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【発明の名称】 発癌予防剤
【発明者】 【氏名】秋久 俊博

【氏名】浮谷 基彦

【氏名】徳田 春邦

【氏名】田形 匡亮
【要約】 【課題】安全で有効な発癌予防剤を提供すること。

【解決手段】ルシデニン酸Ｐ（１ａ）、ルシデニン酸Ｐメチル（１ｂ）、ルシデニン酸Ｑメチル（２ｂ）、ルシデニン酸Ａ（３ａ）、ルシデニン酸Ａメチル（３ｂ）、ルシデニン酸Ｃ（４ａ）、ルシデニン酸Ｄ２（５ａ）、ルシデニン酸Ｄ２メチル（５ｂ）、ルシデニン酸Ｅ２（６ａ）、ルシデニン酸Ｅ２メチル（６ｂ）、ルシデニン酸Ｆメチル（７ｂ）、ルシデニン酸Ｆメチル（８ｂ）、ガノデリン酸Ｅ（９ａ）、ガノデリン酸Ｆ（１０ａ）、ガノデリン酸Ｆメチル（１０ｂ）、ガノデリン酸Ｔ−Ｑ（１１ａ）からなる群から選んだ少なくとも１種のトリテルペン系化合物を有効成分とすることを特徴とする発癌予防剤。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ルシデニン酸Ｐ（１ａ）、ルシデニン酸Ｐメチル（１ｂ）、ルシデニン酸Ｑメチル（２ｂ）、ルシデニン酸Ａ（３ａ）、ルシデニン酸Ａメチル（３ｂ）、ルシデニン酸Ｃ（４ａ）、ルシデニン酸Ｄ２（５ａ）、ルシデニン酸Ｄ２メチル（５ｂ）、ルシデニン酸Ｅ２（６ａ）、ルシデニン酸Ｅ２メチル（６ｂ）、ルシデニン酸Ｆメチル（７ｂ）、ルシデニン酸Ｌメチル（８ｂ）、ガノデリン酸Ｅ（９ａ）、ガノデリン酸Ｆ（１０ａ）、ガノデリン酸Ｆメチル（１０ｂ）、ガノデリン酸Ｔ−Ｑ（１１ａ）からなる群から選んだ少なくとも１種のトリテルペン系化合物を有効成分とすることを特徴とする発癌予防剤。
【請求項２】
エプスタイン・バール・ウイルス（ＥＢＶ）活性化抑制効果を有することを特徴とする請求項１に記載の発癌予防剤。
【請求項３】
トリテルペン系化合物が霊芝を処理して得られることを特徴とする請求項１又は２に記載の発癌予防剤。
【請求項４】
トリテルペン系化合物が霊芝子実体を処理して得られることを特徴とする請求項１又は２に記載の発癌予防剤。
【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ラノスタン型のトリテルペン系化合物を含有する発癌予防剤に関する。ラノスタン型のトリテルペン系化合物は、好ましくは霊芝、さらに好ましくは霊芝子実体を処理して得られる。
【０００２】
【従来の技術】
発癌予防剤として有効なトリテルペン系化合物は、すでに知られている（例えば、特許文献１参照。）。
【０００３】
【特許文献１】
特開平９−２５２３２号公報
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、特許文献１は、具体的に発癌予防に関して十分な効果を有するトリテルペン系化合物を開示するものではない。ところが、複雑な現代社会において、安全性が高くかつ十分な効果を有する発癌予防剤が強く求められている。
そこで本発明の課題は、安全で有効な発癌予防剤を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
発癌予防剤の探索を行うためには、抗発癌プロモーターの探索を行う方法が最も有用である。この、抗発癌プロモーター探索の一次スクリーニング法としては、ＥＢＶ活性化抑制検定法が知られている。
【０００６】
本発明者等は、霊芝子実体を処理して得られるトリテルペン系化合物に注目して鋭意研究を行った結果、ラノスタン型のルシデニン酸及びガノデリン酸類トリテルペン系化合物からなる群から選ばれた少なくとも１種の上記化合物が優れた発癌予防効果を持ち、安全性の高い発癌予防剤になり得ることを見出し、本発明を完成するに至った。特に霊芝子実体を処理して得られる上記化合物は、安全な天然物である霊芝子実体を起源とすることで、安全性については注目に値するメリットがある。
よって本発明は、霊芝子実体エキス成分の抗発癌プロモーター活性を見出した点に重要な意義がある。
【０００７】
本発明者等は、ＥＢＶのゲノムを内臓するバーキット・リンパ腫由来の培養細胞であるラジ（Ｒａｊｉ）株において、ＥＢＶ・ゲノムの発現を阻害する化合物の多くがマウス皮膚発癌二段階実験において抗発癌プロモーターとして作用する点に注目した。そして霊芝子実体抽出物からＥＢＶ・ゲノムの発言を阻害するウイルス・ゲノム不活性化物質を探索した。
【０００８】
ＥＢＶ・ゲノムの発現阻害作用に着目したこの方法はラジ株培養系に発癌プロモーターであるＴＰＡ（テトラデカノイルホルボールアセテート）と活性発現のために相乗作用剤として働くｎ−酪酸、それに被検物質を加えて培養し、ＴＰＡにより活性化された細胞由来の抗体を用いる間接蛍光抗体法で検出する方法である。この方法は、迅速、かつ定量性に優れ、加えて、微量活性成分の検出が可能な点で優れた方法である。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
活性試験法
以下に、ＥＢＶ活性化抑制効果検定法の操作手順を、図１のスキームを参照しながら詳細に説明する。なお、本手順は、徳田らの方法［Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ、４０巻、３０９頁（１９８８）］に準拠している。
（１） １ｘ１０６／ｍＬのラジ細胞に２０ｎｇ／ｍＬ（３２ｐｍｏｌ）の濃度のＴＰＡを加え、さらにｎ−酪酸を加えた。
（２） そこに、水、エタノール、又はジメチルスルホキシドに溶解した所定量の被検物質を添加して、３７℃で４８時間培養した。
（３） 培養終了後、上咽頭癌患者の血清を用いた間接蛍光抗体法によりＥＢＶ早期抗原の発現を検出した。
ＴＰＡのみを加えた群（コントロール）のＥＢＶ早期抗原の発現率を１００％として、被検物質添加群のＥＢＶ早期抗原の発現率を求め、次式により被検物質のＥＢＶ早期抗原の発現率（％）を算出した。
【００１０】
【数１】
ＥＢＶ早期抗原の発現阻害率（％）＝ １００ − 被検物質添加群のＥＢＶ早期抗原の発現率（％）
なお、被検物質の濃度が１０００倍モル濃度の欄の括弧内の数値は、ラジ細胞の生存率（％）を示す。この数値が高い方が正常細胞に対する悪影響が小さい、すなわち安全性が高いと言える。
【００１１】
本発明は、好ましくは霊芝子実体を処理して得られるトリテルペン系化合物を含有する発癌予防剤に関する。これらの化合物のうち、トリテルペン系化合物は、ラノスタン型の化合物である、ルシデニン酸Ｐ（化合物１ａ）、ルシデニン酸Ｐメチル（化合物１ｂ）、ルシデニン酸Ｑメチル（化合物２ｂ）、ルシデニン酸Ａ（化合物３ａ）、ルシデニン酸Ａメチル（化合物３ｂ）、ルシデニン酸Ｃ（化合物４ａ）、ルシデニン酸Ｄ２（化合物５ａ）、ルシデニン酸Ｄ２メチル（化合物５ｂ）、ルシデニン酸Ｅ２（化合物６ａ）、ルシデニン酸Ｅ２メチル（化合物６ｂ）、ルシデニン酸Ｆメチル（化合物７ｂ）、ルシデニン酸Ｌメチル（化合物８ｂ）、ガノデリン酸Ｅ（化合物９ａ）、ガノデリン酸Ｆ（化合物１０ａ）、ガノデリン酸Ｆメチル（化合物１０ｂ）、ガノデリン酸Ｔ−Ｑ（化合物１１ａ）からなる群から選ばれた少なくとも１種のものである。
【００１２】
本発明におけるトリテルペン系化合物を得るためにはサルノコシカケ科に属するキノコである霊芝（紫、赤、青、黄、黒、及び白霊芝；マンネンタケ）子実体及び鹿角（ろっかく）霊芝などが挙げられる、
【００１３】
本発明においては例えば、霊芝子実体あるいは鹿角霊芝を有機溶媒で抽出してトリテルペン系化合物を得る。
【００１４】
抽出用の有機溶媒としては、特にエタノール、メタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｎ−ブタノール、アセトン、ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、イソプロピルエーテル等が好ましく、これらの溶媒を単独又は混合し、または水で希釈して用いることができる。
得られた抽出物はそのまま又は濃縮してエキス状で、又は乾燥して粉末状にして種々の製剤化が可能である。
【００１５】
本発明の霊芝子実体抽出物は、適当な医薬用の担体又は希釈剤と組み合わせて医薬とすることができ、通常の如何なる方法によっても製剤化でき、経口又は非経口投与するための固体、半固体又は液体の剤形に処方することができる。処方にあたっては、他の医薬活性成分との配合剤としてもよい。
【００１６】
例えば、日本薬局方に記載されている各種製剤、即ち、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、乾燥エキス剤、トローチ剤等の内用固形製剤、流エキス剤、エリキシル剤、酒精剤、シロップ剤、リモナーデ剤等の内用液剤、チンキ剤、リニメント剤、ローション剤等の外用液剤、硬膏剤、軟膏剤、パップ剤等の外用剤などに製剤化できる。また、投与可能であるならば、吸入剤、エアゾール剤、注射剤、点眼剤、座剤等にも用途に応じて製剤化してもよい。
【００１７】
経口投与においては、成人に対し体重１ｋｇ当り０．５〜５００ ｍｇ／日の範囲で投与するのが好ましい。
【００１８】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
【００１９】
乾燥粉砕した霊芝子実体（３７３ｇ）を室温で２週間ずつメタノール（３Ｌ）により３回抽出を行い、３０ｇの抽出物を得た。この抽出物は、シリカゲル（１ｋｇ）カラムクロマトグラフィーにより、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒［１：０（２．５Ｌ）、１９：１（６．５Ｌ）、９：１（２．５Ｌ）、４：１（３．０Ｌ）、７：３（１０．０Ｌ）、３：７（９．０Ｌ）、０：１（７．０Ｌ）］を展開液として用い、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）でモニターしながら、順次溶出させながら６画分に分画した。ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７：３、３：７、及び０：１）で溶出した最も高極性画分（６．９ｇ）の一部（５．０ｇ）をシリカゲル（２００ｇ）を用いて再度クロマトグラフィーを行った。ｎ−ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒［９：１（４．５Ｌ）、４：１（５．８Ｌ）、７：３（３．０Ｌ）、１：１（３．４Ｌ）、２：３（０．６Ｌ）、３：７（５．２Ｌ）、１：４（０．８Ｌ），０：１（１．０Ｌ）］を展開液として順次溶出させ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（７：３）、（１：１及び２：３）、及び（３：７、１：４、及び０：１）溶出部から、それぞれ画分Ｉ［ＴＬＣ（シリカゲル；展開液：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル／酢酸、５０：５０：０．５）でＲｆ値約０．７；７０７ｍｇ］、ＩＩ（Ｒｆ値約０．５；９１６ｍｇ）、及びＩＩＩ（Ｒｆ値約０．２；１．８３ｇ）を得た。
【００２０】
画分Ｉの一部（４３７ｍｇ）からは、オクタデシルシリカ（ＯＤＳ）カラム分取ＨＰＬＣ［２５ｃｍｘ内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水／酢酸（８０：２０：１）、２ｍＬ／分］により、化合物１１ａ（２０．２ｍｇ；保持時間３９．６分）を単離した。
【００２１】
画分ＩＩの一部（２５０ｍｇ）からは、ＯＤＳカラムＨＰＬＣ［展開液：メタノール／水／酢酸（６０：４０：１）、２ｍＬ／分］により、化合物１ｂ（１１．０ｍｇ；保持時間４１．１分）、化合物２ｂ（４．９ｍｇ；保持時間２６．４分）、化合物３ｂ（１４．２ｍｇ；保持時間３９．４分）、化合物５ｂ（１．６ｍｇ；保持時間３５．４分）、化合物６ｂ（６．８ｍｇ；保持時間２９．９分）、化合物７ｂ（５．１ｍｇ；保持時間３６．７分）、化合物８ｂ（０．８ｍｇ；保持時間２１．２分）、化合物９ａ（４．９ｍｇ；保持時間２２．８分）、及び化合物１０ｂ（１．４ｍｇ；保持時間３０．７分）を得た。
【００２２】
画分ＩＩＩの一部（５５６ｍｇ）からは、上記画分ＩＩと同条件でのＯＤＳカラムＨＰＬＣにより、化合物３ａ（４．７ｍｇ；保持時間２７．２分）、化合物４ａ（９．０ｍｇ；保持時間１５．８分）、化合物５ａ（４４．１ｍｇ；保持時間２３．３分）、化合物６ａ（２７．７ｍｇ；保持時間２０．６分）、化合物７ａ（２．７ｍｇ；保持時間２４．８分）、及び化合物１０ａ（８．０ｍｇ；保持時間２５．２分）を得た。トリテルペンの化学構造式は図２に示した。
【００２３】
１６種の化合物の同定はＭＳ，ＩＲ，１Ｈ ＮＭＲ，１３Ｃ ＮＭＲ，１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，及びＨＭＢＣにより行った。これらのうち、化合物１ａ、１ｂ及び２ｂの３種はこれまで文献記載のない新規化合物であった。これらのうち化合物１ａ及び２ｂの２種の化合物の１Ｈ ＮＭＲ及び１３Ｃ ＮＭＲデータをＨＭＢＣデータとともに表１に示した。
【００２４】
【表１】


【００２５】
２種の新規化合物の化学名は以下に示す。
化合物１ａ：３β，７β−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１２β−ａｃｅｔｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−１１，１５−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏｉｃ ａｃｉｄ
化合物１ｂ：ｍｅｔｈｙｌ ３β，７β−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１２β−ａｃｅｔｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−１１，１５−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏａｔｅ
化合物２ｂ：ｍｅｔｈｙｌ ７β，１５α−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−３，１１−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏａｔｅ
新規化合物１ａ、１ｂ及び ２ｂの諸性質およびスペクトルデータ（表１のＮＭＲデータを除く）を次に示した。
【００２６】
ルシデニン酸Ｐ（化合物１ａ）： 無色結晶， ｍｐ １３３−１３７ ℃； ［α］２５Ｄ ＋１４．７°（ｃ ０．３８， クロロホルム）； ＵＶ （メタノール） λｍａｘ ２５５ ｎｍ； ＩＲ νｍａｘ ３４４６， １７５５， １７２９， １６８１ ｃｍ−１； ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ５１８ ［Ｍ］＋ （９）， ５０３ （７）， ４９０ （２５）， ４７２ （３）， ４５８ （８）， ４４０ （４）， ４３０ （４）， ３５５ （５）， ３２９ （６）， ３０６ （１００）， ２７７ （７）， ２５５ （３）， １９９ （３）， １７１ （３）， １５３ （１０）， １３５ （３）； 高分解能ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ５１８．２８２７ （理論値Ｃ２９Ｈ４２Ｏ８ ［Ｍ］＋ ５１８．２８８０）． 本化合物はエーテル性ジアゾメタン処理によりルシデニン酸Ｐメチル（化合物１ｂ）を与えた。
【００２７】
ルシデニン酸Ｐメチル（化合物１ｂ）： 無色結晶， ｍｐ ８３−８５ ℃； ［α］２５Ｄ ＋７７．６°（ｃ ０．４１， クロロホルム）； ＵＶ （メタノール） λｍａｘ ２５２ ｎｍ； ＩＲ νｍａｘ ３４５９， １７３３， １６８０ ｃｍ−１； １Ｈ ＮＭＲ δ ０．８５ （３Ｈ， ｓ， Ｈ−２９）， ０．９９ （３Ｈ， ｓ， Ｈ−１８）， ０．９９ （３Ｈ， ｄ，Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ， Ｈ−２１）， １．０３ （３Ｈ， ｓ， Ｈ−２８）， １．２７ （３Ｈ， ｓ， Ｈ−１９）， １．４９ （３Ｈ， ｓ， Ｈ−３０）， ２．２２ （３Ｈ， ｓ， １２β−ＯＡｃ）， ３．２０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ５．６， １０．７ Ｈｚ， Ｈ−３α）， ３．６８ （３Ｈ， ｓ， ＣＯＯＭｅ）， ４．８０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ８．７ Ｈｚ， Ｈ−７β）， ５．６１ （１Ｈ， ｓ， Ｈ−１２α）； ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ５３２ ［Ｍ］＋ （１２）， ５１７ （４）， ５０４ （２３）， ４７２ （１３）， ４５４ （６）， ４４４ （１４）， ４１７ （２）， ３３２ （７）， ３２９ （７）， ３０６ （１００）， ２８８ （４）， ２７７ （１０）， ２５５ （５）， ２４１ （４）， ２２７ （７）； 高分解能ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ５３２．３０３６ （理論値 Ｃ３０Ｈ４４Ｏ８ ［Ｍ］＋ ５３２．３０３６）．
【００２８】
ルシデニン酸Ｑメチル（化合物２ｂ）： 無色結晶， ｍｐ １３０−１３１ ℃； ［α］２５Ｄ ＋５８．５°（ｃ ０．１３， クロロホルム）； ＵＶ （メタノール） λｍａｘ ２５２ ｎｍ； ＩＲ νｍａｘ ３４４５， １７３６， １７０７， １６６１ ｃｍ−１； ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ４７４ ［Ｍ］＋ （１００）， ４５６ （４２）， ４４１ （１６）， ４２５ （１７）， ４１３ （１２）， ３３６ （９２）， ３３０ （１７）， ３１８ （４６）， ３１３ （２２）， ２９９ （１４）， ２８７ （１４）， ２７６ （１９）， ２５９ （２８）， ２４５ （１３）， ２０３ （２８）， １６１ （２９）， １３７ （２４）； 高分解能ＥＩＭＳ ｍ／ｚ ４７４．２９７９ （理論値Ｃ２９Ｈ４２Ｏ８ ［Ｍ］＋ ４７４．２９８１）．
【００２９】
以下には新規化合物１ａ、１ｂ、及び２ｂの構造決定について述べた。
【００３０】
化合物１ａは高分解能ＥＩＭＳ （［Ｍ］＋ ｍ／ｚ ５１８．２８２７）及び１３Ｃ ＮＭＲより分子式Ｃ２９Ｈ４２Ｏ２を持つことが示された。ＵＶスペクトルにおける２５５ｎｍ吸収はα、β‐不飽和ケトンの存在を示している。一方、ＩＲスペクトルからは水酸基 （３４４６ ｃｍ−１）、カルボニル基 （１７２９ ｃｍ−１） 及びカルボキシル基 （１６８１ ｃｍ−１）の存在が示唆された。本化合物は５個の第３級メチル基［δＨ ０．８５， ０．９９， １．０３， １．２７， １．４９ （各 ｓ）］、１個の第２級メチル基［δＨ １．００ （ｄ， Ｊ ＝ ６．４ Ｈｚ）］、３個の酸素化されたメチン基 ［δＨ ３．１８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ６．８， ９．３ Ｈｚ）， ４．８０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ８．９， ８．９ Ｈｚ）， ５．６２ （ｓ）］、及び１個のアセトキシル基 ［δＨ ２．２２ （ｓ）］を持つことが１Ｈ ＮＭＲから示された。さらに、１３Ｃ ＮＭＲ及びＤＥＰＴスペクトル、さらにはＨＭＱＣスペクトルから、化合物１ａは７個のメチル基（アセチルメチル基を含む）、６個のメチレン基、６個のメチン基（３個の酸素化されたメチン基を含む）、４個の第４級炭素、２個のｓｐ２炭素、及び４個のカルボニル基（２個のケトン基を含む）を持つことがわかった。ＥＩＭＳでは、ヒドリド転位を伴った側鎖 （Ｃ５Ｈ９Ｏ２）及び酢酸の脱離に対応するｍ／ｚ ３５５ ［Ｃ２２Ｈ２７Ｏ４］＋の開裂イオン、及び、側鎖と、Ｃ−１１−Ｃ−１２、Ｃ−１３−Ｃ−１４、及びＣ−１６−Ｃ−１７結合開裂により生成したｍ／ｚ ３０６ ［Ｃ１８Ｈ２６Ｏ４］＋イオンが観察された。 これらの開裂イオンは、１２−ｈｙｄｒｏｘｙ−１１，１５−ｄｉｏｘｏ−Δ８−骨格構造を持つラノスタン型トリテルペンに特徴的なものである。以上のデータ、さらには１Ｈ及び１３Ｃ ＮＭＲデータのルシデニン酸Ｃメチル （ｍｅｔｈｙｌ ３β，７β，１２β−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−１１，１５−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏａｔｅ）［Ｎｉｓｈｉｔｏｂａら、Ａｇｒｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ４９巻、１７９３頁（１９８５）］及びルシデニン酸Ｐ （３β，７β−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１２β−ａｃｅｔｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−１１，１５−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏｉｃ ａｃｉｄ）［Ｗｕら、Ｊ． Ｎａｔ． Ｐｒｏｄ．， ６４巻、１１２１頁（２００１）］との比較により、化合物１ａは３β，７β−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−１２β−ａｃｅｔｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−１１，１５−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏｉｃ ａｃｉｄ（ルシデニン酸Ｐと命名）構造を持つことが明らかとなった。この構造の正しいことは１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢ、及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００３１】
化合物１ｂは高分解能ＥＩＭＳ （［Ｍ］＋ ｍ／ｚ ５３２．３０３６）より分子式Ｃ４０Ｈ４４Ｏ８を持つことが示された。本化合物は２個の第２級水酸基［νｍａｘ ３４５９ ｃｍ−１； δＨ ３．２０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ５．６， １０．７ Ｈｚ） 及び ４．８０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ８．５， ８．７ Ｈｚ）］、１個の第２級アセトキシル基［νｍａｘ １６８０ ｃｍ−１；δＨ ２．２２ （３Ｈ， ｓ） ａｎｄ ５．６１ （１Ｈ， ｓ）］、１個のα、β‐不飽和ケトン基（λｍａｘ ２５２ ｎｍ；νｍａｘ １７３３ ｃｍ−１）、４個の第３級メチル基［δＨ ０．８５， １．０３， １．２７ ａｎｄ １．４９ （各 ３Ｈ及び ｓ）］、１個の第２級メチル基［δＨ ０．９９ （３Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）］、及び１個のメトキシル基［δＨ ３．６８ （３Ｈ， ｓ）］を持つことが示された。さらに、ＥＩＭＳでは、化合物１ａと同様にｍ／ｚ ３０６ （［Ｃ１８Ｈ２６Ｏ４］＋；基準ピーク）に特徴的な開裂イオンが観察された。これらのデータは、ＭＳにおける分子イオン、及び１Ｈ ＮＭＲにおけるメトキシル基の存在を除き、１ａに極めて良く一致した。以上より、１ｂは１ａのメチルエステル体、即ちルシデニン酸Ｐメチルの構造を持つことは明らかである。この化合物１ｂの推定構造は、１ａのジアゾメタン法によるメチルエステル化により、１ｂが得られたことにより確認した。
【００３２】
化合物２ｂは高分解能ＥＩＭＳ （［Ｍ］＋ ｍ／ｚ ４７４．２９７９）より分子式Ｃ２８Ｈ４２Ｏ６を持つことが示された。本化合物は２個の第２級水酸基［νｍａｘ ３４４５ ｃｍ−１；δＨ ４．６３ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ６．９， １０．８ Ｈｚ） 及び ４．８０ （１Ｈ， ｄｄ， Ｊ ＝ ７．１， ９．５ Ｈｚ）］、１個はα、β‐不飽和ケトン基［νｍａｘ ２５２ ｎｍ；δＣ １４０．３， １５９．２ （各 ｓ）］として存在する２個のケトン基［νｍａｘ １７３６， １７０７ ｃｍ−１；δＣ １９９．６ ａｎｄ ２１６．９ （ｅａｃｈ ｓ）］、１個のカルボン酸メチルエステル基［νｍａｘ １６６１ ｃｍ−１；δＣ ５１．６ （ｑ）， １７４．３ （ｓ）；δＨ ３．６７ （３Ｈ， ｓ）］、５個の第３級メチル基［δＨ ０．９６， １．１０， １．１２， １．２６， １．２８ （各 ３Ｈ 及び ｓ）］、及び１個の第２級メチル基［δＨ ０．８８ （３Ｈ， ｄ， Ｊ ＝ ６．３ Ｈｚ）］を有している。ＥＩＭＳでは、Ｃ−５−Ｃ−６ 及び Ｃ−９−Ｃ−１０ 結合開裂によるＡ環の脱離で生成した特長的な開裂イオンをｍ／ｚ ３３６ ［Ｃ１９Ｈ２６Ｏ５］＋に示した。これらのデータのガノデリン酸Ａ （７β，１５α−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３，１１，２３−ｔｒｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎｅ−２６−ｏｉｃ ａｃｉｄ） ［Ｋｏｈｄａら、 Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． 、３３巻、１３６７頁（１９８５）］、そのメチルエステル体［Ｋｉｋｕｃｈｉら、 Ｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． 、３４巻、３６９５頁（１９８６）］、さらには化合物１ａと１ｂとの比較により、化合物２ｂはｍｅｔｈｙｌ ７β，１５α−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２５，２６，２７−ｔｒｉｎｏｒ−３，１１−ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ−８−ｅｎ−２４−ｏａｔｅ構造を持つことが明らかとなった。本化合物はルシデニン酸Ｐメチルと命名した。この構造の正しいことは１Ｈ−１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢ、及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００３３】
霊芝子実体抽出物から得た１６種のラノスタン型トリテルペン、即ち、ルシデニン酸Ｐ（化合物１ａ）、ルシデニン酸Ｐメチル（化合物１ｂ）、ルシデニン酸Ｑメチル（化合物２ｂ）、ルシデニン酸Ａ（化合物３ａ）、ルシデニン酸Ａメチル（化合物３ｂ）、ルシデニン酸Ｃ（化合物４ａ）、ルシデニン酸Ｄ２（化合物５ａ）、ルシデニン酸Ｄ２メチル（化合物５ｂ）、ルシデニン酸Ｅ２（化合物６ａ）、ルシデニン酸Ｅ２メチル（化合物６ｂ）、ルシデニン酸Ｆメチル（化合物７ｂ）、ルシデニン酸Ｌメチル（化合物８ｂ）、ガノデリン酸Ｅ（化合物９ａ）、ガノデリン酸Ｆ（化合物１０ａ）、ガノデリン酸Ｆメチル（化合物１０ｂ）、ガノデリン酸Ｔ−Ｑ（化合物１１ａ）のＥＢＶ早期抗原発現阻害率を表２に示した。
【００３４】
【表２】


【００３５】
これらの化合物の阻害率は、ＴＰＡに対し１０倍モル濃度の時２〜７％、同様に１０００倍モル濃度の時９４〜１００％であり、高い活性を有している。また、この阻害率は、ビタミンＡ誘導体であり、その発がん予防効果が種々の動物モデル実験でも確認されているβ‐カロテン［村上ら、Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６０巻、１頁（１９９６）］よりも高い値を示している。また、これらは検定において高いラジ細胞生存率を示したことから、高い安全性を持つ発癌予防剤として期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＥＢＶ活性化抑制検定法の概略を示す。
【図２】１６種のラノスタン型トリテルペンの化学構造式を示す。
【出願人】 【識別番号】８９９００００５７
【氏名又は名称】学校法人日本大学
【出願日】 平成１５年７月１６日（２００３．７．１６）
【代理人】 【識別番号】１０００６６６９２
【弁理士】
【氏名又は名称】浅村 皓

【識別番号】１０００７２０４０
【弁理士】
【氏名又は名称】浅村 肇

【識別番号】１００１０７１４６
【弁理士】
【氏名又は名称】高松 武生

【識別番号】１００１０７５０４
【弁理士】
【氏名又は名称】安藤 克則
【公開番号】 特開２００５−３５８９８（Ｐ２００５−３５８９８Ａ）
【公開日】 平成１７年２月１０日（２００５．２．１０）
【出願番号】 特願２００３−１９７５１７（Ｐ２００３−１９７５１７）