| 【発明の名称】 |
新生物病態およびその他の障害に対する、単独または他の化合物との併用でのフェニルアセテートおよび誘導体 |
| 【発明者】 |
【氏名】ドゥボリット サミッド
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| 【要約】 |
【課題】本発明は、有効治療量のフェニルアセテートあるいは薬学的に受容可能なその誘導体、またはその誘導体単独で、あるいは、オキシ尿素およびフラボノイドを含む他の治療剤との併用で、あるいは混合で投与することにより種々の障害を治療する組成物、ガンをフェニルアセテートで膀胱内で処置するための組成物を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明は、上記病的状態を治療するためのＰＡＡならびにその薬学的に受容可能な塩、誘導体、およびアナログを含む組成物を提供する。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】 以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量と併用してフラボノイドの治療量を含む、被験体の新生物病態を治療するための薬学的組成物：【化１】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【請求項２】 前記フラボノイドが、アピゲニンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】 前記フラボノイドが、クエルセチンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項４】 前記新生物病態が、前立腺ガンである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項５】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項６】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項７】 以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量と併用してオキシ尿素の治療量を含む、被験体の新生物病態を治療するための薬学的組成物：【化２】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【請求項８】 前記新生物病態が、前立腺ガンである、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項９】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１０】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである、請求項７に記載の薬学的組成物。
【請求項１１】 以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、膀胱内投与によって被験体の内部組織の新生物病態を局所的に治療するため薬学的組成物：【化３】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【請求項１２】 前記新生物病態が、膀胱ガンである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１３】 前記新生物病態が、腎臓ガンである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１４】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１５】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである、請求項１１に記載の薬学的組成物。
【請求項１６】 別々に調製したオキシ尿素の治療量および以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、被験体の新生物病態の治療における、同時の、個々の、または継続使用のための組成物：【化４】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【請求項１７】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】 以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、放射線および化学療法に対して耐性の被験体新生物病態を治療するため薬学的組成物：【化５】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【請求項２０】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２１】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２２】 前記新生物病態が、多剤耐性表現型を示す、請求項１９に記載の薬学的組成物。
【請求項２３】 別々に調製したフラボノイドの治療量および以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、被験体の新生物病態の治療における、同時の、個々の、または継続使用のための組成物：【化６】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【請求項２４】 前記フラボノイドが、アピゲニンである、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】 前記フラボノイドが、クエルセチンである、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】 前記新生物病態が、前立腺ガンである、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２７】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２８】 前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである、請求項２３に記載の薬学的組成物。
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【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】Ｉ 発明の分野本発明は、フェニル酢酸およびその薬学的に受容可能な誘導体を用いて、病的状態を治療および予防し、かつ細胞の活性を調整する方法に関する。詳細には、本発明はＡ）フェニル酢酸およびその誘導体のガンの治療または予防における使用、Ｂ）フェニル酢酸およびその誘導体の創傷治癒における使用、Ｃ）フェニル酢酸およびその誘導体のインターロイキン−６に関連する疾患の治療における使用、Ｄ）フェニル酢酸およびその誘導体のＡＩＤＳに関連するＣＮＳ機能不全の治療における使用、Ｅ）フェニル酢酸およびその誘導体の免疫監視を増強するための使用、Ｆ）患者におけるフェニル酢酸およびその誘導体の用量レベルおよび／またはこれらの薬物に対する患者の応答をモニターする方法、Ｇ）フェニル酢酸およびその誘導体によるＰＰＡＲの活性化、レチノイドレセプターと相互作用する薬剤との併用でのフェニル酢酸およびその誘導体の使用、およびフェニル酢酸およびその誘導体のフリーラジカルに基づいた放射線照射または化学療法感作あるいは保護薬剤としての使用、Ｈ）フェニル酢酸およびその誘導体の、多剤耐性表現型を有するガンの治療における使用、Ｉ）フェニル酢酸およびその誘導体、効力と親油性との相関関係、Ｊ）神経芽腫細胞を含有するガンのようなガンの治療および予防のための、レチノイン酸との相乗的併用でのフェニル酢酸およびその誘導体、Ｋ）悪性神経膠腫または他のＣＮＳ腫瘍などのガンの治療および予防のための、ロバスタチンとの相乗的併用でのフェニル酢酸およびその誘導体、Ｌ）悪性黒色腫または他の神経外胚葉の腫瘍を含有するガンおよび他の分化障害などのガンおよび他の分化障害の治療および予防のためのフェニル酢酸およびその誘導体、Ｍ）前立腺ガンのようなガンの治療および予防のための、ヒドロキシ尿素（ＨＵ）との相乗的併用でのフェニル酢酸およびその誘導体、Ｎ）髄芽腫および神経膠星状細胞腫由来細胞を含有するガンの治療および予防のためのフェニル酢酸およびその誘導体、Ｏ）ＰＡおよびＰＢを用いる治療に関するヒトでの研究におけるフェニル酢酸およびその誘導体、Ｐ）血清トリグリセリドの減少を含む脂質代謝を改変する方法におけるフェニル酢酸およびその誘導体、Ｑ）悪性および非悪性細胞におけるフェニル酢酸およびその誘導体によるＨｂＦの誘導、およびＲ）フェニル酢酸およびその誘導体の投与方法、に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＩＩ 発明の背景フェニル酢酸（ＰＡＡ）は、系統発生的範囲を通じて（細菌からヒトまで）見出されるタンパク質分解産物である。進化において高度に保存されているＰＡＡは、増殖制御および分化における根本的な役割を担っているかもしれない。植物において、ＰＡＡは成長ホルモン（オーキシン）として作用して、低用量（１０−５〜１０−７Ｍ）で細胞増殖および腫脹を促進し、その一方でより高濃度では増殖を阻害する。動物およびヒト細胞に対する効果は、十分には特徴付けされていない。ヒトにおいて、ＰＡＡはグルタミンを結合して、次いでフェニルアセチルグルタミン（ＰＡＧ）を腎排泄することが知られている。後者は、不用な窒素の排泄を導き、尿素形成（ｕｒｅａｇｅｎｅｓｉｓ）の先天性異常に関連する高アンモニア血症の治療において、ＰＡＡまたは好ましくはそのフェニルアセテートナトリウム塩（ＮａＰＡ、これはまた本明細書中でその活性な陰イオン部分であるフェニルアセテートまたは「ＰＡ」と呼ばれる）を使用することの基礎となっている。臨床的経験は、高ＮａＰＡ用量を用いた急性または長期間の治療は良好に寛容され、本質的に有害効果がなく、過剰なグルタミンの除去において有効であることを示す［Ｂｒｕｓｉｌｏｗ，Ｓ．Ｗ．， Ｈｏｒｗｉｃｈ，Ａ．Ｌ．Ｕｒｅａ ｃｙｃｌｅ ｅｎｚｙｍｅｓ． Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｂａｓｉｓｏｆ Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ， Ｖｏｌ．６：６２９−６３３（１９８９）］。
【０００３】グルタミンは核酸およびタンパク質合成のための主要な窒素源であり、迅速に分裂している正常および腫瘍細胞におけるエネルギーのための基質である。正常組織に比較して、ほとんどの腫瘍は、グルタミンの合成の減少ならびに資化および異化の促進のために、限られたレベルのグルタミン利用率で作動し、その結果さらなるグルタミン涸渇に対して敏感である。腫瘍細胞におけるグルタミン代謝の不均衡およびＰＡＡのグルタミンを除去する能力を考慮して、ＰＡＡは潜在的な抗腫瘍剤として提唱されている；しかし、この提唱を実証するデータはこれまでに提供されていない［Ｎｅｉｓｈ，Ｗ．Ｊ．Ｐ．「ヒトガンの治療のための潜在的な治療薬剤としてのフェニル酢酸」、Ｅｘｐｅｒｅｎｔｉａ， Ｖｏｌ．２７，ｐｐ．８６０−８６１（１９７１）］。
【０００４】ガンと戦うためのこれらの努力にかかわらず、本出願において問題にする多くの悪性疾患は、臨床腫瘍学に対して重大な難題を提示し続けている。例えば、前立腺ガンは男性における２番目に一般的なガン死亡の原因である。現在の治療プロトコルは主としてホルモン操作に頼っている。しかし、初期の高い応答率にかかわらず、患者はしばしばホルモン治療抵抗性（ｈｏｒｍｏｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ）腫瘍を発達させ、おもわしくない予後を伴う迅速な疾患の進行へ導く。全体的に、細胞障害性化学療法の結果は落胆させるものであり、このことは進行した前立腺ガンの治療に対する新たなアプローチの切実な必要性を示す。異常な細胞複製から生じる他の疾患（例えば、転移性黒色腫、グリア起源の脳腫瘍（例えば、神経膠星状細胞腫）、および肺腺ガン）もまた、おもわしくない予後を伴う高度に攻撃的な悪性疾患である。黒色腫および肺腺ガンの発生率は近年顕著に増加している。脳腫瘍の外科的治療はしばしばすべての腫瘍組織を除去することに失敗し、再発を生じる。全身化学療法は、血液関門により妨害される。それゆえ、進行した前立腺ガン、黒色腫、および脳腫瘍を含むヒト悪性疾患の治療への新たなアプローチに対する切迫した必要性が存在する。
【０００５】フェニル酢酸（ＰＡＡ）は、そのグルタミンに結合してグルタミンフェニルアセテートを形成する能力に加えて、腫瘍細胞に分化を経験させることを誘導し得る。ＰＡＡは非毒性分化増強因子であり、実験室モデルおよびヒトにおいて抗腫瘍活性を有する。前臨床研究は、フェニルアセテートおよび関連の芳香族脂肪酸は細胞増殖抑制性（ｃｙｔｏｓｔａｓｉｓ）を誘導し、ホルモン治療抵抗性前立腺ガンおよび神経膠芽細胞腫を含む種々のヒト悪性細胞の成熟を促進することを示す。腫瘍生活史（ｂｉｏｌｏｇｙ）の顕著な変化は、腫瘍増殖、浸潤、脈管形成、および免疫原生に関係する遺伝子の発現における改変に関連する。ＰＡＡおよびそのアナログは以下を含むいくつかの作用メカニズムを共有するようである：（ａ）核レセプターの活性化を通じての遺伝子発現の調節；および（ｂ）メバロン酸経路およびタンパク質イソプレニル化の阻害。従って、ＰＡＡは特に種々の新生物病態の治療に適しているようである。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】ＮａＰＡにより治療し得るこのような新生物病態の一つは、神経芽腫である。幼児期の悪性腫瘍として、神経芽腫は生物学的および臨床的観点から魅惑的であることが証明されている。このガンは、すべての悪性疾患の中で最も高い自然分化率を有し、いくつかの薬剤は神経芽腫の成熟の神経冠系列を共有する種々の細胞への成熟を誘導をすると報告されている（Ｅｖａｎｓ，Ａ．Ｅ．， Ｃｈａｔｔｅｎ，Ｊ．， Ｄ’Ａｎｇｉｏ，Ｇ．Ｊ．， Ｇｅｒｓｏｎ，Ｊ．Ｍ．， Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｊ．，およびＳｃｈｎａｕｆｅｒ，Ｌ．Ａ．、フィラデルフィア小児病院の１７名のＩＶ−Ｓ神経芽腫患者についての概説。Ｃａｎｃｅｒ，４５：８３３−８３９， １９８０；Ａｂｅｍａｙｏｒ，Ｅ．，およびＳｉｄｅｌｌ，Ｎ．、腫瘍性ニューロン細胞分化のインビトロ研究のためのモデルとしてのヒト神経芽腫細胞株。Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．，８０：３−１５， １９８９）。分化薬剤として探索された化合物の中で、レチノイン酸（ＲＡ）（Ｓｉｄｅｌｌ，Ｎ．， Ａｌｔｍａｎ，Ａ．， Ｈａｕｓｓｌｅｒ，Ｍ．Ｒ．およびＳｅｅｇｅｒ，Ｒ．Ｃ．、レチノイン酸（ＲＡ）のいくつかのヒト神経芽腫細胞株の増殖および表現型発現に対する効果。Ｅｘｐｌ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．， １４８：２１−３０， １９８３）は、種々のヒト神経芽腫細胞株の分化を促進する強力な化合物であることが示された（Ａｂｅｍａｙｏｒ，Ｅ．，およびＳｉｄｅｌｌ，Ｎ．、腫瘍性ニューロン細胞分化のインビトロ研究のためのモデルとしてのヒト神経芽腫細胞株。Ｅｎｖｉｒｏｎ． Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｒｓｐｅｃｔ．， ８０：３−１５， １９８９；Ｓｉｄｅｌｌ，Ｎ．， Ａｌｔｍａｎ，Ａ．， Ｈａｕｓｓｌｅｒ，Ｍ．Ｒ．およびＳｅｅｇｅｒ，Ｒ．Ｃ．、レチノイン酸（ＲＡ）のいくつかのヒト神経芽腫細胞株の増殖および表現型発現に対する効果。Ｅｘｐｌ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．， １４８：２１−３０， １９８３；Ｔｈｉｅｌｅ，Ｃ．Ｔ．， Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，Ｃ．Ｐ．，およびＩｓｒａｅｌ，Ｍ．Ａ．、Ｎ−ｍｙｃの発現減少がヒト神経芽細胞腫のレチノイン酸誘導性形態的分化に先行する。Ｎａｔｕｒｅ， ３１３：４０４−４０６， １９８５）；しかし、現在までに、ＲＡはこの疾患において限られた臨床的有効性しか示していない（Ｆｉｎｋｌｅｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｚ．， Ｋｒａｉｌｏ，Ｍ．Ｄ．， Ｌｅｎａｒｓｋｙ，Ｃ．， Ｌａｄｉｓｃｈ，Ｓ．， Ｂｌａｉｒ，Ｇ．Ｋ．， Ｒｅｙｎｏｌｄｓ，Ｃ．Ｐ．， Ｓｉｔａｒｙ，Ａ．Ｌ．，およびＨａｍｍｏｎｄ，Ｇ．Ｄ．、従来の化学療法に非応答性の転移性神経芽腫を有する小児の治療における１３−シス−レチノイン酸（ＮＳＣ １２２７５８）：小児ガン研究グループからの報告。Ｍｅｄ．Ｐｅｄ．Ｏｎｃｏｌ．，２０：３０７−３１１， １９９２）。ヒト神経芽腫のＲＡ誘導性分化の効力を増大させることを求めて、多数の他の化合物および生物学的応答改変剤（例えば、ｃＡＭＰ上昇薬剤およびインターフェロン）は、レチノイド活性を強化するとともに耐性集団を、ＲＡ治療に対して感受性にし得る（Ｌａｎｄｏ，Ｍ．， Ａｂｅｍａｙｏｒ，Ｅ．， Ｖｅｒｉｔｙ，Ｍ．Ａ．，およびＳｉｄｅｌｌ，Ｎ．ヒト神経芽腫細胞の細胞内環状ＡＭＰレベルおよび分化応答の調整。Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ５０：７２２−７２７， １９９０；Ｗｕａｒｉｎ，Ｌ．，Ｖｅｒｉｔｙ，Ｍ．Ａ．，およびＳｉｄｅｌｌ，Ｎ．、ヒト神経芽腫細胞に対するγインターフェロンの効果とそのレチノイン酸との相互作用。Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ， ４８：１３６−１４４， １９９１）。これらの併用治療のいくつかは、現在臨床的に評価されているかまたは神経芽腫および他の悪性疾患の治療のために提唱されている（Ｓｍｉｔｈ，Ｍ．Ａ．， Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ，Ｄ．Ｒ．， Ｃｈｅｓｏｎ，Ｂ．Ｄ．，およびＦｒｉｅｄｍａｎ，Ｍ．Ａ．、ガン治療におけるレチノイド。Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．， １０：８３９−８６４， １９９２）。しかし、神経芽腫ならびに他の類似のガンおよび病的状態の治療のためのより効果的な併用治療の必要性が存在する。従来治療が困難であった別の新生物病態は悪性神経膠腫である。悪性神経膠腫は、細胞複製に重要なステロールおよびイソプレノイドの合成のためのメバロン酸（ＭＶＡ）経路に高度に依存する（Ｆｕｍａｇａｌｌｉ，Ｒ．， Ｇｒｏｓｓｉ，Ｅ．， Ｐａｏｌｅｔｔｉ，Ｐ．およびＰａｏｌｅｔｔｅ，Ｒ．、脳腫瘍における脂質に関する研究。Ｉ．ヒト脳腫瘍におけるコレステロールのステロール前駆体の出現と意義。Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． １１：５６１−５６５， １９６４；Ｋａｎｄｕｔｓｃｈ，Ａ．Ａ．およびＳａｕｃｉｅｒ，Ｓ．Ｅ．、正常およびｊｉｍｐｙマウスの発達中の脳におけるステロール合成の調節。Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ． １３５：２０１−２０８， １９６９；Ｇｒｏｓｓｉ，Ｅ．， Ｐａｏｌｅｔｔｉ，Ｐ．およびＰａｏｌｅｔｔｉ，Ｒ．、脳コレステロールおよび脂肪酸生合成の解析。Ａｒｃｈ．Ｉｎｔ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． ６６：５６４−５７２， １９５８；Ａｚａｒｎｏｆｆ，Ｄ．Ｌ．， Ｃｕｒｒａｎ，Ｇ．Ｌ．およびＷｉｌｌｉａｍｓｏｎ，Ｗ．Ｐ．、インビトロでのヒト頭蓋内腫瘍によるアセテート−１−１４Ｃのコレステロールへの取り込み。Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ２１：１１０９−１１１５， １９５８；Ｒｕｄｌｉｎｇ，Ｍ．Ｌ．， Ａｎｇｅｌｉｎ，Ｂ．，Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｃ．Ｏ．およびＣｏｌｌｉｎｓ，Ｖ．Ｐ．、ヒト頭蓋内腫瘍における低密度リポタンパク質レセプター活性とそのコレステロール要求性との関連。Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５０（ｓｕｐｐｌ）：４８３−４８７， １９９０）。ＭＶＡ合成および／または利用を標的にすることにより正常脳組織（ここではＭＶＡ経路は最小に活性である）を損傷することなく腫瘍増殖を阻害することが期待される。二つの酵素がコレステロール合成のＭＶＡ経路の律速段階を制御する：（ａ）３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）レダクターゼは、アセチルＣｏＡからのＭＶＡの合成を触媒する；そして、（ｂ）ＭＶＡピロホスフェート（ＭＶＡ−ＰＰ）デカルボキシラーゼはＭＶＡ利用ならびに、その結果細胞内信号伝達タンパク質の翻訳後プロセッシングおよび機能を制御する（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｌ．およびＢｒｏｗｎ，Ｍ．Ｓ．、メバロン酸経路の調節。Ｎａｔｕｒｅ， ３４３：４２５−４３０， １９９０；Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｃ．Ｊ．、タンパク質プレニル化：タンパク質−タンパク質相互作用のメディエーター。Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：１８６５−１８６６， １９９３）。従って、悪性神経膠腫または他の類似のガンおよび病的状態の治療のために、ＭＶＡ経路のこれら二つの段階を阻害し得る治療を見出すことが高く望まれている。
【０００７】治療が困難であったさらなる新生物病態は、悪性黒色腫である。散在性悪性黒色腫は、高い死亡率および従来の治療に対する耐性により特徴付けられる（Ｆｅｒｄｙ Ｌｅｊｅｕｎｅ， Ｊｅａｎ Ｂａｕｅｒ， Ｓｅｒｇｅ Ｌｅｙｖｒａｚ， Ｄａｎｉｅｌｌｅ Ｌｉｅｎａｒｄ （１９９３）：散在性黒色腫、前臨床治療研究、臨床試験、および患者治療。Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ５：３９０−３９６）。分化治療は、細胞障害化学療法に応答しないかまたは応答の乏しいガンの治療のための別法を提供し得る（Ｋｅｌｌｏｆｆ，Ｇ．Ｊ．， Ｂｏｏｎｅ，Ｃ．Ｗ．， Ｍａｌｏｎｅ，Ｅ．Ｆ．， Ｓｔｅｅｌｅ，Ｖ．Ｅ． （１９９２）：化学的予防臨床的試験。Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ． ２６７：２９１−２９５）。いくつかの分化誘導剤が、インビトロで黒色腫細胞の表現型を改変し得る。これらには、レチノイド、ブチレート、ジブチリルアデノシン３’：５’−環状一リン酸（ｄｂｃＡＭＰ）、５−アザシチジン、インターフェロン、ヘキサメチレンビスアセトアミド（ＨＭＢＡ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、１２−テトラデカノイルホルボル−１３アセテート（ＴＰＡ）が含まれる（Ｍａｒｙ Ｊ．Ｈｅｎｄｒｉｘ， Ｒｅｂｅｃｃａ Ｗ．Ｗｏｏｄら、（１９９０）：再構成された基底膜を通じてのヒト黒色腫細胞浸潤のレチノイン酸阻害ならびにそのタンパク質分解酵素の発現および能動性の減少との関連。Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：４１２１−４１３０；Ｌｕａｒａ Ｇｉｆｆｒｅ， Ｍａｇａｌｉ Ｓｃｈｒｅｙｅｒ， Ｊｅａｎ−ｐｉｅｒｒｅ Ｍａｃｈ， Ｓｔｅｆａｎ Ｃａｒｒｅｌ （１９８８）：環状ＡＭＰはヒト黒色腫細胞のインビトロ分化を誘導する。Ｃａｎｃｅｒ ６１：１１３２−１１４１；Ｊａｒｄｅｎａ Ｎｏｒｄｅｎｂｅｒｇ， Ｌｉｎａ Ｗａｓｓｅｒｍａｎ， ＥｉｎａｔＢｅｅｒｙ， Ｄｏｒｏｎ Ａｌｏｎｉ， Ｈａｇｉｔ Ｍａｌｉｋ， Ｋｕｒｔ Ｈ．Ｓｔｅｎｚｅｌ， Ａｂｒａｈａｍ Ｎｏｖｏｇｒｏｄｓｋｙ （１９８６）：酪酸およびジメチルスルホキシドによるマウス黒色腫の増殖阻害。Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １６２：７７−８５；Ｅｌｉｅｚｅｒ Ｈｕｂｅｒｍａｎ， Ｃａｒｏｌ Ｈｅｃｋｍａｎ， Ｒｏｂｅｒ Ｌａｎｇｅｎｂａｃｈ （１９７９）：腫瘍促進薬剤およびジメチルスルホキシドによるヒト黒色腫細胞における分化機能の刺激。Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３９：２６１８−２６２４；Ｃｌａｕｓ Ｇａｒｂｅ， Ｋｏｎｓｔａｎｔｉｎ Ｋｒａｓａｇａｋｉｓ （１９９３）：インターフェロンおよびサイトカインの黒色腫細胞に対する効果。Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１００：２３９Ｓ−２４４Ｓ）。残念ながら、これらの薬剤の臨床適用は、受容不可能な毒性、潜在的な発ガンに関する懸念、または有効な血漿濃度を達成および持続し得ないことにより制限される。従って、悪性黒色腫または他の類似のガン、病的状態、または分化障害のための無毒性で、臨床的に有効な治療の必要が存在する。リボヌクレオチドレダクターゼインヒビターであるヒドロキシ尿素は、１８００年代の後期に最初に合成された単純な化合物（ＣＨ４Ｎ２０２、ＭＷ ７６．０５）である（Ｃａｌａｂｒｅｓｉ Ｐ， Ｃｈａｂｎｅｒ ＢＡ、抗腫瘍薬剤。Ｇｉｌｍａｎ ＡＧ， Ｒａｌｌ ＴＷ， Ｎｉｅｓ ＡＳ， ＴａｙｌｏｒＰ編、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ． Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ １９９０：１２５１−２）。ヒドロキシ尿素は、後に実験室動物において白血球減少症を生じることが見出され、次いで抗腫瘍薬剤として試験された（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ Ｆ， Ｗｉｓｌｉｃｋｉ Ｌ， Ｋｏｌｌｅｋ Ｌ． Ｕｅｂｅｒ ｄｉｅ ｂｅｚｉｅｈｕｎｇｅｎ ｖｏｎ ｓｃｈｗｅｒｓｔｅｎ ｂｌｕｔｇｉｆｔｅｎ ｚｕ ａｂｂａｕｐｒｏｄｕｋｔｅｎ ｄｅｓ ｅｗｗｅｉｓｓｅｓ．Ｂｅｉｔｒａｇ ｚｕｍ ｅｎｔｓｔｅｈｕｎｇｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｕｓｄｅｒ ｐｅｒｎｉｚｉｏｓｅｎ． Ａｎａｍｉｅ．Ｋｌｉｎ．Ｗｓｃｈｒ．１９２８；７：９７２）。現在では、ヒドロキシ尿素の主な臨床的役割は、骨髄増殖性障害の治療にある。現在ヒドロキシ尿素は、慢性骨髄性白血病のための好ましい初期治療と考えられている（Ｄｏｎｅｈｏｗｅｒ ＲＣ．ヒドロキシ尿素。Ｃｈａｂｎｅｒ ＢＡ， Ｃｏｌｌｉｎｓ ＪＭ編 Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ， Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ： ＪＢ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ １９９０：２２５−３３）。
【０００８】ヒドロキシ尿素は、悪性黒色腫、頭部および頚部の扁平上皮ガン、腎細胞ガン、および尿管細胞層（ｕｒｏｔｈｅｌｉｕｍ）の移行上皮ガンを含む多数の固形ガンにおいて評価されている（Ｂｌｏｅｄｏｗ ＣＥ． 成人におけるヒドロキシ尿素に第二相研究：種々の腫瘍。Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｒｅｐ１９６４；４０：３９−４１；Ａｒｉｅｌ ＩＭ．ヒドロキシ尿素の治療効果：手術不能の腫瘍を有する１１８名の患者の経験。Ｃａｎｃｅｒ １９７０；２５：７１４；Ｎｅｖｉｎｎｙ Ｈ， Ｈａｌｌ ＴＣ． 腎細胞ガンにおけるヒドロキシ尿素を用いた化学療法。Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９６８；８８：３５２−９；Ｂｅｃｋｌｏｆｆ ＧＬ， Ｌｅｒｎｅｒ ＨＪ， Ｃｏｌｅ ＤＲ，ら、膀胱ガンにおけるヒドロキシ尿素。Ｉｎｖｅｓｔ Ｕｒｏｌ１９６７；６：５３０−４）。初期の研究はいくつかのこれらの疾患において有望に見えたが、さらなる研究は、固形ガンについてのいかなる標準的治療養生法においても、ヒドロキシ尿素の役割を定義していない。
【０００９】ヒドロキシ尿素は細胞周期のＳ期に特異的な薬剤であるので、ホルモン治療抵抗性転移性前立腺ガンにおけるこの薬物のいくつかの臨床試験は、ヒドロキシ尿素がなんらかの活性を有すると示唆したことは驚異である（Ｌｅｒｎｅｒ ＨＪ， Ｍａｌｌｏｙ ＴＲ． 前立腺のステージＤガンにおけるヒドロキシ尿素。Ｕｒｏｌ １９７７；１０：３５−８；Ｋｖｏｌｓ ＬＫ，Ｅａｇａｎ ＲＴ，Ｍｙｅｒｓ ＲＰ．転移性前立腺ガンにおけるメルファラン、ＩＣＲＦ−１５９、およびヒドロキシ尿素の評価：予備報告。Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｐ１９７７；６１：３１１−２；Ｌｏｅｎｉｎｇ ＳＡ， Ｓｃｏｔｔ ＷＷ，ｄｅＫｅｒｎｉｏｎ Ｊら、前立腺の進行性ガンを有する患者におけるヒドロキシ尿素、メチル−クロロエチル−シクロヘキシ−ニトロソウレア、およびシクロホスファミド（ｃｌｙｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）の比較。Ｊ Ｕｒｏｌ１９８１；１２５：８１２−６；Ｍｕｎｄｙ ＡＲ 前立腺のホルモン「逃避」転移性ガンにおけるヒドロキシ尿素の先行研究。Ｂｒ Ｊ Ｕｒｏｌ １９８２；５４：２０−５；Ｓｔｅｐｈｅｎｓ ＲＬ， Ｖａｕｇｈｎ Ｃ， ＬａｎｅＭら、進行した前立腺ガンにおけるアドリアマイシンおよびシクロホスファミド対ヒドロキシ尿素。Ｃａｎｃｅｒ １９８４；５３：４０６−１０）。これらの活性は、特に（１）疾患の進行の遅い性質および（２）これらの試験において用いられる薬物投与のスケジュール（例えば、１日１回から３日に１回）を与える。これらの試験で用いられたヒドロキシ尿素の用量または投与スケジュールはいずれも、細胞周期の感受期にある腫瘍細胞のかなりの割合を捕らえることはなさそうである。表１３に、ホルモン治療抵抗性前立腺ガンにおけるヒドロキシ尿素の活性に関する報告された臨床データを要約する。全体の他覚的な応答率は２３％であり、自覚的改善の頻度は３６％である（Ｌｅｒｎｅｒ ＨＪ， Ｍａｌｌｏｙ ＴＲ． 前立腺のステージＤガンにおけるヒドロキシ尿素。Ｕｒｏｌ１９７７；１０：３５−８；Ｋｖｏｌｓ ＬＫ， Ｅａｇａｎ ＲＴ， Ｍｙｅｒｓ ＲＰ．転移性前立腺ガンにおけるメルファラン、ＩＣＲＦ−１５９、およびヒドロキシ尿素の評価：予備報告。Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｐ １９７７；６１：３１１−２；Ｌｏｅｎｉｎｇ ＳＡ， Ｓｃｏｔｔ ＷＷ， ｄｅＫｅｒｎｉｏｎ Ｊら、前立腺の進行性ガンを有する患者におけるヒドロキシ尿素、メチル−クロロエチル−シクロヘキシ−ニトロソウレア、およびシクロホスファミドの比較。Ｊ Ｕｒｏｌ １９８１；１２５：８１２−６；ＭｕｎｄｙＡＲ、前立腺のホルモン「逃避」転移性ガンにおけるヒドロキシ尿素の先行研究。Ｂｒ Ｊ Ｕｒｏｌ １９８２；５４：２０−５；Ｓｔｅｐｈｅｎｓ ＲＬ，Ｖａｕｇｈｎ Ｃ， Ｌａｎｅ Ｍら、進行性前立腺ガンにおけるアドリアマイシンおよびシクロホスファミド対ヒドロキシ尿素。Ｃａｎｃｅｒ １９８４；５３：４０６−１０）。従って、前立腺ガンまたは類似のガンの治療のためのヒドロキシ尿素を用いる改良された治療の必要が存在する。
【００１０】大部分の原発性中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍のための治療は、現在まで満足できるものではなかった。化学療法、放射線療法、および手術は主に細胞減少的（ｃｙｔｏｒｅｄｕｃｔｉｖｅ）であり、宿主内の生存腫瘍細胞の数を減少させることを目指す。これらの技術の適用は、いくらかのヒト悪性腫瘍において成功した一方、髄芽腫および悪性神経膠星状細胞腫に細胞減少的ストラテジーを使用することは、原発性腫瘍へ到達できないこと、悪性細胞の脳脊髄液への早くからの散在、有効な細胞減少薬剤がないこと、または受容され得ない毒性のために、限られた成功に終わった。従って、従来の細胞減少的治療の上記の欠点を克服する、ＣＮＳ腫瘍の満足な治療の必要が存在する。
【００１１】さらに、現在では脂質代謝の問題と心臓疾患との関連がよく受け入れられている。従って、関連する疾病を有する被験者の脂質代謝を調整または改変し得る治療を見出すことが望まれる。特に、血清トリグリセリドを減少させるための治療および方法が高く望まれる。
【００１２】放射線療法が腫瘍疾患の処理において広く用いられてきたが、これは悪性腫瘍の特定の領域が放射線感受性を欠いていることにより制限される。腫瘍の放射線照射に対する感受性を化学的に増強することは、大体において不成功であり、放射線療法の重要な問題であり続けている。従って、放射線療法を含む改善された方法の必要が存在する。
【００１３】従って、本発明は、上記およびその他の病的状態をＰＡＡならびにその薬学的に受容可能な塩、誘導体、およびアナログで治療するための方法および組成物を提供する。
【００１４】
【課題を解決するための手段】ＩＩＩ 発明の要旨本発明は、被験者における種々の病的状態を治療する方法を提供する。また本発明は、被験者における種々の細胞活性の調整を提供する。本発明は、被験者における種々の障害（新生物病態を含む）を治療する方法を提供し、この方法は、以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療的量を投与する工程を含む：一般構造Ａ：【００１５】
【化７】
；ここでＲ０＝アリール、フェノキシ、置換されたアリール、または置換されたフェノキシ；Ｒ１およびＲ２＝Ｈ、低級アルコキシ、低級直鎖および分岐鎖アルキル、またはハロゲン；Ｒ３およびＲ４＝Ｈ、低級アルコキシ、低級直鎖および分岐鎖アルキル、またはハロゲン；およびｎ＝０〜２の整数。この一般構造は、以下、いかなる特別な方法または組成物に関係なく一般構造Ａという。本方法により治療し得る新生物病態は、神経芽腫、急性前骨髄細胞性白血病、急性脊髄形成異常、急性神経膠腫、前立腺ガン、乳ガン、黒色腫、非小細胞肺ガン、髄芽腫、肺ガン、神経膠星状細胞腫、およびバーキットリンパ腫ならびに他の状態を含む。上記の方法のための化合物（一般構造Ａに開示したような）、および本明細書中で開示するいかなる方法および組成物のための化合物は、特にフェニルアセテートナトリウムおよびフェニルブチレートナトリウムを含む。
【００１６】さらに、予防的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者における新生物病態を予防する方法を提供する。この方法はまた、化合物が抗腫瘍薬剤と併用して投与される方法を含む。本発明はまた、分化誘導する量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を細胞に投与する工程を含む、細胞の分化を誘導する方法を提供する。
【００１７】胎児ヘモグロビンを誘導する量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を被験者に投与する工程を含む、被験者において胎児ヘモグロビンの産生を誘導する方法もまた含む。
【００１８】本発明は、治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を被験者に投与する工程を含む、被験者における異常なヘモグロビン活性に関連する病的状態を治療する方法を含む。この方法は、貧血である病的状態を治療するために使用され得る。より特定すると、貧血は鎌状細胞およびβサラセミアからなる群から選択され得る。
【００１９】別の実施態様において、本発明は、細胞を一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体のＩＬ−６阻害量に接触させる工程を含む、細胞におけるＩＬ−６の産生を阻害する方法を提供する。この阻害方法は、以下の病的状態のいずれかを有する被験者において使用され得る：慢性関節リウマチ、キャッスルマン病、メザンギウム増殖、糸球体腎炎、ブドウ膜炎、セプシス、自己免疫炎症性腸疾患、Ｉ型糖尿病、脈管炎、および細胞分化関連皮膚障害。もちろん、この阻害は、障害を治療するに十分量である。
【００２０】本発明はまた、細胞をＴＧＦα誘導量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体に接触させる工程を含む、細胞においてＴＧＦαの産生を誘導する方法を提供する。この方法は、誘導が被験者の創傷内である場合および誘導が創傷治癒を促進するに十分である場合に使用され得る。
【００２１】本発明はまた、細胞をＴＧＦ−β２阻害量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体に接触させる工程を含む、細胞においてＴＧＦ−β２の産生を阻害する方法を提供する。
【００２２】さらに、被験者に治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者における中枢神経系のＡＩＤＳに関連した機能不全を治療する方法を提供する。
【００２３】本発明の別の実施態様は、被験者に免疫監視を増強する量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者における免疫監視を増強する方法である。
【００２４】本発明はまた、一般構造Ａの化合物のバイオアベイラビリティーをモニターする方法を提供する。この方法は、ヘモグロビンに関連しない病的状態の治療のために適用し得、この方法は、被験者に化合物を投与する工程および胎児ヘモグロビンのレベルを測定する工程を含む。胎児ヘモグロビンの量の増加は、化合物の病的状態を治療するためのバイオアベイラビリティーの増加を示し、胎児ヘモグロビンの量の減少は化合物の病的状態を治療するためのバイオアベイラビリティーの減少を示す。この方法は新生物病態である病的状態をモニターするに有用である。
【００２５】本発明は、被験者の創傷に、創傷を治癒する量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者における創傷の治癒を促進する方法を提供する。
【００２６】さらに、被験者に治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、放射線照射および化学療法に抵抗性の被験者における新生物病態を治療する方法を提供する。この方法は、多剤耐性表現型を示す新生物病態の治療のために特に有用である。
【００２７】さらに以下の実施態様を提供する：治療的な量のレチノイドを、治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体と併用して投与する工程を含む、被験者における新生物病態を治療する方法。レチノイドは全トランス−レチノイン酸または９−シス−レチノイン酸であり得る。さらに、この方法は、神経芽腫などの新生物病態を治療するために使用され得る。この方法で治療され得るいくつかの新生物病態は、神経芽腫、急性前骨髄細胞性白血病、急性骨髄形成異常、急性神経膠腫、前立腺ガン、乳ガン、黒色腫、非小細胞肺ガン、髄芽腫、およびバーキットリンパ腫を含むが、これらに限定されない。
【００２８】本発明はまた、治療的な量のメバロン酸経路のインヒビターを治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体と併用して投与する工程を含む、被験者における新生物病態を治療する方法を提供する。この方法は、バスタチンまたはそのアナログであるインヒビターを用いて実施され得る。この方法に有用な特に適切なバスタチンはロバスタチンである。別のクラスのインヒビターはテルペンであり、特にリモネンである。他のインヒビターを、実施例に記載の方法を用いてスクリーニングし得る。この方法は、悪性神経膠腫、腺ガン、および黒色腫を含む新生物病態を治療するために使用され得る。さらに、新生物病態は、非悪性神経膠腫、良性前立腺過形成、および乳頭腫ウイルス感染などの状態を含むが、これらに限定されない非悪性の性質であり得る。関連する方法は上記の工程を使用し、さらに被験者を横紋筋融解症誘導性ミオパシーについて連続的にモニターする工程および、横紋筋融解症誘導性ミオパシーが存在する場合には、被験者にユビキノンを投与する工程を含む。
【００２９】本発明のさらなる方法は、新生物病態を有する被験者におけるＨＭＧ−ｃｏＡレダクターゼおよびＭＶＡ−ＰＰデカルボキシラーゼを阻害する方法であり、治療的な量のメバロン酸経路のインヒビターを治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体と併用して投与する工程を含む。適切なインヒビターはバスタチンのクラスまたはそのアナログを含み、特にロバスタチンを含む。他の適切なインヒビターはテルペンおよびそのアナログであり、特にリモネンである。この方法は、必要であれば悪性神経膠腫、腺ガン、および黒色腫を含む新生物病態を治療するために使用され得る。関連する方法はまた、被験者を横紋筋融解症誘導性ミオパシーについて連続的にモニターする工程および、横紋筋融解症誘導性ミオパシーが存在する場合には、被験者にユビキノンを投与する工程をさらに含む。
【００３０】本発明はまた、治療的な量のフラボノイドを治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体と併用して投与する工程を含む、被験者における新生物病態を治療する方法を提供する。適切なフラボノイドはアピゲニンおよびケルセチンを含む。この方法は前立腺ガンを含む新生物病態を治療するために使用され得る。
【００３１】本発明はまた、治療的な量のヒドロキシ尿素を一般構造Ａの治療的な量のフェニル酢酸誘導体と併用して投与することを含む、被験者における新生物病態を治療する方法を提供する。この併用治療法は、前立腺ガンを含む新生物病態を治療するために使用され得る。
【００３２】別の実施態様において、本発明は治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者における脂質代謝を調整する方法を提供する。関連する実施態様において、本発明は治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者における血清トリグリセリドを減少させる方法を提供する。
【００３３】本発明は、治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を嚢内投与する工程を含む、被験者の内部組織の新生物病態を局所的に治療する方法を提供する。この方法は、外部から接近可能な内部のオリフィスおよび膀胱の新生物病態を局所的に治療するために使用され得る。従って、この嚢内方法は膀胱ガンおよび腎臓ガンなどの新生物病態を治療するために使用され得る。
【００３４】本発明は、治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を投与する工程を含む、被験者を放射線療法に対して感受性にする方法を提供する。本発明はまた、レチノイドレセプターと相互作用する薬剤との併用での一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体の使用、および一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体の、フリーラジカルに基づく放射線照射または化学療法感受性化または保護的薬剤としての使用を提供する。
【００３５】治療的な量のバスタチンおよび治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を別個の調製物中に含む、被験者における新生物病態を治療する際において同時、別々または順次に使用するための製品もまた提供する。この組成物には、治療的な量のユビキノンが添加され得る。治療的な量のユビキノンは、重大な付随する副作用なしに、バスタチン（または、特にロバスタチン）の増加した用量の耐性を可能にするに十分な量である。
【００３６】被験者における新生物病態の治療における同時、別々または順次の使用のためのさらなる製品は、治療的な量のレチノイドおよび治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を別個の調製物中に含む。この組成物は、全トランス−レチノイン酸および９−シス−レチノイン酸（または両方）を含むレチノイドを用いて作製し得る。
【００３７】被験者における新生物病態の治療における同時、別々または順次の使用のための別の新規な製品を提供する。この製品は、治療的な量のヒドロキシ尿素および治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を別個の調製物中に含む。
【００３８】本発明は、治療的な量のバスタチンおよび治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を含む組成物を提供する。
【００３９】本発明は、治療的な量のレチノイドおよび治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を含む組成物をさらに提供する。
【００４０】本発明は、治療的な量のヒドロキシ尿素および治療的な量の一般構造Ａのフェニル酢酸誘導体を含む組成物を提供する。
【００４１】１つの局面において、本発明は、以下を提供する：以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量と併用してフラボノイドの治療量を含む、被験体の新生物病態を治療するための薬学的組成物：【００４２】
【化８】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００４３】１つの実施形態において、前記フラボノイドが、アピゲニンである。１つの実施形態において、前記フラボノイドが、クエルセチンである。１つの実施形態において、前記新生物病態が、前立腺ガンである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである。
【００４４】別の局面において、本発明は、以下を提供する：以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量と併用してオキシ尿素の治療量を含む、被験体の新生物病態を治療するための薬学的組成物：【００４５】
【化９】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００４６】１つの実施形態において、前記新生物病態が、前立腺ガンである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである。
【００４７】別の局面において、本発明は、以下を提供する：以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、膀胱内投与によって被験体の内部組織の新生物病態を局所的に治療するため薬学的組成物：【００４８】
【化１０】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００４９】１つの実施形態において、前記新生物病態が、膀胱ガンである。１つの実施形態において、前記新生物病態が、腎臓ガンである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである。
【００５０】別の局面において、本発明は、以下を提供する：別々に調製したオキシ尿素の治療量および以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、被験体の新生物病態の治療における、同時の、個々の、または継続使用のための組成物：【００５１】
【化１１】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００５２】１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである。
【００５３】別の局面において、本発明は、以下を提供する：以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、放射線および化学療法に対して耐性の被験体新生物病態を治療するため薬学的組成物：【００５４】
【化１２】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００５５】１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記新生物病態が、多剤耐性表現型を示す。
【００５６】別の局面において、本発明は、以下を提供する：別々に調製したフラボノイドの治療量および以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、被験体の新生物病態の治療における、同時の、個々の、または継続使用のための組成物：【００５７】
【化１３】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００５８】１つの実施形態において、前記フラボノイドが、アピゲニンである。１つの実施形態において、前記フラボノイドが、クエルセチンである。１つの実施形態において、前記新生物病態が、前立腺ガンである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酪酸ナトリウムである。
【００５９】別の局面において、本発明は、以下を提供する：以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量と併用してメバロン酸経路の阻害剤の治療量を含む、被験体の新生物病態を治療するための薬学的組成物：【００６０】
【化１４】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００６１】１つの実施形態において、前記阻害剤が、バスタチンまたはそれらのアナログである。別の実施形態において、前記バスタチンが、ロバスタチンである。１つの実施形態において、前記阻害剤が、テルペンである。別の実施形態において、前記テルペンが、リモネンである。１つの実施形態において、前記新生物病態が、悪性神経膠腫、腺ガン、または黒色腫である。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムまたはフェニル酪酸ナトリウムである。１つの実施形態において、前記疾患が、非悪性神経膠腫、または良性前立腺肥大、乳頭腫ウイルス感染である。別の局面において、本発明は、前記の組成物で処置される被験体において検出される横紋筋肉腫誘発筋疾患を治療するための、ユビキノンを含む薬学的組成物を提供する。なお別の局面において、本発明は、前記組成物および前記ユビキノンを含む薬学的組成物を備えるキットを提供する。
【００６２】別の局面において、本発明は、以下を提供する：以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量と併用してメバロン酸経路の阻害剤の治療量を含む、新生物病態を有する被験体のHMG-CoAリダクターゼおよびMVA-PPデカルボキシラーゼを阻害するための薬学的組成物：【００６３】
【化１５】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００６４】１つの実施形態において、前記阻害剤が、バスタチンまたはそのアナログである。別の実施形態において、前記バスタチンが、ロバスタチンである。１つの実施形態において、前記阻害剤が、テルペンである。別の実施形態において、前記テルペンが、リモネンである。１つの実施形態において、前記新生物病態が、悪性神経膠腫、腺ガン、または黒色腫である。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムまたはフェニル酪酸ナトリウムである。別の局面において、本発明は、前記の組成物で処置される被験体において検出される横紋筋肉腫誘発筋疾患を治療するための、ユビキノンを含む薬学的組成物を提供する。なお別の局面において、本発明は、前記組成物および前記ユビキノンを含む薬学的組成物を備えるキットを提供する。
【００６５】別の局面において、本発明は、以下を提供する：別々に調製した、バスタチンの治療量および以下の式のフェニル酢酸誘導体、それらの塩、それらの立体異性体、およびそれらの混合物の治療量を含む、被験体の新生物病態の治療における、同時の、個々の、または継続使用のための組成物：【００６６】
【化１６】
ここで、R0＝アリール、フェノキシ、置換アリールまたは置換フェノキシであり；R1およびR2は、独立して、H、低級アルコキシ、ヒドロキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；R3およびR4は、独立して、H、低級アルコキシ、低級直鎖および分枝鎖アルキルまたはハロゲンであり；そしてｎ＝０〜２の整数である。
【００６７】１つの実施形態において、前記組成物がさらにユビキノンの治療量を含む。１つの実施形態において、前記フェニル酢酸誘導体が、フェニル酢酸ナトリウムまたはフェニル酪酸ナトリウムである。
【００６８】
【発明の実施の形態】Ｖ．発明の詳細な説明本明細書で使用される用語「フェニルアセテート誘導体 （ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ）」または「フェニルアセテートアナログ（ｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ａｎａｌｏｇ）」は、以下の化合物を意味する：【００６９】
【化１７】
；ここで、Ｒ０は、アリール（例えば、フェニル、ナフチル）、フェノキシ、置換アリール（例えば、１つまたはそれ以上のハロゲン［例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ］、低級アルキル［例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル］あるいはヒドロキシ置換体（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ））または置換フェノキシ（例えば、１つまたはそれ以上のハロゲン［例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ］、低級アルキル［例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル］あるいはヒドロキシ置換体）である；Ｒ１およびＲ２は、それぞれ、Ｈ、低級アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ）、低級の直鎖および分枝鎖アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）またはハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）である；Ｒ３およびＲ４は、それぞれ、Ｈ、低級の直鎖および分枝鎖アルキル（例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル）、低級アルコキシ（例えば、メトキシ、エトキシ）、またはハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）である；そして、ｎは０から２の整数である；それらの塩（例えば、Ｎａ＋、Ｋ＋、または他の薬学的に受容可能な塩）；それらの立体異性体；およびそれらの混合物。
【００７０】ｎが２のとき、２つのＲ３置換基のそれぞれおよび２つのＲ４置換基のそれぞれは、独立して、上記のフェニルアセテート誘導体の定義内で変化し得る。この定義にはフェニルアセテート（ＰＡＡ）およびフェニルブチレート（ＰＢＡ）が包含されることが意図される。この定義による混合物にはカルボン酸塩、例えば、フェニルアセテートナトリウムおよびフェニルアセテートカリウムの混合物、を包含することが意図される。これらの化合物のカルボキシル部分は主な活性部位であるので、ここでフェニルアセテート（ＰＡ）およびフェニルブチレート（ＰＢ）のようなカルボキシレートについて言及するときは、 Ｎａ＋、Ｋ＋、または他の薬学的に受容可能なカチオン（例えば、アルギニン）のような適切な中和性のカチオンについて言及することをも意図する。それゆえ、本明細書で用いられるＰＡまたはＰＢ誘導体あるいは類似体とは、この定義でいうフェニルアセテート誘導体を意味する。これらの誘導体のいくつかは、生物系に存在する場合に相互に変換され得る。例えば、ＰＡは、酵素的に動物体内でＰＢに変換され得、そして同様にＰＢはＰＡに変換され得る。
【００７１】従って、フェニル酢酸誘導体には、フェニル酢酸、フェニルプロピオン酸、フェニル酪酸、１−ナフチル酢酸、フェノキシ酢酸、フェノキシプロピオン酸、フェノキシ酪酸、４−クロロフェニル酢酸、４−クロロフェニル酪酸、４−ヨードフェニル酢酸、４−ヨードフェニル酪酸、α−メチルフェニル酢酸、α−メトキシフェニル酢酸、α−エチルフェニル酢酸、α−ヒドロキシフェニル酢酸、４−フルオロフェニル酢酸、４−フルオロフェニル酪酸、２−メチルフェニル酢酸、３−メチルフェニル酢酸、４−メチルフェニル酢酸、３−クロロフェニル酢酸、３−クロロフェニル酪酸、２−クロロフェニル酢酸、２−クロロフェニル酪酸、および２，６−ジクロロフェニル酢酸、ならびにこれらの化合物のナトリウム塩が包含されるが、これらに限定されない。
【００７２】本発明の化合物は、静脈的に、腸溶的に、非経口的に、筋肉内に、鼻口内に、皮下的に、局所的に、膀胱内にまたは経口的に投与され得る。投薬量は、インビトロおよびインビボでの抗ガン性研究で観察された効果的な阻害濃度に基づく。本発明の化合物の種々の有効な利用については、これらはまた他の抗ガン剤（例えば、オキシ尿素、５−アザシチジン、５−アザ−２’−デオキシシチジンおよびスラミン）；レチノイド；ホルモン；生物学的応答モディファイヤー（例えば、インターフェロンおよび造血増殖因子）；および従来の化学および放射線療法と併行してあるいは組み合わせて投与し得るという知見からさらに明らかとなる。本発明の方法および化合物は、ヒト被験者を含む動物被験体を処置するために使用され得ることが理解される。
【００７３】本明細書を通して用いられている用語「〜と併用し」は、併用構成薬物を、同時にあるいは薬物が体内で同時に活性であるような間隔で処置することを意味する。さらに、本明細書で使用する用語「治療量」とは、薬剤、薬物あるいはクレームされた使用に適切な一般的なクラスの化合物の総量を示す。それゆえ、「治療量」とは、上記活性を有しないクラスのものを排除している。
【００７４】本明細書で使用する用語「レチノイド」または「レチノイズ」は、９−シスレチノイン酸およびトランス、レチノイン酸を含むあらゆる適切な一般的なクラスを含んでいるが、これに限定されない。レチノイドを組み合わせた療法は乳ガン、白血病、および悪性黒色腫を包含するガンの処置に適切である。
【００７５】本明細書で使用されるメバロン酸経路の阻害剤は、テルペンおよびバスタチンのような化合物を含む。適切なバスタチンはロバスタチンを含んでいる。適切なテルペンは、リモネンおよびその誘導体を含んでいる。
【００７６】ビオフラボノイドは、ビタミンＰ複合体として知られている化合物のクラスであり、そして、毛細血管の脆性に影響を与えること（止血剤）として知られている。一般にこれらは毛細血管の透過性および脆性を減少させる。本明細書で使用されるフラボノイドはアピゲニン（ａｐｉｇｅｎｉｎ）およびクエルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）を含む。しかし、他のフラボノイドも同様の有用性が期待され得る。
【００７７】個々の化合物の特定の活性は、実施例に記載されたアッセイおよびモデルを用しいてスクリーニングされ得る。
【００７８】本発明で使用される用語「脂質代謝の調節」は、インビボでの脂質生産および分解能を変化させる治療能力を示す。例えば、ある脂質代謝の調節は、血清トリグリセリドの減少（被験体の血清中の低密度および高密度のリポタンパク質のレベル）、すなわち被験体のコレステロールのレベルを下げる。
【００７９】
【実施例】ＶＩ．実施例実験を含む本明細書中に記載の実施例は、あらゆる言外の限定を有することなく、以下のＡ〜Ｒに関するフェニル酢酸およびその誘導体に焦点を置いた本発明の実施を例示するための方法を提供する。Ａ．ガンの治療および予防におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用；Ｂ．創傷癒合におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用；Ｃ．インターロイキン−６と関連した疾患の治療におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用；Ｄ．エイズ関連のＣＮＳ機能障害の治療におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用；Ｅ．免疫監視を強めるためのフェニル酢酸およびその誘導体の使用；Ｆ．患者におけるフェニル酢酸およびその誘導体の用量レベルおよび／またはこれらの薬物に対する患者の応答をモニターする方法；Ｇ．フェニル酢酸およびその誘導体によるＰＰＡＲの活性化；Ｈ．多剤耐性表現型を有するガンの治療におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用；Ｉ．フェニル酢酸およびその誘導体の効力と親油性との間の相関；Ｊ．神経芽細胞腫細胞を含むようなガンの治療および予防のための、フェニル酢酸およびその誘導体とレチノイン酸との相乗的併用；Ｋ．悪性神経膠腫または他のＣＮＳ腫瘍のようなガンの治療および予防のための、フェニル酢酸およびその誘導体とロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）との相乗的併用；Ｌ．悪性黒色腫または他の神経外胚葉腫瘍を含むようなガンおよび他の分化障害の治療および予防のためのフェニル酢酸およびその誘導体；Ｍ．前立腺ガンのようなガンの治療および予防のための、フェニル酢酸およびその誘導体とオキシ尿素（ＨＵ）との相乗的併用；Ｎ．髄芽細胞腫および神経膠星状細胞腫誘導細胞を含むガンの治療および予防のためのフェニル酢酸およびその誘導体；Ｏ．ＰＡおよびＰＢを用いる治療に関連するヒト研究におけるフェニル酢酸およびその誘導体；Ｐ．血清トリグリセリドを減少させる工程を含む脂質代謝を改変する方法におけるフェニル酢酸およびその誘導体；Ｑ．悪性細胞および非悪性細胞でのフェニル酢酸およびその誘導体によるＨｂＦの誘導；およびＲ．フェニル酢酸およびその誘導体を投与する方法。
【００８０】セクションＡ．ガンの治療または予防におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用本明細書中で議論されるように、ＮａＰＡおよびＮａＰＢは、薬理学的な、非毒性の濃度でインビトロおよび動物モデルにおける腫瘍の増殖に影響を及ぼす。これらの芳香族脂肪酸は、細胞増殖抑制性を誘導し、そしてホルモン治療抵抗性の前立腺癌腫、神経膠芽細胞腫、悪性黒色腫、および肺癌腫を含む種々のヒト悪性細胞の成熟を促進する。腫瘍生物学における顕著な変化は、腫瘍増殖、浸入、血管形成、および免疫原性と関連される遺伝子の発現の変化と関連付けられた。多数の薬物作用メカニズムが関わるようである。これらのメカニズムには、（ａ）脂質代謝の改変、（ｂ）ＤＮＡのハイポメチル化（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）および転写活性化による遺伝子発現の調節、および（ｃ）タンパク質のイソプレニル化の阻害を包含する。第Ｉ期臨床治験では、これらの新規な、非毒性の分化誘導剤の効果を確認した。
【００８１】フェニル酸誘導体を含有する薬学的組成物は、悪性への逆行を引き起こすこと、および腫瘍細胞の分化を誘導することが示された。例えば、腫瘍細胞の分化を誘導する薬物の能力を示すために、インビトロおよびインビボの異なる分化モデル系を使用した。使用した第１の系は、ヒト前骨髄球性白血病細胞株ＨＬ−６０であった。この細胞株は、骨髄細胞または単核細胞株列の方へ最終的に分化するために誘導され得る、方向づけられていない前駆細胞を表す。第２の系では、筋細胞、脂肪細胞、および軟骨細胞に分化する能力を有する不死化胚間葉Ｃ３Ｈ１０Ｔ１／２細胞を使用した。第３の系は、ヒト赤白血病Ｋ５６２細胞を使用した。なぜなら、これらはヘモグロビンを産生するために誘導され得るからである。インビボ実験は、ヒトおよび動物での最終分化を誘導することにおいてＮａＰＡの有効性を示した。
【００８２】実施例１：悪性神経膠腫（ｇｌｏｍａ）における増殖阻止さらに、フェニルアセテートは、フェニルケトン尿症において未成熟脳への損傷と関連付けられている。発育中の正常脳と悪性中枢神経系腫瘍との間の増殖パターンおよび代謝が類似するために、フェニルアセテートはいくかの脳ガンに損傷を与え得る。フェニルアセテートは、小児および成人が十分に耐える薬理学的濃度で使用される場合、細胞増殖抑制性および培養されたヒト神経膠芽細胞腫細胞の悪性特性の逆転を誘導し得る。興味深いことに、処置された腫瘍細胞は、メバロネートからの新たなコレステロール合成の選択的減少を含む、フェニルケトン尿症様病態で観察された生化学的変化と同様の生化学的変化を示した。神経膠腫（しかし、正常な成熟脳細胞ではない）が細胞増殖に必要なステロールおよびイソプレノイドの生産のためのメバロネートに高度に依存するために、フェニルアセテートは、正常組織には影響を与えずに、インビボで腫瘍増殖に影響を及ぼすことが期待される。頭蓋内神経膠腫を有するラットの全身治療は、宿主に明らかな毒性を与えずに有意な腫瘍抑制を生じる。未分化の脳に対する選択的な活性に関する臨床結果と一致する実験データは、フェニルアセテートが悪性神経膠腫の治療に安全かつ効果的な新規アプローチを提供し得ることを示唆する。
【００８３】尿素回路障害を有する小児のフェニルアセテート治療で得られた臨床経験は、ミリモルレベルが有意な有害作用を有せずに達成され得ることを示す。しかし、これらの患者において神経学的毒性が認められないのは、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）（フェニルアセテートの産生過剰、小頭蓋症、および精神遅滞と関連したフェニルアラニン代謝の先天的エラー）で報告されている重篤な脳損傷とは明白に対照的である。［Ｓｃｒｉｖｅｒ．Ｃ．Ｒ．およびＣ．Ｌ．Ｃｌｏｗ． １９８０． フェニルケトン尿症：ヒト生化学的遺伝学の要説．Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０３：１３９４−１４００．］。臨床的結果中の差は、フェニルアセテートが、出生前および出生後の両方で血液脳関門を迅速に横切るが、神経学的毒性は未成熟の脳に限られるという事実により説明され得る。感受性の範囲が発育の過程で制限されることについての決定的な証拠は、「母性ＰＫＵ症候群」の現象により提供される；早期診断され、そしてフェニルアラニン制限食に保持されるＰＫＵ女性は、正常に発育し、その後の正規の食餌に耐える。これらの女性は、母性ＰＫＵが治療されていないために、しばしば遺伝的に正常ではあるが、精神的に遅滞した乳児を出産する。高レベルの循環中フェニルアセテートは、母親の成熟組織に悪影響を及ぼさずに、胎児の脳に損傷を与える。ＰＫＵにおける最初の病理的変化は、神経膠細胞を迅速に発育させることを包含し、そして次の神経機能障害を伴う脂質代謝および髄鞘形成の変化により特徴づけられる。損傷しやすい胎児神経膠組織は、多くの分子的および生化学的局面において新生物神経膠細胞に類似する。これらの局面には、細胞複製に重要なステロールおよびイソプレノイドの合成のためのメバロネート（ＭＶＡ）代謝［Ｋａｎｄｕｔｓｃｈ，Ａ．Ａ．およびＳ．Ｅ．Ｓａｕｃｉｅｒ．１９６９．正常およびジムピ（ｊｉｍｐｙ）マウスの発育中の脳におけるステロール合成の調節．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．１３５：２０１−２０８；Ｆｕｍａｇａｌｌｉ，Ｒ．，Ｅ．Ｇｒｏｓｓｉ，Ｐ．Ｐａｏｌｅｔｔｉ、およびＲ．Ｐａｏｌｅｔｔｉ． １９６４．脳腫瘍中の脂質に関する研究Ｉ．ヒト脳腫瘍中のコレステロールの前駆体ステロールの発生および意義．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１１：５６１−５６５；Ｇｒｏｓｓｉ，Ｅ．，Ｐ．Ｐａｏｌｅｔｔｉ、およびＲ．Ｐａｏｌｅｔｔｉ．１９５８．脳のコレステロールおよび脂肪酸の生合成の分析．Ａｒｃｈ．Ｉｎｔ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６６：５６４−５７２］、およびＤＮＡ、ＲＮＡおよびタンパク質の合成のための窒素ドナーとしての循環中のグルタミンへの特独な依存性［Ｐｅｒｒｙ．Ｔ．Ｌ．，Ｓ．Ｈａｓｅｎ，Ｂ．Ｔｉｓｃｈｌｅｒ，Ｒ．Ｂｕｎｔｉｎｇ，およびＳ．Ｄｉａｍｏｎｄ．１９７０．フェニルケトン尿症におけるグルタミン涸渇、精神欠陥の可能な原因．ＮｅｗＥｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．２８２：７６１−７６６；Ｗｅｂｅｒ，Ｇ．１９８３．ガン細胞の生化学的ストラテジーおよび化学治療法の設計：Ｇ．Ｈ．Ａ Ｃｌｏｗｅｓ記念講演．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４３：３４６６−３４９２」が包含される。これらの研究の基礎となる仮説は、ヒトの血清グルタミンと結合しそしてこれを涸渇すること、および未成熟脳のＭＶＡ経路を阻害することが知られているフェニルアセテート［Ｃａｓｔｉｌｌｏ，Ｍ．，Ｍ．Ｆ．ＺａｆｒａおよびＥ．Ｇａｒｃｉａ−Ｐｅｒｅｇｒｉｎ．１９８８．実験的高フェニルアラニン血症における脳および肝臓の３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡレダクターゼおよびメバロネート−５−ピロリン酸デカルボキシラーゼの阻害．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１３：５５１−５５５；Ｃａｓｔｉｌｌｏ．Ｍ．，Ｊ．Ｉｇｌｅｓｉａｓ Ｍ．Ｆ．Ｚａｆｒａ，およびＥ．Ｇａｒｃｉａ−Ｐｅｒｅｇｒｉｎ．１９９１．フェニルアラニンのフェニルおよびフェノール性誘導体によるニワトリ脳コレステロール生成酵素の阻害． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．１８：１７１−１７４；Ｃａｓｔｉｌｌｏ，Ｍ．，Ｍ．Ｍａｒｔｉｎｅｚ−Ｃａｙｕｅｌａ，Ｍ．Ｆ．Ｚａｆｒａ，およびＥ．Ｇａｒｃｉａ−Ｐｅｒｅｇｒｉｎ．１９９１．肝臓コレステロール生成の主な調節酵素に対するフェニルアラニン誘導体の効果．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０５：２１−２５］は、悪性神経膠腫中のこれらの重要な制御ポイントを攻撃し得る。フェニルアセテートの有効性を、インビトロおよびインビボの腫瘍モデル両方を用いて示した。
【００８４】細胞培養物および試薬。ヒト神経膠芽細胞腫細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ， Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ， ＭＤ）から購入し、そして他に特定されなければ、１０％の熱で不活性化した仔ウシ血清、抗生物質および２ｍＭＬグルタミンを補充したＲＰＭＩ １６４０に保持した。新たに得られた臍帯から単離したヒト臍静脈内皮細胞は、Ｄ．ＧｒａｎｔおよびＨ． Ｋｌｅｉｎｍａｎ（ＮＩＨ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ）から提供された。フェニル酢酸およびフェニル酪酸のナトリウム塩はＥｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｇａｉｎｓｅｖｉｌｌｅ，ＧＡ）から提供された。フェニルアセチルグルタミンは、Ｓ． Ｂｒｕｓｉｌｏｗ（Ｊｏｈｎｓ Ｈｏｐｋｉｎｓ， ＭＤ）からの贈呈物であった。
【００８５】細胞複製および生存率の評価。３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイドを用いる酵素アッセイ（Ｓｉｇｍａ， Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）［Ａｌｌｅｙ， Ｍ．Ｃ．， Ｄ．Ａ． Ｓｃｕｄｉｅｒｏ， Ａ． Ｍｏｎｋｓ， Ｍ．Ｌ． Ｈｕｒｓｅｙ， Ｍ．Ｊ． Ｃｚｅｒｗｉｎｓｋｉ， Ｄ．Ｌ． Ｆｉｎｅ， Ｂ．Ｊ． Ａｂｂｏｔｔ， Ｊ． Ｇ． Ｍａｙｏ， Ｒ．Ｈ． Ｓｃｈｏｅｍａｋｅｒ，およびＭ．Ｒ． Ｂｏｙｄ， １９８８． マイクロ培養テトラゾリウムアッセイを用いるヒト腫瘍細胞株のパネルによる薬物スクリーニングの可能性． ＣａｎｃｅｒＲｅｓ． ４８：５８９−６０１］、血球計を用いる細胞計数、続いて、トリプシン／ＥＤＴＡによる剥離により、およびＤＮＡへのチミジン組み込みにより、増殖率を決定した。異なるアッセイは本質的に同じ結果を生じた。細胞生存率をトリパンブルー排除により評価した。
【００８６】半固体寒天におけるコロニー形成。腫瘍細胞をトリプシン／ＥＤＴＡで剥離し、０．３６％寒天を含有する成長培地に再懸濁させ、そして薬物の存在または非存在下で固体寒天（０．９％）基底層にプレーティングした。３週間後、３０個またはそれ以上の細胞から構成されるコロニーを評価した。
【００８７】免疫細胞化学。細胞を、Ｄａｋｏ ＰＡＰ ｋｉｔ Ｋ５３７（Ｄａｋｏ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， ＣＡ）を用いる抗ビメンチン（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）モノクローナル抗体で免疫染色した。
【００８８】コレステロール、タンパク質およびＤＮＡ合成の測定。ステロイド合成の研究のために、３μＭロバスタチンおよび０．５ｍＭ非標識メバロネートを含有する成長培地にて、５ｍＭフェニルアセテートまたは２．５ｍＭフェニルブチレートの存在または非存在下で、５×１０６ＤＰＭ［５−３Ｈ］−メバロネート（３５Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ， Ｂｏｓｔｏｎ， ＭＡ）を用いて細胞を２４時間標識した。細胞ステロイドをヘキサンで抽出し、そしてシリカ薄層クロマトグラフィーにより分離した。ヘキサンに溶解した放射性標識生成物のＲｆは、３つの異なる溶媒系中の放射性標識コレステロール標準と同じであった。同様に処置した細胞を、［３Ｈ］−ロイシン（１５８Ｃｉ／ｍｍｏｌ）または［３Ｈ］−デオキシチミジン（６．７Ｃｉ／ｍｍｏｌ）（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ）を用いた代謝標識により、新たなタンパク質およびＤＮＡ合成について試験した。フェニルアセテート／フェニルブチレートと共にインキュベートした細胞ホモジネート中の［１−１４Ｃ］−メバロネート（４９．５ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ， Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ）から放出した１４ＣＯ２の測定を、確立された手順に若干の改変を加えて実施した。
【００８９】タンパク質のイソプレニル化の分析。細胞培養物を、完全成長培地中１０ｍＭフェニルアセテートまたは２．５ｍＭフェニルブチレートと共に２４時間インキュベートし、そして処理の最後の１５時間でＲＳ−［２−１４Ｃ］−メバロネート（１６μＣｉ／ｍｌ、比放射能１５μＣｉ／ｍｍｏｌ）（ＡｍｅｒｉｃａｎＲａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ， ＭＯ）で標識した。全細胞タンパク質を抽出し、１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに再溶解させ、そしてクマシーブリリアントブルー（Ｃｏｍｍａｓｓｉｅ Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ Ｂｌｕｅ）で染色した。次いで、ゲルを乾燥させ、そしてＫｏｄａｋ Ｘ−Ｏｍａｔフィルムに４日間露光させた。
【００９０】動物研究。ヒト神経膠芽細胞腫細胞の腫瘍形成表現型に対するフェニルアセテートの効果を測定するために、培養物を１週間前処理し、次いで、回収し、３０％マトリゲル（ｍａｔｒｉｇｅｌ）（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｂｅｄｆｏｒｄ， ＭＡ）を含有する培地に再懸濁させ、そして５週令の雌性無胸腺マウス（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ， ＮＣＩ Ａｎｉｍａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆａｃｉｌｉｔｙ．）にｓ．ｃ．移植した（部位当たり２．５×１０６細胞）。次いで、動物を、注射部位での腫瘍増殖について観察した。薬物のインビボでの効果をさらに評価するために、Ｆｉｓｈｅｒ ３４４ラットは、上記のように［Ｗｅｉｚｓａｅｃｋｅｒ， Ｍ．， Ｄ．Ｆ． Ｄｅｅｎ， Ｍ．Ｌ． Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍ， Ｔ．Ｈｏｓｈｉｎｏ， Ｐ．Ｈ． Ｇｕｔｉｎ，およびＭ． Ｂａｋｅｒ． １９８１． ９Ｌラット脳腫瘍：動物モデルの説明および適用． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｌ． ２２４：１８３−１９２； Ｃｕｌｖｅｒ， Ｋ． Ｗ．， Ｚ． Ｒａｍ， Ｓ． Ｗａｌｂｒｉｄｇｅ， Ｈ． Ｉｓｈｉｉ， Ｅ．Ｈ． Ｏｌｄｆｉｅｌｄ，およびＲ．Ｍ． Ｂｌａｅｓｅ． １９９２． 実験脳腫瘍の治療のためのレトロウイルスベクター産生細胞を用いたインビボでの遺伝子導入． Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２５６：１５５０−１５５２］、右大脳半球の深層白質に同系９Ｌ神経膠肉腫細胞（４×１０４）の定位接種を受けた。次いで、浸透ミニポンプによる皮下移植を用いて、ナトリウムフェニルアセテート（５５０ｍｇ／ｋｇ／日、ｓ．ｃ．）で動物を２週間連続的に処置した。コントロールラットでは、ミニポンプを生理食塩水で充填した。データの統計的な解析は、フィッシャーの抽出テスト（Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ Ｅｘａｃｔ Ｔｅｓｔ）を使用した。培養ヒト神経膠芽細胞腫細胞における細胞増殖抑制性および表現型復帰の誘導。神経膠芽細胞腫細胞のフェニルアセテートを用いた処置により、時間および用量依存性増殖阻止が生じ、同様にＤＮＡ合成の減少を伴った。４ｍＭフェニルアセテートによる４６日間連続的な処置の後、Ｕ８７、Ａ１７２、Ｕ３７３、Ｕ３４３、およびＨＳ６８３培養物では約５０％の増殖阻害があった（ＩＣ５０ ４．４±０．６ｍＭ）。腫瘍細胞応答の異種性質を反映して、神経膠芽細胞腫Ｕ２５１およびＵ３１８細胞は、感受性が少なかった（８〜１０ｍＭのＩＣ５０値）。患者で予想される薬理学的な病態を模倣して行われるさらなる研究は、グルタミン涸渇培地中のフェニルアセテートに細胞を曝すことを含んだ。これらの条件は、神経膠芽細胞腫細胞の増殖を完全にブロックするが、正常内皮細胞の複製に対して影響をほとんど有しなかった。脂肪酸伸長によって脳内に形成されたフェニルアセテートの中間代謝物であるフェニルブチレートもまた、腫瘍細胞複製を阻害したが（Ａ１７２、Ｕ８７およびＵ３７３では、ＩＣ５０ ２．２±０．２ｍＭ）、最終代謝物であるフェニルアセチルグルタミンは不活性であった。選択性腫瘍細胞増殖抑制性を誘導するに加えて、フェニルアセテートおよびフェニルブチレート両方とも、細胞の成熟化および骨格中間体フィラメントのパターンの変化（足場非依存性の消失）により出現する非悪性表現型への復帰を促進し、そして無胸腺マウスにおける腫瘍形成性を低下させる（表１）。腫瘍挙動におけるこれらの重要な変化は、増殖調節、血管形成、および免疫抑制（例えば、ＴＧＦα、ＨｂＦ、およびＴＧＦ−β２）に関連される遺伝子の発現の変化により達成された。
【００９１】
【表１】
フェニルアセテートはメバロネート経路およびタンパク質のイソプレニル化を阻害する。フェニルアセテートに曝された神経膠細胞に観察された最も一致する生化学的変化は、脂質代謝の変化およびＭＶＡ経路の阻害を含んだ。アセチル−ＣｏＡおよびＭＶＡのような前駆体からのコレステロールおよびイソプレノイドの活発な新たな合成は、発育中の脳の重要な特徴であり（しかし、成熟脳ではない）、髄鞘形成と一致する。これもまた悪性神経膠腫の特質である［Ａｚａｒｎｏｆｆ， Ｄ．Ｌ．， Ｇ．Ｌ． Ｃｕｒｒａｎ，およびＷ．Ｐ． Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ． １９５８． インビトロでヒト頭蓋内腫瘍によるコレステロールへのアセテート−１−１４Ｃの組み込み． Ｊ． Ｎａｔ． Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ． ２１：１１０９−１１１５； Ｒｕｄｌｉｎｇ， Ｍ．Ｊ．， Ｂ．Ａｎｇｅｌｉｎ， Ｃ．Ｏ． Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，およびＶ．Ｐ． Ｃｏｌｌｉｎｓ． １９９０． ヒト頭蓋内腫瘍における低密度リポタンパク質レセプター活性およびコレステロール要求性との関連． Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ５０（補遺）：４８３−４８７］。コレステロール生産およびタンパク質のイソプレニル化は、２４時間内にフェニルアセテートまたはフェニルブチレートのいずれかで処理した神経膠芽細胞腫において低下し、ＤＮＡおよび全タンパク質合成の変化が生じたが、これは４８時間後に検出された。イソプレニル化の低下は、ＰＫＵ様病態の胚脳で先に観察された効果であるＭＶＡのデカルボキシル化の低下（対照の５０％未満）と比較した。ＭＶＡ−５−ピロリン酸デカルボキシラーゼ（脳中のコレステロール合成を調節する鍵酵素）を、ＭＶＡキナーゼおよびＭＶＡ−５−リン酸キナーゼが最小限だけ影響される条件下でフェニルアセテートにより阻害した。フェニルアセテートはまた、アセチル−ＣｏＡからのＭＶＡ合成を妨害する。しかし、神経膠芽細胞腫細胞は外因性ＭＶＡ（０．３〜３ｍＭ）により治療し得なかった。これは、その合成よりもむしろＭＶＡを利用することが、プライム標的であることを示唆する。
【００９２】メバロネートは、全細胞周期の進行に必要とされる数種のイソペンテニル部分（例えば、ステロール、ドリコール、ユビキノンおよびイソペンテニルアデニンの側鎖、および重要なタンパク質の小セットを修飾するプレニル基）の前駆体である［Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ， Ｊ．Ｌ．およびＭ．Ｓ． Ｂｒｏｗｎ． １９９０． メバロネート経路の調節． Ｎａｔｕｒｅ． ３４３：４２５−４３０；Ｍａｒｓｈａｌｌ， Ｃ．Ｊ． １９９３． タンパク質のプレニル化：タンパク質−タンパク質相互作用の仲介物． Ｓｃｉｅｎｃｅ． ２５９：１８６５−１８６６； Ｂｒａｕｎ， Ｐ．Ｅ．， Ｄ．Ｄｅ Ａｎｇｅｌｉｓ， Ｗ．Ｗ． Ｓｈｔｙｂｅｌ，およびＬ． Ｂｅｒｎｉｅｒ． １９９１． イソプレノイド修飾は２’，３’−環状ヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼを膜に結合させる． Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｒｅｓ． ３０：５４０−５４４］。後者は、分裂シグナル変換導入に関わる原形質膜ＧおよびＧ様タンパク質（例えば、ｒａｓ）（分子量２０〜２６ｋＤａ）、髄鞘形成関連酵素２’，３’−サイクリックヌクレオチド３’−ホスホジエステラーゼ、および分裂に重要な役割を果たす核エンベロープラミン（４４−７４ ｋＤａ）を含む。脳の速やかな発育の間におけるステロールおよびイソプレノイドの阻害は、未治療ＰＫＵに見られる小頭蓋症および髄鞘形成障害をもたらし得る。他方、成熟脳ではＭＶＡ経路が著しく活性でないため、脱分化された悪性神経膠腫のＭＶＡを標的化することは、周囲の正常組織を損傷せずにインビボで腫瘍増殖を阻害することが期待される。ラットの実験神経膠腫におけるフェニルアセテートの活性。フェニルアセテートのインビボでの抗腫瘍効果を評価するために、Ｆｉｓｈｅｒラットを同系９Ｌ神経膠肉腫細胞の定位大脳内注射で接種した。この腫瘍モデルは、３〜４週間内で約１００％の死亡率が生じるという攻撃的増殖パターンに関して知られている。フェニルアセテートを、浸透圧ミニポンプによる皮下移植により連続的に投与して、５５０ｍｇ／ｋｇ／日の臨床的に達成し得る用量を送達した。頭蓋内に神経膠腫細胞を有するラットの２週間の全身治療は、検出可能な有害作用を有せずに腫瘍増殖を著しく抑制した（ｐ＜０．０５、表２）。実験動物におけるさらなる研究は、フェニルアセテート（２〜３ｍＭの血漿および髄液レベル）がインビボで腫瘍細胞の成熟化を誘導し、そして生存率を有意に延長した。
【００９３】
【表２】
要約および見込み。フェニルアセテートは、発育中の胎児脳への損傷に長い間関連している。原発性ＣＮＳ腫瘍が非常に未成熟胎児脳を連想させるので、悪性神経膠腫は、同等に損傷を受け易いはずである。さらに、天然のヒトモデルとしての母性ＰＫＵ症候群を考慮すると、フェニルアセテートは正常組織に損傷を与えずに脳新生物の増殖を抑制することが期待される。実験データはこの仮説を支持する。フェニルアセテートは選択的な細胞増殖抑制性を誘導し、そしてインビトロおよびインビボで神経膠腫細胞の成熟を促進した。未熟増殖の停止および分化はまた、ＰＫＵの胎児脳への損傷の基礎となる。多数の作用メカニズムが関わり、これらには、ヒトにおけるタンパク質イソプレニル化の阻害および血漿グルタミンの涸渇が含まれる。証明可能な抗腫瘍活性、毒性の欠如、および投与の容易さ（経口または静脈内）は、悪性神経膠腫、ならびに他の新生物の処理におけるフェニルアセテートの臨床効果を示す。上記のように、フェニルアセテートは、インビトロで前立腺ガンに対し活性を示した。ガンを患った成人をフェニルアセテートで治療する第１相臨床試験は、治療レベルが有意な毒性を有せずに血漿および髄液で達成され得、そして前立腺癌腫および神経膠芽細胞腫患者に有益な予備証拠を提供することを確認した。
【００９４】フェニルアセテートは、前立腺癌腫、神経膠芽細胞腫、および悪性黒色腫を含むヒト固体腫瘍を治療するために使用された。治療の結果として、復帰した足場依存性、低下した浸入および無胸腺マウスの腫瘍形成の消失により示されるように、選択的細胞増殖抑制性および表現型復帰が得られた。脳およびホルモン治療抵抗性の前立腺ガン細胞の分子分析は、増殖調節、血管形成、および免疫抑制に関連されるタンパク質であるＴＧＦβの産生および分泌の著しい低下を示した。処理された前立腺細胞は、ヒトの疾患進行の分子マーカーであるウロキナーゼ−プラスミンーゲン活性化因子により仲介される、低下したタンパク質分解活性を示した。
【００９５】実施例２：ＮａＰＡで処理された脳腫瘍における、成長停止、腫瘍成熟、および生存の延長インビトロ研究細胞増殖。細胞増殖に対するＮａＰＡの影響を、培養９Ｌ神経膠肉腫細胞に対するトリチウム化チミジン取り込みアッセイ、およびトリプシン／ＥＤＴＡによる剥離後血球計数器を用いる細胞計数を用いて評価した。９Ｌは、Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ラット由来の同系の悪性神経膠腫瘍であり、そして大脳内接種後３〜４週間以内に１００％の死亡率を伴う［Ｗｅｉｚｓａｅｃｋｅｒ Ｍ、ＤｅｅｎＤＦ、Ｒｏｓｅｎｂｌｕｍ ＭＬら、９Ｌラット脳腫瘍：動物モデルの解説および応用、Ｊ Ｎｅｕｏｌ．１９８１；２２４：１８３−１９２］。腫瘍細胞を、５×１０４腫瘍細胞／ウェルで、２４ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）中、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）、５０Ｕ／ｍｌペニシリン（ＧＩＢＣＯ）および５０μｇ／ｍｌストレプトマシン（ＧＩＢＣＯ）および２．５μｇ／ｍｌファンギゾン（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．，Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ、ＣＡ）を添加したダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中にプレーティングした。２４時間後、培地を交換し、そしてＮａＰＡ（Ｅｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｇａｉｎｅｓｖｉｌｌｅ、ＧＡ）を、０、２．５、５、および１０ｍＭ濃度で５日間培地に添加した。回収６時間前、０．５ｍＣｉトリチウム化チミジン（ＩＣＮ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｉｒｖｉｎｅ、ＣＡ）を各ウェルに添加した。チミジンの取り込みは、３連のシンチレーションカウントにより測定した。
【００９６】半固形培地におけるコロニー形成。足場依存性成長（細胞が半固形培地でコロニーを形成する能力）が悪性神経膠細胞の特徴である。９Ｌ細胞を、トリプシン／ＥＤＴＡを用いて回収し、そして０．３６％寒天（Ｄｉｆｃｏ）を含む成長培地中１．０×１０４細胞／ｍｌで再懸濁した。２ｍｌの細胞懸濁液を、４ｍｌの固形寒天（０．９％）でプレコートされた６０ｍｍプレート（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）に添加した。フェニルアセテートを、異なる濃度（０、１．２５、２．５および５ｍＭ）で寒天に添加した。第２番目の実験では、９Ｌ細胞を、５ｍＭ ＮａＰＡを含む組織培養中で７日間成長させた。次いで、記載のように、細胞を、ＮａＰＡを含まない寒天平板に移した。３０またはそれより多い細胞を含むコロニーを３週間後に計数した。
【００９７】９Ｌ脳腫瘍接種およびフェニルアセテート投与。２３０〜３５０ｇ体重のＦｉｓｈｅｒ ３４４ラット（ｎ＝５０）を、腹腔内（ｉ．ｐ．）ケタミン（９０ｍｇ／Ｋｇ、Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ， Ｉｎｃ，Ｆｏｒｔ Ｄｏｄｇｅ，Ｉｏｗａ）およびキシラジン（１０ｍｇ／Ｋｇ、ＭｏｂａｙＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ， Ｓｈａｗｎｅｅ、Ｋａｎｓａｓ）を用いて麻酔し、そして定位固定装置（Ｄａｖｉｄ Ｋｏｐｆ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｔｕｊｕｎｇａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）中に置いた。５μＬ（Ｈａｎｋの）平衡塩溶液中の４×１０４の同系の９Ｌ神経膠肉腫細胞を、定位固定装置の操作アームに連結した１０μＬのハミルトンシリンジを用いて、右大脳半球の深部白質（接種の深さ３．５ｍｍ）中に注入した。１０匹のラットにおいて、フェニルアセテートを、２つの２ＭＬ２浸透圧ポンプを用いて、５μｌ／時間の放出速度で１４日間（Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）、薬物の連続皮下（ｓ．ｃ．）放出により投与した。腫瘍接種の日に、ポンプを両側腹部の皮下組織中に移植した。ラット１匹当たり５５０ｍｇ／ｋｇの連日用量に対して、ポンプ中の薬物濃度は６５０ｍｇ／ｍｌ（両方のポンプについて総量２６００ｍｇ）であった。ミニポンプを、２８日の全処置に対して１４日後に取り替えた。１５匹の別のラットに、記載されたように、腫瘍の大脳内投与７日後から開始して、ＮａＰＡを投与した。これらのラットでは、ＮａＰＡの別の連日注入（３００ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を２８日間行った。コントロールラット（ｎ＝２５）には、２つのｓ．ｃ．２ＭＬ２浸透圧ポンプから連続生理食塩水を投与した。手術時にペニシリン（１００，０００ｕ／ｋｇ、ｉ．ｍ．）を、ミニポンプ移植前のすべてのラットに投与した。各グループについて生存率を記録した。確立された腫瘍について処理された３匹のラットおよび２匹のコントロールラットを、ＮａＰＡの開始後７日（腫瘍接種１４日後）に屠殺した。これらを、処置された腫瘍の電子顕微鏡研究、インビボ増殖アッセイ、および血清中およびＣＳＦのＮａＰＡレベルの測定に用いた。末梢器官（心臓、肺、脾臓、肝臓、腎臓、腸、副腎、および生殖腺）を回収し、そして一般組織学的検査に供した。脳標本を切片にし、そして薬物関連毒性の証拠について、ルーチンのヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）ならびにミエリン染色（Ｌｕｘｏｌ−ｆａｓｔ ｂｌｕｅ）に対して染色した。
【００９８】電子顕微鏡観察。動物を、ｐＨ７．４の０．１Ｍカコジル酸ナトリウム中の１％パラホルムアルデヒドおよび２．５％グルタルアルデヒドを用いて心臓内灌流により屠殺した。２時間後、固定した脳を緩衝液中で洗浄し、そして１ｍｍ厚さの冠状切片にスライスした。腫瘍を含む領域を、１ｍｍ３立方体にさらに解剖し、０．１Ｍ カコジル酸ナトリウム緩衝液中の２％オスミウムテトラオキシドを用いて２時間の間後固定し、緩衝液中で洗浄し、１％ウラニルアセテートを用いてｐＨ５で一晩一括して媒染処理し、次いで洗浄し、脱水し、そしてＥｐｏｎ中に包埋した。薄切片を、いくつかのレベルで各ブロックに切断し、より大きなサンプリングを確実にした。腫瘍細胞の電子顕微鏡写真を、形態についてランダムに撮った。
【００９９】インビトロ増殖アッセイ。１匹のＮａＰＡ処理および１匹の生理食塩水処理ラットに、腫瘍接種１４日後、および処置開始７日後、９ｍｇ／３ｍｌのＢｒｄＵ（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）をｉ．ｐ．注入した。２時間後、ラットを屠殺し、そして脳を取り出し切片にした。マウス抗ＢｒｄＵモノクローナル抗体を、組織の免疫染色のために用い、この組織は、次いで、ヘマトキシリンで対比染色した。１０高出力視野中の腫瘍細胞を、各腫瘍標本中で計数し、そして陽性の染色細胞（活性な細胞分裂の間のＢｒｄＵの取り込みを示す）のパーセントを記録した。
【０１００】血清およびＣＳＦ中のＮａＰＡレベルの測定。３匹のＮａＰＡ処理および２匹の生理食塩水処理ラットを、ｓ．ｃ．およびｉ．ｐ．ＮａＰＡの併用、または生理食塩水投与の７日後、屠殺した。血液を心臓から引き抜き、そしてＣＳＦを大槽から吸引した。ＣＳＦの容量制限のため、プールした血清およびＣＳＦサンプルを同様の様式で評価した。生物流体の２００μｌアリコートのタンパク質抽出を、１００μｌの１０％過塩素酸溶液を用いて実施した。１５０μｌの上清液を、２５μｌの２０％重炭酸カリウムで中和し、そして遠心分離した。次いで１２５μｌの上清液を、サンプリングチューブにピペットで移した。クロマトグラフィーを、３０ｃｍのＷａｔｅｒｓ Ｃ１８カラム（内径３．９ｍｍ）を用いて６０℃でＧｉｌｓｏｎ７１５ＨＰＬＣシステム上で実施した。７５μｌの注入液を、２０分間にわたって１ｍｌ／分の流速で５〜３０％の範囲のアセトニトリル／水グラジエントを用いて溶出した。ＵＶモニタリングを２０ｎｍの波長で実施した。フェニルアセテートの溶出時間は、１４．８分であった。
【０１０１】統計解析。χ２乗検定を用いて、ＢｒｄＵ陽性細胞の割合を比較した。Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｚｅｌ検定を、生存実験におけるＮａＰＡ処理と生理食塩水処理ラットとの間の生存率を比較するために用いた。
【０１０２】インビトロの結果細胞増殖おいよび足場依存性に対するＮａＰＡのインビトロ効果。
【０１０３】５日間のＮａＰＡを用いた９Ｌ細胞の処置は、ＩＣ５０が６．０±０．５ｍＭで、細胞数の用量依存性の減少を生じた。これは、トリチウム化チミジン取り込みの減少を伴った。さらに、フェニルアセテートは、足場依存性の用量依存性回復を誘導し、悪性表現型の逆行を示した（表３）。寒天中（ＮａＰＡを含まない）にプレーティングする前７日間の間ＮａＰＡに曝された９Ｌ細胞は、なおコロニー形成において＞４０％の阻害を示した（表３）。
【０１０４】
【表３】
インビボ研究インビボ増殖アッセイおよび電子顕微鏡知見。確立した脳腫瘍のＮａＰＡを用いた処置は、増殖速度を有意に減少させる結果となった。１３４７の生理食塩水処置腫瘍細胞のうち４２９と比較して、１２８３の処置腫瘍細胞のうち２８５がＢｒｄＵに対して染色された（生理食塩水処理腫瘍では０．３３に対してＮａＰＡ処置では０．２２の分裂指数；ｐ＜０．０００１）。
【０１０５】これら腫瘍の電子顕微鏡撮影は、ＮａＰＡ処置腫瘍細胞で、著量の良く組織化された粗面小胞体を示し、より高いレベルの細胞分化を示した［Ｇｈａｄｉａｌｌｙ ＦＮ編、細胞分化および新形成における小胞体およびリボソーム、Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｍａｔｒｉｘ Ｔｈｉｒｄ、Ｌｏｎｄｏｎ：Ｂｕｔｔｏｒｗｏｒｔｈｓ；１９９２：４５０−４５４］。対照的に、非処置腫瘍は、一般に、粗面小胞体が乏しくそして多くのポリリボソームを有していた（これは高度に悪性な細胞の特徴である）。さらに、非処置腫瘍では、分裂細胞がより多い頻度で見出された。
【０１０６】ＮａＰＡの血清およびＣＳＦレベル。ｓ．ｃ．およびｉ．ｐ．ＮａＰＡの併用（８５０ｍｇ／ｋｇの連日の総用量）または生理食塩水投与の７日後得られた、３匹の処置および２匹のコントロールラット由来のプールされた血清およびＣＳＦのアッセイは、血清中に２．４５ｍＭのおよびＣＳＦ中に３．１ｍＭの平均フェニルアセテートレベルを示した。生理食塩水処置ラットからのＣＳＦサンプルではフェニルアセテートは検出されなかった。
【０１０７】生存実験同時腫瘍接種およびＮａＰＡの投与。１０匹のＮａＰＡ処置ラットのうち７匹は、ＮａＰＡが腫瘍接種の日に開始して４週間投与されたとき、腫瘍接種後＞９０日生存した。１０匹のコントロールラットのうち９匹は、腫瘍接種後３４日以内に死亡した（ｐ＜０．０１、Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｚｅｌ検定）。
【０１０８】確立された腫瘍のＮａＰＡを用いた処置。ｓ．ｃ．およびｉ．ｐ．ＮａＰＡで４週間（腫瘍接種７日後に開始）処置した１２匹のラットのうち５匹が腫瘍接種後５０日間なお生存し、その一方１３匹の生理食塩水処置ラットのうち１２匹は３６日までに死亡した（ｐ＜０．０３、Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｚｅｌ検定）。
【０１０９】毒性。試験されたいずれのラットにおいてもＮａＰＡ処置の有害作用は検出されなかった。主な腫瘍末梢器官および非腫瘍性脳の組織学的評価は異常を示さなかった。
【０１１０】考察。フェニルアセテートは、本研究で用いられたインビトロおよびインビボ脳腫瘍モデルにおいて、強力な細胞増殖抑制性効果および抗腫瘍効果を誘導した。この効果は、長期間生存、および腫瘍接種と同時にまたは腫瘍が確立された後のいずれかでＮａＰＡを投与されたラットの明らかな治癒により示されるように、薬物投与の期間を過ぎても持続した。このＮａＰＡの延長効果は、おそらくいくつかの動物では不可逆的に、処置された腫瘍細胞の悪性表現型が、より良性のおよび分化した表現型に逆転したことを示す。足場非依存性、即ち、細胞が半固形寒天でコロニーを形成する能力は、悪性の神経膠腫細胞の特徴である。フェニルアセテートは、足場依存性の用量依存性回復を引き起こし、神経膠腫細胞の非悪性表現型の復帰を示した。コロニー形成の８０％より多い阻害を、処置ラットにおいて測定された血清およびＣＳＦレベルと同様に、２．５ｍＭの寒天平板中のＮａＰＡ濃度で達成した。さらに、ＮａＰＡに対して１週間曝した後、４０％より多い腫瘍細胞が、寒天平板中にＮａＰＡが存在しないにもかかわらず良性の成長パターンを維持した（表３）。細胞分化の顕著なインビボ指標が、本発明者らの研究で処置脳腫瘍細胞の細胞下細胞器官中で観察された。生理食塩水処置腫瘍細胞中の非組織化された細胞質ポリリボソームは、ＮａＰＡにより過形成性の、良く組織化された、粗面小胞体に転換された。小胞体は、多くの異なる機能を行う高度に分化した構造である。それ故、良好に発達した小胞体は、細胞分化および機能的活性を示す。粗面小胞体の量、成長速度、および腫瘍の悪性度の間において逆の関係が認められている［Ｇｈａｄｉａｌｌｙ ＦＮ．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ ｏｆ Ｔｕｍｏｕｒｓ．第２版、Ｌｏｎｄｏｎ：Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ；１９８５］。非処置腫瘍細胞における多くのポリリボソームは、光学顕微鏡により観察される有糸分裂の数と良く相関し、そしてＢｒｄＵ増殖アッセイにより確認された。これらの変化は、悪性神経膠腫細胞に対するＮａＰＡの分化効果を顕著に表し、そして細胞増殖におけるインビボ減少および脳腫瘍を有する処置動物で生じた生存の延長と相関する。
【０１１１】処置ラットでは、治療血液中およびＣＳＦのＮａＰＡレベルに到達した。高ＣＳＦレベルは、中枢神経系中および増殖する腫瘍中へのＮａＰＡの良好な浸透を示す。用いられる用量は、先天性の尿素合成エラーを有する小児（２．５ｇ／ｋｇ／日）またはラット（１．６ｇ／ｋｇ／日）における、ＮａＰＡの既知の毒性レベルのかなり下であり、そしてＮａＰＡがより高い用量で、おそらく抗腫瘍効率の増大とともに、安全に与えられ得ることを示す。これらのデータは、フェニルアセテートが、非毒性用量でラットに与えられれば、腫瘍成長の調節および細胞成熟に対して重要な効果を有することを示す。
【０１１２】実施例３：５−アザ−２’−デオキシシチジンで誘導される発ガンの抑制：それらの低細胞障害性および遺伝毒性の可能性について選択された分化インデューサーは、化学的予防および維持治療において主要な価値を有し得る。具体的には、フェニルアセテートが化学的療法ハイポメチル化（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｎｇ）薬物５−アザ−２’−デオキシシチジン（５ＡｚａｄＣ）による発ガンを予防する能力を、インビトロでおよびマウス中で試験した。不死化されているが、非腫瘍原性のｒａｓ形質転換４Ｃ８線維芽細胞を５ＡｚａｄＣに一時的に曝すと、成長の接触阻害、獲得侵入力、および無胸腺マウスにおける腫瘍原性の損失により顕示される新生物性の形質転換が生じた。後者は、ｒａｓ発現の増加およびコラーゲン生合成減少と関連した。これらの重要な表現型および分子変化は、フェニルアセテートの同時処理により妨げられた。フェニルアセテートによる５ＡｚａｄＣ発ガンからの保護は：（ａ）両薬剤によるＤＮＡハイポメチル化にかかわらず高度に効率的；（ｂ）細胞障害性および遺伝毒性効果がない；（ｃ）処置をやめた後も安定、および；（ｄ）インビボで再現される、ことである。４Ｃ８細胞を保持する無胸腺マウスは、５ＡｚａｄＣによる単回ｉ．ｐ．注入後、線維肉腫を発症したが、腫瘍の発症はフェニルアセテートの非毒性用量による全身処置により有意に阻害された。従って、フェニルアセテートおよび経口投与に適したその前駆体フェニル酪酸（ｐｈｅｎｙｌｂｕｔｙｒａｔｅ）は、新しいクラスの化学的予防剤を呈示し得、その有効性および安全性がさらに評価されるべきである。新生物性形質転換の複数工程である性質は、この疾患プロセスを、化学予防的介入に対して修正可能にする。いくつかの薬剤が、発ガンを阻害し、そしてそれによって原発性または続発性ガンの発症を阻害することが示されている［Ｋｅｌｌｏｆｆ，Ｇ．Ｊ．、Ｃ．Ｗ．Ｂｏｏｎｅ、Ｗ．Ｆ．，Ｍａｌｏｎｅ、およびＶ．Ｅ．Ｓｔｅｅｌｅ、１９９２、化学的予防臨床治験、Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．，２６７：２９１−２９５；Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ，Ｂ．Ｉ．１９９１．ガン予防：最近の進歩およびさらなる機会、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，５１：５０８０Ｓ−５０８５Ｓ；Ｗａｔｔｅｎｂｅｒｇ，Ｌ．Ｗ．天然に存在するおよび合成化合物による発ガンの阻害。Ｙ．Ｋｕｒｏｄａ，Ｄ．Ｍ．ＳｈａｎｋｅｌおよびＭ．Ｄ．Ｗａｔｅｒｓ編、Ａｎｔｉｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ Ａｎｔｉｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ、ＭｅｃｈａｎｉｓｍｓＩＩ、ｐｐ．１５５−１６６．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｒｐ．，１９９０；Ｓｐｏｒｎ，Ｍ．Ｂ．，およびＤ．Ｌ．Ｎｅｗｔｏｎ．１９７９．ガンおよびレチノイドの化学的予防。Ｆｅｄ．Ｐｒｏｃ．３８：２５２８−２５３４］。主に重要なものは、ビタミン（Ａ、Ｂ１２、Ｃ、Ｄ３、およびＥ）、レチノイド、およびテルペンを含む天然産物およびそれらのアナログである。これらの薬剤は、細胞成長および分化を調節することにより発ガン性傷害に続く新生物性形質転換を抑制し得る。そのような１つの成長調節因子がフェニルアセテートである。
【０１１３】化学的予防剤としてのフェニルアセテートの効力は、５ＡｚａｄＣ誘導発ガンのインビトロおよびインビボモデルを用いて試験された。ガンおよびβ鎖ヘモグロビン異常症の処置における５ＡｚａｄＣの有望性にもかかわらず、その臨床応用は、発ガンの可能性に関する懸念から妨げられている。本研究で用いられるモデルは、転写的に活性化されたｃ−Ｈａ−ｒａｓガン原遺伝子を発現する前ガン性のマウス線維芽細胞（細胞株４Ｃ８およびＰＲ４）を含んでいた。これらの非腫瘍形成性細胞は、薬学的用量の５ＡｚａｄＣによって高度に悪性転換を受けやすい。しかし、フェニルアセテートは、培養およびマウスの両方において５ＡｚａｄＣ誘導発ガンからそのような傷を受け易い細胞を保護し得る。
【０１１４】細胞培養および試薬。マウスＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞、ＰＲ４Ｎおよび４Ｃ８−Ａ１０（本明細書ではＰＲ４および４Ｃ８と称する） のサブクローンは先に記載されている［Ｗｉｌｓｏｎ，Ｖ．Ｌ．，Ｒ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｈ．Ａｕｔｒｕｐ，Ｈ．Ｋｒｏｋａｎ，Ｄ．Ｅ．Ｍｕｓｃｉ，Ｎ−Ｎ−Ｔ．Ｌｅ，Ｊ．Ｌｏｎｇｏｒｉａ，Ｄ．Ｚｉｓｋａ，およびＣ．Ｃ．Ｈａｒｒｉｓ．１９８６．３２Ｐポストラベル分析によるゲノム５−メチルシトシン測定、Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１５２：２７５−２８４；Ｄｕｇａｉｃｚｙｋ，Ａ，Ｊ．Ｊ．Ｈａｒｏｎ，Ｅ．Ｍ．Ｓｔｏｎ，Ｏ．Ｅ．Ｄｅｎｎｉｓｏｎ，Ｋ．Ｎ．Ｒｏｔｈｂｌｕｍ，およびＲ．Ｊ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ．１９８３．ニワトリ筋肉から単離されたグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデビドロゲナーゼメッセンジャーリボ核酸のデオキシリボ核酸コピーのクローニングおよび配列決定、Ｂｉｏｃｈｅｍ．２２：１６０５−１６１３］。両方の細胞株は、マウスインターフェロンα／βを用いて長期間処置後、ＬＴＲ／ｃ−Ｈａ−ｒａｓ１−形質転換３Ｔ３細胞から単離された表現型復帰変異体である。培養は、１０％の熱不活性化したウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）および抗生物質を補充したダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で維持された。フェニル酢酸およびフェニル酪酸のナトリウム塩（Ｅｌａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は蒸留水に溶解した。５ＡｚａｄＣ（Ｓｉｇｍａ Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ＭＯ）は、リン酸塩緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中に溶解し、そして使用するまでアリコートに分けて−２０℃で貯蔵した。薬物の加水分解を防ぐために、５ＡｚａｄＣを直接光への曝露を常時避けた。
【０１１５】５ＡｚａｄＣによる処置。培養中の処置のために、細胞を１〜２×１０５細胞で１００ｍｍ皿中にプレーティングし、そして薬物を、２０および４８時間後成長培地に添加した。引き続き細胞を、ヌクレオシドアナログの非存在下で継代培養し、そして表現型の変化を観察した。５ＡｚａｄＣを用いたインビボ処置では、６〜９週齢の雌性無胸腺ヌードマウス（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ＮＣＩ Ａｎｉｍａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆａｃｉｌｉｔｙ）に、０．５×１０６細胞を皮下（ｓ．ｃ．）注射で接種した。２４時間後、２００μｌＰＢＳ中の新たに調製した４００μｇの５ＡｚａｄＣを、各動物に腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した（約２０ｍｇ／ｋｇ）。ＮａＰＡによる全身処置が本文中に記載されている。
【０１１６】マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）上での成長。細胞が組織バリアを分解しそして横切る能力を、再構築された基底膜であるマトリゲル（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ｅｓｅａｒｃｈ）を利用する定性インビトロ侵入アッセイにより評価した。細胞を、４８時間の間、Ｔ．Ｃ．プラスチック皿中で、単独の５ＡｚａｄＣまたはＮａＰＡと組み合わせた５ＡｚａｄＣに曝した。ＮａＰＡ処置を、さらに１〜２週間継続した。次いで細胞を、２５０μｌのマトリゲル（１０ｍｇ／ｍｌ）で予めコートした１６ｍｍ皿（Ｃｏｓｔａｒ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）に再プレーティング（ポイント当たり５×１０４）した。ＮａＰＡは、皿に添加されたか、または効果の可逆性を測定するために省略されたかのいずれかであった。侵入細胞のネット様形成特性は、１２時間以内に生じた；マトリゲル中への侵入は６〜９日後明らかであった。
【０１１７】無胸腺マウスにおける腫瘍形成。細胞を、４〜６週齢の雌性無胸腺ヌードマウス（Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ＮＣＩ ａｎｉｍａｌ Ｐｒｏｇｒａｍ，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆａｃｉｌｉｔｙ）中にｓ．ｃ．（部位当たり５×１０５細胞）注入した。腫瘍の数、サイズ、および重量を、３〜４週後記録した。組織化学的検査のために腫瘍を切除し、Ｂｏｕｉｎの溶液（ピクリン酸：３７％ホルムアルデヒド：氷酢酸、１５：５：１ｖｏｌ／ｖｏｌ）中で固定し、そしてＨ＆Ｅで染色した。
【０１１８】ＤＮＡメチル化の測定。５−メチルシトシン含量を測定するために、第２回目の５ＡｚａｄＣ処置の２４時間後、培養のサンプルを採取した。細胞ペレットを、０．５％ＳＤＳ、０．１Ｍ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＥＤＴＡ ｐＨ８．０中で溶解し、４００μｇ／ｍｌのプロテイナーゼＫ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）を添加し、そしてＤＮＡ単離および分析まで−７０℃で保存した。細胞内ＤＮＡ中のメチル化／非メチル化シトシン残基の含量を、先に記載のように、３２Ｐポストラベル技法により測定した。
【０１１９】ノーザンブロット分析およびＤＮＡプローブ。細胞質ＲＮＡを指数的に増殖する細胞から抽出し、そして１．２％アガロース−ホルムアルデヒドゲル中の電気泳動により分離した。ＲＮＡ調製、ナイロン膜上へのブロッティング（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ）、放射性標識ＤＮＡプローブとのハイブリダイゼーション、およびオートラジオグラフィーは、記載［Ｒｉｍｏｌｄｉ， Ｄ．， Ｖ．Ｓｒｉｋａｎｔａｎ， Ｖ．Ｌ．Ｗｉｌｓｏｎ， Ｒ．Ｈ．Ｂａｓｓｉｎ，およびＤ．Ｓａｍｉｄ．１９９１。５−アザ−２’デオキシシチジンにより誘導される悪性形質転換に対するｒａｓまたはｍｙｃガン原遺伝子を発現する非腫瘍形成性線維芽細胞の増加した感受性。Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、５１：３２４−３３０］のように行った。ＤＮＡプローブは：ｖ−Ｋｉ−ｒａｓの６．２ｋｂ ＥｃｏＲＩフラグメント、ヒトｃ−Ｈａ−ｒａｓＩ遺伝子の２．９ｋｂ ＳａｃＩフラグメント、およびｃ−ｍｖｃ遺伝子のＢａｍＨＩ４．５ｋｂフラグメントを含む。グリセルアルデヒドホスフェートデヒドロゲナーゼｃＤＮＡ［Ｄｕｇａｉｃｚｙｋ，Ａ、Ｊ．Ｊ．Ｈａｒｏｎ、Ｅ．Ｍ．Ｓｔｏｎ、Ｏ．Ｅ．Ｄｅｎｎｉｓｏｎ、Ｋ．Ｎ．Ｒｏｔｈｂｌｕｍ、およびＲ．Ｊ．Ｓｃｈｗａｒｔｚ １９８３。ニワトリ筋肉から単離されたグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼメッセンジャーリボ核酸のデオキシリボ核酸コピーのクローニングおよび配列決定、Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２２：１６０５−１６１３］は、Ｍ．Ａ．Ｔａｉｎｓｋｙ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ、Ｈｏｕｓｔｏｎ）により、そしてマウストランシンｃＤＮＡは、Ｇ．Ｔ．Ｂｏｗｄｅｎ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｒｉｚｏｎａ、Ｔｕｃｓｏｎ）により提供された。マウス組織適合性クラスＩ抗原に対するｃＤＮＡプローブは、Ｇ．Ｊａｙ（ＮＩＨ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ）からの贈与であった。放射標識プローブを、ランダムプライムＤＮＡ標識キット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて［３２Ｐ］ｄＣＴＰ（ＮＥＮ）で調製した。５ＡｚａｄＣにより誘導されるインビトロ発ガンおよびフェニルアセテートによるその予防。非処置の４Ｃ８およびＰＲ４は、上皮様細胞を含む接触阻害された単層を形成した。先の観察に一致して、対数増殖期の間に０．１μＭ ５ＡｚａｄＣに対しこれらの培養を一時的に曝すと、迅速および大量の新生物性形質転換を生じる。５ＡｚａｄＣ処置の１週間以内に、細胞集団の大部分が、屈折性を有し、そして形状が紡錘形になり、そして成長の接触阻害の損失を示す、増加した飽和密度の多層培養を形成した（表４）。これらの表現型変化は、５〜１０ｍＭ ＮａＰＡにより予防され得る（表４）。ＮａＰＡ処置のいくつかの異なるレジュメが同様に効果的であることが見出された。これらは：（ａ）５ＡｚａｄＣの添加１日前から開始するＮａＰＡを用いた予備処理；（ｂ）両薬物に同時に曝す、および；（ｃ）５ＡｚａｄＣ１日後のＮａＰＡの添加を含む。すべての場合において、細胞は、引き続いて、少なくとも１週間の間、ＮａＰＡを用いた連続処置を受けた。これら条件下の細胞培養は、ＮａＰＡ単独で処理された細胞同様、非処置のコントロールに似た接触阻害単層を形成した。これらの細胞は、ＮａＰＡ処置を止めた後、少なくとも３週間の間良性の成長パターンを維持した。
【０１２０】ＮａＰＡが新生物性形質転換を阻害することは、細胞が再構築された基底膜（マトリゲル）に侵入できず、そして無胸腺マウスにおいて腫瘍を形成できないことによりさらに示される。マトリゲル上に置かれたとき、５ＡｚａｄＣ形質転換４Ｃ８およびＰＲ４細胞は、高度に悪性の細胞に特徴的なネット様構造を発達させ、そして結局、細胞外マトリックス成分を分解した。著しく対照的に、ＮａＰＡ処置培養は、先に正常な線維芽細胞で観察されたように、マトリゲルの先端上に、小さな、非侵入性のコロニーを形成した。非処置の親細胞は、それらコロニーがゆっくりと成長し、そし非侵入性であるが、おそらくは増加した細胞移動性のために、なお形態が不規則であったように、中間の表現型を示した。フェニルアセテートの化学的予防効果は、その前駆体であるフェニル酪酸によっても同様に生じ得る。フェニル酪酸ナトリウムの存在下（ＮａＰＢ、１．５〜３ｍＭ）で、５ＡｚａｄＣに曝された細胞は、接触阻害される成長を維持し、そしてマトリゲル上に置かれたとき良性の表現型を示した（表４）。
【０１２１】
【表４】
細胞のインビボ成長特性は、無胸腺マウスにおける細胞の挙動と相関した。５ＡｚａｄＣ処置４Ｃ８細胞は、マウス中へのｓ．ｃ．移植の２週間以内に迅速に成長する線維肉腫を発症させた。それらのインビトロ挙動に一致して、親細胞は、はるかに侵略性でなく、８匹のレシピエント動物のうち３匹で、３〜４週間後小さな病巣を形成した。しかし、５ＡｚａｄＣとＮａＰＡとの併用で培養中で１週間の間予備処置された４Ｃ８細胞を注入した動物では、腫瘍は発症しなかった（表４）。ＮａＰＡ単独で処置されて４Ｃ８を注入したマウスにおいても腫瘍形成は認められなかった。従って、ＮａＰＡが、前悪性の線維芽細胞の表現型復帰を誘導し、そしてシトシンアナログによりそれらの悪性転換を予防したと結論される。
【０１２２】ＮａＰＡによる遺伝子発現の調整。ＮＩＨ３Ｔ３由来の細胞株である４Ｃ８およびＰＲ４は、ＬＴＲ活性化ｃ−Ｈａ−ｒａｓガン原遺伝子を保持する。５ＡｚａｄＣ処置４Ｃ８のノーザンプロット分析は、ｒａｓ ｍＲＮＡレベルで有意な増加を示し、そして分化マーカー、コラーゲンα（Ｉ型）転写物の減少を示した。ＮａＰＡが添加された培養中では遺伝子発現においてそのような変化は起こらなかった。連続処置の１週間後、ＮａＰＡを除去してもｒａｓ発現の回復は起こらず、ＮａＰＡの治療利益がさらなる処置がなくても安定であることを確認した。
【０１２３】ＤＮＡメチル化に対するフェニルアセテートおよび５ＡｚａｄＣの影響。５ＡｚａｄＣは、ＤＮＡメチル化の強力なインヒビターであり、後成的発現機構は、遺伝子発現および細胞表現型の制御に関係した。ハイポメチル化は、ガンおよび重篤な先天性の貧血の治療効果の基礎になり得る［Ｍｏｍｐａｒｌｅｒ，Ｒ．Ｌ．，Ｇ．Ｅ．Ｒｉｖａｒｄ，およびＭ．Ｇｙｇｅｒ．１９８５。急性白血病患者における５−アザ−２’−デオキシシチジンに関する臨床治験、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．，３０：２７７−２８６；Ｓｔａｍａｔｏｙａｎｎｏｐｏｕｌｏｓ，Ｊ．Ａ，およびＡ．Ｗ．Ｎｉｅｎｈｕｉｓ．１９９２。ヘモグロビン異常症の処置におけるヘモグロビン交換に対する治療アプローチ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｍｅｄ．，４３：４９７−５２１；Ｌｅｙ，Ｔ．Ｊ．、Ｊ．ＤｅＳｉｍｏｎｅ、Ｎ．Ｐ．Ａｎａｇｎｏｕ、Ｇ．Ｈ．Ｋｅｌｌｅｒ、Ｒ．Ｋ．Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ、Ｐ．Ｈ．Ｔｕｒｎｅｒ，Ｐ．Ｈ．、Ｎ．Ｓ．Ｙｏｕｎｇ、Ｐ．Ｈｅｌｌｅｒ，およびＡ．Ｗ．Ｎｉｅｎｈｕｉｓ．１９８２。５−アザシチジンは、β−サラセミア患者におけるγグロビン合成を選択的に増加する、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．、３０７：１４６９−１４７５］。しかし、ＤＮＡメチ化における変化がまた、その発ガン性活性の原因となり得る。従って、フェニルアセテートにより保護される細胞におけるＤＮＡメチル化の程度を測定することが重要であった。予期され得るように、５ＡｚａｄＣは、５−メチルシトシン（５ｍＣ）含量に有意な減少を引き起こした（表５）。しかし、ＮａＰＡとの併用で５ＡｚａｄＣ処置した細胞において、およびＮａＰＡ単独で処置した細胞において、５ｍＣの比較され得る減少が存在した（表５）。
【０１２４】
【表５】
ＮａＰＡによるインビボ化学的予防。インビボにおけるＮａＰＡの効力を測定するために、研究を拡張して、皮下的に移植された非腫瘍発生性の４Ｃ８細胞を持つ無胸腺マウスを含む動物モデルを含めた。５ＡｚａｄＣのマウスへの単回ｉ．ｐ．注入（２０ｍｇ／ｋｇ）は、４Ｃ８細胞接種部位で腫瘍の発症を生じた。しかし、マウスが５ＡｚａｄＣ注入の１．５時間前にＮａＰＡで前処置され、そしてＮａＰＡ処置をその後２２日間継続した場合、腫瘍形成の発症は有意に減少した（表６）。動物の体重および挙動により示されるように、ＮａＰＡ処置に関連する有害作用はなかった。さらに、ＤＮＡハイポメチル化を引き起こすにもかかわらず、ＮａＰＡは、移植４Ｃ８細胞の新生物性形質転換を誘導しなかった。ＮａＰＡにより保護された動物は、４Ｃ８接種部位で腫瘍の発症もゆっくり増殖する病巣の形成も引き起こさなかった。この動物データは、インビトロでの知見と一致し、ＮａＰＡが５ＡｚａｄＣ誘導新生物性形質転換を、有意な毒性を生成することなく阻害し得ることを示す。
【０１２５】
【表６】
ガンの化学的予防の非毒性分化誘導剤の使用は大いに興味深い。薬物の毒性は候補者の集団（すなわち、危険性の高い個人および小康状態の患者）の健康状態および変化しやすい寿命全体を考慮すると特に重要である。分化誘導剤フェニルアセテートは、非毒性用量で用いられた場合には、インビトロおよびインビボの両方で、５ＡｚａｄＣ誘導性発ガンを予防し得る。
【０１２６】化学的予防は、発ガンの「開始」工程（すなわち、変異誘発）をブロックすること、あるいは悪性疾患への「プロモーション」および進行を抑制することにより成し遂げられ得る。モデルとして活性化したｒａｓガン遺伝子を有する前悪性細胞を用いる本研究では、抗プロモーション薬物としてのフェニルアセテートの効力を試験した。プロモーションをブロックする他のよく特徴づけられた化学的予防薬剤は、ビタミンＡおよびその合成レチノイドを含む；フェニルアセテートと同様にこれらの化合物はまた、細胞増殖および分化の調節因子である。
【０１２７】本研究は、ＤＮＡ低メチル化薬物である５ＡｚａｄＣおよび５ＡｚａＣ（１６、１７）による悪性転換を非常に受け易い（４Ｃ８およびＰＲ４と命名された）線維芽細胞を含む、インビトロおよびインビボのモデルを開発した。培養中またはレシピエント無胸腺マウスのいずれかにおいて、これらの細胞を５ＡｚａｄＣに一時的に曝すことにより、迅速な新生物性形質転換が生じた。悪性転換は、ｒａｓ ｍＲＮＡレベルの増加、およびコラーゲンＩ型発現のダウンレギュレーションに関係した。このことは細胞分化の喪失を示す。５ＡｚａｄＣによってもたらされる、これらの深い生物学的および分子的変化は、非細胞障害性濃度のフェニルアセテートおよびその前駆体であるフェニルブチレートでの同時の処置によって妨げられる。フェニルアセテートの抗腫瘍活性および毒性の欠如を、無胸腺マウスにおいて確認した。インビボモデルにおいて、ｓ．ｃ．で移植された影響を受けやすい４Ｃ８細胞を有するマウスに５ＡｚａｄＣをｉ．ｐ．で注入した。そのように処置した全てのマウスは、急速に増殖する線維肉腫を発達させた；しかし、腫瘍形成の発生率はＮａＰＡの全身的処置によって著しく減少した。
【０１２８】５ＡｚａｄＣで誘導される悪性転換をＮａＰＡが妨げるメカニズムは不明である。プロモーションをブロックする他の化学的予防剤と同様に、フェニルアセテートは、細胞増殖抑制性および腫瘍成熟を誘導することにより作用し得る。インビトロおよびげっ歯類モデルにおいて、フェニルアセテートが選択的に増殖停止および腫瘍分化を引き起こし得ることを示す、増えつつある大量の証拠がある。ある場合、例えば、前骨髄細胞性白血病では、フェニルアセテートにより誘導された分化は、ｍｙｃガン遺伝子発現の低下と関連している。ＮａＰＡ処置した４Ｃ８では、脱分化からの保護（増殖特性およびコラーゲン発現により証明された）は、ｒａｓの過剰発現の阻害と関連があった。従って、ガン遺伝子発現のダウンレギュレーションは、ＮａＰＡの化学的予防活性の原因の一部分であり得る。ｍＲＮＡレベルでｒａｓに影響することに加えて、コレステロール合成のメバロン酸回路のインヒビターであるフェニルアセテート（Ｃａｓｔｉｌｌｏ， Ｍ．， Ｊ． Ｉｇｌｅｓｉａｓ， Ｍ．Ｆ． Ｚａｆｒａ． およびＥ． Ｇａｒｃｉａ−Ｐｅｒｅｇｒｉｎ． １９９１． フェニルアラニンのフェニルおよびフェノール類誘導体によるヒヨコ脳のコレステロール生成酵素の阻害。Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． Ｉｎｔ．， １８： １７１−１７４）はまた、ｒａｓがコードするタンパク質ｐ２１の翻訳後の改変をブロックし得た。ｐ２１のプレニル化のインヒビターであるリモネンもまた化学的予防剤である。
【０１２９】５ｍＣ含有量の低下にも関わらず、フェニルアセテートは５ＡｚａｄＣによる発ガンをブロックした。実際、ＮａＰＡ自身がＤＮＡのメチル化を阻害することが見出された；しかし、５ＡｚａｄＣとは対照的に、ＮａＰＡは発ガン性を有していなかった。化学的薬剤の発ガン性の潜在能力とＤＮＡ低メチル化活性との相関は、以前に組織培養モデルにおいて記述された。そしてＤＮＡ ５ｍＣパターンの変化は発ガンの開始に貢献し、そしてこれをおよび増強していると提唱された。しかし、このデータは、ＤＮＡメチル化の量的な変化だけでは、細胞の表現型に影響を与えるに十分でなく、従って低メチル化活性は、これらのインビトロおよび動物モデルにおいて、腫瘍発生の表現型を誘導するのに十分ではないことを示す。
【０１３０】脱メチル化に続く細胞内因子および化学的薬剤による特定の遺伝子の選択的な誘導が、いくつかの研究室により報告されている。例えば、インビトロでのヒトγグロビン遺伝子発現の増加は、５ＡｚａＣでの処置後のヘキサメチレンビスアセトアミドによる活性化を必要とすることが見出された。［Ｌｅｙ Ｊ．Ｔ．，Ｙ．Ｌ． Ｃｈｉａｎｇ， Ｄ． Ｈａｉｄａｒｉｓ， Ｎ．Ｐ． Ａｎａｇｎｏｕ Ｖ．Ｌ． Ｗｉｌｓｏｎ， ａｎｄ Ｗ．Ｆ． Ａｎｄｅｒｓｏｎ．１９８４． ヒト染色体１１を含むマウス赤血球白血病細胞におけるＤＮＡのヒトβ−グロビン様遺伝子のメチル化および調節。Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ． ８１：６６１８−６６２２）］； ５ＡｚａＣによるこの遺伝子の脱メチル化は遺伝子発現に十分ではなかった。これに対して、フェニルアセテートおよびフェニルブチレートは、培養した赤血球系前駆細胞およびヒトにおいて、胎児ヘモグロビンのその後の蓄積によりγグロビン遺伝子の発現を誘導した。ＤＮＡメチル化に影響を与えることに加えて、ＮａＰＡおよびＮａＰＢはまた、転写因子として機能する核レセプターを活性化する（ペルオキシソーム増殖因子レセプターを本明細書で議論する）。従って、ここで見られるＮａＰＡ／ＮａＰＢと５ＡｚａｄＣとの間の相反する発ガン活性の違いに関する一つの考えられ得る説明は、芳香族脂肪酸の、増殖調節に重要な遺伝子の発現を誘導する能力であり得る。フェニルアセテートおよび関連化合物は、サイレントな抗ガン遺伝子のメチル化媒介抑制状態を逆転し得る可能性がある。哺乳類細胞におけるＮａＰＡによるＤＮＡ低メチル化の知見は、植物においてミリモル濃度で、フェニルアセテートがＤＮＡのメチル化を阻害することを示した以前の研究を考慮すると、驚くことではない。興味深いことに、そのような高い濃度では、フェニルアセテートはまた、植物の腫瘍細胞の増殖を阻害する。故に、ＤＮＡのメチル化に対するフェニルアセテートの効果、および増殖および分化の調節におけるその役割は進化において保存されている。
【０１３１】ＮａＰＡと５ＡｚａｄＣ（あるいは５ＡｚａＣ）との併用の成果は特に興味深い。シトシンアナログは、白血病、鎌状赤血球貧血、およびβ−サラセミアのような重度の血液障害の患者に利益を与えることが示されている。現在、５ＡｚａｄＣは、悪性黒色腫（Ｗｅｂｅｒら、投稿中）および前立腺癌腫を含むいくつかの固形腫瘍でも、活性を有し得ることを示唆する実験データがある。不幸なことに、５ＡｚａｄＣの臨床的応用は発ガンに関する懸念により制限されている。このデータは、ＮａＰＡが５ＡｚａｄＣの治療的な効果を保存および増強する一方、発ガンの危険性を最小にし得ることを示す。β−異常血色素症患者由来のヒト白血球細胞および赤血球系前駆細胞を用いた研究は、 ＮａＰＡが５ＡｚａｄＣの効力を増強し、このことが胎児ヘモグロビン生産の更なる誘導を引き起こし得ることを明らかにした。さらに、非毒性であるが、最適より下の濃度の５ＡｚａｄＣへのＮａＰＡ／ＮａＰＢの添加は、培養したホルモン治療抵抗性前立腺ガン細胞において増殖を完全に停止させ、そしてアポトーシスを促進した（未発表データ）。
【０１３２】それゆえ、フェニルアセテート（一般的なアミノ酸誘導体）は、抗腫瘍および化学的予防薬物として価値があり得る。不快な臭気を有するＮａＰＡは、その経口投薬用前駆体であるＮａＰＢ（あるいはＮａＰＢの誘導体またはアナログ）により置換され得る。ヒトによる摂取の際に、フェニルブチレートは、フェニルアセテートへのβ酸化を受ける。ＮａＰＡと同様に、ＮａＰＢは実験モデルにおいて抗腫瘍および化学的予防活性を示す。そして両薬とも、尿素サイクル異常の子供の長期経口治療について、安全であることが既に証明された。ガンの成人が参加したより最近の臨床研究は、血漿レベルがミリモルのフェニルアセテートおよびフェニルブチレートを、有害作用なしに達成し得ることを立証した。ＮａＰＢ／ＮａＰＡは、ガンの発達に傾いた、高い危険性の個人に利益をもたらし、他の抗ガン治療薬との併用で適用されて効力を高め、そして有害作用を最小化し、そしておそらく継続治療に用いられて病気の再発を防止する。
【０１３３】セクションＢ：創傷癒合におけるフェニル酢酸およびその誘導体の使用成長因子（ＴＧＦ−αを含む）は、創傷癒合および修復プロセスにおいて重大な役割を果たしている。創傷癒合は、炎症、創傷細胞移動（ｗｏｕｎｄ ｃｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）および有糸分裂、新血管形成および細胞外マトリックスの再生を含む局在化プロセスである。最近のデータによると、創傷細胞の活動は、オートクライン（ａｕｔｏｃｒｉｎｅ）およびパラクライン（ｐａｒａｃｒｉｎｅ）メカニズムを介して創傷細胞に影響を及ぼすペプチド成長因子の局所的産生により調節され得る（Ｓｃｈｕｌｔｚら、Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ． ４５（４）：３４６（１９９１）； Ｓｃｈｕｌｔｚら、Ａｃｔａ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ． Ｓｕｐｐｌ．（Ｃｏｐｅｎｈ），２０２：６０（１９９２））。組織（例えば、皮膚、角膜、および胃腸管）の正常な創傷癒合において重要な役割を果たし得る２つのペプチド成長因子は、構造的に関連する上皮成長因子（ＥＧＦ）およびＴＧＦ−αであり、これらのレセプターは、皮膚、表皮ケラチン細胞、繊維芽細胞、血管内皮細胞、および胃腸管の上皮細胞を含む多くの型の細胞により発現される。ＥＧＦまたはＴＧＦ−αは、創傷癒合に関連する様々な細胞（血小板、表皮ケラチン細胞、活性化マクロファージおよび角膜上皮細胞を含む）により合成される。動物および患者の様々な創傷の癒合（例えば、中間層熱傷の再生、皮膚節創傷、胃十二指腸潰瘍および眼球表面の上皮外傷）は、ＥＧＦまたはＴＧＦ−αを用いて外部から処置することにより増強される。ＴＧＦ−α（ヒト強膜繊維芽細胞の培養におけるリシルオキシダーゼｍＲＮＡレベルの強力なインデューサーである）は、外傷後の細胞外マトリックス成分の合成を誘発する第一の原因であり得る。さらに、ＴＧＦ−αは、血管形成を促進することが知られている。
【０１３４】成長因子を適切に刺激しなければ、多くの慢性創傷に見られる非癒合症状を起こす。未癒合症状は、外因性ＴＧＦ−αを添加するかまたはエフェクター細胞を刺激してＴＧＦ−αおよび関連成長因子を産生させるかのどちらかで顕著に解消され得る。現状では、ＰＡおよびＰＢ（または薬学的に受容可能な誘導体）は、創傷癒合に関連するメラノサイト起源（ｏｒｉｇｉｎ）の細胞；星状細胞株列（神経グリア芽腫細胞）；およびいくつかの正常ヒト上皮細胞型（表皮ケラチン細胞を含む）においてＴＧＦ−αの産生を刺激する能力を有することが見出されている。さらに、ＰＡおよびＰＢでの処置により、コラーゲン−αＩ型の発現が増強される。例えば、ヒトメラノーマ１０１１細胞（細胞は、５ｍＭ ＮａＰＡ、１０ｍＭ ＮａＰＡ、１．５ｍＭ ＮａＰＢおよび３ｍＭ ＮａＰＢで４日間連続して処置した）において、ＮａＰＡおよびＮａＰＢで処置をすることにより、ＴＧＦ−αｍＲＮＡ発現が誘導されることが、ノーザンブロット分析により示され；ＴＧＦ−αの発現は、その後のタンパク質分析で確認される。ＴＧＦ−αタンパク質の産生は、ヒト表皮ケラチン細胞をＮａＰＡおよびＮａＰＢに曝すと増加した。上皮ＨＫ５細胞を、ＮａＰＢ（３．０ｍＭ、１．５ｍＭ、０．７５ｍＭ）、ＮａＰＢ（１０ｍＭ、５．０ｍＭ、２．５ｍＭ）およびＰＡＧ（５ｍＭ）で、４日間連続して処置した。非処置細胞をコントロールとして供した。ＴＧＦ−αの量（ｎｇ／ｍｌ／１０６細胞）は、抗ＴＧＦ−α抗体を用いることにより測定した。このＴＧＦ−α産生の増加は、２、３日間持続し、その後このＴＧＦ−α産生のレベルは、ほぼ処置前のレベルに戻る。以下におよび図４で考察するように、創傷の処置にこれらの化合物を用い得ることが、ＮａＰＢでの処置後、ＩＣＡＭ−１（細胞接着分子／表面抗原）の発現が増強したことによりさらに支持され得る。
【０１３５】従って、本発明は、細胞におけるＴＧＦ−αの産生を刺激する方法を提供する。さらに、ヒトまたは動物の創傷癒合は、フェニル酢酸またはＮａＰＡあるいはＮａＰＢのようなフェニル酢酸誘導体（これらは、ＴＧＦ−αのインサイチュ産生を刺激する）の治療量で処置することにより増強され得る。例えば、表面創傷は、ＰＡ、ＰＢまたはＰＡあるいはＰＢのどちらかの誘導体を皮膚表面に局所的に適用すること（例えば、クリーム処方物）により処置され得る。同様にして、眼球の外傷は、ＰＡまたはＰＢ（またはＰＡ／ＰＢ誘導体）の処方物（例えば、目薬）を角膜に適用することにより処置され得る。同様に、内部外傷（例えば、胃腸管の外傷）は、経口処方物の投与により処置され得る。膣または肛門の外傷もまた、例えば、ＰＡＡまたは誘導体の薬学的効果量を含有する座薬で処置され得る。ＰＡ／ＰＢまたは誘導体処方物は、連続的に、または好ましくは断続的に（例えば、１日、１週間または１ヶ月コースで１回またはそれ以上の用量）投与され得る。例えば、０．１ｍＭから１０ｍＭ ＰＡ、好ましくは、０．１ｍＭ〜５．０ｍＭ ＰＡまたは０．１ｍＭから５ｍＭ ＰＢ、好ましくは、０．１ｍＭ 〜２．５ｍＭ ＰＢを含む組成物を、１週間にわたって１日１回または２回、局所的に投与すると、創傷の修復が適切に刺激される。本明細書中に含有される情報から、用量濃度および様々な投与媒体の量が容易に決定され得る。例えば、局所処置（例えば、ＰＢを含有するクリーム）は、代表的には、約０．５ｍＭ〜３．０ｍＭ ＰＢまたは等価効力（ｅｑｕｉｐｏｔｅｎｔ）（等価効力という言葉により、被験体に等価な効果を与えるために異なるフェニル酢酸誘導体を用いた場合、用量が変化し得ることを意味する）を有する用量のフェニル酢酸誘導体を含む。例えば、同様に示されたＰＡ用量と等価な効果を与えるには、 ＰＢの約１．５倍の用量が必要であるが、それに制限されない。
【０１３６】セクションＣ：インターロイキン−６関連病の処置におけるフェニル酢酸またはその誘導体の使用インターロイキン−６（ＩＬ−６）（刺激された単核細胞および表皮ケラチン細胞により産生され得る）は、防御メカニズム（免疫応答、急性期反応および造血を含む）に重要な役割を果たす多面発現性サイトカインである。成熟Ｂ細胞の活性化は、流動相における抗原によって誘発され得る。抗原がＩＬ−１およびＩＬ−６の存在下で細胞膜ＩｇＭと結合する場合、成熟処女Ｂ細胞は、分化し、そしてイソタイプをＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＥに転換する。ＩＬ−６遺伝子の異常発現は、以下を含む様々な疾患の病因および／または徴候に関連すると提案された：（１）異常分化プログラムに関する非悪性疾患、自己免疫および炎症プロセス（例えば、慢性関節リウマチ、キャスルマン病（Ｃａｓｔｌｅｍａｎ’ｓｄｉｓｅａｓｅ）、メサンギウム増殖、糸球体腎炎、ブドウ膜炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、狼そう、腸炎症、Ｉ型糖尿病、脈管炎）、および細胞分化の様々な皮膚疾患（例えば、乾せんおよび角質増殖））；（２）ウイルス疾患（例えば、ＡＩＤＳおよびＡＩＤＳ関連腫瘍（例えば、カポージ肉腫およびリンパ腫））；および（３）その他の腫瘍（例えば、多発性骨髄腫、腎カルチノーマ、レナートＴ−細胞リンパ腫および血漿細胞腫瘍）。例えば、正常組織と比較して外傷乾せん組織においてＩＬ−６ｍＲＮＡレベルが有意に上昇したことおよびアトピー性コントロールまたは健康コントロール由来の試料と比較して乾せんの血清および末梢血単核細胞においてＩＬ−６量が上昇したことが見出された（Ｅｌｄｅｒら、Ａｒｃｈ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ， Ｒｅｓ．，２８４（６）：３２４（１９９２）； Ｎｅｕｎｅｒら、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，９７（１）：２７（１９９１））。現状では、フェニル酢酸またはフェニル酢酸誘導体（例えば、ＮａＰＡまたはＮａＰＢ）が、ＩＬ−６の発現を阻害し得ることが見出されている。例えば、ＰＡは、結腸カルチノーマ細胞におけるＩＬ−１−誘導−ＩＬ−６発現を阻害する。結腸２６カルチノーマ細胞に由来する細胞性ｍＲＮＡ（５μｇ／レーン）について、ＩＬ−６特異的プローブを用いたノーザンブロット分析を行った。細胞は、組換えＩＬ−１β（０．１ｎｇ／ｍｌ）単独で処置するか、２．５ｍＭ、５．０ｍＭおよび１０ｍＭ ＮａＰＡと併用で４８時間の連続処置するかの、どちらかで処置された。ＩＬ−６は、コントロール細胞（非処置）では、検出されなかった。このＲＮＡの減少は、ＩＬ−６タンパク質の減少により確認される。従って、ＰＡ、ＰＢおよびこれらの誘導体はＩＬ−６の異常な過発現を含む疾患の処置に用いられ得る。
【０１３７】例えば、患者の乾せん性損傷に、鉱物油ベースのクリーム中の２ｍＭ ＮａＰＢまたは鉱物油ベースのクリーム中の２ｍＭナフチルアセテートおよびビタミンＢ１のどちらかを直接、局所的に適用することにより、１日２回の処置をすると、１週間以内に損傷が消失した。重度の乾せんを有する患者に同様の処置をすると、約１〜３週間で乾せん損傷が解消された。明らかに、薬物投与モードおよび薬物量は、処置されるＩＬ−６関連疾患に依存して変化し得るが、これはＩＬ−６発現の減少が所望される細胞を、薬物の標的とするためである。例えば、０．１ｍＭ〜５ｍＭ ＰＢの溶液または薬学的に受容可能なフェニル酢酸誘導体を含む等価効力を有する溶液を連結領域に注射することは、慢性関節リウマチの処置に適切であり得、他方、他の疾患の場合には、局所、静脈または経口送達により、さらに適切な処置がされ得る。処置は、連続または不連続処置のどちらかによりなされ得るが、薬物（特に、ＰＢ）の中断は、薬物での処置の中断をすることによる過剰反応を防止するために投与量を傾斜的に減じることにより行われ得る。さらに、ＩＬ−６の異常な過剰発現に関する疾患は、フェニル酢酸またはフェニル酢酸誘導体（特に、ＰＡまたはＰＢ）の効果量を抗炎症剤（様々なビタミン（例えば、ビタミンＢ１、非ステロイド炎症剤およびステロイド抗炎症剤）を含む）の効果量と共に投与することにより、処置され得る。この抗炎症剤は、同様の用量形態で本発明のフェニル酢酸誘導体と組合わせられ得、あるいはこの誘導体と同様の経路または異なる経路により別々に投与され得る。抗炎症剤の効果量とは、一般的に、特定の疾患状態に対する臨床使用量またはそれ未満の量を意味する。
【０１３８】セクションＤ：ＡＩＤＳ関連ＣＮＳ機能障害の処置におけるフェニル酢酸またはその誘導体の使用ＡＩＤＳ患者における中枢神経系（ＣＮＳ）疾患の特徴（Ｈａｌｌｍａｒｋ）は、頭痛、熱、微細認知変化（ｓｕｄｔｌｅ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｃｈａｎｇｅ）、異常反射および運動失調である。痴呆および重症感覚（ｓｅｖｅｒｅ ｓｅｎｓｏｒｙ）および運動機能障害は、より重度の疾患を特徴付ける。自己免疫様末梢神経障害、脳血管疾患および脳腫湯もまた観察される。ＡＩＤＳ痴呆において、ＣＮＳのマクロファージおよび小グリア細胞は、ＨＩＶ−１に感染し、かつＨＩＶ−１を増殖する優勢細胞型である。しかし、ＨＩＶ−１による直接感染よりむしろ、ＣＮＳ疾患徴候は、ウイルスタンパク質の分泌またはグリア細胞およびニューロンに結合するサイトカイン（例えば、ＩＬ−１、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−６ ）のウイルス誘導を通して媒介されると提案されている（Ｍｅｒｒｉｌｌら、ＦＡＳＥＢ Ｊ．，５（１０）：１２９１（１９９１））。ＴＧＦ−βは、多くの細胞型により放出される成長因子である。その他の効果の中で、ＴＧＦ−βは、マクロファージおよび繊維芽細胞に対する高度な走化性因子であり、そしてＴＮＦ−α、ＴＧＦ−αおよび間接的には、マクロファージから様々な他のモジュレーターの放出を刺激し、ＡＩＤＳのＣＮＳ徴候の開始に関連している。
【０１３９】フェニル酢酸またはフェニル酢酸誘導体（例えば、ＮａＰＡまたはＮａＰＢ）が、ＴＧＦ−β２の産生を阻害し得ることが見出された。ＴＧＦ−β２は、免疫抑制因子なので、この阻害により、患者の免疫系が全般的に改良される。神経グリア芽腫細胞におけるＴＧＦ−β２の遺伝子発現は、ＰＡおよびＰＢの両方により阻害された。Ａ１７２細胞由来の細胞性ｍＲＮＡ（５μｇ／レーン）を、ＴＧＦ−β２特異的プローブを用いたノーザンブロット分析にかけた。細胞を５ｍＭＮａＰＡ、１０ｍＭ ＮａＰＡおよび１．５ｍＭ ＮａＰＢで４日間連続して処置した。このＲＮＡの減少により、ＴＧＦ−β２タンパク質合成が減少される。従って、ＰＡ、ＰＢまたはこれらの誘導体は、細胞におけるＴＧＦ−β２の産生を阻害し、特に、ＨＩＶ感染に起因するＣＮＳ徴候を制御または軽減するために使用され得る。上記で考察したように、この処置はまた、ＩＬ−６の産生を阻害し、さらにＣＮＳ徴候の軽減が可能である。ＴＧＦ−β２を阻害するために効果的な投与の薬物量および／または処方は、ガンの処置またはガン予防のために適切な薬物量または予防計画に対応する。
【０１４０】セクションＥ：免疫監視の増強を目的としたフェニル酢酸およびその誘導体の使用ヒトのような動物の免疫監視は、ＰＡ、ＰＢまたはこれらの誘導体で処置することにより増強され得る。腫瘍細胞は、少なくとも２つの方法により免疫系の攻撃から免れると考えられる。第一に、多くの腫瘍は、免疫活性を直接減少させる免疫抑制因子を分泌する。さらに、細胞の中には、免疫系にアウトロー細胞（ｏｕｔｌａｗ ｃｅｌｌ）を確認させるような適切な表面抗原を発現しないもの、またはこの表面抗原の発現を減少させるものがある。しかし、本発明の組成物は、休眠遺伝子（例えば、胎児グロブリン）を、他の方法により活性化させ得る（おそらく、部分ＤＮＡ（ｈｙｐｏ）メチル化による）。同様に、ガンサプレッサー遺伝子、休眠抗原および他の遺伝子（例えば、（１）細胞性主要組織適合性抗原（ＭＨＣクラスＩおよびＩＩ）またはＩＣＡＭ−１のような他の表面抗原；（２）ＭＡＧＥ−１のような腫瘍抗原；および（３）ＥＢＶラテント膜タンパク質（Ｔ−細胞腫瘍、バーキットリンパ腫鼻咽頭カルチノーマ、およびホジキン病のような多数の疾患に関連している）の活性化は、免疫監視の増強に貢献し得る。従って、新生物性細胞は、ＰＡ、ＰＢまたはこれらの誘導体で処置され得、細胞表面抗原を発現させ、それにより腫瘍細胞の適切な確認およびクリアランスによって免疫系の効力増加させる。
【０１４１】このフェニル酢酸またはフェニル酢酸誘導体組成物が、休眠遺伝子を活性化させ得、そして表面抗原の発現を増強し得る証拠が、図４で与えられる。そして、図４は、メラノーマ細胞を２ｍＭ ＮａＰＢで１０日間処置したときのＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩおよび接着分子ＩＣＡＭ−１の発現の増強を示す（例えば、母集団（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）平均のシフトはＭＨＣ ｃｌａｓｓＩに対して約５０から２００までであった）。
【０１４２】さらに、ＰＢが、バーキットリンパ腫細胞におけるＥＢＶラテント膜タンパク質（ＬＭＰ）の発現を誘導することが見出されている。ＬａｎｄｉｓＰ、ＲａｊＩおよびＰ３ＨＲＩバーキットリンパ腫細胞株から単離した細胞質ＲＮＡ（２０μｇ／レーン）を、２ｍＭ ＰＢで４日間処置した。次いで、特異的ＬＭＰプローブを用いるノーザンブロット分析を行った。コントロール（非処置細胞）と比較して、３つの細胞株の全てにおいて陽性反応が観察され、ＰＢがＥＢＶラテント膜タンパク質の発現を誘導することが示された。バーキットリンパ腫細胞において、ＰＡおよびＰＢの両方がさらに分子および細胞性変化を引き起こし、そしてこれらの変化は細胞増殖抑制性、ｍｙｃ発現の衰退およびＨＬＡ＋１の増強を含む。
【０１４３】これらの表面抗原は、インビボで腫瘍免疫原性を増強するので、ＰＡ、ＰＢまたはこれらの誘導体で動物（ヒト）を処置することは、個々の免疫系の効果を増強し得る。約０．５ｍＭ 〜３．０ｍＭ ＰＢの用量または薬学的に受容可能なフェニル酢酸誘導体の等価効力を有する用量は、有用であり得る。この処置はまた、従来の免疫療法による処置および／または抗原標的化、抗体−媒介化学療法と組合わせられ得る。通常、処置が、実質的に連続処置を可能にするプロトコルに従ってなされるのに対して、不連続またはパルス処置プロトコルもまた、特にＰＡＡまたはＰＡＡ誘導体での処置において最終分化し得る細胞について効果的である。例えば、図４で示されるメラノーマ細胞の１０日間の処置は、この１０日間の後、表面抗原の発現を連続的に増強させ得るのに十分であった。
【０１４４】実施例４：バーキットリンパ腫におけるＮａＰＡおよびＮａＰＢ効果細胞株に感染したエプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）は、ＮａＰＡによる阻害以上にＮａＰＢにより増殖阻害された。これは、処置後約４日目のｃ−ｍｙｃ発現の減少によると考えられる。あいにく、現段階ではこの細胞株の分化を測定する公知の測定法がない。しかし、ＮａＰＡでの処置は、実質的な形態変化およびクランピング（おそらく、細胞間または細胞−マトリックス間相互作用が変化したことに起因する）を引き起こす。細胞外マトリックスに結合した細胞の割合の上昇は、ＩＣＡＭ １の上昇によるものであり得る。この細胞は、さらにＨＬＡクラスＩ抗原およびラテント膜タンパク質を産生し、これにより、免疫系が、細胞で視覚的に観察され得る。
【０１４５】セクションＦ：フェニル酢酸またはその誘導体の投与量レベルを患者および／またはこれらの薬剤に対する患者の応答でモニターする方法上記のように、フェニル酢酸またはフェニル酢酸の誘導体（例えば、ＮａＰＡまたはＮａＰＢ）を動物（ヒト）に本明細書に記載したとおり、ある量で、処置期間にわたって投与することは、種々の分子変化を含む。これらの分子の特性は、（１）薬剤の投与量レベルまたはその生物学的利用性を動物でモニターするため、および／または（２）薬剤に対する患者の応答の生物マーカーとして作用するための生物マーカーとして用いられ得る。例えば、上記のように、有効量のＮａＰＡまたはＮａＰＢ（またはそれらの誘導体）の投与により、種々の分子効果を生じる。種々の効果を以下に列挙する：ａ）赤血球の胎児ヘモグロビンのレベルの増加；ｂ）メラノサイト起源、星状細胞株統、または上皮細胞型の細胞のような種々の細胞におけるＴＧＦ−αの生産の増加；ｃ）ＩＬ−６生産の阻害；およびｄ）ＴＧＦ−β２生産の阻害。従って、特定の生物マーカーの絶対濃度または相対（処置前／処置後）濃度を個体の適切な細胞集団で決定し得、薬剤の投与量レベルまたは生物学的利用性をモニターし得る。さらに、この濃度は、患者の応答と相関し得るか、または比較され得、この生物マーカーに基づく所望の処置目的のために患者の応答スケールを発達する。例えば、胎児ヘモグロビンの量の増加を用いて、新形成状態の処置または防御のために、ＰＡまたはＰＢの生物利用能力を示し得、および薬剤に対する患者の応答の程度を示し得る。
【０１４６】セクションＧ：フェニル酢酸およびその誘導体によるＰＰＡＲの活性化ペルオキシソームは、細胞のレドックスポテンシャルを過酸化水素のような種々の基質を代謝することにより制御する酵素を含む細胞オルガネラである。こ領域での最近の進歩により、ペルオキシソームが特定の遺伝子の転写を調節する核レセプターの活性化を介して増殖することが明らかである（Ｇｉｂｓｏｎ， Ｔｏｘｉｃｏｌ． Ｌｅｔｔ．， ６８（１−２）：１９３（１９９３））。この核レセプターは、ペルオキシソーム増殖因子活性化レセプター（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）（ＰＰＡＲ）と名付けられ、遺伝子発現および細胞生物学に主要な影響を与えるステロイド核レセプターファミリーに属する。ペルオキシソーム増殖因子（例えば、クロフィブレート、除草剤、およびロイコトリエンアンタゴニスト）によるＰＰＡＲとの結合は、核レセプターを活性化し、転写因子として作用し、そして分化、細胞成長、およびペルオキシソームの増殖を起こし得る。これらの試薬は、過形成および発ガン、ならびに齧歯動物細胞のような動物細胞の酵素能力の変化で役割を果たすと考えられているが、こ | |