免疫力強化活性剤

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【発明の名称】	免疫力強化活性剤
【発明者】	【氏名】夏目文雄【氏名】村井吉和
【要約】	【課題】複数種類の菌類を玄米培地で培養して得られた複数の菌類培養物をその培地ごと組み合せて用い、これによって免疫力強化活性が相乗的に発現し、優れた免疫力強化活性を有する加工製剤品であって、医薬品、特定保健用食品、及び健康補助食品等の用途に有用な免疫力強化活性剤を提供する。【解決手段】アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、及び霊芝からなる群から選ばれた少なくとも２種以上の複数の菌類をそれぞれ玄米培地で個別に培養し、得られた複数の菌類培養物をその培地ごと加工素材として組み合せて得られた加工製剤品からなる免疫力強化活性剤、又は、複数の菌類培養物のうち霊芝培養物を霊芝子実体に替えて得られた加工製剤品からなる免疫力強化活性剤である。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、及び霊芝からなる群から選ばれた少なくとも２種以上の複数の菌類をそれぞれ玄米培地で個別に培養し、得られた複数の菌類培養物をその培地ごと加工素材として組み合せて得られた加工製剤品であることを特徴とする免疫力強化活性剤。
【請求項２】
加工素材が、アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、及び霊芝の菌類をそれぞれ玄米培地で個別に培養して得られた４種の菌類培養物からなる請求項１に記載の免疫力強化活性剤。
【請求項３】
加工素材が、アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、霊芝、及びマイタケの菌類をそれぞれ玄米培地で個別に培養して得られた５種の菌類培養物からなる請求項１に記載の免疫力強化活性剤。
【請求項４】
加工素材が、ヤマブシタケ及び／又はチャーガの菌類を玄米培地で個別に培養し、得られた菌類培養物をその培地ごと含む請求項１～３のいずれかに記載の免疫力強化活性剤。
【請求項５】
加工素材が、霊芝培養物に替えて、又は、霊芝培養物と共に、霊芝子実体を含む請求項１～４のいずれかに記載の免疫力強化活性剤。
【請求項６】
加工素材が、グルタチオン高含有酵母エキス、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ₆、無臭ニンニク、及び鮫軟骨エキスから選ばれた１種又は２種以上を含む請求項１～５のいずれかに記載の免疫力強化活性剤。
【請求項７】
加工製剤品が、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、又はエキス剤である請求項１～６のいずれかに記載の免疫力強化活性剤。

【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
この発明は、玄米培地で培養された複数の菌類の培養物をその培地ごと加工素材とし、免疫力強化活性が相乗的に高められた加工製剤品に係り、医薬品、特定保健用食品、及び健康補助食品等の用途に有用な免疫力強化活性剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫は、人間が生命を維持する上で必須とされるシステムであり、単に病原菌やウイルス等の侵入を防いでいるだけでなく、老廃物の処理、老化した細胞やガン化した細胞の排除等、その働きは多岐に亘っている。しかしながら、この免疫力は２０歳位をピークとして徐々に低下することが知られており、中高年者は感染症にかかり易くなり、また、ガンの発症率も高くなるほか、加齢に伴う生活習慣病の増加も免疫力の衰えと密接な関係があると考えられている。
【０００３】
高齢化社会となった日本では、健康な状態で老後を過ごすためには免疫力を如何に維持するかが鍵と言われており、また、食品により免疫力を強化する研究も盛んに行われている。そして、これまでの研究結果によると、免疫力を強化する食品はキノコや酵母、海藻等に代表される多糖体を含む食品と、野菜、果物に代表される抗酸化物質を含む食品との２つに大別される〔食品と開発、35巻、3号、5～8頁（2000）〕。
【０００４】
このうち、キノコはもっとも効果の高い食品として知られており、シイタケ、カワラタケ、スエヒロタケからは免疫賦活作用のある医薬品が創られているほどである。しかしながら、これらの医薬品は医療行為の中でしか使用することができず、また、静脈注射によって投与するものには心臓や腎臓の機能に障害を与える副作用も知られている。
【０００５】
ところで、感染症やガンの予防、生活習慣病の予防という観点からすると、日常的に摂取する食品によって安全に免疫力を高めることが望ましいが、効果の点からは高い評価が得られている食品は少ない。
これまで、安全でより効果の高いキノコ類の素材としては、アガリクス、メシマコブ、マイタケ、冬虫夏草、チャーガ、ヤマブシタケ、霊芝、ハタケシメジ、ハナビラタケ等が知られており、子実体、又はタンク培養された菌糸体の形で提供されている。
【０００６】
また、このようなキノコ類における免疫力を高めるための工夫として他の素材と組み合せたり、複数のキノコ類を組み合せることも行われており、他の素材との組合せとしては、例えば、麦若葉由来の素材とアガリクス、霊芝、マイタケ、シイタケ、マツタケ、エノキタケ、冬虫夏草等の菌類由来の素材とを含む免疫賦活食品(特開2002-65,206号公報)、クロレラ由来の多糖体とアガリクス茸、メシマコブ、シイタケ、冬虫夏草等の担子菌類由来の多糖体とを含む抗癌性物質(特開2002-145,796号公報)、アブラナ科植物及び／又は甘草由来の素材とヒメマツタケ、ハラタケ、シイタケ、霊芝、チョレイマイタケ、カワラタケ、マツホド、マイタケ、マツタケ、ヒラタケ、エノキタケ、ホンシメジ、ハナビラタケ等の担子菌類由来の素材とを含む栄養補助食品(特開2002-191,323号公報)、ケール加工物とアガリクス、霊芝、マイタケ、シイタケ、マツタケ、エノキタケ、冬虫夏草等の菌類由来の素材とを含む免疫賦活食品(特開2002-209,552号公報)、及び薬用人参類とマンネンタケやカワラタケ等の担子菌類とを有効成分として含む生理活性組成物(特開2003－171,306号公報)等が提案されており、また、複数のキノコ類の組合せとしては、例えば、椎茸菌糸体抽出物、霊芝菌糸体抽出物、エノキ茸菌糸体抽出物を含む免疫活性調節剤(特開2002-371,004号公報)等が提案されている。
【０００７】
更に、玄米を培地として培養したキノコ菌糸体を培地ごと食品素材としたものとして、マンネンタケ属に属する担子菌と、玄米等の穀類又はイモ類と、豆類とよりなり、β-D-グルカンと、サポニンと、エルゴステロールとを含有する発酵食品を肝機能障害患者用として用いる肝機能障害患者用食品（特開昭62－234,026号公報）、上記と同じ発酵食品を高脂血症患者用として用いる高脂血症患者用食品（特開昭62－234,027号公報）、上記と同じ発酵食品を糖尿病患者用として用いる糖尿病患者用食品（特開昭62－234,028号公報）や、メシマコブを玄米等の容易に得られる穀物類を培地として培養し、培地成分と共に菌糸体を用いること(特開2001－17,158号公報)が提案されている。しかし、これらの提案については、これまで積極的に利用されたことはなかった。
【０００８】
【特許文献１】特開2002-65,206号公報
【特許文献２】特開2002-145,796号公報
【特許文献３】特開2002-191,323号公報
【特許文献４】特開2002-209,552号公報
【特許文献５】特開2003－171,306号公報
【特許文献６】特開2002-371,004号公報
【特許文献７】特開昭62－234,026号公報
【特許文献８】特開昭62－234,027号公報
【特許文献９】特開昭62－234,028号公報
【特許文献１０】特開2001－17,158号公報
【非特許文献１】食品と開発、35巻、3号、5～8頁（2000）
【非特許文献２】Int. Immunotherapy, 14, pp89-99(1998)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ところで、玄米培地で培養されたキノコは、菌体外に酵素を放出し、玄米の細胞壁やデンプン質、たんぱく質を分解し、可溶化した栄養分を菌糸体表面から吸収して生活している。従って、玄米培地で培養して得られた菌類培養物には、菌糸体成分のみならず、菌体外に放出された酵素、菌類代謝産物等も含まれていることが予想される。
【００１０】
また、玄米培地で菌類を培養した場合、培地を構成する玄米の成分も菌体外酵素により分解され、免疫力強化作用を持つ有用な成分になることが知られている。例えば、玄米の細胞壁成分であるヘミセルロースを構成するアラビノキシランが分解され、免疫力強化作用を持つ有用な成分に変化することが報告されている(Int. Immunotherapy, 14, pp89-99(1998))。しかも、玄米にはγ-オリザノール（自律神経失調症の改善効果）やγ-アミノ酪酸（GABA、血圧降下作用、抗不安作用）等の機能性成分が多く含まれていることを考え合わせると、玄米培地で菌類を培養した後の培地には実に多くの機能性成分が存在していることが予想され、また、免疫力強化の活性も作用点の異なる成分による相乗効果が期待される。
【００１１】
更に、培養するキノコの種類が異なれば、その菌糸体成分が異なるだけでなく、菌体外酵素の性質も異なることになり、玄米の分解産物も異なるものになることが予想される。
【００１２】
このような観点から、本発明者らは、単に１種類の菌類を玄米培地で培養して得られた菌類培養物を用いるのではなく、複数種類の菌類を玄米培地で培養し、得られた複数の菌類培養物をその培地ごと組み合せて用いることにより、免疫力強化活性が相乗的に発現し、より優れた免疫力強化活性を有する加工製剤品を得ることができるとの考えに想到した。
【００１３】
そこで、本発明者らは、係る考えの下に、菌類由来であって、安全で中高年者等が日常的に摂取可能であり、しかも、免疫力強化活性に優れていて医薬品、特定保健用食品、及び健康補助食品等の用途に有用な免疫力強化活性剤を開発すべく鋭意検討した結果、特定の菌類、すなわちアガリクス(Agaricus blazei)、メシマコブ(Phellinus linteus)、冬虫夏草(Cordyceps cinensis)、マイタケ(Grifola frondosa)、及び霊芝(Ganoderma lucidum)の５種の菌類を用い、そのいずれか複数の菌類を玄米培地で培養し、得られた複数の菌類培養物をその培地ごと加工素材として組み合せて加工製剤品を調製したところ、この加工製剤品が優れた免疫力強化活性を有することを見い出し、本発明を完成した。
【００１４】
従って、本発明の目的は、複数種類の菌類を玄米培地で培養して得られた複数の菌類培養物をその培地ごと組み合せて用い、これによって免疫力強化活性が相乗的に発現し、優れた免疫力強化活性を有する加工製剤品であって、医薬品、特定保健用食品、及び健康補助食品等の用途に有用な免疫力強化活性剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
すなわち、本発明は、アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、及び霊芝からなる群から選ばれた少なくとも２種以上の複数の菌類をそれぞれ玄米培地で個別に培養し、得られた複数の菌類培養物をその培地ごと加工素材として組み合せて得られた加工製剤品からなる免疫力強化活性剤である。
【００１６】
本発明において、利用できる菌類については、上記のアガリクス(Agaricus blazei)、メシマコブ(Phellinus linteus)、冬虫夏草(Cordyceps cinensis)、マイタケ(Grifola frondosa)、及び霊芝(Ganoderma lucidum)を始め、ヤマブシタケ（Hericium erinaceum）及びチャーガ（Inonotus obliquus）を好適に挙げることができ、これらはそれぞれアガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、霊芝、ヤマブシタケ及びチャーガに分類されるものであれば特に制限はなく、また、いずれも、例えば米国のFungi Perfecti社から容易に入手できるものを用いることができる。
【００１７】
本発明においては、上記のアガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、及び霊芝からなる群から選ばれた少なくとも２種以上の複数の菌類、あるいは、これらの菌類に加えてヤマブシタケ及び／又はチャーガをそれぞれ玄米培地で個別に培養し、得られた複数の菌類培養物をその培地ごと加工素材として用いるが、これら菌類の培養方法についても玄米培地を用いる方法であれば特に制限はなく、例えば、充分に水分を吸収させた玄米を耐熱ポリバッグに入れ、１２０℃以上で４時間以上加熱して滅菌し、冷却した後、クリーンルーム等で所定のキノコ菌類を植菌し、２０～３０℃の培養室で植菌した菌類が培地全体に繁殖するまで、通常は４０～６０日間培養することにより行われる。
【００１８】
このようにして培養された菌類培養物は、通常、得られた菌類培養物中の菌糸体や胞子等を１２０℃で４時間加熱して不活化し、次いで充分に乾燥し、その玄米培地ごと種々の剤形の加工製剤品を製造するための加工素材として用いられる。そして、この加工素材は、例えば、粉砕して微粉末状にされ、あるいは、熱水等の抽出溶剤を用いて抽出することによりエキス状にされ、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、ドリンク剤、その他の加工製剤品にされて実用に供せられる。
【００１９】
ここで、加工製剤品を製造するための加工素材として組み合せられる複数の菌類培養物としては、その使用に際して、アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、及び霊芝の菌類由来のものから選ばれた少なくとも２種以上を含むものであればよいが、充分なIL-12産生量を確保するという観点から、好ましくはアガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、及び霊芝の菌類由来の４種の菌類培養物を含む組合せであるのがよく、前立腺ガンの治療効果を付与するという観点（Food Style 21, 4, p91 (2000)）から、より好ましくはアガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、霊芝、及びマイタケの菌類由来の５種の菌類培養物を含む組合せであるのがよく、更に好ましくは血液流動性を改善する効果を付与するという観点（Food Style 21, 7, p47 (2003)）から、ヤマブシタケ及び／又はチャーガの菌類由来の菌類培養物を含む６種又は７種の菌類培養物を含む組合せであるのがよい。
【００２０】
そして、本発明においては、上記の霊芝の培養物（霊芝培養物）に替えて、あるいは、霊芝培養物と共に、霊芝の子実体（霊芝子実体）を用いることができる。霊芝子実体は、１００種類以上に及ぶテルペン系化合物を含み、多様な生理活性を発現するだけでなく（「キノコの化学・生化学」、学会出版センター、237頁（1995））、アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、及びマイタケ、更にはヤマブシタケ及びチャーガの菌類培養物と併用した場合、霊芝培養物と同様に、免疫力強化活性において優れた相乗効果を発揮する。この目的で用いられる霊芝子実体は、天然品であっても栽培品であってもよく、加工素材として使用するに際しては、菌類培養物と同様に、子実体や胞子等を不活化し、次いで充分に乾燥し、例えば、粉砕して微粉末状にし、あるいは、熱水等の抽出溶剤を用いて抽出することによりエキス状にして実用に供せられる。
【００２１】
本発明において、加工素材として加工製剤品を製造するために組合せて用いられる上述した複数の菌類培養物、あるいは、これら菌類培養物と霊芝子実体における菌類培養物及び霊芝子実体の各々の配合割合については、配合される菌類培養物及び霊芝子実体の数や種類によっても異なるが、通常は５重量%以上９５重量%以下、好ましくは１０重量%以上９０重量%以下である。この各々の配合割合が５重量%より少ないと、相乗効果の発現が認められない場合が生じる。
【００２２】
本発明の免疫力強化活性剤においては、上記の菌類培養物及び霊芝子実体の組合せに加えて、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ6等の抗酸化性のビタミンや、グルタチオン高含有酵母エキス、無臭ニンニク等の抗酸化物質を含む食品素材や、キノコ類とは異なる多糖類を含む鮫軟骨エキス等の１種又は２種以上を第三成分として配合してもよく、例えばインターロイキン-12の発現等において相乗効果の発現をより一層向上せしめることができる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の免疫力強化活性剤は、特定の菌類の２種以上を玄米培地で個別に培養して得られた複数の菌類培養物、あるいは、霊芝培養物に替えて、又は、霊芝培養物と共に用いられる霊芝子実体を組合せて用いるので、配合される菌類培養物及び霊芝子実体の各々が有する免疫力強化活性が相乗的に発現し、菌類培養物又は霊芝子実体を単独で用いる場合に比べてより優れた免疫力強化活性効果を発揮する。
【００２４】
しかも、本発明で用いる玄米培地の菌類培養物は、タンク培養の場合とは異なって大型の設備を必要としないので多額の投資を必要とせず、通常のキノコ栽培における施設で安価に容易に生産することができる。
加えて、組合せによる相乗効果が認められるため、個々の素材の摂取量が少量になり、アレルギーや胃腸障害等の副作用を引き起こす危険性も低減し、また、菌類培養物は少しこげた米飯の食味を有して、既存のキノコ素材にくらべて摂食し易いという利点もある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
以下、実施例及び試験例に基づいて、本発明の好適な実施の形態を具体的に説明する。
【００２６】
〔実施例１〕
充分に水分を吸収させた玄米２kgを耐熱ポリバッグに入れ、オートクレーブ中１２０℃で４時間加熱した後、クリーンルーム中で冷却することにより、玄米培地を調製した。
【００２７】
クリーンルーム中でアガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、霊芝、ヤマブシタケ、及びチャーガの７種の菌類（米国Fungi Perfecti社製）をそれぞれ別個の玄米培地に植菌し、培養室に移して２５℃で各菌類が培地全体に繁殖するまで培養した。
【００２８】
各菌類の培養が終了した後、得られた各菌類培養物については、その玄米培地ごと１２０℃で４時間、オートクレーブで加熱処理して各菌類培養物中の菌糸体や胞子等を不活化し、次いで８０℃の熱風還流の条件で充分に乾燥した後、旋回気流方式の粉砕機を用いて粉砕し、粉末状の加工素材とした。
【００２９】
このようにして得られた各菌類培養物からなる粉末状の加工素材を等量ずつ秤量して混合し、菌類培養物の７種類が混合された実施例１の粉末状混合物（免疫力強化活性剤）を得た。
更に、得られた実施例１の免疫力強化活性剤に１０重量倍の水を加え、オートクレーブ中で１２１℃に加熱して２時間抽出（熱水抽出）を行った。冷後、遠心分離法で抽出液を分離し、これに等量のエタノールを加え、沈殿したものを分離して乾燥し、試験例１～３に用いる糊状の多糖体分画を得た。
【００３０】
〔試験例１：マイトジェン活性の測定〕
上記のようにして実施例１の免疫力強化活性剤から得られた多糖体分画（以下、単に「実施例１の多糖体分画」という）について、Chem. Pharm. Bull., 32, p4165 (1984)及びMicrobiol. Immunol., 25, p929 (1981)に記載の方法に準じて、マイトジェン活性効果を調べた。また、各菌類培養物からなる粉末状の加工素材について、上記と同様にして熱水抽出して得られた多糖体分画（対照の多糖体分画）についても、対照として同様にマイトジェン活性効果を調べ、実施例１の多糖体分画と比較した。
【００３１】
すなわち、体重２９～３２gのC3H-NeNマウスより脾臓を摘出し、常法により脾臓細胞培養液を調製し、これに上記実施例１又は各対照の多糖体分画１００μgを加え、７２時間培養した。培養終了１６時間前に１μCi(³H-)-thymidineを加え、培養終了後ミリポアフィルターで集細胞し、シンチレーションカウンターにより放射活性を測定し、(³H-)-thymidineの取込み量によってマイトジェン活性を評価した。
【００３２】
図１に示す結果から明らかなように、実施例１の多糖体分画は、各菌類培養物単体から得られた対照の多糖体分画に比べてより強いマイトジェン活性を発現し、菌類培養物単体で最も強い効果を現したアガリクス培養物に比べて約２．３倍であった。このマイトジェン活性は免疫システムを担う白血球の増加をもたらす指標であり、この点において、実施例１の多糖体分画は顕著な相乗効果を示すことが確認された。
【００３３】
〔試験例２：ＮＫ活性の測定〕
Advances in Immunology, 47, p187 (1989)に記載の方法に準じて、上記実施例１の多糖体分画及び対照としての各菌類培養物から得られた多糖体分画について、ＮＫ活性を測定した。
【００３４】
すなわち、ヒト末梢血より遠心分離法によりＮＫ細胞分画を調整し、生理食塩水のみを対照として、上記実施例１及び各菌類培養物から得られた多糖体分画５０μgを投与し、⁵¹Crでラベルした標的細胞と共に培養し、標的細胞がＮＫ細胞によって破壊されることにより培養液上澄に移行した放射活性を測定し、⁵¹Cr放出量(%)を算出した。
【００３５】
⁵¹Cr放出量(%)は、ａ：各多糖体分画を試験したものの放射活性、ｂ：ＮＫ細胞分画に代えて培養液のみを加えた場合の放射活性（自然放出）、ｃ：ＮＫ細胞分画に代えて10%-トリトンＸ１００（Triton X 100）溶液を加え、全ての標的細胞を破壊した場合の放射活性（最大放出）として、以下の計算式
⁵¹Cr放出量(%)＝｛（ａ－ｂ）×100／（ｃ－ｂ）｝
により計算される。
結果を図２に示す。
【００３６】
図２に示す結果から明らかなように、実施例１の多糖体分画は他のどの対照の多糖体分画より強いＮＫ活性を発現し、対照の多糖体分画で最も強いＮＫ活性を示したマイタケ培養物由来の多糖体分画に比べて１．１６倍であった。ＮＫ細胞はガン化した細胞を識別して攻撃を行う白血球であり、ガンの予防、ガンの治療には重要な働きをしている。このＮＫ細胞の活性化についても実施例１の７種の菌類培養物の組合せが有効であることが判明した。
【００３７】
〔試験例３：インターロイキン(IL-6 & IL-8)産生活性の測定〕
ヒト末梢血から遠心分離法によってリンパ球を分離し、実施例１の多糖体分画及び対照の多糖体分画１mgを加え、２４時間培養してインターロイキン-６（IL-6）及びインターロイキン-８（IL-8）の産生量をＥＬＩＳＡ(enzyme-linked immunosorbent assay)法により測定した。
結果を図３及び図４に示す。
【００３８】
図３及び図４に示す結果から明らかなように、実施例１の多糖体分画は他のどの対照の多糖体分画より強いインターロイキン活性を発現した。IL-6の場合には実施例１の多糖体分画は対照の多糖体分画で最も活性の強いアガリクス培養物由来の多糖体分画より１．６倍の活性を有し、また、IL-8の場合には実施例１の多糖体分画は対照の多糖体分画で最も活性の強いチャーガ培養物由来の多糖体分画より１．２倍の活性を有し、顕著な相乗効果が観察された。IL-6とIL-8はいずれも免疫作用を発現させるために放出される情報伝達物質（サイトカイン）であり、この点においても実施例１の７種の菌類培養物の組合せが有効であることが判明した。
【００３９】
〔実施例２〕
霊芝子実体を１００℃で１時間の条件で充分に乾燥した後、旋回気流方式の粉砕機を用いて粉砕し、粉末状の加工素材とした。
次いで、霊芝培養物由来の加工素材に替えて上で得られた霊芝子実体由来の加工素材を用いた以外は、上記実施例１と同様にして、アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、ヤマブシタケ、及びチャーガの６種の菌類培養物と霊芝子実体とを加工素材とする実施例２の粉末状混合物（免疫力強化活性剤）を得た。
【００４０】
〔実施例３〕
アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、及びマイタケの４種の菌類培養物と霊芝子実体とを加工素材とした以外は、上記実施例２と同様にして、実施例３の粉末状混合物（免疫力強化活性剤）を得た。
【００４１】
〔実施例４〕
アガリクス、メシマコブ、及び冬虫夏草の３種の菌類培養物と霊芝子実体とを加工素材とした以外は、上記実施例２と同様にして、実施例４の粉末状混合物（免疫力強化活性剤）を得た。
【００４２】
〔試験例４：インターロイキン(IL-12)産生活性の測定〕
雌７週のBALB/cマウスの腹腔内に０．３ml/マウスのフロイント完全アジュバントを注射し、7日後に腹水から滲出マクロファージ（PEC）を得た。このＰＥＣの１×１０⁶／ml相当培養液に、リポポリサッカライド（LPS）刺激時、上記実施例１～４の免疫強化活性剤から得られた熱水抽出液（各検体1mgに対し１mlの熱水で抽出した溶液、またはその5倍、50倍希釈液）を加え、２４時間後の培養上清中のインターロイキン-12（IL-12）の産生量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
結果を図５に示す。
【００４３】
図５に示す結果から明らかなように、実施例１の霊芝培養物を霊芝子実体に替えた実施例２の免疫強化活性剤、実施例２のものからヤマブシタケ培養物及びチャーガ培養物を除いて得られた実施例３の免疫強化活性剤、更にこの実施例３のものからマイタケ培養物を除いて得られた実施例４の免疫強化活性剤は、そのいずれも実施例１の免疫強化活性剤と同等あるいはそれ以上のインターロイキン(IL-12)産生活性を有していることが判明した。免疫システムには、抗原－抗体反応を行う液性免疫と、老化した細胞やガン化した細胞の排除等を行う細胞性免疫とが存在するが、IL-12は細胞性免疫を活性化させるサイトカインである。液性免疫が優勢となっている現代人にとって、このIL-12の発現は免疫システムの正常化につながり、特に、ガンや生活習慣病の予防に大きな意味を持つほか、アトピー性皮膚炎や喘息等の改善にも寄与するものと考えられる。
【００４４】
〔実施例５〕
実施例２の免疫強化活性剤（加工素材：アガリクス、メシマコブ、冬虫夏草、マイタケ、ヤマブシタケ、及びチャーガの６種の菌類培養物及び霊芝子実体）に、１０wt%の鮫軟骨エキス末（マルハ株式会社製商品名：サメ軟骨エキスNB）、１０wt%のグルタチオン高含有酵母エキス末（株式会社興人製商品名：酵母エキスYH-15）、６wt%の無臭ニンニク末（大蔵製薬株式会社製商品名：ムシューリックパウダーPS-II）、１wt%のビタミンＢ₆、７wt%のビタミンＣ、５wt%のビタミンＥ末（ビタミンＥを15wt%含有）を添加し、実施例５の粉末状混合物（免疫力強化活性剤）を得た。
【００４５】
〔試験例５：インターロイキン(IL-12)産生活性の比較〕
実施例２及び５の免疫強化活性剤について、試験例４と同様にしてインターロイキン(IL-12)産生活性を測定し、抗酸化ビタミン、抗酸化物質、及び異種多糖類の添加による効果を調べた。
結果を図６に示す。
この図６に示す結果から明らかなように、IL-12の発現量はこれらの添加物の添加により相乗的に増加することが確認された。
【００４６】
〔試験例６：MM46乳ガンマウス延命試験〕
アガリクス、マイタケ、霊芝、及びヤマブシタケの各子実体、チャーガの菌核、メシマコブ、冬虫夏草のタンク培養菌糸体の合計７種の素材の等量混合物（比較例１）とメシマコブのタンク培養菌糸体（比較例２）とを対照として、上記実施例２の免疫強化活性剤について、次の方法でMM46乳ガン腹腔内担ガンマウスの延命試験を行った。
【００４７】
すなわち、MM46乳ガンを予め1週間前にC3H/Heマウス腹腔内に移植し、腹水ガンとしたものより腹水を採取し、各実験群マウス（１群５匹）に５×１０⁴cells/0.2mlの腹腔内接種を行い（０日目）、その後、１日目、３日目、及び５日目に、上記実施例２、比較例１及び２の各検体を蒸留水に懸濁させてマウス体重当り０．０２g/kgとなるように経口投与し、また、対照群には蒸留水を経口投与し、生存日数に与える効果を調べた。
結果を表１に示す。
【００４８】
【表１】

【００４９】
表１に示す結果から明らかなように、対照群が１８．６日の平均生存日数であるのに対し、比較例１では０．２日であって、比較例２では０．６日であり、共に危険率５％（p=0.05）でも統計的有意差は認められなかった。一方、実施例２の場合には２．０日の延長効果が認められ、これはＰ＝０．０１８であり、顕著な統計的有意差が認められた。本試験は、免疫強化作用のみならず、ガン細胞に直接的に作用する効果も評価できる方法であるが、免疫力強化作用が期待される比較例１がほとんど無効であるという重篤な条件であるにもかかわらず、実施例２の免疫力強化活性剤が有意な効果を示したことは、６種の菌類培養物と霊芝子実体とに存在する多彩な成分が強力な免疫力強化作用を発揮したのか、あるいはガン細胞に直接作用したことを示している。
【００５０】
〔試験例７：インターロイキン(IL-12)産生活性の比較〕
上記実施例１の免疫強化活性剤及び比較例１の混合物と、比較例１を構成するアガリクス子実体、メシマコブ菌糸体（タンク培養品）、冬虫夏草菌糸体（タンク培養品）、マイタケ子実体、霊芝子実体、ヤマブシタケ子実体、及びチャーガ菌核の各単体について、上記試験例４と同様にしてインターロイキン-12（IL-12）の産生量をＥＬＩＳＡ法により測定した。
結果を図７に示す。
【００５１】
図７に示す結果から明らかなように、実施例１の免疫力強化活性剤は、子実体等の組合せ（比較例１）に比べてインターロイキン(IL-12)産生活性が顕著に強く、相乗効果が発現していることが判明した。これに対して、子実体等の組合せ（比較例１）では相乗効果はみられるものの、その効果が小さい。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明の免疫力強化活性剤は、優れた免疫力強化活性効果を有することから、医薬品としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等の加工製剤品の形で、例えば感染症の予防薬、ガン治療の副作用を軽減する免疫賦活薬、あるいはアトピー性疾患や喘息等の自己免疫疾患の改善薬として利用することができ、また、特定保健用食品や健康補助食品としては、錠剤タイプ、カプセルタイプ、顆粒タイプ、エキス剤タイプ等の加工製剤品の形で、例えばガン、感染症、生活習慣病等の予防や改善の効果が期待できる食品として、あるいは、一般食品への添加物として利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】図１は、実施例１の免疫力強化活性剤から得られた多糖体分画（実施例１の多糖体分画）について、マイトジェン活性効果を調べたグラフ図である。
【図２】図２は、実施例１の多糖体分画について、ＮＫ活性効果を調べたグラフ図である。
【００５４】
【図３】図３は、実施例１の多糖体分画について、インターロイキン(IL-6)産生活性効果を調べたグラフ図である。
【図４】図４は、実施例１の多糖体分画について、インターロイキン(IL-8)産生活性効果を調べたグラフ図である。
【００５５】
【図５】図５は、実施例１～４の免疫強化活性剤について、インターロイキン(IL-12)産生活性効果を調べたグラフ図である。
【図６】図６は、実施例２及び５の免疫強化活性剤について、インターロイキン(IL-12)産生活性効果を比較したグラフ図である。
【図７】図７は、実施例１の免疫強化活性剤及び比較例１の混合物並びにその構成素材について、インターロイキン(IL-12)産生活性効果を比較したグラフ図である。

【出願人】	【識別番号】３０１０５４２８７【氏名又は名称】株式会社バイオソリューションズ
【出願日】	平成１５年９月２５日（２００３．９．２５）
【代理人】	【識別番号】１０００８２７３９【弁理士】【氏名又は名称】成瀬勝夫【識別番号】１０００８７３４３【弁理士】【氏名又は名称】中村智廣【識別番号】１０００８８２０３【弁理士】【氏名又は名称】佐野英一【識別番号】１００１０８９２５【弁理士】【氏名又は名称】青谷一雄【識別番号】１００１１０７３３【弁理士】【氏名又は名称】鳥野正司【識別番号】１００１１４４９８【弁理士】【氏名又は名称】井出哲郎【識別番号】１００１２０７１０【弁理士】【氏名又は名称】片岡忠彦
【公開番号】	特開２００５－９７１９２（Ｐ２００５－９７１９２Ａ）
【公開日】	平成１７年４月１４日（２００５．４．１４）
【出願番号】	特願２００３－３３３５６９（Ｐ２００３－３３３５６９）