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【発明の名称】 アセロラ発酵物
【発明者】 【氏名】高垣 欣也
【住所又は居所】福岡県福岡市博多区博多駅前２丁目１９番２７号 株式会社東洋新薬内

【氏名】森 貞夫
【住所又は居所】福岡県福岡市博多区博多駅前２丁目１９番２７号 株式会社東洋新薬内

【氏名】平野 真
【住所又は居所】福岡県福岡市博多区博多駅前２丁目１９番２７号 株式会社東洋新薬内
【要約】 【課題】優れた生理活性を有するアセロラ発酵物を提供すること

【解決手段】アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって得られるアセロラ発酵物であって、該アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体を乾燥質量換算で２質量％以上含有する、発酵物。好ましくは、アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、発酵前の５０％以上保持される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって得られるアセロラ発酵物であって、
該アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、該アセロラ発酵物中に乾燥質量換算で２質量％以上含有される、発酵物。
【請求項２】
前記アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、発酵前の５０％以上保持される、請求項１に記載の発酵物。
【請求項３】
前記発酵が乳酸発酵であり、乳酸を、該発酵物の乾燥質量に対して０．０００１質量％以上含有する、請求項１または２に記載の発酵物。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかの項に記載のアセロラ発酵物を含有する組成物。
【請求項５】
請求項１に記載のアセロラ発酵物の製造方法であって、
アセロラ果実またはその破砕物を発酵する工程を包含し、かつ
該発酵に用いられる菌体が、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus Plantarum）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus Casei）、バチルス・メセンテリカス（Bacillus mesentericus）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、およびラクトバチルス・アシドフィリス（Lactobacillus acidophilus）からなる群より選択される少なくとも１種である、製造方法。
【請求項６】
請求項１に記載のアセロラ発酵物の製造方法であって、
アセロラ果実またはその破砕物を、酵素処理および中和処理のうちの少なくとも１種で処理した後に発酵する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】【技術分野】
【０００１】
本発明は、アセロラ発酵物、それを含有する組成物、およびアセロラ発酵物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
アセロラは、キントラオ科に属する果樹であり、その果実には、アスコルビン酸およびその誘導体が豊富に含有されている。このため、アセロラの果実の搾汁または抽出物は、アスコルビン酸が有する美白効果などを期待して食品や外用剤に利用されている（例えば、特許文献１）。
【０００３】
上記美白効果以外にも、アセロラ抽出物が、細胞賦活剤および／または保湿剤の効果を高めること（特許文献２）あるいは、アセロラチェリー発酵体がメラニン合成抑制作用を有することが報告されている（特許文献３）。
【０００４】
この特許文献３には、アセロラチェリー発酵体と、アスコルビン酸などの白色化剤とを含有する組成物を外部適用することによって、メラニン合成抑制活性を有することが記載されている。このアセロラチェリー発酵体は、アセロラピューレを抽出・濾過して得られた濾液を発酵し、さらに発酵後の成分を抽出したものである。そのため、この発酵体には、アセロラの果実に豊富に含有されるはずのアスコルビン酸が実質的に含有されておらず（１重量％以下）、アセロラの有効な天然成分の大部分が失われていると思われる。また、上記組成物はさらに、外来からアスコルビン酸を添加する必要があり、工程が増える点、コストの点などにおいても好ましくない。
【０００５】
このように、アセロラ果実の成分の有効性についての検討は、まだ十分とはいえない。さらに、アセロラ果実およびその破砕物や搾汁を発酵させるには、多大な時間を要し、長時間発酵すると、アスコルビン酸の損失が大きいといった問題点もある。
【特許文献１】特開平１１−２０６３４１号公報
【特許文献２】特開２０００−２１２０２７号公報
【特許文献３】特許第３０７６７８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、優れた生理活性を有するアセロラ果実の発酵物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等はアセロラの成分が有する生理活性について鋭意検討した結果、アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって、該アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体を特定割合で含有する発酵物を得ることに成功し、この発酵物が優れた生理活性を有することを見出して、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明のアセロラ発酵物は、アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって得られ、該アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、該アセロラ発酵物中に乾燥質量換算で２質量％以上含有される。
【０００９】
好ましい実施態様においては、上記アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、発酵前の５０％以上保持される。
【００１０】
好ましい実施態様においては、上記発酵が乳酸発酵であり、乳酸を該発酵物の乾燥質量に対して０．０００１質量％以上含有する。
【００１１】
本発明の組成物は、上記アセロラ発酵物を含有する。
【００１２】
本発明のアセロラ発酵物の製造方法は、アセロラ果実またはその破砕物を発酵する工程を包含し、かつ該発酵に用いられる菌体が、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus Plantarum）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus Casei）、バチルス・メセンテリカス（Bacillus mesentericus）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、およびラクトバチルス・アシドフィリス（Lactobacillus acidophilus）からなる群より選択される少なくとも１種である。
【００１３】
本発明のアセロラ発酵物の製造方法はまた、アセロラ果実またはその破砕物を、酵素処理および中和処理のうちの少なくとも１種で処理した後に発酵する工程を包含する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって、該アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体を２質量％以上含有するアセロラ発酵物を得ることができる。このアセロラ発酵物は、香りおよび風味がよく嗜好性に優れ、さらにチロシナーゼ阻害作用、美白作用、リパーゼ阻害作用、血中脂質改善作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用などの優れた生理活性を有する。そのため、脂質代謝調整剤および／または美白剤として利用することができる。また、このアセロラ発酵物をアスコルビン酸に由来する様々な生理活性を目的とした食品や外用剤に利用することも可能である。この発酵物は、アセロラ果実またはその破砕物を、酵素処理および中和処理のうちの少なくとも１種で処理することによって、発酵を短時間で行うことが可能となる。したがって、発酵中のアスコルビン酸の損失を防ぐことができる。さらに、天然由来の成分であるため、安全性およびコストの面からも好ましい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（１）アセロラ発酵物
本発明のアセロラ発酵物は、アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって、あるいは酵素処理および中和処理のうちの少なくとも１種で処理した後に発酵することによって得られる。アセロラ発酵物はそのままか、あるいは濾過して用いられる。本発明においては、濾過物が好ましく用いられる。好ましいアセロラ発酵物は、発酵後に得られる可溶成分である。
【００１６】
（アセロラ果実またはその破砕物）
アセロラは、熱帯に生息するキントラオ科に属する果樹であり、その果実部には、アスコルビン酸およびその誘導体が豊富に含まれる。本発明においては、このアセロラの果実が用いられる。
【００１７】
上記アセロラ果実は、通常、洗浄してから、あるいはさらに、カット、摩砕などの当業者が通常行う方法によって破砕してから使用される。アセロラ果実の破砕物が好ましい。破砕物の大きさに特に制限はない。好ましくは、粒経が５０００μｍ以下、より好ましくは２０μｍ〜５０００μｍ程度の破砕物（ピューレ）が用いられる。本発明においては、破砕後、固液分離して得られた溶液（搾汁）も破砕物として用いることもできる。さらに上記アセロラ果実またはその破砕物を抽出した後、固液分離して用いてもよい。アセロラ果実由来の成分、すなわち不溶性成分および水溶性成分の全ての成分を発酵することができる点で、アセロラ果実またはその破砕物を固液分離せずに用いることが好ましい。
【００１８】
上記アセロラ果実およびその破砕物は、雑菌の繁殖を防ぐ目的で、加熱処理を行ってもよく、冷凍保存してもよい。特に、冷凍保存は、アセロラ果実に含有される成分および風味の保持の観点から好ましく、直ちに次工程を行わない場合に採用される。
【００１９】
上記アセロラ果実またはその破砕物は、発酵を効率的に行うために、必要に応じて、加水され得る。加水量に特に制限はない。通常、アセロラ果実またはその破砕物１質量部に対して水が０．１〜３０質量部、好ましくは０．５〜１０質量部の割合で加えられる。
【００２０】
（酵素処理工程および中和処理工程）
次いで、アセロラ果実またはその破砕物の発酵を促進する目的で、酵素による細胞壁分解処理および中和処理のうちの少なくとも１種で処理し得る。
【００２１】
酵素処理に用いられる酵素としては、アミラーゼ、ペクチナーゼ、エンドアラバナーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、エンドβ−グルカナーゼ、エキソβ−グルカナーゼ、キシラーゼ、β−グルコシダーゼなどが挙げられる。好ましくは、ペクチナーゼである。これらの酵素は混合して用いてもよい。特に好ましくは、ペクチナーゼと、アミラーゼ、エンドアラバナーゼ、エンドβ−グルカナーゼ、エキソβ−グルカナーゼ、キシラナーゼ、およびβ−グルコシダーゼからなる群より選択される少なくとも１種の酵素との混合酵素である。これらの添加量は、酵素の種類によって異なるが、通常、酵素濃度が、０．０００１〜０．５質量／容量％、好ましくは０．０００５〜０．３質量／容量％となるように添加される。
【００２２】
酵素処理の条件は、処理するアセロラ果実の形状、酵素の種類、酵素濃度に応じて適宜設定すればよい。通常、３０〜７５℃、好ましくは３５〜７０℃にて３０分間〜７２時間、好ましくは１〜４８時間程度で処理される。
【００２３】
酵素処理は、発酵の阻害要因（例えば、ペクチン等の細胞壁を構成する多糖類）を分解することによって、発酵を短時間で終了させることができる。そのため、アスコルビン酸の損失が少ないアセロラ発酵物が得られる。さらに、例えば、多糖類が分解されると、多糖類の分解物（単糖類、オリゴ糖など）が生成される。これらが、得られるアセロラ発酵物中の新たな成分となる。例えば、オリゴ糖は、整腸作用、発酵物の可溶化を促進するなどの様々な効果を有する。単糖類は、さらに微生物の増殖に必要な栄養素を供給して微生物の有用物質の産生を促進すると考えられる。
【００２４】
中和処理は、最適なｐＨで発酵するために行われ、アセロラ果実またはその破砕物のｐＨを４．０〜７．５に調節する。ｐＨの調節は、当業者が用いる通常の方法を用いて行われる。例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸ナトリウム、重曹、クエン酸ナトリウムなどのｐＨ調整剤；電解水；クエン酸緩衝液や酢酸緩衝液などを添加して調節され得る。なお、ｐＨが７．５より高くなると、アセロラ果実に含まれる成分、特にアスコルビン酸が分解するおそれがある。
【００２５】
（発酵工程）
上記アセロラ果実またはその破砕物を発酵する、あるいは酵素処理および中和処理のうちの少なくとも１種で処理した後に発酵してアセロラ発酵物を得る。発酵としては、乳酸発酵、クエン酸発酵、アルコール発酵、酢酸発酵などが挙げられる。これらの中でも、乳酸発酵が好ましい。発酵はこれらを組み合わせてもよい。発酵は、例えば、２４時間〜７２時間で終了することが、アスコルビン酸またはその誘導体の損失を防ぐ点から好ましい。発酵の種類に応じて、乳酸菌、酵母菌、酢酸菌などが用いられる。酵母や酢酸菌は、耐酸性が強いため、中和処理を行わずとも、効率的な発酵が可能であり、アセロラ果実の風味を十分維持することができる。
【００２６】
上述の酵素処理および中和処理はいずれも、発酵を促進させ、発酵工程におけるアスコルビン酸などのアセロラ果実に含有される有効成分の損失を防ぐことを目的として行われる。したがって、発酵能力が高い微生物（例えば、後述の特定の乳酸菌）と、酵素処理または中和処理したアセロラ果実またはその破砕物とを組み合わせることが、比較的短時間（例えば、２４時間〜７２時間）で発酵できる点から好ましい。このように発酵を行うことで、アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、アセロラ発酵物中にアセロラ発酵物の乾燥質量あたり２質量％以上含有される。乳酸発酵の場合は、さらにアセロラ発酵物の乾燥質量１００ｇ当り、０．１ｍｇ以上の乳酸を含有する発酵物を得ることができる。また、好ましくはアセロラ果実中に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、発酵前の５０％以上保持される発酵物となる。
【００２７】
乳酸発酵は、上記アセロラ果実またはその破砕物を乳酸菌と接触させることによって行われる。乳酸発酵は、得られる発酵物中に乳酸が含有される点で好ましい。好ましくは発酵物の乾燥質量１００ｇ当り、乳酸を乾燥質量換算で０．１ｍｇ（０．０００１質量％）以上、より好ましくは０．５ｍｇ（０．０００５質量％）以上、さらに好ましくは１ｍｇ（０．００１質量％）以上含有し得る。
【００２８】
乳酸菌としては、ロイコノストック・メセントロイデス、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ブレビス、ラクトバチルス・デルブロイキ、ラクトバチルス・ガッセリ、ラクトバチルス・アシドフィルス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ストレプトコッカス・サーモフィラス、ストレプトコッカス・フェカリス、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ラクティス、バチルス・メセンテリカス（Bacillus mesentericus）などが挙げられる。これらの乳酸菌は単独でまたは組み合わせて用いられる。これらの中でも、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・カゼイ、バチルス・メセンテリカス、ビフィドバクテリウム・ロンガム、およびラクトバチルス・アシドフィリスが好ましく、ラクトバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・カゼイ、およびバチルス・メセンテリカスが短時間で発酵を行い、乳酸量を増加させることができる点でより好ましく、耐酸性、生育温度、および増殖速度の面から発酵を効率よく行える点で、ラクトバチルス・プランタラムがさらに好ましく、ラクトバチルス・プランタラムの特定株であるヴィニフローラ株（Lactobacillus plantarum viniflora）が特に好ましい。また、アセロラ果実に常在する乳酸菌は、一般的にアセロラ果実またはその破砕物を効率よく発酵することができるため、好適に用いられる。
【００２９】
上記の乳酸菌の中には、アセロラ発酵物を得るために時間を要する乳酸菌もある。例えば、ビフィドバクテリウム・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ラクティスなどの一般にビフィズス菌と呼ばれる乳酸菌、ストレプトコッカス・フェカリス、ラクトバチルス・アシドフィルス、ラクトバチルス・サーモフィラスなどが挙げられる。このような乳酸菌を用いて発酵すると、発酵に時間を要するため、アスコルビン酸の損失が大きくなる可能性がある。したがって、この場合、アセロラ果実またはその破砕物を予め酵素処理または中和処理しておくことが、発酵を促進できる点で有効である。特に中和処理を行った後に、ビフィドバクテリウム・ロンガムまたはラクトバチルス・アシドフィリスを用いて発酵することが好適であり、このようにして得られた発酵物は、高いチロシナーゼ阻害効果、美白効果、リパーゼ阻害効果、および血中脂質改善効果（中性脂肪上昇抑制効果、血中コレステロール低減作用等）を有する。
【００３０】
乳酸菌は、アセロラ果実またはその破砕物１００質量部に対して、乾燥菌体質量で好ましくは０．００５〜１０質量部、さらに好ましくは０．０１〜５．０質量部添加される。
【００３１】
また、乳酸菌の優先的な生育のために、グルタミン酸またはその塩を加えてもよい。添加するグルタミン酸の量は、アセロラ果実またはその破砕物に対して０．０５〜１質量％程度、好ましくは０．２質量％程度である。
【００３２】
さらに乳酸菌の発酵を促進するために、乳酸菌代謝性の糖を添加してもよい。この糖の添加は、糖分含量が少ない植物（糖分含量が１質量％未満）を発酵させる場合に有用である。あるいは、発酵の促進および発酵物への甘味の付加という目的で糖を添加してもよい。添加される糖は、乳酸菌が生育および発酵に利用し得る糖であり、例えば、庶糖、ぶどう糖、果糖、麦芽糖などが挙げられるが、これらに限定されない。これらの糖は、糖分がアセロラ果実の糖分と合わせて約１〜６質量％になるように加えることが好ましい。
【００３３】
乳酸発酵は、乳酸菌が優先的に増殖できる環境をつくるため、アセロラ果実またはその破砕物のｐＨを予め中和処理により調節しておくことが好ましい。例えば、ラクトバチルス・プランタラムを用いる場合は、ｐＨを４．０程度に調節してから発酵を開始すれば、短期間でその発酵を終了させることができる。
【００３４】
乳酸発酵は、アスコルビン酸の分解を抑制する観点から、嫌気性条件下で行うことが好ましい。嫌気性条件は、例えば、アセロラ果実またはその破砕物を発酵槽に入れた後、脱気することにより、または発酵槽を密封するか、窒素、二酸化炭素などのガスで満たすか、減圧することにより、あるいはそれらを組み合わせることにより得られる。また、嫌気条件下で発酵を行うことにより、得られる発酵物の風味も良くなる。
【００３５】
乳酸発酵の条件に特に制限はない。発酵温度は、通常、４℃〜５０℃で行われ得る。発酵時間は、発酵温度に応じて適宜設定すればよく、２０℃〜５０℃で発酵を行う場合、１２時間〜７２時間、好ましくは２４時間〜７２時間である。さらに、風味を高める目的で４℃〜１０℃の低温発酵を行う場合は、アスコルビン酸などのアセロラ果実に含有される成分の損失を考慮すると、５日間〜１４日間が好ましい。
【００３６】
乳酸発酵は、糖を加えて発酵を停止させることができる。このような糖としては、糖アルコール（例えば、ソルビトール）、オリゴ糖（例えば、マルトオリゴ糖、キトオリゴ糖、フラクトオリゴ糖）などが挙げられる。このようなオリゴ糖は、整腸作用、う蝕の予防などに効果があり、得られる発酵物に機能性を付与し得る。
【００３７】
乳酸発酵は、アセロラ果実中の成分を資化して有機酸やオリゴ糖などの有用成分を産生するだけでなく、発酵物を低いｐＨに維持できるため、他の雑菌の繁殖を防ぐことも可能である。また、乳酸菌を添加するため、風味の改善や整腸作用、酵素阻害作用などの生理活性の高いアセロラ発酵物を得ることができる。
【００３８】
クエン酸発酵は、一般的には、酵母を、上記果実またはその破砕物と好気的条件下で接触させて培養することによって行われる。クエン酸発酵において、乳酸菌をさらに添加して発酵すると、酵母の増殖が促進されやすく、さらに得られる発酵物の嗜好性も高まるため好ましい。
【００３９】
酵母としては、清酒酵母、ワイン酵母、ビール酵母、パン酵母などが用いられる。例えば、サッカロミセス属、シゾサッカロミセス属などに属する酵母が用いられ、好ましくは、サッカロミセス・セレビシエ、サッカロミセス・パストリアヌス、シゾサッカロミセス・ポンベなどが挙げられる。特にアミノ酸やビタミンなどの有用物質を産生する点で、サッカロミセス・セレビシエおよびその単離株が好ましい。
【００４０】
酵母は、アセロラ果実またはその破砕物１００質量部に対して、乾燥体質量で０．００１〜１５質量部、好ましくは０．０１〜１０質量部添加する。
【００４１】
クエン酸発酵は、アセロラ果実またはその破砕物と酵母とを発酵槽に入れ、通気攪拌しながら、４℃〜４０℃、好ましくは１０℃〜３５℃で２４時間〜１４日間行う。特にアセロラの果実は酸性であるため、酵母発酵により香気成分が高くなるため、より嗜好性の高い発酵物を得ることができる。
【００４２】
クエン酸発酵は、酵母を用いて行われるため、発酵物中に酵母が産生するアミノ酸、タンパク質、ビタミン類などが含まれ、栄養価が高く嗜好性に優れる点で好ましい。
【００４３】
アルコール発酵は、酵母を、アセロラ果実またはその破砕物と嫌気条件下で接触させて培養することによって行われる。アルコール発酵に用いられる酵母の種類および量は、上記クエン酸発酵の場合と同様である。発酵条件も、嫌気条件にすること以外は、上記クエン酸発酵の場合と同様である。こうしてアルコール発酵で得られたアセロラ発酵物は、さらに以下で述べる酢酸発酵に供することが好ましい。
【００４４】
酢酸発酵は、アセロラ果実またはその破砕物にアルコールを加え、所定のアルコール濃度にした後、酢酸発酵し得る微生物（酢酸菌）を添加することによって行われる。あるいは上記のアルコール発酵によって得られたアセロラ発酵物に酢酸菌を添加して二段発酵させてもよい。
【００４５】
アルコール濃度は、酢酸菌が生育できる濃度であれば、特に制限されず、発酵時間などに応じて適宜調整すればよい。好ましくは１０質量／容量％以下、より好ましくは１〜６質量／容量％である。
【００４６】
酢酸菌としては、アセトバクター属に属する微生物、例えば、アセトバクター・アセチ、アセトバクター・パステウリアヌス、アセトバクター・ハンセニなどが挙げられる。
【００４７】
酢酸菌は、適切な培地で１５℃〜４０℃、好ましくは２５℃〜３５℃にて６〜４８時間予備培養しておくことが好ましい。予備培養した酢酸菌は、例えば、次のようにして得られる。まず、ポテト２００ｇ、破砕酵母３０ｇ、肝臓エキス２５ｇ、肉エキス５ｇ、チオグリコール酸培地１０ｇ、グルコース５ｇ、グリセロール１５ｇ、および炭酸カルシウム１５ｇを含有する１Ｌの酢酸菌培地（ｐＨ７．０）に酢酸菌を添加して、１５℃〜４０℃にて２４時間予備培養する。次いで、得られた培養物を遠心分離し、回収した菌体を滅菌水で洗浄し、再度遠心分離して上清を除去することによって、予備培養した酢酸菌が得られる。
【００４８】
酢酸発酵は、攪拌培養、振盪培養、および静置培養のいずれでも行うことができる。発酵温度は１０℃〜４０℃、好ましくは２０℃〜３５℃で行われる。発酵時間は、酢酸菌の添加量に応じて適宜設定され、通常、１日〜１週間が好適である。
【００４９】
上記発酵後は、さらに必要に応じて、殺菌または除菌してもよい。例えば、加圧式殺菌、熱交換式殺菌、蒸煮殺菌、限外ろ過などの当業者が通常用いる方法が用いられる。加熱殺菌の場合、例えば、６０℃〜１２０℃にて５秒間〜１２時間行われる。
【００５０】
（アセロラ発酵物）
このようにして得られたアセロラ発酵物は、そのまま使用してもよいし、必要に応じて、その後当業者が通常用いる処理方法によって種々の態様にして使用することもできる。このような態様としては、例えば、上記のように発酵物を固液分離して上清を回収することにより得られた発酵エキス、該発酵物または該発酵エキスを濃縮処理した発酵ペースト、該発酵物または該発酵エキスを乾燥・粉末化処理した発酵粉末または発酵エキス末などが挙げられる。これらは、すべてアセロラ発酵物の一態様である。
【００５１】
上記アセロラ発酵物の１つの実施態様である発酵粉末または発酵エキス末は、具体的には、該発酵物または発酵エキスを、乾燥、粉末化することによって得られる。乾燥は、当業者が通常用いる種々の方法が採用されるが、凍結乾燥、噴霧乾燥が好ましく用いられる。噴霧乾燥は、必要に応じて、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン、マルトースなどの賦形剤を添加して行われる。好ましくはデキストリン、より好ましくは難消化性デキストリンが用いられる。デキストリンを用いることにより、血清における血糖値の上昇を防ぎ、さらには水溶性食物繊維によるコレステロールの低下という効果を得ることができる。発酵物または発酵エキスと賦形剤との混合比は、発酵物を乾燥する場合、好ましくは質量比で１：５〜１０：１、発酵エキスを乾燥する場合、好ましくは質量比１：１０〜５：１である。上記混合比で乾燥することにより得られる発酵粉末または発酵エキス末の褐変を防ぐことができる。
【００５２】
本発明のアセロラ発酵物は、発酵前のアセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体を乾燥質量換算で２質量％以上含有する。好ましくは５質量％以上、より好ましくは１０質量％以上、さらに好ましくは１５質量％以上、最も好ましくは２０質量％以上含有される。
【００５３】
本発明のアセロラ発酵物はまた、好ましくは、発酵前のアセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体が、発酵前（アセロラ果実またはその破砕物）の５０％以上、より好ましくは６０％以上保持される。
【００５４】
本発明のアセロラ発酵物は、香りおよび風味がよく嗜好性に優れ、さらに発酵によって、アセロラ果実が本来有しない新規な機能（例えば、リパーゼ活性阻害作用）、アセロラ果実が本来有する生理活性を増強する作用（チロシナーゼ阻害作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用など）を有する。このようなアセロラ発酵物は、脂質代謝調整剤および／または美白剤として利用できる。
【００５５】
また、本発明のアセロラ発酵物は、上述のように、アスコルビン酸およびその誘導体を含有するため、様々な生理活性を有する。例えば、抗酸化作用に基づく脂質等の生体成分の酸化抑止作用、動脈硬化予防作用や血栓防止作用などの血管系疾患の予防作用、肝機能改善作用、解毒作用、発ガン抑制作用、血中脂質改善作用、血管保護作用、コラーゲンの酸性増強作用、シワなどの皮膚改善作用、メイラード反応阻害作用、日焼け予防作用、抗疲労作用、抗ストレス作用、免疫増強作用、抗高血圧予防作用、痴呆予防作用、糖尿病および糖尿病合併予防作用、骨代謝改善作用、抗炎症作用、アミノ酸代謝改善作用、心疾患予防作用、脳卒中予防作用、歯槽膿漏予防作用、貧血予防作用、胃潰瘍予防作用、更年期症状改善作用などが挙げられる。したがって、アセロラ発酵物を天然のアスコルビン酸の供給源として利用することも可能であり、安全性並びにコストの面で優れている。さらに、発酵物中に含有されるアスコルビン酸以外の成分による上記作用の相乗効果も期待できる。
【００５６】
（２）アセロラ発酵物含有組成物
本発明のアセロラ発酵物含有組成物は、アセロラ発酵物を含有し、必要に応じて、その他の成分を含有し得る。この組成物は、食品、医薬部外品、化粧品、トイレタリー用品などに広く適用し得る。
【００５７】
本発明の組成物中のアセロラ発酵物の含有量は、特に制限されない。アセロラ発酵物が有する生理作用を得る点から、食品など経口投与を目的とする場合には、好ましくは０．００１〜１００質量％、より好ましくは０．０１質量％〜７０質量％、化粧品などの経皮投与を目的とする場合には、好ましくは０．００００１質量％〜５０質量％、より好ましくは０．０００１質量％〜３０質量％である。
【００５８】
本発明の組成物は、上述のように、必要に応じて、種々の成分を含有し得る。種々の成分の含有量は任意である。種々の成分としては、例えば、通常の食品として添加し得る成分（賦形剤、増量剤、結合剤、増粘剤（例えば、寒天）、乳化剤、滑沢剤、湿潤剤、懸濁剤、着色料（色素）、食品添加物、調味料など）または通常、医薬部外品、化粧品、およびトイレタリー用品として添加し得る成分（基材、動植物抽出物など）が挙げられる。上記成分は、単独で含有させてもよく、組み合わせて含有させてもよい。
【００５９】
上記種々の成分のうちの食品添加物としては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｂ群、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、キチン・キトサン、レシチン、ポリフェノール（カテキン類、アントシアニン類、プロアントシアニジンなどの縮合型タンニン、ガロタンニン等の加水分解型タンニン、イソフラボン、ヘスペリジンなどのフラボノイド類、これらの誘導体等）、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ジンセサノイド、グリチルリチン酸等）、キサンチン誘導体（カフェイン等）、脂肪酸、アミノ酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、ムコ多糖類（ヒアルロン酸、コンドロイチン、デルマタン、ヘパラン、ヘパリン、ケタラン、これらの塩等）、アミノ糖（グルコサミン、アセチルグルコサミン、ガラクトサミン、アセチルガラクトサミン、ノイラミン酸、アセチルノイラミン酸、ヘキソサミン、それらの塩等）、食物繊維（難消化性デキストリン、アルギン酸、グアガム、ペクチン、グルコマンナン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質、スフィンゴ脂質、及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、キノン類（コエンザイムＱ１０等）、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、麦若葉末等のイネ科植物の緑葉、ケール等のアブラナ科植物の緑葉などが挙げられる。さらに上記食品添加物を含む飲料、例えば、植物発酵ジュース、野菜ジュース（例えば、人参ジュース）、植物抽出物、果汁なども利用され得、これらを含有させることにより機能性または栄養価の高い飲料を得ることができる。
【００６０】
上記種々の成分のうちの調味料としては、例えば、グラニュー糖、蜂蜜、ソルビットなどの甘味料、アルコール、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸などの酸味料、および香料が挙げられる。
【００６１】
本発明の組成物は、目的に応じて、各種の形態に調製することができる。例えば、食品などとして利用する場合は、ハードカプセル、ソフトカプセルなどのカプセル剤、錠剤、丸剤、粉末（散剤）、顆粒、ティーバッグ、液体（飲料）、ペーストなどの当業者が通常用いる形態で利用される。さらに、上記液体などを加工して、ゼリー、シャーベット、フローズンヨーグルトあるいはアイスクリームとすることもできる。これらは、形状または好みに応じて、そのまま摂取してもよく、あるいは水、湯、牛乳などに溶いて、または成分を浸出して飲むことができる。なお、飲料の場合、低ｐＨであれば、１２０℃、４分の完全殺菌をしなくても、１００℃以下の殺菌条件で殺菌できる。例えば、ｐＨが４．０以下の場合では、６５℃、１０分相当の殺菌条件で十分に殺菌できる。
【００６２】
本発明の組成物を、医薬部外品、化粧品、トイレタリー用品などとして利用する場合は、例えば、化粧水、化粧クリーム、乳液、パック、ヘアトニック、シャンプー、ヘアリンス、トリートメント、ボディーシャンプー、先顔剤、石鹸、ファンデーション、口紅、育毛剤、軟膏、入浴剤、歯磨剤、マウスウウォッシュ、シップ、ゲルなどの形態とされ得る。
【００６３】
本発明の組成物は、リパーゼ活性阻害作用およびチロシナーゼ阻害作用を有するアセロラ発酵物を含有するため、特に優れた脂質代謝調整剤および／または美白剤として利用可能である。さらに香りおよび風味がよく嗜好性にも優れる。
【実施例】
【００６４】
以下、本発明をより詳細に説明するが、本発明は、この範囲に限定されるものではない。
【００６５】
（実施例１：ラクトバチルス・プランタラム・ヴィニフローラ（ＬＰＶ）による発酵）
アセロラピューレ（株式会社ニチレイ）を、以下のような処理方法（試験１〜５）によって発酵した。
【００６６】
（ｉ）試験１
アセロラピューレ１ｋｇにイオン交換水１ｋｇを加えて攪拌してアセロラ分散液を調製した。この分散液を固液分離せずに、２ｇの乳酸菌（ラクトバチルス・プランタラム・ヴィニフローラ、クリスチャンハンセン社製）を添加し、３５℃にて２４時間発酵した。なお、発酵前後の乳酸値をＦ−キットＬ−乳酸（Ｊ．Ｋ．インターナショナル社製）を用いて測定した。得られたアセロラ発酵物をろ過し、アセロラ発酵液を得た。このアセロラ発酵液を９５℃にて８秒間殺菌した後に、これを凍結乾燥し、アセロラ発酵液の乾燥粉末（アセロラ発酵エキス末）７０ｇを得た。アセロラピューレおよびアセロラ発酵エキス末中に含まれるアスコルビン酸の量を以下の方法で測定し、発酵前後におけるアスコルビン酸の残存率（％）を求めた。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に示す。なお、後述の試験２〜５の結果についても同様に表１に示す。
【００６７】
（アスコルビン酸の測定）
アセロラピューレまたはアセロラ発酵エキス末をサンプルとして、サンプル０．４ｇを１０ｍＬの水に溶解した。この溶液と、１０ｍＬのブタノールとを分液ロート中で攪拌混合した後、水層を回収する操作を２回行って試験液を調製した。得られた試験液をＨＰＬＣに供し、以下の条件で測定した。なお、標準物質として、アスコルビン酸（和光純薬株式会社製）の０．０１質量／容量％水溶液、０．０５質量／容量％水溶液、および０．１質量／容量％水溶液を調製した。
移動相：２５ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ２．５）
カラム：Ｕｎｉｓｏｎ ＵＫ−Ｃ１８ １５０×４．６ｍｍ（Ｉｍｔａｋｔ社製）
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
使用サンプル量：１０μＬ
検出波長：２０５ｎｍ
【００６８】
（ii）試験２
試験１において、乳酸菌を添加する前に、アセロラ含有溶液をセルラーゼＡ（天野エンザイム社製）で酵素処理したこと以外は、試験１と同様に行い、アセロラ発酵エキス末を得た。なお、酵素処理は、アセロラ分散液にセルラーゼＡ（ペクチナーゼ、エンドβ−グルカナーゼ、エキソβ−グルカナーゼ、キシラナーゼ、およびβ−グルコシダーゼを含有）を最終濃度が０．１質量／容量％となるように添加し、５５℃、２４時間保持して行った。
【００６９】
（iii）試験３
セルラーゼＡの代わりに、ペクチナーゼＡ（ペクチナーゼおよびアミラーゼを含有、天野エンザイム社製）を用いて酵素処理したこと以外は、試験２と同様にして、アセロラ発酵エキス末を得た。
【００７０】
（iv）試験４
セルラーゼＡの代わりに、スミチームＰＸ（ペクチナーゼおよびエンドアラバナーゼを含有、新日本化学社製）を用いて酵素処理したこと以外は、試験２と同様にして、アセロラ発酵エキス末を得た。
【００７１】
（ｖ）試験５
試験１において、乳酸菌を添加する前に、中和処理を行ったこと以外は、試験１と同様に行い、アセロラ発酵エキス末を得た。なお、中和処理は、１ＮのＮａＯＨを用いてアセロラ分散液のｐＨを５．０に調節して行った。
【００７２】
（実施例２：ラクトバチルス・カゼイ（ＬＣ）による発酵）
実施例１の乳酸菌をラクトバチルス・カゼイ（クリスチャンハンセン社製）にしたこと以外は、実施例１と同様に行い（試験１〜５）、アセロラ発酵エキス末（７５ｇ）を得た。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に併せて示す。
【００７３】
（実施例３：ラクトバチルス・プランタラム・ＬＰ１１５株（ＬＰ１１５）による発酵）
実施例１の乳酸菌をラクトバチルス・プランタラム・ＬＰ１１５株（協和ハイフーヅ社製）にしたこと以外は、実施例１と同様に行い（試験１〜５）、アセロラ発酵エキス末（７２ｇ）を得た。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に併せて示す。
【００７４】
（実施例４：ビフィドバクテリウム・ロンガム（ＢＬ）による発酵）
実施例１の乳酸菌をビフィドバクテリウム・ロンガム（クリスチャンハンセン社製）にしたこと以外は、実施例１と同様に行い（試験１〜５）、アセロラ発酵エキス末（７０ｇ）を得た。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に併せて示す。
【００７５】
（実施例５：ラクトバチルス・アシドフィルス（ＬＡ）による発酵）
実施例１の乳酸菌をラクトバチルス・アシドフィルス（クリスチャンハンセン社製）にしたこと以外は、実施例１と同様に行い、アセロラ発酵エキス末（７３ｇ）を得た。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に併せて示す。
【００７６】
（実施例６：バチルス・メセンテリカス（ＢＭ）による発酵）
実施例１の乳酸菌をバチルス・メセンテリカス（東亜薬品工業社製）にしたこと以外は、実施例１と同様に行い（試験１〜５）、アセロラ発酵エキス末（６９ｇ）を得た。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に併せて示す。
【００７７】
（比較例１）
実施例１の試験１において、乳酸菌を用いなかったこと以外は、実施例１の試験１と同様に行い、アセロラ搾汁末（８１ｇ）を得た。発酵前後の乳酸量およびアスコルビン酸量、ならびに発酵前後におけるアスコルビン酸残存率の結果を表１に併せて示す。
【００７８】
【表１】


【００７９】
表１の結果から、実施例の乳酸菌を用いて得られたアセロラ発酵エキス末は、発酵後に乳酸値が上昇していることから、発酵していることが分かる。実施例１のラクトバチルス・プランタラム・ヴィニフローラおよび実施例２のラクトバチルス・カゼイを用いた場合に乳酸値が大きく上昇し、特に、実施例１の発酵後の乳酸値が最も上昇していた。さらに、実施例４および５に顕著に示されるように、酵素処理または中和処理を行うことによって、発酵が促進されることがわかる。アスコルビン酸については、実施例で得られた発酵後のアセロラ発酵エキス末は、乾燥質量換算で２０質量％以上含有しており、発酵前に比べて６０％以上保持していた。酵素処理または中和処理は、比較的短時間の発酵を可能にするため、アスコルビン酸の損失を抑制し、保持することができると考えられる。
【００８０】
（実施例７〜１４）
実施例１〜６で得られたアセロラ発酵エキス末の中から、表２に示される８種類のアセロラ発酵エキス末を用いて、チロシナーゼ阻害作用、リパーゼ阻害作用、および嗜好性について評価した。結果を表２に示す。
【００８１】
（ｉ）チロシナーゼ阻害作用
チロシナーゼ阻害作用を以下のように評価した。まず、各発酵エキス末０．４ｇを精製水１０ｍＬに溶解し、さらに１００倍希釈して希釈液を調製した（アスコルビン酸濃度０．０８〜０．１１ｍｇ／ｍＬ）。この希釈液１００μＬに、１０μＬ（１１０Ｕｎｉｔｓ）のチロシナーゼ（フナコシ株式会社製）および９０μＬの１／１５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６.８）を添加し、３７℃にて１０分間保持した。その後、０．０３質量／容量％のＤＯＰＡ（和光純薬株式会社）を１００μＬ加えて、さらに３７℃にて５分間保持した。得られた溶液を試験液として４８０ｎｍの吸光度を測定した（測定値Ａとする）。対照として、上記希釈液の代わりに、精製水を用いたこと以外は上記と同様に行って得た試験液（対照試験液）の吸光度を測定した（測定値Ｂとする）。さらに、試験液および対照試験液の各ブランクとして、上記チロシナーゼの代わりに１／１５Ｍリン酸緩衝液を用いたこと以外は上記と同様に行って得た各溶液（ブランク）の吸光度を測定した（試験液のブランクの測定値を測定値Ｃ、対照試験液のブランクの測定値を測定値Ｄとする）。上記の測定値Ａ〜Ｄを用いて、以下の式からチロシナーゼ阻害率（％）を求めた。なお、表２の値は、三重測定して得られた値である。
チロシナーゼ阻害率（％）＝［１−｛（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｄ）｝］×１００
【００８２】
（ii）リパーゼ阻害作用
上記希釈液１ｍＬを、１０質量／容量％の炭酸ナトリウム（和光純薬株式会社）でｐＨ８．５に調整し、蒸留水で全量を２ｍＬに調整した。この溶液に、４ｍＬの基質液（牛乳を蒸留水で３倍希釈し、炭酸ナトリウムでｐＨ８．５に調整した溶液）および０．０４質量／容量％の豚膵臓由来のリパーゼ（和光純薬株式会社）を添加した。この溶液のｐＨを直ちに測定し、さらに３７℃にて２０分間反応させた後に再度ｐＨを測定し、このｐＨの差（ΔＡとする）を求めた。対照として、上記希釈液の代わりに、蒸留水を用いたこと以外は上記と同様に行い、ｐＨの差（ΔＢとする）を求めた。ΔＡおよびΔＢを用いて、以下の式よりリパーゼ阻害率（％）を求めた。
リパーゼ阻害率（％）＝｛１−（ΔＡ）／ΔＢ｝｝×１００
【００８３】
（iii）嗜好性
上記希釈液１ｍＬを、５０ｍＬの蒸留水に溶解した（アセロラ発酵エキス末溶液とする）。これとは別に、アセロラピューレをろ過し、凍結乾燥して得られた乾燥粉末１ｇを蒸留水５０ｍＬに溶解した（アセロラ搾汁末溶液とする）。６人のパネラーに、アセロラ発酵エキス末溶液とアセロラ搾汁末溶液とについて以下の評価基準で評価してもらった。なお、表２中の数値は、それぞれ回答した人数を示す。
評価基準：
アセロラ発酵エキス末溶液のほうが明らかに香りおよび風味がよい ：○
アセロラ発酵エキス末溶液のほうが香りおよび風味がよいと思われる：△
特に差はない ：×
【００８４】
（比較例２）
アセロラ発酵エキス末の代わりに、アセロラピューレの濾過液を凍結乾燥して得られた乾燥粉末（アセロラ搾汁末）を用いたこと以外は、実施例７と同様にして、チロシナーゼ阻害率およびリパーゼ阻害率を求めた。結果を表２に併せて示す。
【００８５】
（比較例３）
希釈液の代わりに、アスコルビン酸を０．１１ｍｇ／ｍＬ含有する水溶液を用いたこと以外は、実施例７と同様にして、チロシナーゼ阻害率を求めた。結果を表２に併せて示す。
【００８６】
【表２】


【００８７】
表２の結果から、実施例のアセロラ発酵エキス末は、比較例のアセロラ搾汁末に比べて、チロシナーゼ阻害作用およびリパーゼ阻害作用に優れることがわかる。さらに比較例のアスコルビン酸に比べて、チロシナーゼ阻害作用に優れることがわかる。チロシナーゼ阻害作用については、特に、実施例７、８、および１２〜１４のアセロラ発酵エキス末が、比較例２のアセロラ搾汁末に比べて約１．２倍〜２．８倍高く、比較例３のアスコルビン酸に比べても約１．５倍〜３．５倍高かった。このことは、アセロラ発酵エキス末中のアスコルビン酸以外の成分が高いチロシナーゼ阻害作用を発揮することを示す。他方、リパーゼ阻害作用については、実施例のアセロラ発酵エキス末が、比較例のアセロラ搾汁末に比べて約１．２倍〜１．８倍高かった。以上のことから、本発明のアセロラ発酵物は、脂質代謝調整剤および／または美白剤として利用できると考えられる。さらに、嗜好性については、いずれの実施例においても、発酵によって風味がよくなる傾向（評価△以上が半数以上）にあり、風味改善剤としても利用することが可能である。
【００８８】
（実施例１５および１６：ヒアルロニダーゼ阻害作用）
実施例１の試験１（ＬＰＶ、前処理なし）および実施例２の試験１（ＬＣ、前処理なし）で得られた２種類のアセロラ発酵エキス末０．４ｇをそれぞれ精製水１０ｍＬに溶解し、さらに１００倍希釈して希釈液を調製した。この希釈液１００μＬに、終濃度１４０ｕｎｉｔ／ｍＬに調製したヒアルロニダーゼ（シグマアルドリッチジャパン社製）および０．１Ｍの酢酸緩衝溶液（ｐＨ４．０）５０μＬを加えて３７℃にて２０分間保持した。さらに、０．１Ｍの酢酸緩衝溶液（ｐＨ４．０）で０．１ｍｇ／ｍＬに調製されたＣｏｍｐｏｕｎｄ４８／８０（シグマアルドリッチジャパン社製）溶液を１００μＬ加えて３７℃にて２０分間保持した。そして、さらに０．１Ｍの酢酸緩衝溶液（ｐＨ４．０）で０．６４ｍｇ／ｍＬに調製されたヒアルロン酸ナトリウム（和光純薬工業株式会社製）溶液を２５０μＬ加えて３７℃にて４０分間反応させた。反応後、０．４Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を１００μＬ加え、氷冷した。この反応液に、４９．５ｍｇ／ｍＬのホウ酸緩衝液（ｐＨ９．１）を１００μＬ加えて３分間煮沸し、再度氷冷した。氷冷後、１０ｍｇ／ｍＬに調製したｐ−ジメチルベンズアルデヒド（ｐ−ＤＢＡ）（和光純薬工業株式会社）を３ｍＬ加えて３７℃にて２０分間反応後、６５０ｎｍの吸光度を測定した（測定値（ａ）とする）。対照として、上記希釈液の代わりに、蒸留水を用いたこと以外は上記と同様に行い、吸光度を測定した（測定値（ｂ）とする）。なお、測定値（ａ）および（ｂ）は、ブランクとして、上記ヒアルロニダーゼの代わりに１／１５Ｍリン酸緩衝液を用いたこと以外は上記と同様に行って得た各溶液の吸光度の各値を予め差し引いた値である。上記測定値（ａ）および（ｂ）を用いて、以下の式からヒアルロニダーゼ阻害率（％）を求めた。結果を表３に示す。
ヒアルロニダーゼ阻害率（％）＝{１−（ａ／ｂ）}×１００
【００８９】
（比較例４）
アセロラ発酵エキス末の代わりに、アセロラピューレの濾過液を凍結乾燥して得られた乾燥粉末（アセロラ搾汁末）を用いたこと以外は、実施例１３と同様にして、ヒアルロニダーゼ阻害率を求めた。結果を表３に併せて示す。
【００９０】
【表３】


【００９１】
表３の結果から、実施例のアセロラ発酵エキス末は、アセロラ搾汁末に比べて、ヒアルロニダーゼ阻害作用が高いことがわかる（アセロラ搾汁末の約１．２倍）。このことは、発酵によってヒアルロニダーゼ阻害作用が高められることを示す。以上のことから、本発明のアセロラ発酵物は、肌質改善剤として、食品、医薬品、化粧品等に使用することが期待できる。
【００９２】
（実施例１７：血中脂質改善効果１）
アセロラ発酵エキス末を用いて、血中の中性脂肪上昇抑制作用を以下のように評価した。まず、４週齢雄性ＳＤラット３０匹を標準飼料（ＭＦ，オリエンタル酵母工業株式会社製）を用いて１週間馴化した。ＳＤラットを１６時間絶食させ、眼窩静脈より採血し、血清中のトリグリセリド（以下、血中ＴＧという）をＴＧ測定キット（商品名：トリグリセライドＧ−テストワコー、和光純薬工業株式会社）を用いて測定した。血中ＴＧの平均値（投与前の血中ＴＧ値とする）がほぼ均一となるように１群６匹の計５群（ラット群１〜５）に分けた。
【００９３】
次いで、ラット群１のラットに、綿実油０．５ｍＬをゾンデで強制経口投与し、その直後に、実施例４の試験５で得られたアセロラ発酵エキス末（ＢＬ、中和処理）を４０ｍｇ／ｍＬの割合で含有する精製水（試験液１）を固形分含量で１００ｍｇ／ｋｇ体重となるようにゾンデで経口投与した。
【００９４】
ラット群２のラットには、試験液１の代わりに、実施例５の試験５で得られたアセロラ発酵エキス末（ＬＡ、中和処理）を４０ｍｇ／ｍＬの割合で含有する水溶液（試験液２）を投与した。
【００９５】
ラット群３のラットには、試験液１の代わりに、比較例２で得られたアセロラ搾汁末を４０ｍｇ／ｍＬの割合で含有する精製水（試験液４）を固形分含量で４００ｍｇ／ｋｇ体重となるように投与した。
【００９６】
ラット群４のラットには、試験液１の代わりに、グアバポリフェノール（備前化成社製）を４０ｍｇ／ｍＬの割合で含有する精製水（試験液４）を固形分含量で４００ｍｇ／ｋｇ体重となるように投与した。
【００９７】
残りのラット群５のラットには、試験液１の代わりに、精製水（試験液５）を投与した。
【００９８】
上記試験液投与１時間、２時間、および４時間後に、各群のラットの眼窩静脈から採血し、血中ＴＧを測定し、投与前の血中ＴＧの値を１００％としたときの割合を血中ＴＧの変化率（％）として算出した。結果を図１に示す。なお、血中ＴＧの変化率が小さいほど、血中ＴＧの上昇が抑制されていることを示す。
【００９９】
図１の結果から、実施例で得られたアセロラ発酵エキス末を投与した群（ラット群１および２）は、比較例２で得られたアセロラ搾汁末を投与した群（ラット群３）または精製水を投与した群（ラット群５）に比べて、血中ＴＧの変化率が小さく、血中ＴＧの上昇が抑制されていることがわかる。このことは、アセロラを発酵することによって、優れた血中の中性脂肪上昇抑制作用が得られることを示す。さらに、アセロラ発酵エキス末を投与した群（ラット群１および２）の血中ＴＧの変化率は、血中脂質改善作用が知られているグアバポリフェノールを投与した群（ラット群４）の血中ＴＧの変化率とほぼ同等であった。このことは、アセロラ発酵エキス末の投与量が１００ｍｇ／ｋｇ体重であるのに対して、グアバポリフェノールの投与量が４００ｍｇ／ｋｇ体重であることを考慮すると、アセロラ発酵物が優れた血中の中性脂肪の上昇を抑制する作用を有することが分かる。
【０１００】
（実施例１８：血中脂質改善効果２）
アセロラ発酵エキス末を用いて、血中のコレステロール改善作用を以下のように評価した。まず、４週齢雄性ＳＤラット３０匹を標準飼料（ＭＦ，オリエンタル酵母工業株式会社製）を用いて１週間馴化した。ＳＤラットを１６時間絶食させ、眼窩静脈より採血し、血清中の総コレステロール量（以下、血中Ｔ−Ｃｈｏという）を測定キット（商品名：コレステロールＥ−ワコー、和光純薬工業株式会社）を用いて測定した。血中Ｔ−Ｃｈｏの平均値（投与前の血中Ｔ−Ｃｈｏ値とする）がほぼ均一となるように１群６匹の計５群に分けた。
【０１０１】
各群のラットに、綿実油０．５ｍＬをゾンデで強制経口投与し、その直後に、実施例１７と同様の試験液１〜５を固形分含量で４００ｍｇ／ｋｇ体重となるようにゾンデで経口投与した。上記試験液投与１時間後および２時間後に、各群のラットの眼窩静脈から採血し、血中Ｔ−Ｃｈｏを測定し、投与前の血中Ｔ−Ｃｈｏの値を１００％としたときの割合を、血中Ｔ−Ｃｈｏの低下率（％）として算出した。結果を図２に示す。なお、血中Ｔ−Ｃｈｏの低下率が大きいほど、血中コレステロール改善作用に優れることを示す。
【０１０２】
図２の結果から、実施例で得られたアセロラ発酵エキス末を投与した群は、比較例２で得られたアセロラ搾汁末を投与した群または精製水を投与した群に比べて、血中Ｔ−Ｃｈｏの低下率が大きく、血中のコレステロールが低下していることがわかる。このことは、アセロラを発酵することによって、優れた血中コレステロール改善作用が得られることを示す。なお、実施例で得られたアセロラ発酵エキス末を投与した群の血中Ｔ−Ｃｈｏの低下率は、グアバポリフェノールを投与した群の血中Ｔ−Ｃｈｏの低下率に比べて、同等以下であった。
【０１０３】
（実施例１９：美白効果）
６週齢の雄性マウス（ＤＢＡ／２Ｎ）２０匹を標準飼料（ＭＦ飼料、オリエンタル酵母工業株式会社）を用いて１週間馴化した。これらのマウスを平均体重がほぼ均一となるようにすること以外はランダムに１群４匹の５群にわけた。
【０１０４】
５群のマウスのうちの４群に、実施例４の試験５で得られたアセロラ発酵液（ＢＬ、中和処理）、実施例５の試験５で得られたアセロラ発酵液（ＬＡ、中和処理）、実施例６の試験５で得られたアセロラ発酵液（ＢＭ、中和処理）、および比較例２で得られたアセロラピューレの濾過液をそれぞれ、含有されるアスコルビン酸が乾燥質量換算で０．７ｍｇ／Ｋｇ体重の割合となるようにゾンデで強制経口投与した。その後、紫外線が９０ｍＪ／ｃｍ２となるように、マウスの耳介部に照射した。なお、残りの１群のマウスは、発酵液または濾過液の代わりに、精製水を強制経口投与した（対照群）。この経口投与後、紫外線照射する試験を１日１回の頻度で１０日間行った。
【０１０５】
試験期間終了後、マウスから右の耳介部を採取し、耳介部の表皮を得た。この耳介部の表皮を０．１Ｍリン酸緩衝液（１／１５Ｍリン酸緩衝液、和光純薬工業社製）にて洗浄した後、１Ｍ臭化ナトリウム水溶液(和光純薬工業社製)に浸漬し、３７℃、５時間インキュベートし、０．１Ｍリン酸緩衝液にてさらに洗浄した。この表皮を１０％ホルマリン水溶液(和光純薬工業社製)に浸漬して、室温にて３０分間固定した後、０．１ＭＤＯＰＡ（L-β-3,4-dihydroxy-phenyl-alanine、和光純薬工業社製）を含有する０．１Ｍリン酸緩衝溶液に浸漬し、３７℃にて５時間インキュベートし、ＤＯＰＡ染色を行った。その後、３Ｍ水酸化ナトリウム水溶液(和光純薬工業社製)に移し、 ３７℃にて１〜２時間インキュベートして薄膜化した皮膚をグリセロール(和光純薬工業社製)にて封入し、スライド標本を得た。このスライド標本の４箇所を任意に選択し、倒立型光学顕微鏡（ＩＸ７０、オリンパス光学工業社製）を用いて、ＤＯＰＡ陽性メラノサイト数を測定し、平均値を求めた。この平均値をメラニン顆粒含有メラノサイト数とした。結果を図３に示す。
【０１０６】
図３の結果から、実施例で得られたアセロラ発酵液を投与した群は、比較例２で得られたアセロラピューレの濾過液を投与した群に比べて、メラノサイト数が減少していることがわかる。このことは、アセロラを発酵することによって得られるアセロラ発酵物が、紫外線照射によって引き起こされるメラノサイトの増加を抑制し、優れた美白効果を有することを示す。中和処理後に得られたアセロラ発酵液を投与した群の中でも、特に、実施例４の試験５で得られたアセロラ発酵液（ＢＭ、中和処理）、実施例６の試験５で得られたアセロラ発酵液（ＢＭ、中和処理）、および実施例５の試験５で得られたアセロラ発酵液（ＬＡ、中和処理）の順で美白効果に優れていた。
【０１０７】
（実施例２０）
アセロラピューレ１ｋｇと精製水１ｋｇとを混合した後、気流式殺菌装置（株式会社奈良製作所）に入れ、１１０℃にて１分間加熱した。室温になるまで放置した後、この混合物をジャケットつきタンクに投入した。これにグルコースを最終濃度が５質量％となるように添加した。次いで、湿質量で４ｇのパン酵母（オリエンタル酵母工業株式会社）を添加して、３０℃にて４８時間発酵した。発酵終了後に濾過し、デキストリンを２４０ｇ添加し、噴霧乾燥によりアセロラ発酵エキス末を２８０ｇ得た。
【０１０８】
（実施例２１）
実施例１の試験１（ＬＰＶ、前処理なし）で得られたアセロラ発酵エキス末を用いて以下の食品（錠剤：１００ｍｇ）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。
＜錠剤の配合成分＞ 配合量（質量％）
アセロラ発酵エキス末 ２０
ビタミンミックス（日本香料薬品社製） ５
結晶セルロース １０
ショ糖エステル ４
還元麦芽糖 ３０
二酸化ケイ素 １
卵殻カルシウム ３０
【０１０９】
（実施例２２）
実施例２の試験１（ＬＣ、前処理なし）で得られたアセロラ発酵エキス末を用いて、以下の食品（顆粒品）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。
＜顆粒品の配合成分＞ 配合量（質量％）
アセロラ発酵エキス末 ３０
還元麦芽糖 ３０
難消化性デキストリン ２０
トレハロース ２０
【０１１０】
（実施例２３）
実施例４の試験２（ＢＬ、酵素処理（セルラーゼＡ））で得られたアセロラ発酵エキス末を用いて、以下の食品（飲料）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。この飲料は、嗜好性もよく、美容効果も期待される。
＜飲料の配合成分＞ 配合量（１Ｌあたり）
アセロラ発酵エキス末 ２ｇ
果糖ブドウ糖液糖 １０ｇ
レモン果汁 １０ｇ
クエン酸 ２ｇ
香料 １５０ｍｇ
グリシン １００ｍｇ
プロリン １００ｍｇ
アラニン ８０ｍｇ
純水 残量
【０１１１】
（実施例２４）
実施例６の試験１（ＢＭ、前処理なし）で得られたアセロラ発酵エキス末を用いて、以下の食品（カプセル剤）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。
＜カプセル剤の配合成分＞ 配合量（質量％）
アセロラ発酵エキス末 ９８
ビタミンＥ ２
【０１１２】
（実施例２５）
実施例５の試験５（ＬＡ、中和処理）で得られたアセロラ発酵エキス末を用いて、以下の化粧品（化粧水）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。この化粧水は、アセロラ発酵エキス末を含有することで、新陳代謝促進、美白効果が期待される。
＜化粧水の配合成分＞ 配合量
アセロラ発酵エキス末 ０．０１ｇ
グリセリン ８ｇ
プロピレングリコール ５ｇ
オレイルアルコール ０．１ｇ
ポリオキシエチレンラウリルエーテル １ｇ
エタノール ５ｇ
フェノキシエタノール ０．１ｇ
クエン酸ナトリウム ０．５ｇ
精製水 ８０．３ｇ
【０１１３】
（実施例２６）
実施例１の試験１（ＬＰＶ、前処理なし）および実施例４の試験５（ＢＬ、中和処理）で得られたアセロラ発酵エキス末を用いて、以下の化粧品（クリーム）を製造した。配合成分および配合量を以下に示す。
＜クリームの配合成分＞ 配合量
アセロラ発酵エキス末（実施例１の試験１） ０．２ｇ
アセロラ発酵エキス末（実施例４の試験５） ０．１ｇ
マイクロクリスタリンワックス ３ｇ
ラノリン ３ｇ
ワセリン ５ｇ
スクワラン ９ｇ
オリーブ油 １２ｇ
セスキオレイン酸ソルビタン ３ｇ
トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １ｇ
ソルビトール ９ｇ
クエン酸ナトリウム ０．３ｇ
精製水 ５４．８ｇ
香料 適量
【産業上の利用可能性】
【０１１４】
本発明のアセロラ発酵物は、アセロラ果実またはその破砕物を発酵することによって得られ、該アセロラ果実に含まれるアスコルビン酸またはその誘導体を乾燥質量換算で２質量％以上含有する。このアセロラ発酵物は、優れたチロシナーゼ阻害作用、リパーゼ活性阻害作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用などの優れた生理活性を有する。さらに香りおよび風味がよく嗜好性に優れる。このアセロラ発酵物は、食品、医薬部外品、化粧品、トイレタリー用品などに広く適用し得る。特に、脂質代謝調整剤および／または美白剤などに利用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】ラットに、２種類のアセロラ発酵エキス末含有液、アセロラ搾汁末含有液、グアバポリフェノール含有液、および精製水をそれぞれ投与した場合の、血中の中性脂肪の変化率の推移を示すグラフである。
【図２】ラットに、２種類のアセロラ発酵エキス末含有液、アセロラ搾汁末含有液、グアバポリフェノール含有液、および精製水をそれぞれ投与した場合の、血中の総コレステロール量の低下率の推移を示すグラフである。
【図３】ラットに、３種類のアセロラ発酵液、アセロラピューレの濾液、および精製水をそれぞれ投与した場合の、メラノサイト数を示すグラフである。
【出願人】 【識別番号】３９８０２８５０３
【氏名又は名称】株式会社東洋新薬
【住所又は居所】福岡県福岡市博多区博多駅前２丁目１９番２７号 九勧リクルート博多ビル６階
【識別番号】０００１３４９７０
【氏名又は名称】株式会社ニチレイ
【住所又は居所】東京都中央区築地６丁目１９番２０号
【出願日】 平成１７年２月７日（２００５．２．７）
【代理人】 【識別番号】１００１０４６７３
【弁理士】
【氏名又は名称】南條 博道
【公開番号】 特開２００５−２５３４６３（Ｐ２００５−２５３４６３Ａ）
【公開日】 平成１７年９月２２日（２００５．９．２２）
【出願番号】 特願２００５−３０３３６（Ｐ２００５−３０３３６）