＡで処理した後に得た生成物の選択的イオン監視は、化合物Ｉ−ＩＶがそれぞれｍ／ｚ２０３［−ＣＨ（ＯＳｉＭｅ３）−（ＣＨ２）３−ＣＯＯＣＨ３］において突出したイオンを示し、ＬＸＡ４の炭素１から５（カルボキシル炭素が１番）が変更されなかったことを示したが、それぞれの生成物はＬＸＡ４と異なる保持時間を与えた。ＬＸＡ４のメチルエステル、トリメチルシリル誘導体は、その電子衝撃スペクトルにおいて、ｍ／ｚ２０３（ベースピーク）及び１７３において突出したイオン、及び５８２（Ｍ＋４）においてその分子量を示した。このＬＸＡ４の誘導体における診断的価値を有する他のイオンは、ｍ／ｚ１７１（２０３−３２）、４０６（Ｍ−１７３）、３７９（Ｍ−２０３）、４８２（Ｍ−１００）及び４９２（Ｍ−９０）において観察される（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：５３３５；及びＳｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ １８７：１６７）。一般にリポキシン類は非常に弱い分子イオンピークを与えることが知られていることは、注目に値する（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：５３３５）。それにもかかわらず、標識化合物Ｉ及びＩＩはｍ／ｚ１７３（Ｍｅ３ＳｉＯ＋＝ＣＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）においても突出したイオンを有し、これらのＬＸＡ４−誘導生成物の炭素１５〜２０断片が無損傷であることを示しているが、化合物ＩＩＩ及びＩＶにおいてはｍ／ｚ１７３におけるイオンは明確でなかった。かくして化合物Ｉ−ＩＶがＬＸＡ４の代謝物であるという結論は、それらの物理的性質（ＨＰＬＣ及びＧＣ／ＭＳ）、それらがトリチウム標識を有するという発見、ならびにＰＭＡを用いて処理しなかったＨＬ−６０細胞を用いたインキュベーションにおけるこれらの生成物の不在に基づいた。
【０２０６】
次に、化合物ＩＩＩ及びＩＶがＬＸＡ４の炭素１５〜２０断片において構造的修飾を有する代謝物を示すと思われるので、それらに焦点を当てた。可能性はω−酸化（炭素２０におけるヒドロキシル化）であったので、誘導の後のそれぞれＬＸＡ４の２０−ＯＨ及び２０−ＣＯＯＨ形態から生じ得るイオン、すなわちｍ／ｚ２６１及び２１７（Ｍｅ３ＳｉＯ＋＝ＣＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ２ＯＳｉＭｅ３及びＭｅ３ＳｉＯ＋＝ＣＨ−（ＣＨ２）４−ＣＯ２Ｍｅ）を、得られたＧＣ−ＭＳデータプロファイルにおいて走査した。ＩＩＩ又はＩＶのいずれもｍ／ｚ２６１又は２１７において突出したイオンを示さず、これらの生成物がω−酸化の結果でないらしいことを示した。］
Ｍｅ３Ｓｉ誘導体、化合物ＩＩＩのメチルエステルの質量スペクトル（Ｃ値２４．３）を得た。そのスペクトルにおける突出イオンはｍ／ｚ２０３（ベースピーク、ＣＨ（ＯＳｉＭｅ３）−（ＣＨ２）３−ＣＯＯＣＨ３）、１７１（２０３−３２；ＣＨ３ＯＨの脱離）、２１５［（Ｍ−２０３）−９０、トリメチルシラノール（Ｍｅ３ＳｉＯＨ）の脱離］及び９９（Ｏ＝Ｃ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）において観察された。強度が比較的低いイオンはｍ／ｚ５０８（Ｍ＋）及び４１８（Ｍ−９０；Ｍｅ３ＳｉＯＨの消失）であった。これらのイオンの存在は、３Ｈ−標識化合物ＩＩＩと共溶離された材料がＬＸＡ４の１５−オキソ−誘導体であったことを示唆した。これはいくつかの証拠、すなわちｍ／ｚ１７３（Ｍｅ３ＳｉＯ＋＝ＣＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）における突出したイオンの事実上の消失、ｍ／ｚ９９（Ｏ＝Ｃ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）の存在、テトラエン発色団の不在及び３３５〜３４０ｎｍのＵＶλｍａｘにおける新しい発色団の出現により支持される。テトラエン発色団は、プロスタグランディン変換の場合に用いられる通り、クロロホルム中においてＬＸＡ４をＭｎＯ２で処理することにより確証された（Ａｅｎｇｇａｒｄ，Ｅ．ａｎｄ Ｓａｍｕｅｌｓｓｏｎ，Ｂ．（１９６４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３９：４０９７）。又、接触水添生成物の質量スペクトルもｍ／ｚ２０３（ベースピーク）、ｍ／ｚ９９（６６％）、ｍ／ｚ３１３（Ｍ−２０３又はＭ−ＣＨ（ＯＳｉＭｅ３）−（ＣＨ２）３−ＣＯＯＣＨ３；３５％）及びｍ／ｚ１７１（３６％）において突出したイオンを有し、ｍ／ｚ１７３において突出したイオンのない２５．１のＣ値を与えた。比較的弱いイオンはｍ／ｚ５１６（Ｍ＋）及びｍ／ｚ４２６（Ｍ−９０）においてあった。かくして８ａｍｕの上方への移動及びこの飽和誘導体の分裂は、対応する１５−オキソ−誘導体の生成と一致した。
【０２０７】
このＬＸＡ４−誘導生成物をさらに調べるために、標識ＩＩＩのピークの下で溶離する材料のアリコートをジアゾメタンで処理し、続いてメトキシム化し（Ｂｅｒｇｈｏｌｔｅ，Ｊ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５７：４４４におけると同様に）、ＢＳＴＦＡで処理した。Ｃ値が２５．４のそのスペクトルはｍ／ｚ２０３（ベースピーク）、１７１（２０３−３２；ＣＨ３ＯＨの消失）及び２２９［Ｍ−１２８又はＣＨ３Ｏ−Ｎ＝Ｃ−（ＣＨ２）４ＣＨ３−（２ｘ９０）］における突出したイオンを示した。比較的強度が低いイオンはｍ／ｚ５３７（Ｍ＋）、４６６（Ｍ−７１、αｔ−分裂イオンＭ−ＣＨ２（ＣＨ２）３ＣＨ３）、４８１（Ｍ−５６又はＭ−ＣＨ２＝ＣＨ−ＣＨ２−ＣＨ３、ＭｃＬａｆｆｅｒｔｙ転位イオン）、４３１［Ｍ−１０６（おそらくＣ７Ｈ５Ｎ＋の消失）］、４０１［Ｍ−１３６（Ｍｅ３ＳｉＯＨ＋ＣＨ３＋・ＯＣＨ３の脱離）］及び４６０（Ｍ−７７、ＮＯＣＨ３とＭｅＯＨの消失）においてあった。この場合も、アルコール−含有Ｃ−１５断片を起源とするｍ／ｚ１７３におけるイオン（Ｍｅ３ＳｉＯ＋−ＣＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）はそのスペクトル中に事実上不在であった。かくして存在するイオンはＬＸＡ４の１５−オキソ−含有誘導体から生成されるメチルエステル、Ｏ−メトキシム誘導体と一致した。これらの種々の誘導体の場合に観察される突出したイオンが一緒になって、標識ＩＩＩのピークの下で溶離する材料がＬＸＡ４の１５−オキソ−生成物（すなわち１５−オキソ−ＬＸＡ４）であったことを示唆している。
【０２０８】
化合物ＩＶのメチルエステルＭｅ３Ｓｉ誘導体（Ｃ値２６．０）の質量スペクトルは、ｍ／ｚ２０３（ベースピーク、ＣＨ（ＯＳｉＭｅ３）−（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ３）、１７１（２０３−３２；ＣＨ３ＯＨの消失）、９９（Ｏ＝Ｃ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）及び３０７（Ｍ−２０３又はＭＣＨ（ＯＳｉＭｅ３）−（ＣＨ２）３−ＣＯＯＣＨ３）において突出したイオンを示した。比較的低い強度のイオンはｍ／ｚ５１０（Ｍ＋）、４２０（Ｍ−９０、トリメチルシラノールの消失）及び２０８（Ｍ−（９９＋２０３））においてあった。そのＵＶスペクトルは、２５９、２６９及び２８０ｎｍにおいて最大を有する吸収のトリプレットを示し、共役トリエン発色団と一致した。これらのイオンの存在及びＵＶスペクトルは、ＩＶがＬＸＡ４のジヒドロ−１５−オキソ−代謝物であったことを示す。この基本的構造は、炭素１５位におけるケト基と一致するｍ／ｚ９９におけるイオンの存在、及び炭素５及び６におけるアルコール基が無損傷のままであることを明らかにするベースピークとしてのｍ／ｚ２０３の存在により支持された。さらにトリエンオン発色団（λｃａｌ＝３１０ｎｍ）の不在は、二重結合の消失が△１３−１４位においてであり、観察されたトリエン発色団を与えることを示す。これらの結果が一緒になって、化合物ＩＶが１３，１４−ジヒドロ−１５−オキソ−ＬＸＡ４であったことを示している。
【０２０９】
化合物ＩＩのメチルエステル、Ｍｅ３ＳｉＯ誘導体（Ｃ値−２５．４）は、ｍ／ｚ２０３（ベースピーク；ＣＨ（ＯＳｉＭｅ３）−（ＣＨ２）３ＣＯＯＣＨ３）、１７３（Ｍｅ３ＳｉＯ＋−ＣＨ−（ＣＨ２）４−ＣＨ３）、１７１（２０３−３２）及び５８４（Ｍ＋）においてイオンを与えた。その分子イオンはＬＸＡ４誘導体より２質量単位高かった。これらのイオン及びλｍａｘＭｅＯＨ２５９ｎｍ、２６９ｎｍ及び２８２ｎｍにおける吸収のトリプレットバンドは、化合物ＩＩがＬＸＡ４のジヒドロ−誘導体であったことを示す。ＨＬ−６０細胞からの化合物Ｉのメチルエステル、Ｍｅ３ＳｉＯ誘導体はＧＣにおいて２つの生成物を与えた。主要な生成物（Ｃ値＝２５．０）は、その質量スペクトルにおいてＬＸＡ４と類似のイオンを与えたが、その分子イオンはｍ／ｚ５８６においてであり、ｍ／ｚ５５５（Ｍ−３１）及び４９６（Ｍ−９０）におけるイオンも存在し、４つの二重結合の２つが還元された（示されていない）ことを示している。しかし末梢血単球（上記参照）の場合に同一の生成物は観察されず、かくしてピークＩからのＨＬ−６０細胞−誘導材料は本実験においてこれ以上特性化しなかった。Ｉ−ＩＶの構造及び図１からの結果は、ＬＸＡ４が無損傷の白血球によるω−酸化により代謝されず、代わりに炭素１５アルコールにおいて脱水素され、共役テトラエンからトリエン構造にも変換されることを示す。これらの観察を一緒にして、ＬＸＡ４は、プロスタノイドを基質として類似の反応を行うことが知られている酵素であるＮＡＤ−依存性１５−プロスタグランディンデヒドロゲナーゼ（５−ＰＧＤＨ）により攻撃され得ることが示唆される（Ａｅｎｇｇａｒｄ，Ｅ．ａｎｄ Ｓａｍｕｅｎｓｓｏｎ，Ｂ．（１９６４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３９：４０９７及びＨａｎｓｅｎ，Ｈ．Ｓ．（１９７６）Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ １２：６４７において考察）。
【０２１０】
１５−ＰＧＤＨ活性は最近、ＨＬ−６０細胞において誘導されることが示され（Ｘｕｎ，Ｃ−Ｑ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．２７９：５５３）、それはＰＧＥ２と比較して９２％の効率で基質として１５−ＨＥＴＥを用いると思われる（Ａｇｉｎｓ，Ａ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ａｇｅｎｔｓ Ａｃｔｉｏｎ ２１：３９７）。実際に、ＰＭＡ−処理ＨＬ−６０細胞から調製された１００，０００ｇ上澄み液は、１５−ＨＥＴＥを１５−オキソ−ＥＴＥに変換し、分化の後のデヒドロゲナーゼ活性の存在を示している。ＬＸＡ４は１５−ＨＥＴＥの触媒作用に関して競合し、Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋｅプロットから算出されるＫｉ＝８．２±２．６μＭ（Ｓ．Ｅ．Ｍ．，ｎ＝６）を与えた。等モル濃度のＬＸＡ４及び１５−ＨＥＴＥにおいて、ＬＸＡ４は１５−オキソ−ＥＴＥ生成を約５０％妨害した。ＰＧＥ１と比較したＬＸに関する、１００，０００ｇ上澄み液による相対的変換率（図５）は、ＬＸＡ４、１１−トランス−ＬＸＡ４及びＬＸＢ４が変換されるが１５−メチル−ＰＧＥ１は変換されないことを示した。これらの結果は一緒になって、ＬＸＡ４＞１１−トランス−ＬＸＡ４＞ＬＸＢ４が１５−ＰＧＤＨ又は同等の酵素系に関する基質であることを示す。
【０２１１】
ＰＭＡはＨＬ−６０細胞の単球−マクロファージ−様整列（ｌｉｎｅａｇｅ）を誘導するので（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．（１９８７）Ｂｌｏｏｄ ７０：１２３３）、末梢血単球をインキュベートし、それらがリポキシンを代謝するか否かを決定した。リポキシン類は単球との有力な作用を示し（Ｓｔｅｎｋｅ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．（１９９１ｂ）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８０：２５５）、これらの細胞はエイコサノイド類をω−酸化しない（Ｗｏｌｄｙｎｅ，Ｍ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９：８８１５）。無損傷の単球（ｎ＝５）及び透過化細胞（凍結−解凍又はサポニン−処理、ｎ＝５）の両方の懸濁液をＬＸＡ４に暴露すると、ＬＸＡ４は１５−オキソ−ＬＸＡ４ならびに共役トリエン含有生成物、１３，１４−ジヒドロ−ＬＸＡ４及び１３，１４−ジヒドロ−１５−オキソ−ＬＸＡ４に変換される（表１を参照）。分化ＨＬ−６０細胞の場合と同様に、単球は３０秒以内に急速にＬＸＡ４を変換した（＞６０％）（図６）。無損傷の、及び透過化単球の両方におけるこれらの代謝物の生成に関する時間的（ｔｅｍｐｏｒａｌ）関連性は類似であり、１５−オキソ−ＬＸＡ４代謝物が遷移的中間体であることを示唆している。又、３Ｈ−ＬＸＡ４（ｄ＝３３）と共にインキュベートされた各単球懸濁液において、１３，１４−ジヒドロ−１５−オキソ−ＬＸＡ４及び１３，１４−ジヒドロ−ＬＸＡ４が放射性標識を有する主要な生成物であった。１５．５〜１７分において１３，１４−ジヒドロ−ＬＸＡ４より前に溶離する生成物が観察され、それもトリエン発色団を示し、仕上げの間に遭遇するシス−トランス異性化から生ずる１３，１４−ジヒドロ−ＬＸＡ４の１１−トランス異性体であると思われたことは、注意するに値する。本来のＬＸＡ４の１１−シス二重結合は不安定であり、抽出及び単離の間に全−トランスに容易に異性化する（Ｒｏｍａｎｏ，Ｍ．ａｎｄ Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．（１９９２）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３１：８２６９）。
【実施例３】
【０２１２】
リポキシンレセプター類似体への結合親和力
ヒト前骨髄球性白血病細胞（ＨＬ−６０）はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）らか購入した。ＲＰＭＩ培地及び細胞培養試薬はＧＩＢＣＯ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ ＮＹ）から購入した。合成ＬＸＡ４．トリヒドロキシヘプタン酸（メチルエステル）、ＬＸＢ４、ＬＴＤ４、ＬＴＣ４及びＬＴＢ４はＢｉｏｍｏｌ（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ）から、及びＳＫＦ１０４３５３はＳｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ ａｎｄ Ｆｒｅｎｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。ＯＮＯ４０５７はＯＮＯ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｌ，Ｌｔｄ（Ｏｓａｋａ，Ｊａｐａｎ）から購入した。［１４，１５−３Ｈ］ＬＴＢ４（３２．８ｍＣｉ／ミリモル）、［１−１４Ｃ］アラキドン酸（５０．２ｍＣｉ／ミリモル）、３２ＰγＡＴＰ（３，０００Ｃｉ／ミリモル）、［９，１０−３Ｈ（Ｎ）］パルミチン酸（３０．０ｍＣｉ／ミリモル）及び［９，１０−３Ｈ（Ｎ）］ミリスチン酸（３０．７Ｃｉ／ミリモル）はＮｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ（ＤｕＰｏｎｔ Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）から購入した。１１，１２−アセチレン性ＬＸＡ４はＣａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，ＵＫ）から購入した。微量遠心管フィルター（０．４５μｍ酢酸セルロース）はＰＧＣ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）から、及びシリコン油はＨａｒｗｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐ．（Ａｋｒｏｎ，ＯＨ）（ｄ＝１．０５）及びＴｈｏｍａｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｓｗｅｄｅｓｂｏｒｏ，ＮＪ）（ｄ＝０．９６３）からそれぞれ購入した。ニトロブルーテトラゾリウム、ＰＭＡ、ＤＭＳＯ、プロテアーゼ、レチノイン酸及びアクチノマイシンＤはＳｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。インスリン分泌活性タンパク質（ｉｓｌｅｔ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＩＡＰ）はＬＩＳＴ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂ．，Ｉｎｃ．（Ｃａｍｐｂｅｌｌ，ＣＡ）から購入した。プラスチックウェア、Ｗｈａｔｍａｎ ＬＫ６Ｄ ＴＬＣプレート及び溶媒（ＨＰＬＣ等級）はＦｉｓｈｅｒ（Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＮＪ）から購入した。
【０２１３】
［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４の製造 １１，１２−アセチレン性ＬＸＡ４メチルエステルのトリチウム化は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）による通常のトリチウム化サービス（ＮＥＴ−２５９：９２−２３２６）下で行った。簡単に言うと、１１，１２−アセチレン性メチルエステルを（Ｎｉｃｏｌａｏｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０７：７５１５）におけると同様にＵＶ吸収及び逆相ＨＰＬＣにより特性化し、室温においてメチレンクロリド中でトリチウム雰囲気に暴露した。このインキュベーション物をＬｉｎｄｌａｒ触媒（Ｆｌｕｋａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓからの１．０ｍｇ）の存在下で約１時間撹拌した。得られた混合物をメタノール中に保存し、ＲＰ−ＨＰＬＣを用いて単離した。トリチウム化生成物を、光ダイオードアレー急速スペクトル検出器（ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｒａｐｉｄ ｓｐｅｃｔｒａｌ ｄｅｔｅｃｔｏｒ）を備えた勾配ＨＰＬＣ系を用いてメチルエステルとしてクロマトグラフィーにかけた（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：Ａｒａｃｈｉｄｏｎａｔｅ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｌｉｐｉｄ Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ，ｉｎ Ｍｕｒｐｈｙ Ｒ．Ｃ．，Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，Ｆ．（ｅｄｓ．）ｖｏｌ．１８７，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ．Ａｃａｄｅｍｉｃ，（１９９０），ｐ．１６７）。この混合物は［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４及び［１１，１２−３Ｈ］−１１−トランス−ＬＸＡ４メチルエステル（〜１：３の比率）の両方を含むことが合成標準との共溶離により決定された。ＲＰ−ＨＰＬＣの後、［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４を含む画分を集め、酢酸エチル中に抽出した。ＬｉＯＨけん化により遊離の酸を製造した（Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６１６８）。これらの画分からの材料は、ＵＶ−電気化学的検出ＨＰＬＣ中に注入すると、合成ＬＸＡ４と共溶離したテトラエン−含有生成物に伴う９０％以上の放射性を与えた。２つのＨＰＬＣ系において基準ＬＸＡ４の保持時間を有して溶離した材料を結合実験に採用した。［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４に関して算出された比活性は４０．５Ｃｉ／ミリモルであった。
【０２１４】
細胞培養及び分化 ＨＬ−６０細胞を１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン及び１０％の牛胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を補足したＲＰＭＩ培地に播種し、２５０ｍｌのフラスコにおいて５％ＣＯ２雰囲気を用い、３７℃でインキュベートした。次に〜５０ｘ１０６細胞／ｍｌを含むそれぞれのフラスコにジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（１．１２％ ｖ／ｖ、１２０時間）又はレチノイン酸（ＲＡ）（１μＭ、１２０時間）又はホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）（２０ｎＭ、４８時間）を与えた。結合アッセイを開始する前に、細胞をＣａ２＋及びＭｇ２＋を含まないリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で２回洗浄し、計数し、Ｔｒｉｓ緩衝液（１０ｍＭ）、ｐＨ７．４中に２０ｘ１０６細胞／ｍｌで懸濁した（Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６１６８）。ニトロブルーテトラゾリウム還元を行い、（Ｉｍａｉｚｕｍｉ，Ｍ．ａｎｄ Ｂｒｅｉｔｍａｎ，Ｔ．Ｒ．（１９８６）Ｂｌｏｏｄ ６７：１２７３）におけると同様に多形核表現型の誘導を監視し、マクロファージ−様表現型の誘導に関して細胞付着を決定した（Ｃｏｌｌｉｎｓ Ｓ．Ｊ．（１９８７）Ｂｌｏｏｄ ７０：１２７３）。第３継代培養に保持されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）をＤｒ．Ｍ．Ｇｉｍｂｒｏｎｅ（Ｂｒｉｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｌｏｈｙ）から得た。
【０２１５】
末梢血からのＰＭＮ、血小板及びＲＢＣの単離
ヒトＰＭＮは、健康で正常なボランティアの静脈穿刺の後に、新しいヘパリン血から修正Ｂｏｅｙｕｍ法（Ｂｏｅｙｕｍ，Ａ．（１９６８）Ｓｃａｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．２１：７７）により得た。ＰＢＳ中の懸濁液を細胞数に関して、及びトリパンブルーを排除する能力により生存率に関して監視し、両者は９８％を越えた。１０ｍｌのヘパリン血から、ＰＢＳ中で３回遠心した後、赤血球を得た（２，５００ｒｐｍ、２０℃において１０分間）。酸性クエン酸塩デキストロース（９：１ ｖ／ｖ）中に採血した血液を用い、前記の通りに血小板を単離した（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｋ．−Ａ．（１９９０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８５：７７２）。
【０２１６】
リガンド結合 ３Ｈ−ＬＸＡ４及び３Ｈ−ＬＴＢ４結合を本質的にＦｉｏｒｅ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６１６８におけると同様にして行った。Ｔｒｉｓ緩衝液１０ｍＭ（ｐＨ７．４、Ｃａ２＋２．５ｍＭ、Ｍｇ２＋１．２ｍＭ）中に細胞を懸濁させた後、アリコート（０．５ｍｌ）を３Ｈ−リガンドのみ（０．３ｎＭ）と、又は濃度を増加させたホモリガンド又は他の化合物（３〜３００ｎＭ）の存在下でインキュベートした（４℃において２０分間）。インキュベーション物をシリコン油上（ｄ＝１．０２８）で急速に遠心し（６０秒間、１２，０００ｇ）、細胞−付随放射性を液体シンチレーションカウント（Ｗａｌｌａｃ １４０９，Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）により決定した。ＨＵＶＥＣ細胞との結合実験は、３．５ｘ１０５細胞／ウェルを有する１２ウェルプレートにおいて行った。１０分後、ウェルをＰＢＳで２回洗浄し、氷酢酸（０．５ｍｌ）を加えることにより細胞−付随標識を回収した。これらのアッセイから得た結果から、リガンドプログラムを用いた実験をさらに行うこととなった。
【０２１７】
ＰＬＤ活性 上記の通りに調製されたヒトＰＭＮ及びＨＬ−６０細胞（５０ｘ１０６細胞／ｍｌ）を３Ｈ−ミリスチン酸又は３Ｈ−パルミチン酸（８μＣｉ／５０ｘ１０６細胞）と共にＰＢＳ中で３７℃において４０〜６０分間インキュベートした。細胞吸収は加えられた標識の６０〜８０％の範囲であり、７．１±４．２％（ｎ＝１０；平均±Ｓ．Ｄ．）及び３２．６±１０．３％（ｎ＝６；平均±Ｓ．Ｄ．）がそれぞれＰＭＮ及びＨＬ−６０細胞の全リン脂質中に吸収された。インキュベーションは３７℃において行った（１０ｘ１０６細胞／ｍｌＰＢＳ）。Ｂｉｌｌａｈ．Ｍ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１７０６９におけると同様に、拮抗剤を５０μＬのＰＢＳ中で、又はホスファチジルエタノール生成のために１：１０（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ：ＰＢＳを用いて加えた。指示された時間に、ここでは抽出回収物を定量するための内部標準として用いられる１−１４Ｃ−アラキドン酸（５，０００ｃｐｍ）を含む３．５ｍｌの氷冷ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（２／５ ｖ／ｖ）を加えることによりインキュベーションを停止した。試料を、（Ｓｅｒｈａｎ，Ｃ．Ｎ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｋ．−Ａ．（１９９０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８５：７７２）におけると同様に修正Ｂｌｉｇｈ ａｎｄ Ｄｙｅｒ抽出を用いて抽出した。５０μＬのＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ（８／２ ｖ／ｖ）中で濃縮された有機相を線状（ｌｉｎｅａｒ）Ｋ６Ｄ ＴＬＣプレート上にスポットし、酢酸エチル／イソオクタン／酢酸／水（１１０／５０／２０／１００，ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）の有機相を用いて５０分間展開した（Ｂｉｌｌａｈ．Ｍ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１７０６９）。この系において、ホスファチジン酸（ＰＡ）はＲｆ＝０．１±０．０４を与え、ＰＥｔはＲｆ＝０．５６±０．０４を与え；ｎ＝３８±Ｓ．Ｄ．、それらは他のリン脂質（起点に残った）又は天然の脂質（Ｒｆ＝０．７５〜０．９０）から明確に分離された。脂質をヨウ素蒸気を用いて視覚化し、やはり各ＴＬＣプレートにおいてスポットされてクロマトグラフィーにかけられた基準標準試料と共溶離することにより同定した。ＰＡ、ＰＥｔ及び内部標準に相当する領域をこすり落とし、液体シンチレーションカウントにより定量した。３Ｈ−ミリステート又は３Ｈ−パルミテート標識の他に、［１−１４Ｃ］アラキドネート（０．２５μＣｉ／３０ｘ１０６ＰＭＮ）及び３２ＰγＡＴＰ（２０μＣｉ／５０ｘ１０６ＰＭＮ）標識細胞の両方を用い、ＰＡ及びＰＥｔ生成のＬＸＡ４−刺激生成を監視した。これらの実験において、ＰＡは酢酸エチル／イソオクタン／酢酸（４５／１５／１０、ｖ／ｖ／ｖ）を溶媒系として用いて分離され（Ｂｏｃｃｋｉｎｏ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１８０：２４）、Ｒｆ＝０．４６±０．０３（ｎ＝１５）を与えた。表４及び５におけるＰＥｔ生成に関して報告されているすべての値は、拮抗剤のみの存在下で得たｄｐｍを拮抗剤及び０．５％ＥｔＯＨの存在下で測定されたｄｐｍから引き去ることにより算出した。
【０２１８】
ＬＸＡ４−誘導ＰＬＤ活性へのＩＡＰ及びスタウロスポリンの影響
上記の通りに行われたＰＬＤ活性アッセイ（上記参照）の前に、ＩＡＰ又はスタウロスポリンのいずれかへの細胞暴露を行った。ＰＭＮのＩＡＰ処理は、以前に記載された通りに行い（Ｎｉｇａｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１４３：５１２）、ＨＬ−５０はＩＡＰ（３００ｎｇ／ｍｌ）の存在下又は不在下で３７℃において２時間インキュベートした（Ｋａｎａｈｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２３５５４）。アリコート（１０７細胞／０．５ｍｌ）を０．４ｍｌの緩衝液に加えた。次に、インキュベートされた細胞を１００μｌのビヒクル（ＰＢＳ、ＥｔＯＨ０．０４％）又はＬＸＡ４（１０−７Ｍ及び１０−９Ｍ）のいずれかに、０．５％ＥｔＯＨの存在下で暴露した。スタウロスポリン（１００ｎＭ）は、ＬＸＡ４を加える前に３７℃で５分間細胞懸濁液に加えた。
結果
合成［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４の製造の後、その前骨髄球性白血病細胞（ＨＬ−６０）への特異的結合を特性化し、［１４，１５−３Ｈ］ＬＴＢ４の特異的結合との直接的比較を行った。慣例的表現型マーカーを監視すると、未処理ＨＬ−６０細胞は３Ｈ−ＬＸＡ４及び３Ｈ−ＬＴＢ４リガンドの両方に関して低い程度の特異的結合を示した。ＤＭＳＯ（１．１２％）又はレチノイン酸（１μＭ）に５日間暴露することにより誘導された分化は、両方の放射性リガンドに関する特異的結合の３〜５倍の増加を伴った。マクロファージ−様表現型の特性を示すＰＭＡ−処理細胞（２０ｎＭ、４８時間）、すなわちプラスチックに付着するＮＢＴ陰性細胞（Ｉｍａｉｚｕｍｉ，Ｍ．ａｎｄ Ｂｒｅｉｔｍａｎ，Ｔ．Ｒ．（１９８６）Ｂｌｏｏｄ ６７：１２７３；Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．（１９８７）Ｂｌｏｏｄ ７０：１２３３を参照）も３Ｈ−ＬＸＡ４及び３Ｈ−ＬＴＢ４の両方との特異的結合の出現に導いた。４℃において１０分で３Ｈ−ＬＸＡ４との平衡結合に達し、次の２０分間、事実上変化しないままであった。
【０２１９】
両３Ｈ−リガンドに関する特異的結合の誘導が始めからの合成（ｄｅ ｎｏｖｏ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）を必要とするか否かを評価するために、アクチノマイシンＤ（２μｇ／ｍｌ）をＰＭＮインキュベーション物と共に加えた。アクチノマイシンＤは、両標識エイコサノイド類に関する特異的結合におけるＰＭＡ−誘導増大を妨害し、始めからのタンパク質生合成の阻害が特異的結合部位の出現も妨害することを示唆した。プロテアーゼ及びグリコシダーゼ処理の影響を、３Ｈ−ＬＸＡ４特異的結合に関して分化ＨＬ−６０細胞及びヒトＰＭＮの両方を用いて評価した。プロテアーゼ処理は特異的結合を減少させ、ＬＸＡ４特異的結合部位のタンパク質成分を支持する証拠を追加した。
【０２２０】
分化ＨＬ−６０細胞及び［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４（０．１〜３０ｎＭ）を用いた等温結合アッセイ（４℃、１０分間）からの結果は、［１１，１２−３Ｈ］ＬＸＡ４特異的結合部位がＫｄ＝０．６±０．３ｎＭを与えることを示した。ヒトＰＭＮとのＬＸＡ４特異的結合の場合に観察された濃度に関し、Ｓｃａｔｃｈａｒｄプロットの非直線状部分が観察された（Ｆｉｏｒｅ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１６１６８）。ＨＬ−６０細胞とのＬＴＢ４特異的結合の場合にここで得た結果、Ｋｄ＝０．１２ｎＭは本質的に、Ｈａｒａｄａ（Ｘｉｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８８：４５）により最近報告された値、すなわちＫｄ＝０．２３ｎＭと一致する。
【０２２１】
３Ｈ−ＬＸＡ４のその特異的結合部位との相互作用をさらに特性化するために、分化ＨＬ−６０細胞を用いて競合結合実験を行った。ＬＸＡ４、ＬＸＢ４、ＬＴＢ４、ＬＴＣ４及びロイコトリエンレセプター拮抗剤ＳＫＦ １０４３５３（ＬＴＤ４拮抗剤；Ｈａｒａｄａ．Ｙ．（１９９０）Ｈｉｒｏｓｈｉｍａ Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．３９：８９）及びＯＮＯ−４０５７（ＬＴＢ４拮抗剤；Ｇｌｅａｓｏｎ．Ｊ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：９５９）を、可能性のある競合リガンドとして評価した。ＬＸＢ４、ＬＴＢ４又はトリヒドロキシヘプタン酸（メチルエステル）（３００ｎＭ）のいずれも分化ＨＬ−６０細胞との３Ｈ−ＬＸＡ４特異的結合を置換することができなかったが、ＬＴＣ４は３対数モル過剰（３ ｌｏｇ ｍｏｌａｒ ｅｘｃｅｓｓ）で加えると特異的結合を約３０％減少させた。ＬＸＡ４（３００ｎＭ）が、分化ＨＬ−６０細胞への３Ｈ−ＬＴＢ（０．３ｎＭ）結合と競合できないという発見は、ＬＸＡ４及びＬＴＢ４が別の種類の特異的結合部位と相互作用することを示唆している。ロイコトリエンレセプター拮抗剤ＳＫＦ １０４３５３及びＯＮＯ−４０５７は、分化ＨＬ−６０細胞との３Ｈ−ＬＸＡ４結合を置換しなかったが、ＳＫＦ １０４３５３及びＬＴＤ４はＨＵＶＥＣとの特異的３Ｈ−ＬＸＡ４結合との競合において有効であった。ＨＵＶＥＣは３Ｈ−ＬＸＡ４に関して１１．０±２．６ｎＭのＫｄ及び２．５ｘ１０−１０ＭのＢｍａｘを示し、ＬＴＤ４競合に関して事実上同一の値が算出された。３Ｈ−ＬＴＢ４の場合、ＨＵＶＥＣはＬＴＢ４に特異的に結合しなかったが、この３Ｈ−リガンドとの非特異的細胞会合が明白であった（ｎ＝３；示されていない）。３Ｈ−ＬＸＡ４の特異的会合は、調査されたいくつかの他の細胞型の中で明らかではなかった。ここで、洗浄された血小板、ＲＢＣ、β−細胞（Ｒａｊｉ）又はＴ−細胞（Ｊｕｒｋａｔ）培養細胞系のいずれも３Ｈ−ＬＸＡ４に関する特異的結合を示さなかった。これらの結果を一緒にすると、ＬＸＡ４は、ロイコトリエンレセプター拮抗剤（ＳＫＦ １０４３５３又はＯＮＯ−４０５７）に感受性でない、分化ＨＬ−６０細胞における独特の結合部位と相互作用することが示されている。ＨＵＶＥＣにおいて、３Ｈ−ＬＸＡ４特異的結合部位はＬＴＤ４及びＳＫＦ １０４３５３の両方に感受性であったが、ＯＮＯ−４０５７に感受性でなく、この細胞型における３Ｈ−ＬＸＡ４特異的結合が推定ＬＴＤ４レセプターとのその相互作用を反映し得ることを示唆している。
【０２２２】
ＬＸＡ４はヒト好中球におけるホスファチジン酸生成を急速に刺激する（Ｎｉｇａｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１４３：５１２）。３Ｈ−ＬＸＡ４結合がＰＬＤ活性化を与えるか否かの決定のために、ＰＥｔ及びＰＡをＰＭＮ及びＨＬ−６０細胞の両方において監視した。結果は、これらの細胞型においてＬＸＡ４は、類似の時間的応答でＰＬＤ活性を刺激することを示した。ＬＸＡ４（１０−１０Ｍ）に暴露されたＰＭＮは、６０秒以内に急速にエタノール捕獲生成物ＰＥｔを生成し、それは５分までにベースライン量まで減少した。ＥｔＯＨを加えない場合、ＰＥｔは統計的に有意な量では生成されなかった。ＰＭＮ及び分化ＨＬ−６０細胞の両方において、ＰＥｔ生成に関する２相濃度依存性（ｂｉｐｈａｓｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｅ）が得られた。見掛けの最大応答は、約１０−９〜１０−１０ＭのＬＸＡ４の濃度範囲の場合に見られ、活性の第２のピークは１０−７ＭのＬＸＡ４において観察された。１０−８Ｍ以下では、化学走性ペプチドＦＭＬＰ及びＬＸＡ４の両方が類似の大きさの結果を与え、ＦＭＬＰが何人かのドナーからのＰＭＮの場合にわずかに、より効力があると思われる。他の生合成経路の寄与の可能性を評価するために、ＬＸＡ４−誘導ＰＡ生成を３２ＰγＡＴＰ及び［１−１４Ｃ］−アラキドネート−標識ＰＭＮの両方においても調べた。３２Ｐ−標識ＰＡは、ＬＡＸ４（１０−７Ｍ）への暴露の３０分後に初めて統計的に有意な量で明らかとなった。１４Ｃ−アラキドネート−標識前駆体から誘導される１４Ｃ−標識ＰＡ生成の場合、類似の結果が得られた。これらの発見は、ＬＸＡ４がＰＭＮにおけるＰＡ生成の他の経路も刺激することができるが、暴露のやっと３０分後であることを示した。
【０２２３】
ＬＸＡ４と共にインキュベートされた分化ＨＬ−６０細胞のみ（３Ｈ−ＬＸＡ４に関する特異的結合部位を発現する）がＰＥｔを急速に生成し、それは３０秒以内に明らかとなった。ＬＸＡ４（１０−９Ｍ）と共にインキュベートされた未分化ＨＬ−６０細胞は、急速にＰＥｔを生成しなかった。これらの細胞の場合の濃度依存性もＬＸＡ４との２相応答を与え、１０−９Ｍにおいて見掛けの最大値を与えた。ＬＸＡ４−媒介ＰＬＤ活性化に含まれる可能な信号導入事象（ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ｅｖｅｎｔｓ）を調べるために、次にＰＭＮ及びＨＬ−６０細胞をＩＡＰ又はスタウロスポリンのいずれかに暴露した。結果は、低濃度範囲（１０−９〜１０−１０Ｍ）内で引き出されたＬＸＡ４−媒介ＰＬＤ活性は、両細胞型においてＩＡＰ処理に感受性であり、同様にＬＸＡ４の高濃度（１０−７Ｍ）において刺激されたＰＬＤ活性はスタウロスポリンにより阻害されたことを示す。かくして１０−８Ｍより低い濃度における両細胞系の場合、ＬＸＡ４は急速に特異的結合部位と相互作用し、それがＰＬＤ活性の引金を引き、従って機能的応答を与えるが、ＬＸＡ４のマイクロモル以下の濃度の範囲内でそれは、やはりＰＬＤの活性化に導くことができる別の過程を刺激することができる。
【実施例４】
【０２２４】
リポキシン生物活性アッセイ
好ましいリポキシン類似体のいくつか（上記の化合物１〜８として構造を示した）を実施例１に記載の通り、全合成により製造した。製造及びＨＰＬＣを介したこれらの化合物の単離の後に、最初にそれらが生物活性を保持しているか否かを決定するために、好中球付着アッセイ及び上皮細胞移行アッセイにより化合物を� | |