| 【発明の名称】 |
ＴＧＦβ作用抑制剤 |
| 【発明者】 |
【氏名】竹鼻 健司
【住所又は居所】神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の素株式会社内
【氏名】二木 史恵
【住所又は居所】神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の素株式会社内
【氏名】小野 幸胤
【住所又は居所】神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の素株式会社内
【氏名】飯野 幸生
【住所又は居所】神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の素株式会社内
【氏名】小林 幹
【住所又は居所】神奈川県川崎市川崎区鈴木町１−１ 味の素株式会社内
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| 【要約】 |
【課題】ＴＧＦβが関与する組織線維化を予防、または治療するのに有効な薬剤を提供することである。
【解決手段】シクロプロパンカルボン酸アミド化合物または製薬学的に許容されるその塩を有効成分とするＴＧＦβ作用抑制剤。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示されるシクロプロパンカルボン酸アミド化合物またはその製薬学的に許容される塩を有効成分として含有するＴＧＦβ作用抑制剤。
【化１】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ同じでも異なってもよく、アルキル基またはハロゲン原子を示し、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ同じでも異なってもよく、水素原子またはアルキル基を示し、Ｒ５は置換基を有してもよいシクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基を示し、Ｂ１，Ｂ２はそれぞれ同じでも異なってもよく、置換基を有してもよい芳香環または置換基を有してもよい芳香族複素環を示し、−Ｘ−は、原子間結合、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ６−、−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＲ７−、−ＮＲ８−ＣＯ−、−ＣＲ９Ｒ１０−、−Ｏ−ＣＨＲ１１−、−ＣＨＲ１２−Ｏ−、−Ｓ−ＣＨＲ１３−、−ＣＨＲ１４−Ｓ−（ここで、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は水素原子、アルキル基、またはアシル基のいずれかを示し、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４はそれぞれ同じでも異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、置換基を有してもよいアルキル基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アシルオキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、アミノ保護基で置換されたアミノ基、カルボキシル基アルコキシカルボニル基、アミノカルボニル基、またはシアノ基を示す）を示し、−Ｙ−は−ＣＯ−または−ＣＨ２−を示し、ｎは０〜６から選ばれる整数を示す。〕
【請求項２】
一般式（Ｉ）の−Ｘ−が、−Ｏ−，−Ｓ−，−ＮＨ−，−ＣＨ２−，−ＣＨ（ＯＨ）−、または−Ｓ−ＣＨ２−のいずれかである請求項１記載ＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項３】
一般式（Ｉ）のＢ１およびＢ２が、共にベンゼン環である請求項２記載のＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項４】
一般式（Ｉ）のＢ１が、置換基を有してもよいピジリン、置換基を有してもよいピリミジンのいずれかを示し、Ｂ２が、置換基を有してもよいベンゼン環である請求項３記載のＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項５】
一般式（Ｉ）のＲ１、Ｒ２がそれぞれ同じでも異なってもよく、メチル基または塩素原子であり、Ｒ３が２，２−ジメチルシクロプロピル基または２，２−ジクロロシクロプロピル基のいずれかであり、−Ｙ−が−ＣＯ−であり、ｎ＝０である請求項４記載のＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項６】
一般式（Ｉ）のＲ１、Ｒ２がそれぞれ同じでも異なってもよく、メチル基または塩素原子であり、Ｒ３が置換基を有してもよいアリール基または置換基を有してもよいヘテロアリール基であり、−Ｙ−が−ＣＯ−であり、ｎが０〜３から選ばれる整数である請求項４記載のＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項７】
一般式（Ｉ）のＲ１、Ｒ２がそれぞれ同じでも異なってもよく、メチル基または塩素原子であり、Ｒ３が置換基を有してもよいアリール基または置換基を有してもよいヘテロアリール基であり、−Ｙ−が−ＣＨ２−であり、ｎが０〜３から選ばれる整数である請求項４記載のＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項８】
一般式（Ｉ）のＲ３、Ｒ４が水素原子である請求２〜７のいずれか１項記載のＴＧＦβ作用抑制剤。
【請求項９】
一般式（Ｉ）で示されるシクロプロパンアミド誘導体が下記の式で示される化合物であるＴＧＦβ作用抑制剤。
【化２】
【化３】
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項記載のＴＧＦβ作用抑制剤を有効成分とする、臓器組織線維化の予防薬または治療薬。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれか１項記載のＴＧＦβ作用抑制剤を有効成分とする、肺線維症、肝硬変、動脈硬化症、強皮症、経皮経管冠動脈血管拡張術後の冠動脈再狭窄、間質性肺炎、間質性心筋炎、間質性膀胱炎、糸球体腎炎、血管炎、糖尿病性腎症、高血圧性腎硬化症、ＨＩＶ腎症、ＩｇＡ腎症、ループス腎症、間質性腎炎、尿管閉塞による閉塞腎、または熱傷後の皮膚瘢痕化に伴う線維化いずれかの予防薬または治療薬。
【請求項１２】
請求項１〜９のいずれか１項記載のＴＧＦβ作用抑制剤を有効成分とする、薬剤投与により引き起こされる線維化の予防薬または治療薬。
【請求項１３】
薬剤が、抗腫瘍剤、抗生剤、抗菌剤、抗不整脈剤、消炎剤、抗リウマチ剤、インターフェロン又は小柴胡湯である、請求項１１記載の線維化の予防薬または治療薬。
【請求項１４】
請求項１〜９のいずれか１項記載のＴＧＦβ作用抑制剤を有効成分とする、抗腫瘍剤投与に伴う肺線維症の予防薬または治療薬。
【請求項１５】
請求項１〜９のいずれか１項記載のＴＧＦβ作用抑制剤を有効成分とする、ＴＧＦβによるα平滑筋型アクチン（αＳＭＡ）の産生増強作用、ＴＧＦβによるコラーゲンの産生増強作用、またはＴＧＦβによるプラスミノーゲンアクチベーター阻害因子１（ＰＡＩ−１）の産生増強作用いずれかの抑制剤。
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【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は難治性かつ進行性の臓器障害を引き起こす種々の線維化疾患を、予防または治療するのに有効なＴＧＦβ作用抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
臓器の線維化は、炎症などにより障害を受けた組織の修復反応が何らかの理由により正常性を失った結果、過剰な組織修復として引き起こされる。線維化した臓器は著しい機能障害を伴い、臓器特異的に種々の難治性疾患の原因となる。このような線維化が原因となる疾患としては、肺線維症、肝硬変、動脈硬化症、強皮症、経皮経管冠動脈血管拡張術後の冠動脈再狭窄、間質性肺炎、間質性心筋炎、間質性膀胱炎、糸球体腎炎、血管炎、糖尿病性腎症、高血圧性腎硬化症、ＨＩＶ腎症、ＩｇＡ腎症、ループス腎症、間質性腎炎、尿管閉塞による閉塞腎、熱傷後の皮膚瘢痕化などの疾患が挙げられる。
線維化疾患の成因の共通機序は過剰な組織修復反応であり次のように考えられている。ある種の炎症性病変が先行した後に、その修復過程において主として免疫担当細胞や血小板などから、種々のサイトカイン・増殖因子が産生・活性化され、それらが線維芽細胞の増殖や活性化、形質転換を促進し、またコラーゲンなどの細胞外基質の沈着を起こす。この過程において過剰な修復反応が惹き起こされると、組織の線維化が進行する。なかでもＴＧＦβは種々の線維化疾患の成因に共通のサイトカインとして、その役割が強調されている。ＴＧＦβは血管内皮細胞や上皮細胞、リンパ球細胞には増殖抑制作用を示す一方で、線維芽細胞には増殖を促進し、また平滑筋αアクチン（αＳＭＡ）などを発現する筋線維芽細胞への形質転換を促す。さらにコラーゲンなどの細胞外基質の合成を強力に増加させ、同時にプラスミノーゲアクチベータ阻害因子（ＰＡＩ−１）などの線溶系阻害物質の産生を亢進するなど、組織線維化の原因となる分子である。
それゆえ、線維化疾患の治療を目的として、ＴＧＦβの中和抗体や受容体拮抗物質がさかんに研究されているが、未だ有効な治療手段は見出されていない。
【０００３】
一方、本発明で用いるシクロプロパンカルボン酸アミド化合物は、公開特許（ＷＯ００／１５６０３およびＷＯ０１／０２３５９）に記載されており、その作用としてはＮＦ−ｋａｐｐａＢ阻害活性が知られているが、本発明で対象とするＴＧＦβ作用抑制効果については開示されていない。一般に、ＴＧＦβ作用により細胞内で引き起こされるシグナル伝達経路は、ＮＦ−ｋａｐｐａＢの活性化に関わる経路とは異なることが知られており、本発明で用いるシクロプロパンカルボン酸アミド化合物がＴＧＦβ作用を抑制することは類推できない。
また本発明と類似の骨格を有するシクロプロパンカルボン酸アミド化合物としては、たとえば公開特許（ＷＯ９９／６１０１３）に下記化合物の記載があるが、本発明で対象とするＴＧＦβ作用抑制効果については開示されていない。
【０００４】
【化４】
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、ＴＧＦβ刺激による組織線維化の促進作用を選択的に抑制する薬剤を開発し提供する事である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
発明者らは、ＴＧＦβによる臓器組織の線維化促進作用を抑制する薬物を見出すべく鋭意検討した結果、一般式（Ｉ）で示されるシクロプロパンカルボン酸アミド化合物がＴＧＦβ作用を強く抑制することを見いだし、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、下記一般式（Ｉ）で示されるシクロプロパンカルボン酸アミド化合物または製薬学的に許容されるその塩を有効成分とするＴＧＦβ作用抑制剤を提供する。
【０００７】
【化５】
〔式中、Ｒ１、Ｒ２はそれぞれ同じでも異なってもよく、アルキル基またはハロゲン原子を示し、Ｒ３、Ｒ４はそれぞれ同じでも異なってもよく、水素原子またはアルキル基を示し、Ｒ５は置換基を有してもよいシクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基を示し、Ｂ１，Ｂ２はそれぞれ同じでも異なってもよく、置換基を有してもよい芳香環または置換基を有してもよい芳香族複素環を示し、−Ｘ−は、原子間結合、−Ｏ−、−Ｏ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ６−、−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＲ７−、−ＮＲ８−ＣＯ−、−ＣＲ９Ｒ１０−、−Ｏ−ＣＨＲ１１−、−ＣＨＲ１２−Ｏ−、−Ｓ−ＣＨＲ１３−、−ＣＨＲ１４−Ｓ−（ここで、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は水素原子、アルキル基、またはアシル基のいずれかを示し、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４はそれぞれ同じでも異なってもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、置換基を有してもよいアルキル基、メルカプト基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アシルオキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、アミノ保護基で置換されたアミノ基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノカルボニル基、またはシアノ基を示す）を示し、−Ｙ−は−ＣＯ−または−ＣＨ２−を示し、ｎは０〜６から選ばれる整数を示す。〕
【０００８】
【発明の実施の形態】
一般式（Ｉ）中、ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子があげられる。
アルキル基とは、炭素数１〜６、好ましくは炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐鎖状のアルキル基を示し、具体的には例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ネオペンチル基、２−ペンチル基、３−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、２−ヘキシル基などがあげられ、好ましくはメチル基、エチル基などがあげられる。
【０００９】
シクロアルキル基とは、炭素数３〜６の環状のアルキル基を示し、具体的には例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などがあげられ、より好ましくはシクロプロピル基があげられる。
アリール基とは、炭素原子で構成される単環または２環の芳香環からなる置換基を示し、具体的には例えばフェニル基、インデニル基、ナフチル基などがあげられ、好ましくはフェニル基があげられる。
アラルキル基とは、アリール基で置換されたアルキル基を示し、そのアリール基の例は前記「アリール基」で示したものがあげられ、そのアリール基上には置換基を有していてもよい。具体的にはベンジル基、フェネチル基、フェニルプロピル基などがあげられ、好ましくはベンジル基があげられる。
【００１０】
ヘテロアリール基とは、炭素、窒素、酸素、およびイオウなどで構成される５〜７員の１〜３環の芳香族複素環からなる置換基をあらわし、具体的には例えば、ピラニル基、ピリジル基、ピリダジル基、ピリミジル基、ピラジル基、フリル基、チエニル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、ピラゾリル基、フラザニル基、チアジアゾリル基、インドリル基などがあげられ、好ましくはピリジル基、ピリミジル基、ピラジル基、イミダゾリル基、トリアゾリル基であり、より好ましくはピリジル基である。
芳香環とは、炭素原子で構成される単環または２つの環からなる芳香環をあらわし、具体的には例えばベンゼン環、ナフタレン環、インデン環などがあげられ、好ましくはベンゼン環があげられる。
芳香族複素環とは、炭素および窒素、酸素、イオウなどで構成される５〜７員の１〜３つの環からなる芳香族複素環をあらわし、具体的には例えば、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環、ピロール環、フラン環、チオフェン環、オキサゾール環、イソオキサゾール環、ピラゾール環、イミダゾール環、チアゾール環、イソチアゾール環、チアジアゾール環、フラザン環、インドール環、イソインドール環、ベンゾフラン環、イソベンゾフラン環、ベンゾチオフェン環、ベンゾピラゾール環、ベンゾイミダゾール環、ベンゾオキサゾール環、ベンゾチアゾール環、プリン環、ピラゾロピリジン環、キノリン環、イソキノリン環、ナフチリジン環、キナゾリン環、ベンゾジアゼピン環、カルバゾール環、ジベンゾフラン環などがあげられる。
【００１１】
アシル基とは、ホルミル基、または炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖もしくは環状のアルキル基を有するアシル基、または置換基を有してもよいアリール基を有するアシル基であり、具体的には例えばホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、バレリル基、イソバレリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、アクリロイル基、メタクリロイル基、クロトノイル基、イソクロトノイル基、ベンゾイル基、ナフトイル基などがあげられる。
アルコキシ基とは、炭素数１〜６、好ましくは炭素数１〜３の直鎖または分岐鎖または環状のアルキル基を有するアルコキシ基を示し、具体的には例えばメトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、シクロプロピルオキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、トリフルオロメトキシ基などがあげられ、好ましくはメトキシ基、エトキシ基などがあげられる。
【００１２】
アリールオキシ基とは、酸素原子上に置換基を有してもよいアリール基が置換したアリールオキシ基を示し、そのアリール基の例は前記「アリール基」で示したものがあげられる。具体的には例えばフェノキシ基、インデニルオキシ基、１−ナフチルオキシ基、２−ナフチルオキシ基などがあげられ、好ましくはフェノキシ基があげられる。
アルキルチオ基とは、炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖状または環状のアルキル基を有するアルキルチオ基を示し、具体的には例えばメチルチオ基、エチルチオ基、ｎ−プロピルチオ基、イソプロピルチオ基、ｎ−ブチルチオ基、イソブチルチオ基、ｓｅｃ−ブチルチオ基、ｔｅｒｔ−ブチルチオ基、シクロプロピルチオ基、シクロブチルチオ基、シクロペンチルチオ基、シクロブチルチオ基などがあげられる。
【００１３】
アリールチオ基とは、硫黄原子上に置換基を有してもよいアリール基が置換したアリールチオ基を示し、そのアリール基の例は前記「アリール基」で示したものがあげられる。具体的には例えばフェニルチオ基、インデニルチオ基、１−ナフチルチオ基、２−ナフチルチオ基などがあげられ、好ましくはフェニルチオ基があげられる。
アシルオキシ基とは、ホルミルオキシ基、または炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐鎖もしくは環状のアルキル基を有するアシルオキシ基、または置換されていてもよいアリール基を有するアシルオキシ基を示し、具体的には例えばホルミルオキシ基、アセチルオキシ基、プロピオニルオキシ基、ブチリルオキシ基、イソブチリルオキシ基、バレリルオキシ基、イソバレリルオキシ基、ピバロイルオキシ基、ヘキサノイルオキシ基、アクリロイルオキシ基、メタクリロイルオキシ基、クロトノイルオキシ基、イソクロトノイルオキシ基、ベンゾイルオキシ基、ナフトイルオキシ基などがあげられる。
【００１４】
アルキルアミノ基とは、アルキル基で一置換もしくは二置換されたアミノ基であり、そのアルキル基の例は前記「アルキル基」で示したものがあげられる。具体的には例えば、アミノ基、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、イソプロピルアミノ基、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基、メチルエチルアミノ基などがあげられる。
「アミノ保護基で置換されたアミノ基」におけるアミノ保護基とは、通常用いられる保護基であり、アミノ基を諸反応から保護するものであれば特に限定されない。具体的には、ホルミル基、アセチル基、ピバロイル基などのアシル基、またはメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基、（フルオレン−９−イル）メトキシカルボニル基などのアルコキシカルボニル基などがあげられる。
アルコキシカルボニル基とは、炭素数１〜６の直鎖または分岐鎖または環状のアルキル基を有するアルコキシカルボニル基を示し、具体的には例えばメトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、イソプロポキシカルボニル基、ｎ−ブトキシカルボニル基、イソブトキシカルボニル基、ｓｅｃ−ブトキシカルボニル基、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基などがあげられる。
【００１５】
置換基を有してもよいとは、置換基を有しない場合、および置換基を有する場合には少なくとも１個以上の置換基により置換されていることを示し、該置換基は同一または異なっていてもよく、また置換基の位置は任意であって、特に限定されるものではない。置換基として具体的には例えば、ハロゲン原子、水酸基、アルキル基、アリール基、アラルキル基、メルカプト基、アルコキシ基、アリールオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アシル基、アシルオキシ基、アミノ基、アルキルアミノ基、アミノ保護基で置換されたアミノ基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、アミノカルボニル基、ニトロ基、トリフルオロメチル基、またはシアノ基などがあげられる。
【００１６】
本発明では、一般式（Ｉ）で表されるシクロプロパンカルボン酸アミド化合物またはその製薬学的に許容される塩としては、式中、次のものが好ましい。
【００１７】
Ｒ１、Ｒ２してはメチル基、塩素原子、臭素原子が好ましく、メチル基、塩素原子がより好ましく、メチル基がさらに好ましい。
Ｒ３、Ｒ４としては水素原子またはメチル基が好ましく、水素原子がより好ましい。
Ｒ５としては２，２−ジメチルシクロプロピル基、２，２−ジクロロシクロプロピル基、置換基を有してもよいアリール基または置換基を有してもよいヘテロアリール基が好ましく、２，２−ジメチルシクロプロピル基、２，２−ジクロロシクロプロピル基がより好ましい。
Ｂ１、Ｂ２としては置換基を有してもよい芳香環または置換基を有してもよい芳香族複素環が好ましく、置換基を有してもよいベンゼン環、置換基を有してもよいピリジン環、置換基を有してもよいピリミジン環がより好ましく、置換基を有してもよいベンゼン環、置換基を有してもよいピリジン環がさらに好ましい。特にＢ１およびＢ２が、共にベンゼン環であるのが好ましく、又は、Ｂ１またはＢ２の少なくとも一方が、置換基を有してもよいベンゼン環ではないのが好ましく、又は、Ｂ１またはＢ２の少なくとも一方が、置換基を有してもよい芳香族複素環であるのが好ましく、又は、Ｂ１が、置換基を有してもよいピリジン環、置換基を有してもよいピリミジン環のいずれかを示し、Ｂ２が、置換基を有してもよいベンゼン環であるのが好ましい。
−Ｘ−としては−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−Ｓ−ＣＨ２−が好ましい。
−Ｙ−としては−ＣＯ−、−ＣＨ２−が好ましく、−ＣＯ−がより好ましい。
ｎとしては０〜６から選ばれる整数であるのが好ましく、０〜３から選ばれる整数であるのがより好ましい。
【００１８】
Ｒ１、Ｒ２がメチル基である場合、Ｒ１、Ｒ２が置換されているシクロプロピル基上のカルボニル基の隣の炭素原子の立体配置がＳであるのが好ましい。
Ｒ１、Ｒ２が塩素原子または臭素原子である場合、Ｒ１、Ｒ２が置換されているシクロプロピル基上のカルボニル基の隣の炭素原子の立体配置がＲであるのが好ましい。
【００１９】
製薬学的に許容される塩とは、具体的には例えば十分に酸性である本発明化合物についてはそのアンモニウム塩、アルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩などが例示され、これらが好ましい）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩などが例示され、これらが好ましい）、有機塩基の塩としてはたとえばジシクロヘキシルアミン塩、ベンザチン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカン塩、ヒドラミン塩、アルギニンまたはリジンのようなアミノ酸の塩などが挙げられる。さらに十分に塩基性である本発明化合物ついてはその酸付加塩、例えば塩酸、硫酸、硝酸、りん酸などの無機酸塩、または酢酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、フマル酸、モノメチル硫酸等の有機酸塩などが挙げられる。また、場合によっては含水物あるいは水和物であってもよい。
また本発明は、全ての光学異性体及び幾何異性体などの異性体、水和物、溶媒和物もしくは結晶形を包含するものである。
【００２０】
本発明の化合物は公開特許（ＷＯ００／１５６０３およびＷＯ０１／０２３５９）に記載される方法またはそれを応用することに合成することができる。
【００２１】
本発明におけるＴＧＦβ作用とは、ＴＧＦβが生体に及ぼす生理的および病因的な種々の作用であり、ある種の遺伝子の発現変化を介して発揮されるものである。主なものとしては、発生分化過程や病因的な原因による種々の細胞の形質変化、上皮系細胞の間葉系細胞転移や、炎症や創傷の治癒過程における組織修復とその過剰反応による組織線維化などである。こうした生体反応においては、ＴＧＦβは種々の細胞に作用しさまざまな蛋白質の産生を誘導するが、代表的なものとしては、平滑筋αアクチン（αＳＭＡ）などの筋繊維芽細胞や平滑筋細胞、肝星細胞、血管周皮細胞を代表とする間葉系細胞に特異的なマーカー蛋白質や、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンなどの種々の細胞外マトリクスや、あるいはプラスミノーゲンアクチベータ−阻害因子（ＰＡＩ−１）などの抗線溶系蛋白質や組織マトリクスメタロプロテアーゼ阻害因子（ＴＩＭＰ）などの蛋白質分解抑制因子などがあげられる。本発明のＴＧＦβ作用抑制剤とは、こうした生体反応を抑制するものであり、例えば、ＴＧＦβ刺激により誘導される平滑筋αアクチン（αＳＭＡ）産生の抑制や、ＴＧＦβ刺激により誘導されるコラーゲン産生の抑制、ＴＧＦβ刺激により誘導されるＰＡＩ−１発現の抑制などの生物活性を有するものである。
一般式（Ｉ）の化合物は後述するように、ＴＧＦβ作用の阻害活性を有し、組織修復過程においてＴＧＦβ作用の過剰が原因となる種々の線維化疾患の予防または治療に有用である。
【００２２】
一般式（Ｉ）の化合物を線維化の予防および進行抑制剤として使用する場合、経口投与、静脈内投与、経皮投与、点眼投与することができる。投与量は投与する患者の症状、年齢、投与方法によって異なるが、通常１〜３０００ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００２３】
一般式（Ｉ）の化合物は常法により製剤化することができる。製剤の形としては注射剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、クリーム剤、座薬などが挙げられ、製剤用担体としては、例えば、乳糖、ブドウ糖、Ｄ−マンニトール、澱粉、結晶セルロース、炭酸カルシウム、カオリン、デンプン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、エタノール、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム塩、ステアリン酸マグネシウム、タルク、アセチルセルロース、白糖、酸化チタン、安息香酸、パラオキシ安息香酸エステル、デヒドロ酢酸ナトリウム、アラビアゴム、トラガント、メチルセルロース、卵黄、界面活性剤、白糖、単シロップ、クエン酸、蒸留水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール、マクロゴール、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸ナトリウム、ブドウ糖、塩化ナトリウム、フェノール、チメロサール、パラオキシ安息香酸エステル、亜硫酸水素ナトリウム等があり、製剤の形に応じて、一般式（Ｉ）の化合物と混合して使用される。
さらに、本発明の製剤中における一般式（Ｉ）の含有量は、製剤の形によって大きく変動し、特に限定されるものではないが、通常は、組成物全量に対して０．０１〜１００重量％、好ましくは１〜１００重量％である。
【００２４】
【実施例】
次に、実施例により本発明をさらに詳細に述べる。なお、以下の実施例は、本発明を説明するためのものであって、本発明をこれに限定するものではない。
なお実施例にて評価を行う下記化合物１および化合物２は、公開特許（ＷＯ００／１５６０３およびＷＯ０１／０２３５９）に記載される方法に従い合成した。
【００２５】
【化６】
【００２６】
（実施例１）
ＴＧＦβ刺激により誘導される平滑筋αアクチン（αＳＭＡ）産生の抑制
ヒト肺線維芽細胞（ＨＬＦ）は、Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ社より購入し、ＦＧＭ−２培地（三光純薬）にて３７℃、５％ ＣＯ２下で培養を行った。試験前日に、ＨＬＦ細胞は９６穴プレートに１穴あたり１×１０４細胞を蒔き一晩培養を行った。被験物質を適当な濃度で添加し、その６時間後にヒトＴＧＦβを最終濃度１０ ｎｇ／ｍｌで添加した。さらに培養を４日間継続し、細胞内に蓄積されたαＳＭＡ量をＷｈｏｌｅ−Ｃｅｌｌ−ＥＬＩＡＳ法にて測定した。被験物質の代わりに、その溶媒であるＤＭＳＯのみを添加した場合をＴＧＦβ刺激のみのコントロールとした。培養終了後、培養液を除き、ＰＢＳにて細胞を洗浄後、２％パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ溶液にて３０分間、室温で固定処理を行った。続いて０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００／ＰＢＳ溶液にて１０分間処理し、膜透過性を上げる処理を行った後、ＰＢＳにて洗浄した。ＥＬＩＳＡ反応は、１次抗体にαＳＭＡ抗体、２次抗体にはＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅ Ｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）標識ウサギ抗マウスＩｇＧを用いて、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ社）に記載の方法で行った。ＨＲＰ活性の検出はＴＭＢ（３，３’，５，５’Ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）を基質に用いて、４５０ｎＭの吸光度を測定した。本評価系において、本発明の化合物はＴＧＦβ刺激により誘導されるαＳＭＡ産生の抑制効果を示した。図１にＣｏｍｐｏｕｎｄ１およびＣｏｍｐｏｕｎｄ２の評価結果を示す。
【００２７】
なお既知のＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ法（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ社）を用いて被験物質の細胞生育性に及ぼす影響を検討したが、試験を行った濃度でのＣｏｍｐｏｕｎｄ１およびＣｏｍｐｏｕｎｄ２の添加による、細胞生育性の変化は観察されなかった。
【００２８】
（実施例２）
ＴＧＦβ刺激により誘導されるコラーゲン産生の抑制
ヒト肺線維芽細胞（ＨＬＦ）は実施例２と同様に培養を行った。試験前日に、ＨＬＦ細胞は９６穴プレートに１穴あたり１×１０４細胞を蒔き一晩培養を行った。被験物質を適当な濃度で添加し、その６時間後にヒトＴＧＦβを最終濃度１０ ｎｇ／ｍｌで添加した。さらに培養を１６時間継続し、細胞内に蓄積されたコラーゲン量をＷｈｏｌｅ−Ｃｅｌｌ−ＥＬＩＡＳ法にて測定した。被験物質の代わりに、その溶媒であるＤＭＳＯのみを添加した場合をＴＧＦβ刺激のみのコントロールとした。培養終了後、培養液を除き、ＰＢＳにて細胞を洗浄後、２％ パラホルムアルデヒド／ＰＢＳ溶液にて３０分間、室温で固定処理を行った。続いて０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００／ＰＢＳ溶液にて１０分間処理し、膜透過性を上げる処理を行った後、ＰＢＳにて洗浄した。ＥＬＩＳＡ反応は、１次抗体にマウス抗ヒトＰＩＰ（Ｉ型プロコラーゲン Ｃ末端ペプチド）モノクローナル抗体、２次抗体にはＨＲＰ（Ｈｏｒｓｅ Ｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）標識ウサギ抗マウスＩｇＧを用いて、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ社）に記載の方法で行った。ＨＲＰ活性の検出は化学発光基質（ＥＣＬシステム、アマシャムファルマシア）を基質に用いて、発光度を検出した。本評価系において、ＴＧＦβは１晩後にコラーゲンの細胞内蓄積を約２倍程度上昇させたが、本発明の化合物はＴＧＦβ刺激により上昇する細胞内コラーゲンの蓄積抑制効果を示した。図２にＣｏｍｐｏｕｎｄ１およびＣｏｍｐｏｕｎｄ２の評価結果を示す。
【００２９】
（実施例３）
ＴＧＦβ刺激により誘導されるＰＡＩ−１発現の抑制
ＳＶ４０大型Ｔ抗原にて不死化させたヒトさい帯静脈由来血管内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）にＴＧＦβ１０ｎｇ／ｍｌを添加した後、６時間後に細胞を回収し、ＲＮＡを調整した。被験物質はＴＧＦβ処理の３０分前に最終濃度５μｇ／ｍｌとなるように添加し、またコントロールとしてＤＭＳＯを添加した。薬剤処理を施した細胞からの総ＲＮＡの調製はＲＮｅａｓｙＭｉｎｉキット（キアゲン社：Ｃａｔ．Ｎｏ．７４１０４）を用い、添付のプロトコール従って実施した。約１ｘ１０６細胞から精製した総ＲＮＡを定量した後、５μｇ相当を、ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＴＭ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ−ＰＣＲキット（インビトロジェン社：Ｃａｔ．Ｎｏ．１１９０４−０１８）を用い、添付のプロトコールに従ってｃＤＮＡを合成した。こうして作成したｃＤＮＡを用いてリアルタイム定量ＰＣＲ解析を常法に従い実施した。すなわち、測定用ＰＣＲプライマーはヒトＰＡＩ−１遺伝子ｍＲＮＡ配列（Ｇｅｎｅｂａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ１６００６）のｆｏｒｗａｒｄ側５’−ｔｇｔｇｔｇｔｇａｇｃａｇｔｇｇａｃａｃｇｔ−３’（２５３４−２５５５番目）、Ｒｅｖｅｒｓｅ側５’−ａｔｃｔｔｔｇｔｇｃｃｃｔａｃｃｃｔｃｔｇｇ−３’（２６３０−２６５１番目）を、ＰＣＲプライマー設計支援ソフトウェアＰｒｉｍｅｒＥｘｐｒｅｓｓ（ＰＥバイオシステムズ社）を用いて設計し、日本バイオサービスにて委託合成した。リアルタイム定量ＰＣＲの反応は、溶液量５０μｌで実施した。２ｘＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＰＥバイオシステムズ社、Ｃａｔ．Ｎｏ．４３０９１５５）２５μｌに上記作成のｃＤＮＡテンプレートを１μｌ、上記プライマーを各々終濃度１００ｎＭとなるように加え、オートクレーブ滅菌水で５０μｌに合わせた。リアルタイム定量ＰＣＲ 装置Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ７７００（ＰＥバイオシステムズ社）を用い、装置操作マニュアル及び２ｘＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ添付プロトコールに従って反応を実施し、取得したデータを解析した。本評価系において、ＴＧＦβは６時間後にＰＡＩ−１ｍＲＮＡの産生を約３．５倍程度上昇させたが、本発明の化合物はＴＧＦβ刺激により誘導されるＰＡＩ−１ｍＲＮＡの抑制効果を示した。図３にＣｏｍｐｏｕｎｄ１の評価結果を示す。
【００３０】
【発明の効果】
上記の結果からも明らかなように、本発明の化合物は、ＴＧＦβにより引き起こされる種々の作用を抑制する。特に臓器組織の線維化疾患の進展を、予防または治療するのに有用である。
【００３１】
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒト肺繊維芽細胞でのＴＧＦβ刺激による平滑筋アクチンα産生に対する効果を示す図である。
【図２】ヒト肺繊維芽細胞でのＴＧＦβ刺激によるコラーゲン１産生に対する効果を示す図である。
【図３】ヒトさい帯静脈血管内皮細胞でのＴＧＦβ刺激によるＰＡＩ−１産生に対する効果を示す図である
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| 【出願人】 |
【識別番号】０００００００６６
【氏名又は名称】味の素株式会社
【住所又は居所】東京都中央区京橋１丁目１５番１号
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| 【出願日】 |
平成１４年７月３日（２００２．７．３） |
| 【代理人】 |
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| 【公開番号】 |
特開２００４−３５４７５（Ｐ２００４−３５４７５Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１６年２月５日（２００４．２．５） |
| 【出願番号】 |
特願２００２−１９５１６８（Ｐ２００２−１９５１６８） |
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