| 【発明の名称】 |
アテローム性動脈硬化症の治療のための安息香酸置換ベンゾピラン |
| 【発明者】 |
【氏名】ロバート ジョセフ エイエロ
【氏名】パトリシア−アン ブーラッサ
【氏名】サラリン リンゼイ
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| 【要約】 |
【課題】アテローム性動脈硬化症の治療に有効な量のＬＴＢ4アンタゴニストを含む新規医薬組成物の提供。
【解決手段】アテローム性動脈硬化症の治療に有効な量の以下の式（Ｉ）の化合物：【化１】 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】 以下の式（１）の化合物：【化１】
｛前記式（１）の化合物中、Ｒ3−置換された安息香酸基はベンゾピラン環の炭素６又は７に結合し；Ｒ1は、ｑが０〜４である、−（ＣＨ2）qＣＨＲ5Ｒ6であり、それぞれＲ2及びＲ3は、水素、フルオロ、クロロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル、及びｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−から成る群から独立に選ばれ；前記Ｒ2及びＲ3アルキル基はどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記Ｒ2及びＲ3フェニル基はどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；Ｒ5は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又はフェニルであり；前記Ｒ5フェニルは場合によりフルオロ、クロロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル又はｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−により置換され；そして前記アルキル基が前記フェニルの選択可能な置換基上のどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記フェニルが前記フェニルの選択可能な置換基上のどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；Ｒ6は水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ3−Ｃ8）シクロアルキル、フェニル又は５〜１０員のヘテロアリールであり；前記Ｒ6フェニルは場合によりフルオロ、クロロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル又はｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−により置換され；そして前記アルキル基は前記フェニルの選択可能な置換基上のどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記フェニル基が前記フェニルの選択可能な置換基上のどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記５〜１０員のヘテロアリールは場合により、フルオロ、クロロ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル又はｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−から独立に選ばれる１又は２の置換基により置換され；前記アルキル基は前記５〜１０員のヘテロアリールの選択可能な置換基上のどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記フェニル基は前記５〜１０員のヘテロアリールの選択可能な置換基上のどこに生じても１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換される｝、そのエナンチオマー；又はその医薬として許容される塩；をアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項２】 式中、Ｒ1はベンジル、４−フルオロベンジル、４−フェニルベンジル、４−（４−フルオロフェニル）ベンジル又はフェネチルである、請求項１に記載の化合物をアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項３】 式中、Ｒ2は水素又はフルオロである、請求項１に記載の化合物をアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項４】 式中、前記Ｒ3−置換された安息香酸基は上記ベンゾピラン環の炭素７に結合し、そして前記Ｒ3−置換された安息香酸基は２−カルボキシフェニル、２−カルボキシ−５−クロロフェニル、２−カルボキシ−４−クロロフェニル、２−カルボキシ−３−フルオロフェニル、２−カルボキシ−５−フルオロフェニル、２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル、２−カルボキシ−４−フルオロフェニル、２−カルボキシ−６−フルオロフェニル又は３−カルボキシフェニルである、請求項１に記載の化合物をアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項５】 式中、Ｒ1はベンジル、Ｒ2は水素、そして前記Ｒ3−置換された安息香酸基は２−カルボキシ−５−フルオロフェニルである、請求項１に記載の化合物をアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項６】 式中、Ｒ1は４−フェニルベンジル、Ｒ2は水素、及び前記Ｒ3−置換された安息香酸基は２−カルボキシ−５−フルオロフェニル又は２−カルボキシ−４−クロロフェニルである、請求項１に記載の化合物をアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項７】 式中、前記化合物が（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）である、アテローム性動脈硬化症の治療に有効な請求項１に記載の化合物を含む、哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項８】 前記式（１）の化合物がステント中に含浸される、アテローム性動脈硬化症の治療に有効な請求項１に記載の化合物を含む、アテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項９】 前記化合物が（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）である、請求項８に記載のアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項１０】 治療的に有効な量のＬＴＢ4アンタゴニスト剤を含む、哺乳類患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項１１】 前記ＬＴＢ4アンタゴニスト剤がＬＴＢ4受容体の抗体及びＬＴＢ4遺伝子のアンチセンスからなる群から選ばれる、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】 前記ＬＴＢ4アンタゴニスト剤が走化性分析により計測されるとき約２０ｎＭ未満のＬＴＢ4ＩＣ50を示す、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】 前記病変の形成の進行を有効に軽減する、治療として有効な量の低分子を含む、アテローム性動脈硬化症の病変を有する哺乳類患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
【請求項１４】 前記低分子は走化性評価により計測されるとき約２０ｎＭ未満のＬＴＢ4ＩＣ50を示す、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】 病変の形成の進行を有効に軽減する量のＬＴＢ4アンタゴニスト剤及び医薬として許容される担体を含む、アテローム性動脈硬化症の病変を有する、ヒトを含む哺乳類患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療用医薬組成物。
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【発明の詳細な説明】【０００１】発明の背景本発明はアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量のＬＴＢ4アンタゴニスト、好ましくは置換されたベンゾピラン又はその医薬として許容される塩を投与することによる、ヒトを含む哺乳類におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法に関する。本発明に従って調製される置換されたベンゾピランは、「アテローム性動脈硬化症の治療のための安息香酸置換ベンゾピラン（“Ｂｅｎｚｏｉｃ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ Ｂｅｎｚｏｐｙｒａｎｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ”）」と題された２００１年６月２８日出願の米国仮特許出願第６０／３０１，７１２号；米国特許第５，５５２，４３５号及び同第６，０９６，９０６号；及びＰＣＴ国際出願公開番号ＷＯ ９６／１１９２５、同ＷＯ ９６／１１９２０、及びＷＯ ９３／１５０６６中に示される。それぞれの上記米国及びＰＣＴ国際特許及び特許出願はそれらを全体として本明細書中に援用する。
【０００２】アテローム性動脈硬化症の病変の形成は移動、脂質蓄積、炎症性細胞の遊走、血管平滑筋細胞の増殖、及び細胞外マトリックス沈着のような５の重複する段階中で起こりうる。それぞれのこれらの段階はヒト及びアテローム性動脈硬化症モデル動物において起こりうるが、病理学及び病変の臨床的重大性へのそれぞれの関連した寄与は明らかでない。
【０００３】単球の遊走及び活性化はアテローム性動脈硬化症の病変の発展の１側面である［Ｇｅｒｒｉｔｙ， Ｒ．Ｇ．， Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｅｖｅｎｔｓ Ｉｎ Ｅａｒｌｙ Ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ Ｉｎ Ｓｗｉｎｅ， Ｉｎ Ｓｗｉｎｅ Ｉｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， Ｍ．Ｅ． Ｔｕｍｂｌｅｓｏｎ， Ｅｄｉｔｏｒ． １９８５， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ． ｐ．１４９７−１５０９を参照のこと］。単球の遊走は、アラキドン酸代謝物ロイコトリエンＢ4（ＬＴＢ4）を含む細胞特異的化学誘引物質により制御される。ＬＴＢ4及びＢ4イソロイコトリエンは、好中球、好酸球、及びマクロファージのような炎症性細胞上に発現される、高アフィニティーＬＴＢ4受容体（ＢＬＴＲ）に結合することによりそれらの効果を誘導する［Ｙｏｋｏｍｉｚｏ Ｔ， ｅｔ． ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， １９９７；３８７：６２０−６２４を参照のこと］。ＢＬＴＲアンタゴニストは、実験的な自己免疫性脳脊髄炎、コラーゲン誘導関節炎及び同種移植片移植のような、前臨床疾患モデルにおいて、好中球、好酸球、及びマクロファージの遊走を阻害することが示された［Ｗｅｒｉｎｇｅｒ Ｅ．Ｊ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ， １９９９；６７（６）：８０８−８１５； Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ Ｒ， ｅｔ． ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ， １９９５；９２：５１７−５２１；及びＳｈｏｗｅｌｌ Ｈ．Ｊ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， １９９５；２７３：１７６−１８４を参照のこと］。したがって、ＬＴＢ4受容体に結合するＬＴＢ4又は他のリガンドは前アテローム発生の役割を果たしうる。
【０００４】本明細書中の本発明者は特異的ＬＴＢ4受容体アンタゴニスト、例えば安息香酸置換ベンゾピランは、いくつかのアテローム性動脈硬化症マウスモデルにおいて病変の進行を遅延させることを示した。
発明の要約本発明は、前記哺乳類にアテローム性動脈硬化症の治療に有効な量の式（Ｉ）の化合物：【０００５】
【化２】
【０００６】｛前記式（Ｉ）の化合物中、Ｒ3−置換された安息香酸基はベンゾピラン環の炭素６又は７に結合し；Ｒ1は、ｑが０〜４である、−（ＣＨ2）qＣＨＲ5Ｒ6であり；それぞれのＲ2及びＲ3は、水素、フルオロ、クロロ、（メチルのような）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（メトキシの如き）（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル、及びｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−であり；前記Ｒ2及びＲ3アルキル基はどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして、前記Ｒ2及びＲ3フェニル基はどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；Ｒ5は、水素、（メチルのような）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル又はフェニルであり；前記Ｒ5フェニルは、フルオロ、クロロ、（メチルのような）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（メトキシのような）（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル、及び（Ｃ1−Ｃ6）アルキルチオ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルスルフィニル、又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルスルフォニルのような前記ｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−から成る群から独立に選ばれる１〜３の基により場合により置換され；そして前記アルキル基は前記フェニル上のどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記フェニルスルフィニル及びフェニルスルフォニル基は前記フェニル置換基上のどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；Ｒ6は、水素、（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（Ｃ3−Ｃ8）シクロアルキル、フェニル、又は５〜１０員のヘテロアリールであり；前記Ｒ6フェニルは、フルオロ、クロロ、（メチルのような）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（メトキシのような）（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル、及び（Ｃ1−Ｃ6）アルキルチオ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルスルフィニル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルスルフォニルのような前記ｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−から成る群から独立に選ばれる１〜３の基により場合により置換され；そして、前記アルキル基は前記フェニル置換基上のどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして、前記フェニルスルフィニル及びフェニルスルフォニル基は前記フェニル置換基上のどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記５〜１０員のヘテロアリールは、フルオロ、クロロ、（メチルの如き）（Ｃ1−Ｃ6）アルキル、（メトキシの如き）（Ｃ1−Ｃ6）アルキルオキシ、フェニルスルフィニル、フェニルスルフォニル、及び（Ｃ1−Ｃ6）アルキルチオ、（Ｃ1−Ｃ6）アルキルスルフィニル又は（Ｃ1−Ｃ6）アルキルスルフォニルのような前記ｎが０〜２である（Ｃ1−Ｃ6）アルキル−Ｓ（Ｏ）n−から独立に選ばれる１〜２の置換基により場合により置換され；前記アルキル基は前記５〜１０員のヘテロアリール置換基上のどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換され；そして前記フェニルスルフィニル及びフェニルスルフォニル基は前記５〜１０員のヘテロアリール置換基上のどこに生じても、１〜３のフルオロ基により独立に場合により置換される｝、そのエナンチオマー、ラセミ体又は医薬として許容される塩を投与することを含む、哺乳類、好ましくはヒトにおけるアテローム性動脈硬化症の治療方法に関する。
【０００７】本明細書中に使用される「ハロ」（“ｈａｌｏ”）の用語は、別段の定めなき限り、フルオロ、クロロ、ブロモ又はヨードを意味する。
【０００８】本明細書中に使用される「アルキル」（“ａｌｋｙｌ”）の用語は、別段の定めなき限り、直鎖、有枝鎖又はその組み合わせを有する飽和一価炭化水素基を含む。
【０００９】本明細書中に使用される「アルキルオキシ」（“ａｌｋｙｌｏｘｙ”）の用語は、「アルキル」が上記に定義されるＯ−アルキル基を含む。
【００１０】本明細書中に使用される「アリール」（“ａｒｙｌ”）の用語は、別段の定めなき限り、フェニル又はナフチルのような、１の水素の除去による芳香族炭化水素に由来の有機基を含む。
【００１１】本明細書中に使用される「シクロアルキル」（“ｃｙｃｌｏａｌｋｙｌ”）の用語は、別段の定めなき限り、場合により１又は２の二重結合を含み、フルオロ、クロロ、トリフルオロメチル、（Ｃ1-4）アルコキシ、（Ｃ6-10）アリルオキシ、トリフルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ又は（Ｃ1-4）アルキル、より好ましくはフルオロ、クロロ、メチル、エチル及びメトキシのような、以下に定義される１〜３の好適な置換基により場合により置換される、単環又は二環の炭素環（例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、バイシクロ［２．２．１］ヘプタニル、バイシクロ［３．２．１］オクタニル及びバイシクロ［５．２．０］ノナニル等）をいう。
【００１２】本明細書中に使用される「ヘテロアリール」（“ｈｅｔｅｒｏａｒｙｌ”）の用語は、別段の定めなき限り、ピリジル、フリール、チエニル、イソキノリル、ピリミジニル、及びピラジニルのような、１の水素の除去による芳香族ヘテロ環化合物由来の有機基を含む。
【００１３】本明細書中に使用される「エナンチオマー」（“ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ”）の用語は、別段の定めなき限り、以下の式の化合物を含む：【００１４】
【化３】
【００１５】本明細書中に使用される「ラセミ体」（“ｒａｃｅｍａｔｅ”）の用語は、別段の定めなき限り、式（Ｉ）の化合物と、「エナンチオマー」の用語が上記に定義されるそのエナンチオマーの混合物を含む。
【００１６】本発明に係る方法において使用される式（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有し、そのため異なる鏡像異性体として存在する。本発明は式（Ｉ）の化合物の全ての光学異性体及び構造異性体、並びにそのラセミ体のようなその混合物に関する。
【００１７】「持続された放出（持続性放出）」（“ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ”）の用語は、約３〜約２１日の範囲の時間にわたって式（Ｉ）の化合物を放出するように計画された投与形態をいう。長時間にわたる放出は本発明に係る「持続された放出」投与形態としても企図される。
【００１８】「治療する」（“ｔｒｅａｔｉｎｇ”）の用語は、上記用語が適用される疾患若しくは状態又は上記疾患若しくは状態の１以上の症状を後退させる、緩和する、進行を阻害する又は避けることをいう。本明細書中に使用される「治療」（“ｔｒｅａｔｍｅｎｔ”）の用語は、「治療する」が上記に定義される、治療する行為をいう。
【００１９】「ＬＴＢ4受容体アンタゴニスト」（“ＬＴＢ4 ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）の用語は、上記に定義される式（Ｉ）の化合物をいう。
【００２０】「アテローム性動脈硬化症」の用語は、移動、脂質蓄積、炎症性細胞の遊走、血管平滑筋細胞の増殖、及び細胞外マトリックス沈着のような５の重複する段階におけるアテローム性動脈硬化症の病変の形成をいう。
【００２１】本明細書中に使用される「ＬＴＢ4アンタゴニスト剤」（“ＬＴＢ4 ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ａｇｅｎｔ”）の用語は、（走化性評価又は直接結合評価のような）標準の評価により計測されたとき、ＬＴＢ4に対する請求項に示した活性を有する、ＤＮＡ、ＲＮＡ、アンチセンス若しくはセンスオリゴヌクレオチド、モノクローナル若しくはポリクローナル抗体又は低分子のような、化学又は医薬分子をいう。
【００２２】本明細書中に使用される「低分子」（“ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ”）の用語は、２０００グラム／ｍｏｌｅ以下の分子量、好ましくは５００グラム／ｍｏｌｅ以下の非ＤＮＡ、非ＲＮＡ、非ポリペプチド、及び非モノクローナル抗体分子をいう。好ましい低分子は（アリル又はヘテロアリルのような）芳香族環を含む。より好ましい低分子はフェニル又はベンゾピラニル基を含む。最も好ましい低分子は、ＭｅｒｃｋのＬ−６５１，３９２が属するフェノチアジン−３−オン類の化合物；ＮｏｖａｒｔｉｓのＣＧＳ−２５０１９が属するアミジノ化合物類；オンタゾラストが属するベンゾキサオラミン類；ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒのＢＩＩＬ ２８４／２６０が属するベンゼンカルボキシミドアミド類；ＬｉｌｌｙのＬＹ−２３３，５６９が属する２−（置換）−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ−アルキルシンナムアミド類；エブセレンが属する化合物類；リナゾラストが属する化合物類；ＢａｙｅｒのＢａｙ−ｘ−１００５が属する化合物類；Ｌｅｏ ＤｅｎｍａｒｋのＥＴＨ−６１５が属する化合物類；ＭｅｒｋのＭＡＦＰが属する化合物類；ＴｅｒｕｍｏのＴＭＫ−６８８が属する化合物類；ＴａｎａｂｅのＴ−０７５７が属する化合物類；ＬｉｌｌｙのＬＹ−２１３０２４、ＬＹ−２１００７３、ＬＹ−２２３９８２、ＬＹ−２３３４６９、ＬＹ−２５５２８３、ＬＹ−２９３１１１、ＬＹ−２６４０８６及びＬＹ−２９２７２８が属する化合物類；ＯＮＯのＯＮＯ−ＬＢ４５７、ＯＮＯ−４０５７、及びＯＮＯ−ＬＢ４４８が属する化合物類；ＳｈｉｏｎｏｇｉのＳ−２４７４が属する化合物類；カルシトロールが属する化合物類；ＳｅａｒｌｅのＳＣ−５３２２８、ＳＣ−４１９３０、ＳＣ−５０６０５及びＳＣ−５１１４６が属する化合物類；Ｗａｒｎｅｒ ＬａｍｂｅｒｔのＢＰＣ−１５が属する化合物類；ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ ＢｅｅｃｈａｍのＳＢ−２０９２４７の属する化合物類；又はＳＫ＆ＦのＳＫＦ−１０４４９３が属する化合物類である。
【００２３】本明細書中に使用する「病変」（“ｌｅｓｉｏｎ”）の用語は、本明細書中に援用する、Ｒｏｓｓ，Ｒ． ＴＨＥ ＰＡＴＨＯＧＥＮＥＳＩＳ ＯＦ ＡＴＨＥＲＯＳＣＬＥＲＯＳＩＳ ＩＮ ＨＥＡＲＴ ＤＩＳＥＡＳＥ １１０６−１１２４（Ｅ． Ｂｒａｕｎｗａｌｄ ｅｄ．， Ｗ． Ｂ． ＳａｕｎｄｅｒｓＣｏｍｐａｎｙ １９９２）中に示される。
【００２４】本明細書中に使用する「プラーク」（“ｐｌａｑｕｅ”）又は「プラーク安定性」（“ｐｌａｑｕｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ”）の用語は、本明細書中に援用する、Ｒｏｓｓ，Ｒ． ＴＨＥ ＰＡＴＨＯＧＥＮＥＳＩＳ ＯＦ ＡＴＨＥＲＯＳＣＬＥＲＯＳＩＳ ＩＮ ＨＥＡＲＴ ＤＩＳＥＡＳＥ １１０６−１１２４（Ｅ． Ｂｒａｕｎｗａｌｄ ｅｄ．， Ｗ． Ｂ． Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ １９９２）中に示される。
【００２５】本明細書中に使用する「走化性評価により計測されたとき、約２０ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満のＬＴＢ4ＩＣ50」（“ＬＴＢ4 ＩＣ50 ｏｆ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ａｂｏｕｔ ２０ｎＭ， ｐｒｅｆｅｒａｂｌｙ ｌｅｓｓｔｈａｎ ａｂｏｕｔ １０ｎＭ， ａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ａｓｓａｙ”）の用語は、本明細書中に援用する、Ｄｏｈｅｒｔｙ ｅｔ． ａｌ．， Ｔｈｅ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ Ｉｎ ＶｉｖｏＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｏｔｅｎｔａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅ Ｂ４ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＣＰ−１０５，６９６， Ｊ． Ｐｈａｒｍ．ａｎｄ Ｅｘｐ． Ｔｈｅｒ， ２７３：１７６−１８４（１９９５）；及びＳｈｏｗｅｌｌ ｅｔ． ａｌ．， Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＴｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ Ｔｈｅ Ｐｏｔｅｎｔ ＬＴＢ4 Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ＣＰ−１０５，６９６ ｏｎＭｕｒｉｎｅ ＬＴＢ4 Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ， Ｂｒ．Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， １１７：１１２７−１１３２（１９９６）中に示される。
【００２６】本明細書中に使用される「医薬として許容される」（“ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ”）の用語は、上記組成物の他の成分に影響を及ぼさない、その受容者に有害でない、担体、媒体、希釈剤、賦形剤及び／又は塩である。
【００２７】本発明の好ましい態様においては、式（Ｉ）の化合物は脂質病変の進行を阻害する。本明細書中の以下に例示されるように、安息香酸置換ベンゾピランは哺乳類において脂質病変の進行を阻害する。
【００２８】本発明の好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物中のＲ1は、ベンジル、４−フルオロベンジル、４−フェニルベンジル、４−（４−フルオロフェニル）ベンジル又はフェネチルである。
【００２９】本発明の好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物中のＲ2は、水素又はフルオロである。
【００３０】本発明の好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物中の前記Ｒ3置換された安息香酸基は、前記ベンゾピラン環の炭素７に結合され；そして前記Ｒ3置換された安息香酸基は、２−カルボキシフェニル、２−カルボキシ−５−クロロフェニル、２−カルボキシ−４−クロロフェニル、２−カルボキシ−３−フルオロフェニル、２−カルボキシ−５−フルオロフェニル、２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル、２−カルボキシ−４−フルオロフェニル、２−カルボキシ−６−フルオロフェニル又は３−カルボキシフェニルである。
【００３１】本発明の好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物中のＲ1はベンジルであり、Ｒ2は水素であり、そして前記Ｒ3置換された安息香酸基は２−カルボキシ−５−フルオロフェニルである。
【００３２】本発明の好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物中のＲ1は４−フェニルベンジル、Ｒ2は水素であり、そして前記Ｒ3置換された安息香酸基は２−カルボキシ−５−フルオロフェニル又は２−カルボキシ−４−クロロフェニルである。
【００３３】本発明の特に好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−クロロフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−４−クロロフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−３−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−４−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−フルオロフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン；及び（３Ｓ，４Ｒ）−７−（３−カルボキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピランから成る群から選ばれる。
【００３４】本発明の最も好ましい態様においては、前記式（Ｉ）の化合物は（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）である。
【００３５】上記のある態様においては、前記式（Ｉ）の化合物の量は０．５〜１０００ｍｇ／日である。
【００３６】上記のある態様においては、上記式（Ｉ）の化合物は経口投与される。
【００３７】上記のさらなる態様においては、上記式（Ｉ）の化合物は、金属、プラスティック又は生物分解性のポリマーでありうる、血管内ステントのような、ステント中に浸透される。浸透可能な装置及びそれらが形成される生物材料の一般的な議論は、本明細書中に援用される、Ｈ． Ｋａｍｂｉｃ ｅｔ ａｌ．， 「人口臓器における生物材料」（“Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｏｒｇａｎｓ”）， Ｃｈｅｍ． Ｅｎｇ． Ｎｅｗｓ， ３０（１９８６）を参照のこと。
【００３８】上記のさらなる態様においては、血管内ステントのような、前記ステント中に浸透される上記式（Ｉ）の化合物は、（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）である。
【００３９】本発明において有用なステントは、その中に持続性放出投与形態を分散させた、生物分解性コーティング又は多孔性の非生物分解性コーティングを含みうる。別の態様においては、生物分解性ステントはその中、例えばステントマトリックス中に浸透させた式（Ｉ）の化合物を有しうる。式（Ｉ）の化合物がその中に含浸された生物分解性ステントであって、生物分解性コーティングで又はさらにその中に分散された持続性放出投与形態を有する多孔性の非生物分解性コーティングでさらにコーティングされたものを利用することも企図される。本発明に係るこの態様は、式（Ｉ）の化合物の差異のある放出速度提供するであろう、すなわち、上記コーティングからの式（Ｉ）の化合物の速い放出があり、それに続いてステントマトリックスの分解中に、ステントマトリックス中に浸透された式（Ｉ）の化合物の遅延した放出がある。
【００４０】上記のさらなる態様においては、式（Ｉ）の化合物は、上記ステント、例えば血管内ステント中に含浸され、ここで前記ステントは、生物分解性コーティングで又はその中に分散された前記式（Ｉ）の化合物の持続性放出投与形態を有する多孔性の非生物分解性コーティングでさらにコーティングされる。
【００４１】本発明は、前記患者に治療として有効な量の、前記病変の形成の進行を有効に軽減するＬＴＢ4アンタゴニスト剤、好ましくは低分子、より好ましくはフェニル又はベンゾピラニル基を含む低分子を投与することを含む、アテローム性動脈硬化症の病変を有する哺乳類患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法にも関する。
【００４２】１の態様においては、本発明は、アテローム性動脈硬化症の病変を有する前記患者に治療として有効な量の、プラーク安定性を改善することによりプラーク安定性を有効に改善する、ＬＴＢ4アンタゴニスト剤、好ましくは低分子、より好ましくはフェニル又はベンゾピラニル基を含む低分子を投与することを含む、哺乳類患者、好ましくはヒト患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法に関する。
【００４３】他の態様においては、本発明は、アテローム性動脈硬化症の病変を有する前記患者に治療として有効な量のＬＴＢ4アンタゴニスト剤を投与することを含む、哺乳類患者、好ましくはヒト患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法に関し、前記剤はＬＴＢ4受容体の抗体及びＬＴＢ4遺伝子のアンチセンスから成る群から選ばれる。
【００４４】他の態様においては、本発明は、アテローム性動脈硬化症の病変を有する前記患者に治療として有効な量のＬＴＢ4アンタゴニスト剤を投与することを含む、哺乳類患者、好ましくはヒト患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法に関し、前記ＬＴＢ4アンタゴニスト剤は走化性評価により計測されたとき約２０ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満のＬＴＢ4ＩＣ50を示す。
【００４５】さらに他の態様においては、本発明は、アテローム性動脈硬化症の病変を有する前記患者に治療として有効な量の低分子を投与することを含む、哺乳類患者、好ましくはヒト患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法に関し、前記低分子は走化性評価により計測されたとき約２０ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満のＬＴＢ4ＩＣ50を示す。
【００４６】さらに他の態様においては、本発明は、前記病変の形成の進行を有効に軽減する量のＬＴＢ4アンタゴニスト剤及び医薬として許容される担体を含む、アテローム性動脈硬化症の病変を有する、ヒトを含む哺乳類患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療のための医薬組成物に関する。
【００４７】上記のさらなる態様においては、式（Ｉ）の化合物、好ましくは（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）は、以下から成る群から選ばれる１以上の要素と共に投与される：（ａ）ロイコトリエン生合成阻害剤：ジロイトン；ＡＢＴ−７６１；フェンロイトン；テポキサリン；Ａｂｂｏｔｔ−７９１７５；Ａｂｂｏｔｔ−８５７６１；Ｎ−（５−置換）−チオフェン−２−アルキルスルフォンアミド；２，６−ジ−第三−ブチルフェノールヒドラゾン；Ｚｅｎｅｃａ ＺＤ−２１３８を含むメトキシテトラヒドロピラン類；化合物ＳＢ−２１０６６１及びそれが属する類；Ｌ−７３９，０１０が属するピリジニル−置換２−シアノナフタレン化合物類；Ｌ−７４６，５３０が属する２−シアノキノリン化合物類；ＭＫ−５９１、ＭＫ−８８６、及びＢＡＹ ｘ １００５が属するインドール及びキノリン化合物類； から成る群から選ばれる、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害剤及び５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）アンタゴニスト；（ｂ）Ｌ−６５１，３９２が属するフェノチアジン−３−オン類の化合物；ＣＧＳ−２５０１９が属するアミジノ化合物類；オンタゾラストが属するベンゾキサオラミン類；ＢＩＬＬ ２８４／２６０が属するベンゼンカルボキシミドアミド類；ザファールカスト、アブルカスト、モンテルカスト、プランルカスト、バールカスト（ＭＫ−６７９）、ＲＧ−１２５２５、Ｒｏ−２４５９１３、イラルカスト（ＣＧＰ４５７１５Ａ）、及びＢＡＹ ｘ ７１９５が属する化合物類；から成る群から選ばれるロイコトリエンＬＴＢ4、ＬＴＣ4、ＬＴＤ4、及びＬＴＥ4の受容体アンタゴニスト；（ｃ）アイソフォームＰＤＥ４Ｄの阻害剤を含むＰＤＥ４阻害剤；（ｄ）５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害剤；又は５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）アンタゴニスト；（ｅ）５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）と血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニストの二重阻害剤；（ｆ）ＬＴＢ4、ＬＴＣ4、ＬＴＤ4、及びＬＴＥ4のアンタゴニストを含むロイコトリエンアンタゴニスト（ＬＴＲＡｓ）；（ｇ）セチリジン、ロラタジン、デスロラタジン、フェキソフェナジン、アステミゾール、アゼラスチン、及びクロルフェニラミンを含む抗ヒスタミンＨ1受容体アンタゴニスト；（ｈ）胃保護Ｈ2受容体アンタゴニスト；（ｉ）プロピルヘキセドリン、フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、プソイドエフェドリン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、塩酸キシロメタゾリン、及び塩酸エチルノルエピネフリンを含む、鬱血除去のために経口又は局所的に投与されるα1−及びα2−アドレナリン受容体アゴニスト血管収縮交感神経性ミメティック剤；（ｊ）５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害剤を伴うα1−及びα2−アドレナリン受容体アゴニスト；（ｋ）臭化イプラトロピウム；臭化チオトロピウム；臭化オキシトロピウム；ピレンゼピン；及びテレンゼピンを含む抗コリン作用剤；（ｌ）メタプロテレノール、イソプロテレノール、イソプレナリン、アルブテロール、サルブタモール、フォルモテロール、サルメテロール、テルブタリン、オルシプレナリン、ビトルテロールメシレート、及びピルブテロールを含むβ1−〜β4−アドレナリン受容体アゴニスト；（ｍ）テオフィリン及びアミノフィリンを含むメチルキサンタニン；（ｎ）クロモグリケートナトリウム；（ｏ）ムスカリン作動性受容体（Ｍ１、Ｍ２、及びＭ３）アンタゴニスト；（ｐ）ＣＯＸ−１阻害剤（ＮＳＡＩＤｓ）；ロフェコキシブを含むＣＯＸ−２選択的阻害剤；及び一酸化窒素ＮＳＡＩＤｓ；（ｑ）インスリン様成長因子１型（ＩＧＦ−１）ミメティック；（ｒ）シクレソニド；（ｓ）プレドニソン、プレドニソロン、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタソン、ブデソニド、プロピオン酸フルチカソン、及びモメタソンフロエートを含む、身体的副作用が軽減された吸入糖質コルチコイド；（ｔ）トリプターゼ阻害剤；（ｕ）血小板活性化因子（ＰＡＦ）アンタゴニスト；（ｖ）内因性炎症性単位に対して活性なモノクローナル抗体；（ｗ）ＩＰＬ ５７６；（ｘ）エタネルセプト、インフリキシマブ、及びＤ２Ｅ７を含む、抗腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）剤；（ｙ）レフルノミドを含むＤＭＡＲＤｓ；（ｚ）ＴＣＲペプチド；（ａａ）インターロイキン変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤；（ｂｂ）ＩＭＰＤＨ阻害剤；（ｃｃ）ＶＬＡ−４アンタゴニストを含む接着分子阻害剤；（ｄｄ）カテプシン；（ｅｅ）ＭＡＰキナーゼ阻害剤；（ｆｆ）グルコース−６リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤；（ｇｇ）キニン−Ｂ1−及びＢ2−受容体アンタゴニスト；（ｈｈ）さまざまな親水基を伴う金チオ基の形態の金；（ｉｉ）免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、アザチオプリン、及びメトトレキセート；（ｊｊ）抗通風剤、例えばコルキシン；（ｋｋ）キサンチン酸化酵素阻害剤、例えばアロプリノール；（ｌｌ）尿酸排泄剤、例えばプロベネシド、スルフィンピラゾン、及びベンズブロマロン；（ｍｍ）抗腫瘍剤、特にビンブラスチン及びビンクリスチンのようなビンカアルカロイドを含む、抗有糸分裂薬；（ｎｎ）成長ホルモン分泌促進薬；（ｏｏ）マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰｓ）、すなわちアグレカナーゼはもちろん、ストロメリシン、コラゲナーゼ、及びゼラチナーゼの阻害剤；特にコラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、コラゲナーゼ−２（ＭＭＰ−８）、コラゲナーゼ−３（ＭＭＰ−１３）、ストロメリシン−１（ＭＭＰ−３）、ストロメリシン−２（ＭＭＰ−１０）、及びストロメリシン−３（ＭＭＰ−１１）；（ｐｐ）トランスフォーミンング増殖因子（ＴＧＦβ）；（ｑｑ）血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；（ｒｒ）線維芽細胞成長因子、例えば塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）；（ｓｓ）顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；（ｔｔ）カプサイシンクリーム；（ｕｕ）ＮＫＰ−６０８Ｃ；ＳＢ−２３３４１２（タルネタント）；及びＤ−４４１８；から成る群から選ばれる、タチキニンＮＫ1及びＮＫ3受容体アンタゴニスト；（ｖｖ）ＵＴ−７７及びＺＤ−０８９２から成る群から選ばれる、エラスターゼ阻害剤；（ｗｗ）ロバスタチンのようなＨＭＧ ＣｏＡ還元酵素阻害剤；（ｘｘ）リピター；（ｙｙ）シプロフィブレート及びクロフィブレートのようなフィブリン酸；（ｚｚ）コレスチラミン及びコレスチポールのような胆汁酸結合剤；（ａａａ）ニコチン酸；及び（ｂｂｂ）プロブコールのような脂肪親和性抗酸化剤。
【００４８】上記のさらなる態様においては、上記式（Ｉ）の化合物は上記式（Ｉ）の化合物のプロドラッグとして投与される。遊離アミノ、アミド、ヒドロキシ又はカルボキシル基を有する式（Ｉ）の化合物は、プロドラッグに変換されうる。プロドラッグは、式（Ｉ）の化合物の遊離アミノ、ヒドロキシ又はカルボン酸基にペプチド結合を通して共有結合で連結される、アミノ酸残基を有する化合物又は２以上の（例えば、２、３又は４の）アミノ酸残基のポリペプチド鎖を含む。上記アミノ酸残基は通常３の文字記号により表される２０の天然アミノ酸を含み、そして４−ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、デモシン、イソデモシン、３−メチルヒスチジン、ノルバリン、ベータ−アラニン、ガンマ−アミノ酪酸、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、オルニチン、及びメチオニンスルフォンをも含む。プロドラッグは、上記式（Ｉ）の置換基にカルボニル炭素プロドラッグ側鎖を通して共有結合したカルボネート、カルバメート、アミド及びアルキルエステルをも含む。
発明の詳細な説明アテローム性動脈硬化症の本治療方法に係る、ＬＴＢ4受容体アンタゴニスト、好適には安息香酸置換ベンゾピランの、ヒトを含む、哺乳類への投与のために、さまざまな慣用の経路が使用されうる。好適な経路は経口の、非経口の（例えば、静脈内、筋内、腹腔内又は皮下）、頬の、直腸の、鼻腔内の、及び経皮の経路を含む。一般的には、本発明に係る化合物（これ以降において活性化合物として知られる）は、約０．５〜１０００ｍｇ／日の用量で投与されうる。
【００４９】好ましくは、上記活性化合物は経口投与されるであろう。しかしながら、用量におけるいくつかの変更が治療される患者の状態に因って必然的に起こるであろう。投与に責任を負う者は、いかなる事件においても、個々の患者に適切な用量を決定するであろう。
【００５０】上記活性化合物は広くさまざまな異なる投与形態で投与されることができ、一般的に本発明に係る有効な量の化合物は約５．０重量％〜約７０重量％の範囲内の濃度の値で上記投与形態で存在する。
【００５１】本発明に係る上記化合物、アイソマー、プロドラッグ及び医薬として許容される塩は、医薬として許容される担体、媒体又は希釈剤との混合物中に混合され、哺乳類、さらに好ましくはヒト、患者におけるアテローム性動脈硬化症の治療に有効な医薬組成物を提供する。これらの医薬組成物において使用される特別な担体、媒体又は希釈剤は所望される投与のタイプ、例えば静脈、経口、局所、坐剤又は非経口、好ましくは経口に因って広くさまざまな形態をとりうる。また、本発明に係る上記化合物、そのアイソマー、プロドラッグ及び塩は、経口、非経口、直腸の、または経皮の投与形態のような、慣用の投与形態で個々に又は共に投与されうる。
【００５２】経口投与のために、微晶質セルロース、クエン酸ナトリウム、カルボン酸カルシウム、リン酸ジカルシウム及びグリシンのような、さまざまな賦形剤を含む錠剤が、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチオン及びアカシアのような顆粒化結合剤と共に、デンプン（及び好ましくはトウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、アルギン酸及び若干数の複合珪酸塩のようなさまざまな崩壊剤を伴って使用されうる。それに加えて、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクのような潤滑剤は、錠剤化の目的のためにしばしば非常に有用である。同じタイプの固体組成物はゼラチンカプセル中の充填材としても使用されうる；この結合において好ましい物質は、高分子量のポリエチレングリコールはもちろん、ラクトース又は乳糖をも含む。水性懸濁物及び／又はエリキシル剤が経口投与のために所望される場合、上記活性成分はさまざまな甘味料又は香味料、色素又は染料、及び、そのように所望される場合、乳化及び／又は懸濁剤とも、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びそれらの配合のようなさまざまなもののような上記希釈剤と共に混合されうる。動物の場合、それらは５〜５０００ｐｐｍ、好ましくは２５〜５００ｐｐｍの濃度で動物の食餌又は飲料水中に都合よく含まれる。
【００５３】非経口投与（静脈内、筋内、腹腔内又は皮下の使用）のために、上記活性成分の滅菌注射可能溶液が通常調製される。胡麻若しくはピーナッツ油中又は水性のプロピレングリコール中のどちらかの、本発明に係る化合物の溶液が使用されうる。上記水性溶液は、必要な場合はそして上記液体希釈剤がはじめに等張にされ、好ましくは８超のｐＨに、好適に調節され、及び緩衝されるべきである。これらの水性溶液は好適な静脈内注射の目的である。上記油状溶液は静脈内、筋内及び皮下の注入の目的に好適である。滅菌条件下における全てのこれらの溶液の上記調製物は当業者に周知の標準の医薬技術により容易に達成される。動物の場合、化合物は約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日、都合よくは単回用量で又は３までの分割用量で与えられて０．２〜１０ｍｇ／ｋｇ／日の用量値で、筋内で又は皮下で投与されうる。
【００５４】頬の投与のために、上記化合物は慣用の方法で形成される錠剤又は舐剤の形態をとりうる。
【００５５】直腸投与のために、本発明に係る上記活性成分は、例えばココアバター又は他のグリセリドのような慣用の坐剤基材を含む、坐剤又は貯留浣腸のような直腸組成物にも形成されうる。
【００５６】鼻腔内投与又は吸入による投与のために、本発明の上記活性化合物は上記患者によりしぼられる又は汲み出されるポンプ噴霧容器からの溶液又は懸濁物の形態で、又は好適な駆出剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適な気体の使用を伴って、加圧容器又は噴霧器からのエーロゾル噴霧物として、都合よくデリバリーされる。加圧されたエーロゾルの場合、上記用量単位は計測された量をデリバリーするための弁を提供することにより決定されうる。上記加圧容器又は噴霧器は上記活性化合物の溶液又は懸濁物を含みうる。吸入器又は注入器中で使用するための（例えば、ゼラチンから作られた）カプセル又は薬包は、本発明に係る化合物及びラクトース又はデンプンのような好適な粉末基材の粉末混合物を含むように形成されうる。
【００５７】経皮投与のために、周知の薬剤デリバリー技術に従って調製された経皮パッチが調製され、治療される哺乳類、好ましくはヒト又はイヌの皮膚に適用されることができ、その後上記活性剤はその調製された溶解特性のために表皮を超えて、一般の循環の一部としてそれが取り込まれる皮膚の皮膚層へ移動し、最終的に所望の延長された期間にわたって上記活性成分の身体の分布を提供する。皮膚の表皮層の下、すなわち治療される患者の皮膚の表皮と皮膚の間に設置される埋め込みも含まれる。上記埋め込みはこのデリバリー技術において通常使用される周知の原理及び材料に従って形成されるであろうし、上記患者の身体の循環への活性成分の制御された、持続された、及び／又は遅延された放出を提供するような上記方法で調製されうる。上記表皮下の（小皮下の）埋め込みは経皮パッチと同様の設置の容易さとデリバリー効率を提供するが、崩壊しやすさの制限なしでは、患者の皮膚の表面の層に暴露される結果として損傷又は偶発的な除去を提供する。
【００５８】式（Ｉ）の化合物、好ましくは（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）の、哺乳類、特にマウスにおけるアテローム性動脈硬化症への影響力を確かめるために実施された実験は、以下の実施例の節中に詳細に示される。
【００５９】本発明は標的細胞へのＬＴＢ4受容体アンタゴニストの持続性放出を含む方法及び投与形態をも企図する。好適には、上記標的細胞は、上記投与形態の局所投与により到達可能な、血管平滑筋細胞、癌細胞、疾患状態を改善するための調節を必要とする体細胞、及び免疫系を介した疾患に関連した細胞である。その結果、本発明のこの局面に係る方法及び投与形態は、上記細胞の活性（例えば、移動、増殖、脂質増殖病変の形成、収縮等）を阻害するが、上記細胞を殺さない、ＬＴＢ4受容体アンタゴニストを使用して、哺乳類宿主における血管平滑筋細胞、及び場合により血管平滑筋細胞結合タンパク質を阻害するのに有用である。持続性放出投与形態は本方法の実施においても使用されうる。
【００６０】ｉｎ ｖｉｖｏの医薬活性化合物の調節された放出を意図した調剤は、フィルムを形成する重合体、蝋、脂肪、シリカ等でコーティングされた又は錠剤化された上記活性成分の固体粒子を含む。これらの物質はｉｎ ｖｉｖｏの活性成分の崩壊、分散又は吸収を阻害することを意図される。ヒドロキシプロピルメチルセルロースは上記活性成分の遅い又は調節された放出を提供しうる成分の１例である。上記化合物は経皮デリバリーのためのパッチ、皮下の埋め込み、浸剤ポンプを介して、又は埋め込まれた持続性放出形態からの放出を介してデリバリーされうる。
【００６１】本発明に係る本方法の他の態様は、１週間〜２年間又はより長い期間にわたって本発明に係るＬＴＢ4受容体アンタゴニストを放出することができる賦形剤マトリックスを使用する、ステントのような静脈装置の表面からの持続性放出法に関する。上記表面のコーティング及びその物品の埋め込まれた形態は、上記装置の機能を減ずる線維性筋性細胞の増殖及び／又は脂質蓄積を阻害しうる用量率で、本発明に係るＬＴＢ4受容体アンタゴニストをゆっくり放出することができる、生物分解性又は非生物分解性の重合体又はセラミックの材料でありうる。線維性筋性細胞の蓄積、及びそれらに結合したマトリックスは、脂質を含む泡沫細胞に伴って、血流が決定的にそこなわれ、そして上記装置が機能的に役に立たない程度までステントの内腔領域を減少しうる。この増殖の阻害はステントの臨床的な機能寿命を延長し、上記患者にとって臨床的利益であろう。
【００６２】本発明に係るこの態様の持続性放出投与形態は、アテローム性動脈硬化症を治療する装置表面のすぐ近傍の細胞を暴露するために、充分な抗増殖の、好適には細胞増殖抑制性の、用量をデリバリーする必要がある。これは、線維性筋性細胞及び泡沫細胞の細胞接着、移動及び増殖を阻害するであろう。この用量は、両者とも細胞増殖抑制の用量を達成するために必要とされる上記薬の放出の速度及び持続期間に影響するであろう、さまざまな量の本発明に係るＬＴＢ4受容体アンタゴニスト及び重合体賦形剤の修飾を伴う、特別な装置を血管内に埋め込むことにより経験的に確定できる。ステントは永久的に埋め込まれる装置と考えられる；しかしながら、上記装置から上記活性剤が持続的に放出される必要がないこともある。上記ステントが休止した組織により囲まれ、無傷の内皮により覆われるまで過度の増殖が避けられる場合、ＬＴＢ4受容体アンタゴニストの持続性放出が不必要であろうということが初期の観察から明白である。
【００６３】本発明に係る持続性放出投与形態は、好適に非分解性マイクロ粒子若しくはナノ粒子又は生物分解性マイクロ粒子若しくはナノ粒子のどちらかである。より好適には、上記マイクロ粒子又はナノ粒子は、無作為の、非酵素的、加水分解的切断により生物分解する重合体を含むマトリックスから形成される。好適な構造は熱可塑性のポリエステル（例えば、ポリラクチド又はポリグリコリド）の混合物又はラクチド及びグリコリド成分の共重合体から形成される。上記ラクチド／グリコリド構造はそれらの生物分解が、両者とも哺乳類の通常の代謝産物である乳酸及びグリコール酸を形成するという追加の利点を有する。
【００６４】本発明に係る持続性放出投与形態は持続された期間にわたって標的細胞にＬＴＢ4受容体アンタゴニストをデリバリーする能力を示す。本発明に係る上記投与形態はこの目的のために好適などんな形態でもありうる。好適な持続性放出投与形態は１以上の以下の特性を示す：１．マイクロ粒子（例えば、直径約０．５マイクロメートル〜約１００マイクロメートル、好適には約０．５〜約２マイクロメートル）又はナノ粒子（例えば、直径約１．０ナノメートル〜約１０００ナノメートル、好適には約５０〜約２５０ナノメートル）の遊離の流動する粉末構造；
２．約３〜約１８０日、好適には約１０〜約２１日の期間にわたって生物分解するように計画された生物分解性構造、又はＬＴＢ4受容体アンタゴニストの拡散が約３〜約１８０日、好適には約１０〜約２１日の期間にわたって起こるようにさせる非生物分解性構造；
３．生物適合性の生物分解産物を含む、上記投与形態が投与される標的組織及び局所の生理的環境に生物適合性のある；
４．１又は両方の以下の経路をとおして起こるＬＴＢ4受容体アンタゴニストの放出と共に、好適にはＬＴＢ4受容体アンタゴニスト−重合体マトリックスを形成するために、その中でのＬＴＢ4受容体アンタゴニストの安定な及び再生可能な分散を促進する：（１）上記投与形態をとおしてのＬＴＢ4受容体アンタゴニストの拡散（ＬＴＢ4受容体アンタゴニストが上記投与形態を形成する重合体又は重合体混合物中に可溶性である場合）；又は（２）上記投与形態の生物分解性物質としてのＬＴＢ4受容体アンタゴニストの放出；及び１以上の細胞の及び／又は間質性マトリックスエピトープと結合する能力、好適には約１〜約１０，０００の結合タンパク質／ペプチド−投与形態結合、そしてより好適には最高で粒子の表面領域の１５０平方オングストローム当たり約１の結合ペプチド−投与形態を有する。結合する総数は使用される上記粒子の大きさに因る。上記結合タンパク質又はペプチドは本明細書中に示されるように共有リガンドサンドウィッチ又は非共有様相をとおして粒子の投与形態に連結することができる。
【００６５】例えば、式（Ｉ）の化合物を含むナノ粒子は、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）ＰＬＡ、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクティック−共−グリコリック）ＰＬＧＡ、メタクリル酸共重合体、ポリ（エプシロン−カプロラクトン）を含む生物分解性重合体を用いて、１）ｎ−溶媒乳化−蒸発技術又は２）乳化−沈殿技術のどちらかを用いて、調製されうる。これらの工程は、共溶媒、典型的には塩化メチレンと共の又はなしの、有機溶媒（例えば、アセトン又はベンジルアルコール）中の重合体の分散を含む。上記式（Ｉ）の化合物は有機溶媒中に含まれる。いくつかの場合、溶媒は機械的な攪拌又は超音波処理で、その後混合され、それから安定化させるヒドロコロイド［例えば、ポリ（ビニルアルコール）又はゼラチン］（すなわち、水中の油）を含む水性溶液に１滴ずつ加えられる。上記安定エマルジョンの形成に続いて、上記塩素化溶媒は攪拌されたエマルジョンの蒸発を介して除去され、その後脱線的な濾過又は遠心分離／再懸濁による繰り返される洗浄により有機溶媒を含まないようにすることができるナノ粒子を産出する。生ずる水性懸濁物はその後糖又は他の凍結防止剤と共に又はなしで凍結され、凍結乾燥され、単純な攪拌又は超音波処理で生理的食塩水中に再懸濁できるナノ粒子を産出しうる。
【００６６】あるいは、上記水性溶液は塩素化溶媒を欠く有機層（すなわち、油中の水エマルジョン）に攪拌又は超音波処理で加えられることができ、それに続いて上記ナノ粒子を沈殿させるために、層の反転を達成するためにさらに水性溶液が追加される。あるいは、沈殿は水性溶媒中の塩析剤に加えることにより増大されうる。典型的には、乳化−蒸発技術のために７５０ｍｇＰＬＧＡが３０ｍｌの塩化メチレン中に溶解されうる。好適には、７５ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含む５ｍｌの塩化メチレンが加えられる。この有機層は、可溶性のエマルジョンを形成するために約１０分間、１５〜５５ワットの出力で音波発生装置を用いる超音波処理で、１８０ｍｌの２．５％ポリ（ビニルアルコール，ＰＶＰ）（２０〜７０ｋＤｍｏｌ Ｗｔ．）の水性溶液に１滴ずつ加えられる。超音波処理は１５℃を超えない温度で氷水浴中で実行される。上記エマルジョンはその後塩素化溶媒を蒸発させるために、さらに室温で２４時間攪拌される。生ずるナノ粒子はさらに１００ｍｍ多孔ポリオレフィンカートリッジフィルターに適合した濾過装置で精製される。上記乳化−沈殿技術のためには、１０μＬの水性ＰＭＰ（１０〜３０％ｗ／ｗ）が１２００〜５０００ｒｐｍの機械的攪拌の下で１０〜１５％ｗ／ｗの重合体ＰＬＡ又はＰＬＧＡ及び１０〜１５ｗ／ｗの式（Ｉ）の化合物を含む５ｍＬのベンジルアルコールに加えられ、それに続いて５分間にわたり水中油エマルジョンが形成される。水（１６０ｍＬ）はその後層の反転に影響させるために加えられ、次の１０分間に同時に起こる固体ナノ粒子としての重合体の沈殿と共に水中への有機溶媒の拡散が起こる。
【００６７】上記アテローム性動脈硬化症の病変の形成は５の段階で起こりうる。
【００６８】１．移動。健康な脈管では、ほとんど又は全ての平滑筋細胞（ＳＭＣ）は脈管中膜中に含まれる。病変形成の間の拡大された脈管内膜中のＳＭＣの発生はしたがって脈管の上記中膜から上記内膜へのＳＭＣの移動を必要とする。このＳＭＣの移動の阻害は病変の性質をかなり変更するであろうし、そして病変形成に関連した病態を改善しうる。
【００６９】２．脂質蓄積。健康な脈管壁中の中膜ＳＭＣは脂質を蓄積することはあまりない。しかしながら、脈間内膜のＳＭＣは脂質取り込み及び蓄積の増大した能力を有する。高い値の循環脂質（特に低密度リポタンパク質；ＬＤＬ）に暴露された場合、ＳＭＣは脂肪性脂質で飽和され、死ぬこともある。上記脂質の蓄積は、それは病変の血栓形成性の壊死した芯を形成するので、臨床的に明らかに上記病変の進行に必要である。上記ＳＭＣにおける脂質蓄積の阻害は病変の進行を軽減し又は回避し、それからアテローム性動脈硬化症及び結果として生ずる心筋梗塞を減少又は回避するはずである。
【００７０】３．炎症性細胞の遊走。ヒトの病変は多くのマクロファージ由来細胞を含む。遊走の過程、これらの細胞の機能、及びそれらの病態への寄与は明らかでない。簡素化したメカニズムは、上記脈管壁から上記脂質を除去するためにマクロファージが病変中に蓄積する脂質に誘引されるということを示唆する。マクロファージ由来細胞の遊走の阻害が病変の病態を軽減しうる一方で、それは脂質で満たされた破裂しやすい状態への進行を促進しうる。
【００７１】４．増殖。内膜ＳＭＣの蓄積は多くの場合中膜の薄化を伴う。そのため、総ＳＭＣ数は病変部位であまり増大しないであろう。さらに、アテローム性動脈硬化症の慢性的な性質はこれらの病変中で増殖の刺激を検出することを困難にする。
【００７２】５．細胞外マトリックスの沈着。アテローム性動脈硬化症の病変は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）、そして特にコラーゲン繊維に富む。増大したＥＣＭ合成はプラーク安定性を増大しうる。心筋梗塞をもたらす初期のプラーク破裂は低いＥＣＭ沈着及び結果として生ずる病変の壊死した脂質に富む芯を覆う繊維質の蓋の弱化に関連しうる。
【００７３】したがって、アテローム性動脈硬化症はそのうちいくつかはまだ特定されていない、さまざまな過程の複合した相互作用を含む。アテローム性動脈硬化症を治療する努力における単一の過程を標的にすることは現れた病態へのそれぞれの過程の関連した寄与の知識に因る。この理由のため、協調した計略が好適である。例示した計略は増大されたＥＭＣ沈着の可能性のある有益な効果と共に、ＳＭＣ移動、脂質蓄積及び増殖の阻害を含む。
【００７４】アテローム性動脈硬化症の本治療方法における式（Ｉ）の化合物は以下のスキーム中に示されるような方法により調製されうる。以下のスキーム及びそれに続く議論においては、別段の定めなき限り、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6は上記に定義されたとおりである。以下のスキーム及びそれに続く議論は式（Ｉ）〜（ＸＩＸ）の化合物の調製を示す。以下のスキーム及びそれに続く記述は式（Ｉ）〜（ＸＩＸ）の化合物のエナンチオマーにも適用される。
【００７５】
【化４】
【００７６】
【化５】
【００７７】
【化６】
【００７８】
【化７】
【００７９】
【化８】
【００８０】全体として、スキーム（１）中の合成順序はキラル補助ＸcをＲ1を含む化合物（Ｉ）（ステップ１）に連結すること、非対称アルドールのアルデヒド（ＩＩＩ）との縮合（ステップ２又は２’）、キラル補助のアルドール（ＩＶ）からの還元的除去（ステップ３）、ジオール（Ｖ）の塩基仲介環化（ステップ４）、ハロベンゾピラノール（ＶＩ）のリチウム化及びホウ素化（ステップ５）、ホウ酸（ＶＩＩ）のアリルハリド又はスルフォン酸（ＶＩＩＩ）への結合（ステップ６）、及びエステル（ＩＸ）の加水分解（ステップ７）を含む。
【００８１】スキーム（１）のステップ（１）は、約−８０〜０℃、好ましくは−７８〜−５５℃の温度で、約２０分間〜１時間にわたり、エーテル溶媒、好ましくはテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）のような非プロトン性溶媒中で、アルキルリチウム塩基、好ましくはブチルリチウムのような、好適な強い塩基で処理することによるキラル補助ＨＸcの一致するアニオンへの変換を示す。置換基Ｘcは非対称性アルドール反応において比較的及び絶対的な立体構造を制御するのに好適なキラル補助である。ＨＸcの例は（Ｒ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン、（Ｓ）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン、（４Ｒ，５Ｓ）−４−メチル−５−フェニル−オキサゾリジン−２−オン、及び（４Ｓ，５Ｒ）−４−メチル−５−フェニル−オキサゾリジン−２−オンを含む。生ずるアニオンは、同じ溶媒中で約−８０〜０℃、好ましくは約−７５℃の温度で、約１時間にわたり、群（Ｗ）がハロ、好ましくはクロロ、及びＲ1が上記に定義されるようなアシル化剤（Ｉ）で処理され、そしてその後、水性の重炭酸ナトリウムで処理することにより好ましく達成される、水性のワークアップの前に、約−２０℃〜２０℃、好ましくは約０℃まで温められ、アシル化キラル補助（ＩＩ）を産出する。
【００８２】スキーム（１）のステップ（２）は、両者とも本明細書中に援用する、Ｅｖａｎｓ， Ｄ． Ａ．；Ｂａｒｔｒｏｌｉ， Ｊ．；Ｓｈｉｈ， Ｔ． Ｌ．，Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １９８１， １０３， ２１２７及びＧａｇｅ， Ｊ． Ｒ．；Ｅｖａｎｓ， Ｄ． Ａ．， Ｏｒｇ． Ｓｙｎ． １９８９， ６８， ８３中に示されるものと類似の条件下で実行される「エバンズアルドール」反応を示す。特に、スキーム（１）のステップ（２）では、上記アシル化キラル補助（ＩＩ）はルイス酸、塩基、及び置換されたベンズアルデヒド（ＩＩＩ）で処理され、高い程度の構造選択性でアルコール（ＩＶ）を産出する。ベンズアルデヒド（ＩＩＩ）は、環化ステップ（４）で脱離基としての役割を果たすオルト置換基Ｙ、結合ステップ（６）の間にアリル側鎖により置換される基Ｘ（又はスキーム（２）のＸ’、特にスキーム（２）の結合ステップ（４））、及び上記に定義されるような置換基Ｒ2で置換される。置換基Ｘ（又はスキーム（２）のＸ’）はベンズアルデヒド（ＩＩＩ）のフェニル基の４又は５位に連結される。上記脱離基Ｙは典型的にはハロ又はニトロ基であり、そしてＸはハリドである（そして、スキーム（２）には、Ｘ’はハリド又はＣ1−Ｃ4ペルフルオロアルキルスルフォン酸である）。アルドール生成物（ＩＶ）を調製するために、アシル化キラル補助（ＩＩ）は、約−７８℃〜４０℃、好ましくは−５℃の温度で、約２０分間、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、トルエン又はジエチルエーテル、好ましくはジクロロメタンのような非プロトン溶媒中で、スルフォン酸ジアルキルホウ素、好ましくはジブチルホウ素トリフレートのようなホウ素ハリド又はスルフォン酸で処理され、約−７８℃〜−４０℃、好ましくは−５〜５℃の温度で、約１時間にわたって、トリエチルアミン又はジイソプロピルエチルアミン、好ましくはトリエチルアミンのような、第三アミン塩基で処理される。この混合物は、約−１００℃〜０℃、好ましくは約−７０℃の温度で、約３０分間にわたって、置換されたベンズアルデヒド（ＩＩＩ）で処理される。この混合物は、約１時間にわたって、約−２０℃〜２５℃、好ましくは約−１０℃の温度に温められ、その後、約１５℃以下の温度で、好ましくはｐＨ７の緩衝溶液、メタノール、及び水性過酸化水素の連続的な添加により、プロトン酸化クエンチ処理され、アルコール（ＩＶ）を産出する。
【００８３】スキーム（１）のステップ（２’）は代替の、及び好ましい、チタン含有ルイス酸を用いたアルコール（ＩＶ）の提供方法を示す。スキーム（１）のステップ（２’）ではアシル化キラル補助（ＩＩ）は、約−８０℃〜０℃、好ましくは−８０℃〜−７０℃の温度で、約３０分間の追加の攪拌を伴う約３０分間にわたって、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、又はトルエン、好ましくはジクロロメタンのような非プロトン溶媒中で、チタン（ＩＶ）ハリド、好ましくは四塩化チタンで処理され、続いて約−８０℃〜０℃、好ましくは−８０℃〜−６５℃の温度で、約３０分間にわたって、トリエチルアミン又はＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン、好ましくはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミンのような第三アミン又は第三ジアミン塩基で処理される。これは場合により、及び好ましく、約−８０〜０℃、好ましくは−８０〜−６５℃の温度で、１−メチル−２−ピロリジノン、ジメチルフォルムアミド、１，３−ジメチル−３，４，５，６−テトラヒドロ−２（１Ｈ）−ピリミジノン、トリエチル燐酸又は２，２’−ジピリジル、好ましくは１−メチル−２−ピロリジノンのようなドナーリガンドで処理され、続いて約３０分間攪拌される。この混合物は、約−１００〜０℃、好ましくは−８０〜−６５℃の温度で、約３０分間にわたって、置換されたベンズアルデヒド（ＩＩＩ）で処理され、−３０〜３０℃、好ましくは０〜２５℃の温度まで、約１〜２４時間、好ましくは約４時間にわたって温められる。この混合物は、−３０〜３０℃、好ましくは０〜２５℃の温度で、プロトンクエンチ、好ましくは水性塩化アンモニウムで処理され、アルコール（ＩＶ）を産出する。ドナーリガンドを用いた処理がなされる場合、上記アルコール（ＩＶ）は、いくつかの場合、上記ドナーリガンドと共に結晶溶媒和物として提供される。クエンチされた反応混合物を約１２時間にわたり約２０℃の温度で、Ｃｅｌｉｔｅ（商標）のような固体の支持を用いて攪拌することは、チタン副生成物の除去のための反応溶液の濾過を改善する。
【００８４】スキーム（１）のステップ（２’）のチタンアルドール状態は、それらが自然発火性試薬トリブチルボラン、腐食性試薬トリフリック酸、及びルイス酸ジブチルボロントリフレートの調製におけるそれらの発熱性の混合物を避けるという点で、スキーム（１）のステップ（２）のホウ素アルドール状態よりも好ましく、そして操作上より単純である。
【００８５】さらに、Ｅｖａｎｓ， Ｄ． Ａ．；Ｒｉｅｇｅｒ， Ｄ． Ｌ．；Ｂｉｌｏｄｅａｕ， Ｍ． Ｔ．；Ｕｒｐｉ， Ｆ．， Ｊ， Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． １９９１， １１３， １０４７のような文献中に示されたチタンアルドール反応と比較して、スキーム（１）のステップ（２’）のチタンアルドール状態は２当量以下のアルデヒド（ＩＩＩ）の高い選択性を提供する。好ましくは、約１当量のアルデヒド（ＩＩＩ）がこのステップで使用される。本明細書中でアルデヒド（ＩＩＩ）又は（請求項中に再引用される）式Ｒ11Ｃ（Ｏ）Ｈの化合物に関して使用される「約１当量」（“ａｂｏｕｔ ｏｎｅ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ”）の句は、１．５当量以下の前記化合物を意味する。Ｅｖａｎｓ ｅｔ．ａｌ．による上記論説において、２当量のアルデヒドがスキーム（１）のステップ（２’）に類似するチタンアルドール反応のために必要であろうということが報告される。
【００８６】式（Ｘ）の化合物の調製において有用性を有することに加えて、スキーム（１）のステップ（２’）のチタンアルドール状態は、（１９９４年３月３０日公開の）英国特許出願第２，２７０，９１４号中、及びＢ． Ｄ． Ｄｏｒｓｅｙｅｔ． ａｌ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ， １９９３，３４（１２）， １８５１中に示されるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤化合物の調製において有用である。スキーム（４）の反応は、Ｒ11がＣ1−Ｃ9アルキル又はＣ2−Ｃ9アルケニル、好ましくは３−シクロヘキシルプロペニルである、前記英国特許出願中に示されるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤化合物を調製するために使用しうる。特に、スキーム（４）はチタンアルドール反応の、Ｒ11が、Ｃ1−Ｃ9アルキル、Ｃ2−Ｃ9アルケニル又はＸ、Ｙ及びＲ2が上記に定義される、２位でＹ、４又は５位でＸ、及びフェニル基の残りの位置のひとつでＲ2により置換されたフェニルである、アルデヒド（ＸＶＩＩＩ）への適用を示す。スキーム（４）の反応条件はスキーム（１）のステップ（２’）のために示された条件と同じである。アルデヒド（ＸＶＩＩＩ）はスキーム（１）からのアルデヒド（ＩＩＩ）を含み、そしてアルコール（ＸＩＸ）はスキーム（１）からのアルコール（ＩＶ）を含む。
【００８７】以下の表（１）はスキーム（１）のステップ（２’）の生成物（又はスキーム（４）の生成物）がどのようにして使用される反応条件に因って多様化しうるか、そして特に、ジアステレオマー構造選択性がどのようにしてＴＭＥＤＡの量を１．２〜３当量に増大させることにより、及び２当量のＮＭＰを添加することにより増大するかを示す。表（１）に関して、１．０当量のアルデヒドＲＣＨＯがそれぞれの反応で使用され、ｘ及びｙはそれぞれ塩基及びＮＭＰの量を示し、ＮＭＰは１−メチル−２−ピロリジノンを意味し、ＴＭＥＤＡはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミンを意味し、ＮＥｔｉＰｒ2はジイソプロピルエチルアミンを意味し、そしてジアステレオマーの率はＨＰＬＣにより決定された。上記アルドールアイソマーは、分離、及びＶａｎ Ｄｒａａｎｅｎ， Ｎ．Ａ．；Ａｒｓｅｎｉｙａｄｉｓ， Ｓ．；Ｃｒｉｍｍｉｎｓ， Ｍ． Ｔ．；Ｈｅａｔｈｃｏｃｋ， Ｃ． Ｈ．， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ． １９９１， ５６， ２４９９及びＧａｇｅ， Ｊ． Ｒ．；Ｅｖａｎｓ， Ｄ． Ａ．， Ｏｒｇ． Ｓｙｎ． １９８９， ６８， ８３中に示される手順と類似の手順に従う、ＬｉＯＨ／Ｈ2Ｏ2を用いた加水分解による既知のカルボン酸アイソマーへの変換により同定された。上記所望のアイソマーは太字で示す。
【００８８】
【化９】
【００８９】
【表１】
【００９０】
【表２】
【００９１】スキーム（１）のステップ（３）は、ステップ（１）における再利用のために場合により再生されるキラル補助Ｘcの除去、及び本明細書中に援用される、Ｐｅｎｎｉｎｇ， Ｔ． Ｄ．；Ｄｊｕｒｉｃ， Ｓ． Ｗ．；Ｈａａｃｋ， Ｒ． Ａ．；Ｋａｌｉｓｈ， Ｖ． Ｊ．；Ｍｉｙａｓｈｉｒｏ， Ｊ． Ｍ．；Ｒｏｗｅｌｌ， Ｂ． Ｗ．；Ｙｕ， Ｓ． Ｓ．， Ｓｙｎ． Ｃｏｍｍｕｎ． １９９０， ２０， ３０７中に示される手順と類似の手順に従う化合物（ＩＶ）（酸のレベル）の所望のアルコール（Ｖ）への還元を示す。この工程では、アルコール（ＩＶ）は、約−７８℃〜還流温度、好ましくは０℃〜室温（２０〜２５℃）の温度で、典型的に水、エタノール又はイソプロパノールのようなプロトン溶媒を含む、ＴＨＦ、ジイソプロピルエーテル又はメチル第三エーテル、好ましくはＴＨＦのようなエーテルを含んだ溶媒中で、リチウムボロヒドリド、リチウムアルミニナムヒドリド、ボロヒドリドナトリウム又はボロヒドリドカルシウム、好ましくはリチウムボロヒドリドのようなヒドリド還元剤で処理される。１〜２４時間、典型的には１２時間後、上記反応は水で停止され、場合によっては過酸化水素を続いて追加される。キラル補助ＨＸcは、選択的沈殿により又はジイソプロピルエチル又は酢酸エチル及びヘキサンの混合物のような有機溶媒中のジオール（Ｖ）の溶液からのＨＸcの水性酸、好ましくは塩酸への抽出、それに続く水性酸抽出物の塩基を用いた中和、及び有機溶媒へのＨＸcの抽出により、ステップ（１）での再利用のために再生しうる。
【００９２】スキーム（１）のステップ（４）は、ジオール（Ｖ）の第一ヒドロキシルがオルト脱離基Ｙを置換し、（ＶＩ）のベンゾピラノール環系を産出する、分子内芳香族置換を示す。特に、脱離基Ｙはハロまたはニトロ基、好ましくはフルオロ基である、ジオール（Ｖ）がＴＨＦ、ジメチルスルフォキシド、又は１−メチル−２−ピロリジノン、好ましくはＴＨＦのような非プロトン溶媒中で、場合により追加の銅塩存在下で、室温〜１３０℃、好ましくは約７０℃の温度で、１〜２４時間、典型的には約４時間、第三ブトキシドカリウム、ビス（トリメチルシリル）アミドナトリウム、ビス（トリメチルシリル）アミドカリウム、炭酸セシウム又は水酸化ナトリウム、好ましくは第三ブトキシドカリウムのような塩基で処理され、ベンゾピラノール（ＶＩ）を与える。ベンゾピラノール（ＶＩ）中では、上記置換基Ｘ（又はスキーム（２）のＸ’）はベンゾピラン環の６又は７位で連結される。スキーム（１）のステップ（５）はベンゾピラノール（ＶＩ）中の置換基Ｘのリチウム、及びその後ホウ素酸基への変換を示す。リチウム化には、ベンゾピラノール（ＶＩ）ははじめにメチルリチウムで好ましく処理され、リチウムアルコキシドを形成し、続いてブチルリチウムで処理され、アリルリチウムを形成する。この工程において、Ｘがハリド、好ましくは臭化物又はヨー化物である、ベンゾピラノール（ＶＩ）は、エーテルを含む溶媒、好ましくはＴＨＦ中で、−７８〜０℃、好ましくは−７０〜−６５℃の温度で約１時間、２当量のアルキルリチウム、好ましくははじめに１当量のメチルリチウム、続いて１当量のブチルリチウムで処理され、続いて−７８〜０℃、好ましくは−７０〜−６５℃の温度で、約３０分間にわたり、ボラン−テトラヒドロフラン複合体、ホウ酸トリイソプロピル又はホウ酸トリメチル、好ましくはボラン−ＴＨＦ複合体のようなホウ素化試薬により処理され、続いて約−６５℃〜室温、好ましくは約０℃の温度で、水または場合により水性酸で停止され、ホウ素酸基がベンゾピラン環の６又は７位に連結したホウ素酸（ＶＩＩ）を与える。
【００９３】スキーム（１）のステップ（６）は、化合物（ＩＸ）のビアリール結合を形成する、ホウ素酸（ＶＩＩ）と化合物（ＶＩＩＩ）のスズキカップリングを示す。化合物（ＶＩＩＩ）中では、Ｚはハライド又はスルフォネート、好ましくは臭化物、ヨー化物又はトリフルオロメタンスルフォネートであり、Ｒ4はＣ1−Ｃ6アルキルそしてＲ3は上記に示すとおりである。この手順は、本明細書中に援用する、Ｍｉｙａｕｒａ， Ｎ．；Ｓｕｚｕｋｉ， Ａ．， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ．１９９５， ９５， ２４５７中に示される手順と類似である。この手順は、有機亜鉛を大量調製することの困難さ及び有機錫化合物の毒性のために、亜鉛又は錫種のカップリングに好ましい。この工程において、場合により水、好ましくはエタノールを含む、エタノール、ジメトキシエタン又はトルエンのような溶媒中で、ホウ素酸（ＶＩＩ）、アレン（ＶＩＩＩ）、テトラキス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（０）；ジクロロビス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（ＩＩ）；酢酸パラジウム（ＩＩ）；塩化アリルパラジウム２量体；トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）又は炭素上１０％パラジウム、好ましくは炭素上１０％パラジウムのようなパラジウム触媒、及び炭酸ナトリウム；トリエチルアミン；重炭酸ナトリウム；炭酸セシウム；リン酸三カリウム；フルオリドカリウム；フルオリドセシウム又はフルオリドテトラブチルアンモニウム、好ましくはフルオリドカリウムのような塩基又はフルオリド塩の混合物は、室温〜１３０℃の温度、好ましくは還流温度で、約１〜約２４時間、好ましくは約３時間攪拌され、ベンジルエステル基がベンゾピラン環の６又は７位に連結したバイアリル（ＩＸ）を与える。
【００９４】スキーム（１）のステップ（７）は、４０℃〜還流温度、好ましくは還流温度の温度での、約１〜約２４時間、好ましくは約６時間の、イソプロピルアルコールのような、アルコール溶媒中での、エステル（ＩＸ）の水性水酸化ナトリウムのような、水性水酸化塩基での処理を示す。上記反応混合物は室温まで冷却され、ヘキサン及びイソプロピルエーテルの混合物のような、水性塩基及び有機溶媒間で分割される。上記水性溶液は酸化され、そして最終化合物（Ｘ）は酢酸エチルの如き有機溶媒中へ抽出される。化合物（Ｘ）を有機溶媒で抽出するこの方法は、中性不純物を除去し、このことは、特にこの合成の最終段階において有利である。
【００９５】カルボン酸Ｘの取り扱いを容易にするために、この化合物は、トルエンのような溶媒中で、Ｒ5及びＲ6が上記に定義される式ＮＨＲ5Ｒ6の第二アミンで処理されることができ、式中Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ5、及びＲ6が上記に定義される以下の式（ＸＶＩＩ）：【００９６】
【化１０】
【００９７】のカルボン酸アンモニウムを形成する。カルボン酸アンモニウム（ＸＶＩＩ）は、０℃〜室温の範囲の温度で、３０分間〜３時間、好ましくは１時間、酢酸エチル、トルエン又は塩化メチレン、好ましくは酢酸エチルのような溶媒中で、塩酸又は硫酸、好ましくは塩酸のような水性酸で処理され、カルボン酸（Ｘ）を提供しうる。
【００９８】スキーム（２）は、スキーム（１）のステップ（５）又は（６）のカップリング順序の代替物を示す。スキーム（２）の工程は好ましい。スキーム（２）のステップ（１）はカルボン酸（ＸＩ）の、Ｒ3及びＲ4が上記に定義されるアルコールＲ4ＯＨを用いたエステル化であり、エステル（ＸＩＩ）を産出する。この工程において、カルボン酸（ＸＩ）は、０℃〜還流温度、好ましくは還流温度の温度で、１〜２４時間、典型的には４時間、トルエン、ジクロロメタン又はジクロロエタン、好ましくはトルエンのような溶媒中で、アルコールＲ4ＯＨ、好ましくは２，２−ジメチル−プロピルアルコールのような第一又は第二アルコール、及び硫酸、塩酸、メタン硫酸、トルエン硫酸又はカンファー硫酸、好ましくは硫酸のような酸で処理され、エステル（ＸＩＩ）を提供する。
【００９９】スキーム（２）のステップ（２）はエステル（ＸＩＩ）の塩基を用いた処理を示し、そして生ずるオルトメタル化種はホウ酸トリアルキルで捕らえ、ホウ酸エステル（ＸＩＩＩ）を与える。スキーム（２）のステップ（３）では、上記ホウ酸エステル（ＸＩＩＩ）は水酸化され、当業者に知られた方法により実行される対応するホウ酸（ＸＩＶ）になる。スキーム（２）のステップ（２）及び（３）では、エステル（ＸＩＩ）は、約−７８℃〜室温（２０〜２５℃）の温度範囲、好ましくは約０℃にわたり、ＴＨＦ、ジイソプロピルエーテル、ジオキサン又はメチル第三ブチルエーテル、好ましくはＴＨＦのようなエーテルを含む溶媒中で、トリイソプロピルホウ酸、トリエチルホウ酸又はトリメチルホウ酸、好ましくはトリイソプロピルホウ酸のようなトリ（Ｃ1−Ｃ4アルキル）ホウ酸存在下で、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムジエチルアミド、リチウム２，２，６，６−テトラメチルピペリジン又はビス（２，２，６，６−テトラメチルピペリジノ）マグネシウム、好ましくはリチウムジイソプロピルアミドのような金属アミド塩基で処理される。１０分間から５時間、典型的には１時間の後、上記反応は水性酸で停止され、ホウ酸（ＸＩＶ）を提供する。
【０１００】スキーム（２）のステップ（４）に進む前にホウ酸（ＸＩＶ）の取り扱いを容易にするために、上記ホウ酸（ＸＩＶ）はスキーム（３）に示すようにアミノジオールと反応されうる。スキーム（３）では、ホウ酸（ＸＩＶ）は、０℃〜還流温度の範囲内の、好ましくは室温の温度で、１５分間〜１０時間、好ましくは１０時間、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ヘキサン、トルエン又は上記溶媒の混合物、好ましくはイソプロパノールのような溶媒中で、Ｒ8、ｍ及びｎは上記に定義されるアミノジオール（ＸＶ）と反応され、アミン複合体（ＸＶＩ）を提供する。スキーム（２）のステップ（４）を用いて進行するために、アミン複合体（ＸＶ）は当業者に知られた方法従って水酸化されてホウ酸（ＸＩＶ）になる。上記方法は塩酸のような水性酸の使用を含む。
【０１０１】スキーム（２）のステップ（４）は、（ＩＸ）のビアリール結合を形成するための、ホウ酸（ＸＩＶ）とベンゾピラノール（ＶＩ）のスズキカップリングを示す。この工程では、ホウ酸（ＸＩＶ）、ベンゾピラノール（ＶＩ）、テトラキス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（０）；ジクロロビス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（ＩＩ）；酢酸パラジウム（ＩＩ）；塩化アリルパラジウム２量体；トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）又は炭素上１０％パラジウム、好ましくはテトラキス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（０）のようなパラジウム触媒、炭酸ナトリウム；トリエチルアミン；重炭酸ナトリウム；炭酸セシウム；リン酸三カリウム；フルオリドカリウム；フルオリドセシウム；水酸化ナトリウム；水酸化バリウム又はフルオリドテトラブチルアンモニウム、好ましくは炭酸ナトリウムのような塩基又はフルオリド塩、及び場合により水を含む、トルエン；エタノール；ジメトキシエタンのような溶媒、好ましくは水を含むトルエンを含む、混合物が調製される。スキーム（１）に従って調製されるベンゾピラノール（ＶＩ）では、ベンゾピラン環の６又は７位に連結するＸ’はハリド又はＣ1−Ｃ4硫酸ペルフルオロアルキル、好ましくは臭化物、ヨー化物又は硫酸トリフルオロメタンを示す。上記混合物は室温〜還流温度、好ましくは還流温度の温度で、約１０分間〜約６時間、好ましくは１時間、攪拌され、ビアリール（ＩＸ）を提供する。
【０１０２】スキーム（２）のステップ（５）はスキーム（１）のステップ（７）のための上記に示すカルボン酸（Ｘ）を提供するためのエステル（ＩＸ）の加水分解を示す。
【０１０３】式（Ｉ）の化合物の塩は、水酸化アルカリ金属、例えば水酸化ナトリウム又は水酸化アルカリ土壌金属、例えば水酸化マグネシウムのような塩基との反応により、慣用の方法で調製されうる。
実施例本発明は以下の特別な例を参照することにより、より理解されるであろう。
【０１０４】マウス系の派生。本研究において使用される遺伝学的に調節されたアポリポタンパク質Ｅ欠損（ＡｐｏＥ-/-）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体欠損（ＬＤＬｒ-/-）、及び単球化学誘引物質タンパク質−１欠損（ＭＣＰ−１-/-）マウスは以前に記述され、特定されている［Ｒｕｔｌｅｄｇｅ， Ｂ． Ｊ．ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．， １９９５；１５５：４８３８−４８４３；及びＮａｋａｓｈｉｍａ Ｙ， ｅｔ． ａｌ．， Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ． Ｔｈｒｏｍｂ．， １９９４；１４（１）：１３３−１４０を参照のこと］。アポＥ及びＭＣＰ−１（ＳｃｙＡ２）ヌル対立遺伝子の両方がホモ接合であるマウスを得るために、Ｃ５７Ｂ／６バックグラウンド（Ｃ５７Ｅ-/-）の雄ＡｐｏＥ-/-マウスをＣ５７Ｂ／６バックグラウンドのヘテロ接合雌ＭＣＰ-/+マウスと交配した。生ずるＡｐｏＥ-/-×ＭＣＰ−１-/+子孫をサザンブロット分析により同定し、ＡｐｏＥ-/-×ＭＣＰ−１-/-（Ｃ５７Ｅ-/-×ＭＣＰ−１-/-）及び対照ＡｐｏＥ-/-×ＭＣＰ−１+/+（Ｃ５７Ｅ-/-）マウスを作出するために交配した。混合された遺伝子バックグラウンド１２９０Ｉａ×Ｃ５７Ｂ／６（１２９Ｅ-/-）のＡｐｏＥ-/-マウスは屋内飼育され兄弟姉妹交配に由来した。全てのマウスは２１日目で離乳され、１２時間明／暗周期で維持され、普通又は西欧タイプの食事を給餌された［Ｂｏｕｒａｓｓａ， Ｐ． Ｋ．， ｅｔ．ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９６；９３：１００２２−１００２７を参照のこと］。
【０１０５】化合物の投与。式（Ｉ）の化合物、好ましくは（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）は、３５日処理プロトコールを用いて週齢を合わせた群のマウス（犠牲時に１５〜３０週齢）において病変の発展に対する影響について評価された。マウスの下位群は、上記表及び図の凡例中に示すように組織遺伝子発現における急性の変化の評価のために、より短期間（７〜１４日間）、（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）で処理された。全ての研究群で、上記化合物はＰＢＳ中０．６％Ｔｗｅｅｎ８０（商標）と０．２５％メチルセルロースから成る媒体中で１日１回経口胃管栄養により投与された。マウスは媒体のみ、式（Ｉ）の化合物３０ｍｇ／ｋｇ／日又は１００ｍｇ／ｋｇ／日のいずれかを受けた。
【０１０６】ＣＤ１１ｂ ＦＡＣｓ分析。処理期間後、マウスはケタミン：キシラジン：ＰＢＳ（１：１：２）で麻酔され、全血標本は腹大動脈から７．５％ＥＤＴＡを含む真空管へ採取された。血液単球ＣＤ１１ｂ発現の決定は以前に示すように実行された［Ｓｈｏｗｅｌｌ， Ｈ． Ｊ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｔｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， １９９５；２７３：１７６−１８４を参照のこと］。細胞はゆるやかな遠心分離（１２００ｒｐｍ、２分間）によりペレットにされ、５０μｇ／ｍｌのフルオレセイン結合ラット抗マウスＣＤ１１ｂＩｇＧ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に室温で３０分間インキュベートされた。非特異的な結合を調節するために、二重標本が５０μｇ／ｍｌのフルオレセイン結合ラットＩｇＧと共にインキュベートされた。３０分間のインキュベート後、細胞は１ｍｌのＨｉＦＡＺ緩衝液で洗浄され、ペレットにされ、そして赤血球は溶血緩衝液（ＣＡ、マウンテンビューのＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で室温で１０分間溶血された。上記細胞はその後２回洗浄され、ＨｉＦＡＺ緩衝液中に再懸濁され、そしてフルオレセインの程度がＦＡＣｓ流動血球計算器上で決定された。データはリスト様式で回収され、そしてマクロファージゲートは側方分散に対する前方分散ドットブロットにより定義された。
【０１０７】血漿リポタンパク質及び脂質。高速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ， ＮＪ、ピスカタウェイのＰｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｃ．）を用いた血漿リポタンパク質の分離は以前に示すように実行された［Ｂｏｕｒａｓｓａ， Ｐ． Ｋ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９６；９３：１００２２−１００２７を参照のこと］。総血漿コレステロール及びトリグリセリドは商業的に入手できるコレステロール／ＨＰ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ）及びトリグリセリドＧ（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のキットで呈色法を用いて計測された。
【０１０８】大動脈樹枝状分岐分析。いくつかの実験では、マウスは４％のパラフォルムアルデヒドで灌流−固定され、そしてさい状頭部領域及び頸動脈、鎖骨下動脈及び大腿の分枝を含むその全ての大動脈樹枝状分岐が取り除かれた。上記組織は外膜を取り除かれ、そして一片のポリスチレン上に置かれ、そして複製スタンドに取り付けられたＣＣＤカメラを用いてデジタルイメージが得られた。上記頸動脈及び鎖骨下の分枝は取り除かれ、そして上記さい状頭部領域がさらなる処置のために単離された。大動脈樹枝状分岐の残りの部分中の病変により覆われた大動脈表面のパーセントは、以前に示したＥｎ ｆａｃｅ調製を用いて決定された［Ｂｏｕｒａｓｓａ， Ｐ． Ｋ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９６；９３：１００２２−１００２７を参照のこと］。それぞれの大動脈は直接イメージ捕獲及びトリニトロンモニター上の表示により病変領域について評価された。上記病変領域はＩｍａｇｅＰｒｏ３．１イメージ分析（ＭＡ、ウォーバーンのＩｍａｇｅ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）を用いて未染色組織で決定された。外膜を取り除いた大動脈内のアテローム性動脈硬化症プラークの領域は半透明の非病変領域に比較して黄−白色の不透明な領域として現れた。この領域は黒（背景）、灰色（正常組織）、及び白（病変領域）の影について手動で設定した境界により量化された。
【０１０９】病変分析。断面病変領域を決定するために、心臓は、以前に示すように、４％パラフォルムアルデヒド中で灌流−固定され、３０％ゴムスクロースで２４時間４℃で浸透され、そしてＯＣＴ化合物中に埋め込まれて−１８℃で１０μｍの切片にされ［Ｂｏｒｇｅａｔ Ｐ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， １９７９；２５４：２６４３−２６４６を参照のこと］、そして上記切片はオイルレッドＯ（ＮＹ、ベイショアのＰｏｌｙｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色され、そしてＧｉｌｌＩＩＩヘマトキシリン（ＭＯ、セントルイスのＳｉｇｍａ）で対比染色された。大動脈弁のそれぞれの切片はトリニトロンＲＧＢモニター上の表示のためにＬｅｉｔｚ Ｌａｂｏｒｌｕｘ Ｓ（Ｌｅｉｃａ）光マイクロスコープに取り付けられたＲＢＧカメラからの直接の捕獲イメージによりオイルレッドＯ染色領域について評価された。イメージ分析は以前に示したように、ＩｍａｇｅＰｒｏ３．１’ソフトウェアを用いて実行された［Ｂｏｕｒａｓｓａ， Ｐ． Ｋ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ， １９９６；９３：１００２２−１００２７を参照のこと］。結果は切片当たりの平均の病変の大きさとして又はオイルレッドＯで染色された総断面血管壁のパーセントとして表現された。それぞれの動物について、１２〜１６の切片の上記平均の病変領域が決定され、そしてデータは病変の大きさ又は平均パーセント病変領域±Ｓ．Ｄ．として表現された。
【０１１０】マクロファージの免疫組織化学染色。大動脈弁の連続的なパラフォルムアルデヒド固定されたＯＣＴ包埋切片はＭＯＭＡ−２（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）及びＣＤ１１ｂ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）に対するラットモノクローナル抗体（ＩｇＧ2b）を用いてマクロファージについて免疫染色された。内因性のビオチン及びペルオキシダーゼ活性はそれぞれの切片をアビジン／ビオチン溶液（ＶｅｃｔｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、及び１％ウシ血清中の０．３％Ｈ2Ｏ2とそれぞれインキュベートすることにより防がれた。ラット、抗マウスＭＯＭＡ−２は２５μｇ／ｍｌの濃度で適用され、そしてラット抗マウスＣＤ１１ｂは（５μｇ／ｍｌ）の濃度で適用された。一次抗体とのインキュベートに続いてビオチン化ロバ抗ラット二次抗体ＩｇＧ（１．４μｇ／ｍｌ，Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｃｈ）、そしてセイヨウワサビペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン（１：５００）と共にインキュベートされた。非特異的ラットＩｇＧ２ｂ抗体（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）は陰性対照として使用された。抗体結合はＤＡＢ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）で可視化され、そして全ての切片はＧｉｌｌＩＩＩヘマトキシリンで対比染色された。結果は総断面血管壁領域のパーセントとして表現された（正常＋疾患領域／切片、ＤＡＢで染色された管腔を除く）。
【０１１１】腹膜マクロファージ走化性分析。本研究の最後に、それぞれの群からのマウスの一部は１ｍｌの滅菌６％カゼインを腹腔内注射され、そして４日後腹腔の滲出細胞は腹膜腔を１％ウシ胎児血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ））で補充したＨａｎｋｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ＨＢＳＳ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で洗浄することにより回収された。腹膜細胞はその後０．１％ウシ血清アルブミンＢＳＡで補充されたＲＰＭＩ−１６４０中で３回洗浄された。走化性には、細胞は走化性緩衝液（０．１％ＢＳＡ及び２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）で補充されたＲＰＭＩ−１６４０）中に２×１０6細胞／ｍｌの濃度で懸濁された。上記細胞懸濁液は４８穴の小走性容器の上部容器中にのせられた。マウスＭＣＰ−１（１０ｎＭ）又はＬＴＢ4（１０ｎＭ）は５μｍポリカーボネート膜により上記容器から分離された下部容器に加えられた。上記膜の下面に結合した上記腹膜マクロファージは固定され、Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ、染色セット（スイスのＤａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ Ｉｎｃ）を用いて染色された。結果は３回の標本中で４倍高力域中に移動した細胞の（２０回）平均数として表された。
【０１１２】統計。統計的有意性はＳｔａｔＶｉｅｗ統計プログラム（ＣＡ、バークレイのＡｂａｃｕｓ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ， Ｉｎｃ．）を用いて、対でないスチューデントのｔテストにより決定された。結果は平均±標準偏差として報告される。
【０１１３】アテローム性動脈硬化症に対する式（Ｉ）の化合物、特に（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）の活性は以下の表（２）〜（４）中に表される：【０１１４】
【表３】
【０１１５】表（２）に関して、混合された１２９Ｉｏ／Ｂ６（１２９Ｅ-/-）又はＣ５７ＢＩ／６バックグラウンド（Ｃ５７Ｅ-/-）のアポリポタンパク質Ｅ欠損マウス、低密度リポタンパク質受容体欠損マウスＬＤＬＲ-/-マウスのホモ接合マウスは、３５日間、経口で、示された用量で（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）を用いて処置された。ＬＤＬＲ-/-は西欧食を給餌された；全ての他の系は普通食で維持された。大動脈洞及び弁領域の１０μ切片中の平均パーセント病変領域はオイルレッドＯ染色に従って計測され、値は平均±ＳＤとして報告される。「ＮＤ」の用語は未測定として定義する。「ＴＰＣ」の用語は総血漿コレステロールとして定義する。「ＴＧ」の用語はトリグリセリドとして定義する。「洞」（“ｓｉｎｕｓ”）の用語は大動脈弁の領域；心臓の基底から上昇する；大動脈弁尖がはじめに現れるところではじまり、内腔を３の明確な領域に分ける；として定義する。上記洞では、上記大動脈壁はふくらんでおり不規則である。「弁」（“ｖａｌｖｅ”）の用語は洞領域がおわるところにはじまる大動脈弁の領域；弁領域は、弁尖がもはや管腔を分けない、そして大動脈壁がより曲線的で明確に現れるところからはじまる；として定義する。上記弁領域は上記弁尖がもはや明らかでなく上記壁が充分に曲線的であるところでおわる。
【０１１６】
【表４】
【０１１７】表（３）に関して、普通食で維持された雌アポリポタンパク質Ｅ欠損マウス（１２９Ｅ-/-）及び西欧タイプの食事で維持された雄ＬＤＬ受容体（ＬＤＬｒ-/-）欠損マウスは（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）（３０ｍｇ／ｋｇ／ｄ）を用いて経口で３５日間処理された。データは平均±ＳＤ（Ｎ＝８／群）病変領域及びＣＤ１１ｂについて陽性に染色された病変の平均パーセントとして報告される。「ＣＤ１１ｂ」の用語は、他の細胞タンパク質、ＣＤ−１８と結合したときＭＡＣ−１を形成する細胞中内部に見られるタンパク質；ＭＡＣ−１は接着に関係する単球表面上の受容体である；として定義する。
【０１１８】
【表５】
【０１１９】表（４）に関して、Ｃ５７ｂＩ／６バックグラウンド（Ｃ５７Ｅ-/-）マウスの単球化学誘引物質タンパク質−１（ＭＣＰ−１-/-）及びアポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ-/-）のヌル対立遺伝子のホモ接合（ＭＣＰ−１-/-×ＡｐｏＥ-/-）のマウスは、３５日間、経口で、示された０、３０又は１００ｍｇ／ｋｇの用量で（３Ｓ，４Ｒ）−７−（２−カルボキシ−５−トリフルオロメチルフェニル）−４−ヒドロキシ−３−ベンジル−２Ｈ−１−ベンゾピラン）を用いて処置された。大動脈洞及び弁領域の１０μ切片中の平均パーセント病変領域はオイルレッドＯ染色に従って計測され、値は平均±ＳＤとして報告される。「ＮＤ」の用語は未測定として定義する。「ＴＰＣ」の用語は総血漿コレステロールとして定義する。「ＴＧ」の用語はトリグリセリドとして定義する。「洞」の用語は大動脈弁の領域；心臓の基底から上昇する；大動脈弁尖がはじめに現れるところではじまり、内腔を３の明確な領域に分ける；として定義する。上記洞では、上記大動脈壁はふくらんでおり不規則である。「弁」の用語は洞領域がおわるところにはじまる大動脈弁の領域；弁領域は、弁尖がもはや管腔を分けない、そして大動脈壁がより曲線的で明確に現れるところからはじまる；として定義する。上記弁領域は上記弁尖がもはや明らかでなく上記壁が充分に曲線的であるところで終わる。
【０１２０】本発明に係る方法において使用される式（Ｉ）の化合物は以下の調製法により示されるように合成されうるが、それはその詳細に限定されない。以下の調製法では、「室温」（ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）の用語は約２０℃〜約２５℃の範囲内の温度を意味する。
調製法（１）（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸イソプロピルアルコール（９Ｌ）中の（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸エチルエステル（８９７ｇ、１．９３ｍｏｌ）及び１０％水性水酸化ナトリウム（９８０ｍＬ、２．７２ｍｏｌ）の混合物を還流で６時間熱し、室温まで冷却し、そして１２時間攪拌した。上記反応混合物は水（１３．５Ｌ）、ヘキサン（９Ｌ）、及びイソプロピルエーテル（４．５Ｌ）で希釈した。上記水層を分離し、ヘキサン（９Ｌ）及びイソプロピルエーテル（４．５Ｌ）で抽出し、２Ｎの水性塩酸でｐＨ２に調整し、そして酢酸エチル（８Ｌ及び４Ｌ）で抽出した。混合された酢酸エチル抽出物を水（６Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮して濃い琥珀色の油を得、トルエン（２Ｌ）で希釈し、再び濃縮して油を得た。上記油は６０℃でトルエン（４．２Ｌ）に溶解し、そしてヘキサン（８．８Ｌ）を５０℃以上の温度を維持する率で加えた。数時間かけて室温までゆっくり冷却されて沈殿された上記黄褐色の固体を濾過し、そして２：１ヘキサン／トルエン（２Ｌ）で洗浄した。これらの固体を６０℃でトルエン（５Ｌ）に溶解し、Ｄａｒｃｏ（商標）Ｇ−６０で処理し、濾過し、トルエンで洗浄し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで約４．０Ｌに濃縮した。この混合物を５０〜６０℃に熱し、ヘキサン（８．６Ｌ）で１滴ずつ処理し、冷却し、そして５℃で１〜２時間粒状化した。生じた固体を濾過し、２：１のヘキサン／トルエン（２Ｌ）で洗浄し、そしてその湿った塊をヘキサン（４Ｌ）で還流で３０分間攪拌した。この混合物を室温まで冷却し、１時間粒状化し、濾過し、そして生じた固体を真空下で一晩乾燥し、４５０ｇ（５５％）の（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸を乳白色の固体として得た：【０１２１】
【化１１】
【０１２２】調製法（１）のための上記（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸エチルエステル出発物質は以下のように調製された：Ａ． （Ｒ）−４−ベンジル−３−（３−フェニル−プロピオニル）−オキサゾリジン−２−オン−７８℃でテトラヒドロフラン（９Ｌ）中の（Ｒ）−（＋）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノン（９１０ｇ、５．１４ｍｏｌ）及び標識としての５００ｍｇの２，２’−ジピリジルの溶液に、ヘキサン（２．０３Ｌ、５．１４ｍｏｌ）中のＢｕＬｉの２．５Ｍ溶液を３０分間にわたり添加した。上記反応混合物の温度を上記添加の間−５５℃以下に保った。上記反応混合物を−７５℃まで冷却し、そして塩化ヒドロシナモイル（９５０ｇ、５．６３ｍｏｌ）を５分間にわたり添加した。上記反応溶液を０℃まで温めた、そこで上記反応混合物は薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２：１）により完了したことを判断した。上記反応を１０％の水性重炭酸ナトリウム（３．６Ｌ）及び水（３．６Ｌ）を添加することにより停止した。上記水相を分離し、酢酸エチル（３Ｌ）で抽出した。混合された有機層は５％水性炭酸ナトリウム（３．６Ｌ）及び飽和された水性塩化ナトリウム（２Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで約２Ｌの粘性の黄色懸濁液に濃縮した。この懸濁液を酢酸エチル（３Ｌ）に溶解し、固体に濃縮し、そして５０℃で酢酸エチル中に溶解した。ヘキサン（１０．７Ｌ）を添加し、そして上記混合物をゆっくり１０℃まで冷却し、固体の沈殿を得、それを１０℃で３０分間攪拌した。上記固体を濾過により回収し、ヘキサンで洗浄し、そして室温で風乾して１．４ｇ（８８％）の（Ｒ）−４−ベンジル−３−（３−フェニル−プロピオニル）−オキサゾリジン−２−オンを淡い黄色の針晶として得た：【０１２３】
【化１２】
【０１２４】Ｂ． ［４Ｒ−［３（２Ｒ，３Ｒ）］］−４−ベンジル−３−［２−ベンジル−３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピオニル］−オキサゾリジン−２−オン−５℃でジクロロメタン（５．６Ｌ）中の（Ｒ）−４−ベンジル−３−（３−フェニル−プロピオニル）−オキサゾリジン−２−オン（１０６４ｇ、３．４４ｍｏｌ）の溶液にジブチルホウ素トリフレート（１１３３ｇ、４．１３ｍｏｌ）を２０分間にわたり添加し、続いて反応温度を５℃以下に維持する一方でトリエチルアミン（７１９ｍＬ、５．１６ｍｏｌ）を添加した。この混合物を−７０℃まで冷却し、そしてジクロロメタン（２Ｌ）中の４−ブロモ−２−フルオロ−ベンズアルデヒド（６６９ｇ、３．４４ｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたり添加した。上記混合物を１時間にわたって−１０℃まで温め、そこでそれは薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２：１）により完了したことを判断した。上記反応を３０分間にわたりリン酸カリウム１塩基−塩化ナトリウムｐＨ７緩衝液（３．５Ｌ）を添加することにより停止し、続いて反応温度を１５℃以下に維持する一方で１．５時間にわたりメタノール（１．８Ｌ）及び３５％水性過酸化水素（１．８Ｌ）を加えた。上記有機層を分離し、飽和水性重炭酸ナトリウム（６．７Ｌ）で洗浄し、無水エタノール（４Ｌ）及び２５％水性重亜硫酸ナトリウムで希釈した。上記有機層を分離し、水（４Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮して１８１８ｇ（１０３％−粗重量）の［４Ｒ−［３（２Ｒ，３Ｒ）］］−４−ベンジル−３−［２−ベンジル−３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピオニル］−オキサゾリジン−２−オンを非常に粘性の琥珀色油として得た：【０１２５】
【化１３】
【０１２６】Ｃ． ［４Ｒ−［３（２Ｒ，３Ｒ）］］−４−ベンジル−３−［２−ベンジル−３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピオニル］−オキサゾリジン−２−オン， １−メチル−２−ピロリジノン溶媒和物−７０℃〜−８０℃でジクロロメタン（１８０Ｌ）中の（Ｒ）−４−ベンジル−３−（３−フェニル−プロピオニル）−オキサゾリジン−２−オン（１２．０ｋｇ、３８．８ｍｏｌ）の溶液に四塩化チタン（８．８ｋｇ、４６．６ｍｏｌ）を３０分間にわたり添加し、濃い懸濁物を与え、それを−７０℃〜−８０℃でさらに３０分間攪拌した。Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’，−テトラメチルエチレンジアミン（１７．６Ｌ、１１６．４ｍｏｌ）を３０分間にわたり添加し、より流動性の反応混合物を得た。全て−６５℃以下の反応温度に維持される間、１−メチル−２−ピロリジノン（７．６ｋｇ、７７．６ｍｏｌ）を添加し、そして上記反応混合物を３０分間攪拌した。−６８℃以下又は−６８℃の反応温度に維持する間、ジクロロメタン（３８Ｌ）中の４−ブロモ−２−フルオロ−ベンズアルデヒド（７．９ｋｇ、３８．８ｍｏｌ）の溶液を３０分間にわたり添加した。上記反応混合物を８時間にわたり２０℃まで温め、そこで１０℃まで冷却し、そして１１Ｌの水中の５．０ｋｇの塩化アンモニウムの溶液で停止し、白い沈殿物及び２８℃までの発熱を誘発した。Ｃｅｌｉｔｅ（商標）（１２ｋｇ）を添加し、そして上記反応混合物を１２時間２０℃で攪拌した。上記反応混合物を濾過し、大気中で油に濃縮し、ヘキサン（１２０Ｌ）で処理し、約５０Ｌまで濃縮し、ゆっくり０℃まで冷却し、そして２４時間粒状化した。上記粗生成物、２４．３ｋｇを濾過により単離し、１１０Ｌのジクロロメタン中の２つの同様の反応からの上記粗生成物と混合し、３２０Ｌのヘキサンで処理し、大気中で約２５０Ｌの最終容積まで濃縮して（蒸留温度６５℃）、確実な生成物を結晶の核にし、そして２０℃で１８時間にわたる粒状化を伴ってゆっくり冷却した。濾過は６７．４ｋｇ（９４％）の［４Ｒ−［３（２Ｒ，３Ｒ）］］−４−ベンジル−３−［２−ベンジル−３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピオニル］−オキサゾリジン−２−オン，１−メチル−２−ピロリジノン溶媒和物を薄い黄褐色の粒状固体として得た：【０１２７】
【化１４】
【０１２８】Ｄ． （１Ｒ，２Ｓ）−２−ベンジル−１−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１，３−ジオールテトラヒドロフラン（１．７Ｌ、３．４ｍｏｌ）中のリチウムボロヒドリドの２Ｍ溶液をテトラヒドロフラン（１．７Ｌ）で希釈し、そして水（６１ｍＬ、３．４ｍｏｌ）で１５分間にわたり慎重に処理した。この混合物を室温で水素放散が終わるまで（０．５〜１時間）攪拌し、そしてその後テトラヒドロフラン（８．７５Ｌ）中の［４Ｒ−［３（２Ｒ，３Ｒ）］］−４−ベンジル−３−［２−ベンジル−３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピオニル］−オキサゾリジン−２−オン（１．７５ｋｇ、３．４ｍｏｌ）の溶液に０℃で３０分間にわたり添加した。生じた乳白色の懸濁物を１２時間にわたり室温まで温め、そこでそれを薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２：１）により完了したことを判断した。上記反応混合物を１５℃まで冷却し、そして１５分間にわたり水（５．２５Ｌ）で停止し、そして３５％水性過酸化水素（２．６Ｌ）を２０分間にわたり添加する前に、さらに１０分間攪拌した。上記反応混合物を１５分間攪拌し、そしてその後酢酸エチル（５．３Ｌ）及び水（４Ｌ）で希釈した。上記有機層を分離し、そして水（５．３Ｌ）、５％水性重亜硫酸ナトリウム（５．２５Ｌ）、及び５０％飽和水性塩化ナトリウム（７．５Ｌ）で洗浄した。過酸化水素が上記有機層中で検出されたので、それをさらに５％水性重亜硫酸ナトリウム（５Ｌ）及び５０％飽和水性塩化ナトリウム（６Ｌ）で洗浄した。上記有機層をｉｎ ｖａｃｕｏで油に濃縮し、酢酸エチル（４Ｌ）及びヘキサン（１３Ｌ）で希釈し、そして（Ｒ）−（＋）−４−ベンジル−２−オキサゾリジノンを除去するために１Ｎの水性塩酸（６回１７Ｌ）で洗浄した。上記有機層を飽和水性重炭酸ナトリウム（５．３Ｌ）で洗浄し、トルエン（２Ｌ）で希釈し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮して１１３８ｇ（９８％）の（１Ｒ，２Ｓ）−２−ベンジル−１−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１，３−ジオールを油として得た：【０１２９】
【化１５】
【０１３０】Ｅ１． （３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールテトラヒドロフラン（６．５５Ｌ、６．５５ｍｏｌ）中のビス（トリメチルシリル）アミドナトリウムの１Ｍ溶液を２０分間にわたり、室温でジメチルスルフォキシド（９．８８Ｌ）中の（１Ｒ，２Ｓ）−２−ベンジル−１−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１，３−ジオール（１９７５ｇ、５．８２ｍｏｌ）の溶液に添加した。上記混合物を上記反応混合物からテトラヒドロフランを取り除くために吸引真空下でゆっくり６０℃まで熱し、そしてその後吸引真空下で６０℃〜６５℃で５時間熱し、そこで上記反応を薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、２：１）に従って完了したことを判断した。上記反応混合物を室温まで冷却し、そして水（１０Ｌ）、続いて１Ｎの水性塩酸（１０Ｌ）を添加することにより停止した。生じた黄褐色の懸濁物を濾過し、水（２Ｌ）で洗浄し、そして酢酸エチル（１２Ｌ）中に溶解した。この溶液を水（２回１２Ｌ）で洗浄し、低容積まで濃縮し、イロプロピルエーテル（４Ｌ）中に溶解し、そして大気圧下で５０〜６０℃で濃縮して１．０Ｌとし、そこで固体が沈殿しはじめた。生じた懸濁物を室温まで冷却し、１２時間攪拌し、その二分の一の容積まで濃縮し、０〜５℃まで冷却し、そして濾過して９１６ｇ（４９％）の（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールを白色固体として得た。上記濾液を濃縮して濃い油（９０６ｇ）を得、還流でイソプロピルエーテル（１．５Ｌ）中に溶解し、室温まで冷却し、攪拌し、そして濾過して追加の８２ｇの固体を得た。上記濾液を濃縮し、そしてシリカゲル（６０〜２３０目）でクロマトグラフィーにかけ、３：１のヘキサン／酢酸エチルで溶出した。生成物に富む画分を濃縮し、そしてイソプロピルエーテルから再結晶して追加の８２ｇの固体を産出した。（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールの総収量は１０８０ｇ（５８％）であった：【０１３１】
【化１６】
【０１３２】Ｅ２． （３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールあるいは、上記に示す化合物を以下のように調製しうる：１８５Ｌのテトラヒドロフラン中の（３３．５ｋｇ（５４．８ｍｏｌｅｓ）の［４Ｒ−［３（２Ｒ，３Ｒ）］］−４−ベンジル−３−［２−ベンジル−３−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−３−ヒドロキシ−プロピオニル］−オキサゾリジン−２−オン，１−メチル−２−ピロリジノン溶媒和物から単離なしに調製された）（１Ｒ，２Ｓ）−２−ベンジル−１−（４−ブロモ−２−フルオロ−フェニル）−プロパン−１，３−ジオールの溶液に、１２．９ｋｇ（１１５ｍｏｌ）の第三ブトキシドカリウムを添加した。上記反応混合物を環流で４時間熱し、そこで上記反応を薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、３：１）により完了したことを確認した。上記反応混合物を室温まで冷却し、１７０Ｌの水で停止し、８３Ｌの酢酸エチルで希釈し、そして７．５Ｌの濃縮された塩酸でｐＨ５．３（水層）に酸性化した。上記有機層を真空下で約３８Ｌの懸濁液になるまで濃縮し、７６Ｌのイソプロピルエーテルで希釈し、その固体を溶解するために温め、ゆっくり０℃まで冷却し、そして０℃で１２時間粒状化した。（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オール、５．１ｋｇの白色固体を濾過により単離した。上記母アルコール液を４Ｌの飽和水性塩化ナトリウムで洗浄し、５７Ｌの最終容積まで濃縮し、そして０℃で１２時間粒状化して４．３ｋｇの（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールの第二収穫物を得た。
【０１３３】第二の同一の反応混合物を停止し、酢酸エチルで希釈し、そして上記に示すように酸性化した。上記有機層を１０ｋｇの硫酸マグネシウム上で乾燥させ、大気中で約３０Ｌの懸濁液になるまで濃縮し、３８Ｌのイロプロピルエーテルで希釈し、約５７Ｌまで濃縮し、ゆっくり冷却し、そして０〜１０℃で１２時間粒状化した。（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オール、８．７ｋｇを濾過により単離した。上記母アルコール液を上記はじめの反応からの上記第二収穫物からの母アルコール液と混合し、濃縮して油とし、冷却により凝固させ、６Ｌのイソプロピルエーテル中で２０℃で１２時間、及び０℃で２時間粒状化し、そして濾過して冷イソプロピルエーテルで洗浄された後６．３ｋｇの（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールを得た。両反応からの上記混合された収穫物を乾燥させて２０．８ｋｇ（５９％）の（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オールを得た。
【０１３４】Ｆ． （３Ｓ，４Ｒ）−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−ホウ素酸−６５℃以下の温度を維持する間、−７５℃でテトラヒドロフラン（５．６Ｌ）中の（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オール（３７７ｇ、１．１８ｍｏｌ）の溶液に、エーテル（１．６Ｌ、２．３７ｍｏｌ）中のメチルリチウムの１．４８Ｍ溶液を４５分間にわたり添加した。上記反応混合物を−６５℃以下で１時間攪拌し、続いてヘキサン（４４０ｍＬ、１．３ｍｏｌ）中のブチルリチウムの２．５Ｍ溶液を１５分間にわたり添加した。上記反応混合物を−６５℃以下で１時間攪拌し、続いてテトラヒドロフラン（５．９Ｌ、５．９ｍｏｌ）中のボラン−テトラヒドロフラン複合体の１．０Ｍ溶液を３０分間にわたり添加した。上記反応混合物を０℃まで温め、水（４．４Ｌ）を添加することにより停止し、１Ｎの水性塩酸（４Ｌ）でｐＨ２に調整し、そしてイソプロピルエーテル（４Ｌ）で抽出した。上記水層をイソプロピルエーテル（４Ｌ）で抽出され、そして上記混合された有機層を０．５Ｎの水性水酸化ナトリウム（７．２Ｌ）で洗浄した。上記水層を１Ｎの水性塩酸（５．５Ｌ）でｐＨ３に調整し、そして酢酸エチル（５．４Ｌ及び２．７Ｌ）で抽出した。上記混合された酢酸エチル層を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮されて３０４．５ｇ（９１％）の（３Ｓ，４Ｒ）−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−ホウ素酸を黄色泡沫として得た：【０１３５】
【化１７】
【０１３６】Ｇ． （３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸エチルエステルエチル２−ヨード−４−トリフルオロメチル−ベンゾエート（７２３ｇ、２．１ｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−ホウ素酸（６２７ｇ、２．２ｍｏｌ）、フルオリドカリウム（３６６ｇ、６．３ｍｏｌ）、炭素（１５７ｇ、５０％水で湿った）上の１０％パラジウム、及び無水エタノール（６．２７Ｌ）の混合物を環流で３時間熱し、そこで薄層クロマトグラフィー（トルエン／酢酸、５：１）が上記反応が完了したことを示した。上記反応混合物をイソプロピルエーテル（８Ｌ）で希釈し、Ｃｅｌｉｔｅ（商標）で濾過し、そして１０％の水性重炭酸ナトリウム（１．５Ｌ）で洗浄した。上記水層を分離し、そしてイソプロピルエーテル（３Ｌ）で抽出した。上記混合された有機層を水（６Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そして室温でＤａｒｃｏ（商標）Ｇ−６０（１．０ｋｇ）及びシリカゲル（１ｋｇ、７０〜２３０目）で処理した。この混合物をシリカゲル（７０〜２３０目）のパッドで濾過し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮して９２２ｇの濃い色の油を得た。この油を酢酸エチル（１Ｌ）で希釈し、そしてシリカゲル（２ｋｇ）のカラムをとおして濾過し、酢酸エチルで溶出して、薄琥珀色の溶液を与え、その溶液を濃縮して８９７ｇ（９２％）の（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸エチルエステルを薄琥珀色の油として得た：【０１３７】
【化１８】
【０１３８】調整法（２）（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸イソプロピルアルコール（２３ｍＬ）中の（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル（２．３４ｇ、４．６９ｍｍｏｌ）の溶液を１０％水性水酸化ナトリウム（２．３ｍＬ、６．４ｍｍｏｌ）で処理し、そして還流で３時間熱した。上記反応混合物を室温まで冷却し、水（３４ｍＬ）中へ注ぎ、そしてヘキサン（２３ｍＬ）及びイソプロピルエーテル（１３ｍＬ）で抽出した。上記水層を分離し、そしてヘキサン（２３ｍＬ）及びイソプロピルエーテル（１３ｍＬ）で抽出し、６Ｎの水性塩酸でｐＨ２に調整し、そして酢酸エチル（２回４０ｍＬ）で抽出した。上記混合された酢酸エチル抽出物を塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮されて白色泡沫を得た、それをトルエン／ヘキサンから再結晶させた。生じた固体を濾過し、そしてヘキサンで洗浄し、そしてその湿った塊をヘキサン（２０ｍＬ）で１時間攪拌した。上記混合物を濾過し、そして生じた固体を真空下で乾燥させ１．０１ｇ（５０％収量）の（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸を白色固体として得た：【０１３９】
【化１９】
【０１４０】調製法（２）のための上記（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル出発物質を以下のように調製した：Ａ． ４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステルトルエン（５００ｍＬ）中の４−トリフルオロメチル安息香酸（７５．０ｇ、３９４ｍｍｏｌ）及び２，２−ジメチル−プロピルアルコール（７０．５ｇ、８００ｍｍｏｌ）の懸濁液に濃縮された硫酸（３．０ｍＬ）を添加した。上記混合物を環流で４時間攪拌し、室温まで冷却し、飽和水性炭酸ナトリウム（２５０ｍＬ）へ注ぎ、そしてその層を分離した。上記有機層を飽和水性炭酸ナトリウム（２５０ｍＬ）、及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、そして濃縮して４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル（１０２ｇ、９９％収率）を黄色液体として得た：Ｒf：０．６６（酢酸エチル／ヘキサン ２５／７５）；
【０１４１】
【化２０】
【０１４２】Ｂ． ２−（２，２−ジメチル−プロポキシカルボニル）−５−トリフルオロメチル−ベンゼンホウ素酸テトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中の４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル（４．２２５ｇ、１６．２３ｍｍｏｌ）溶液にホウ酸トリイソプロピル（９．００ｍＬ、３９．０ｍｍｏｌ）を添加した。上記溶液を−７８℃まで冷却し、そしてリチウムジイソプロピルアミド（１２．０ｍＬのテトラヒドロフラン／ヘプタン中の２．０Ｍ溶液、２４．０ｍｍｏｌ）を５分間にわたり１滴ずつ添加した。上記赤い溶液を３０分間攪拌し、０℃まで温め、そして１Ｎの塩酸（５０ｍＬ）をゆっくり添加することにより停止した。上記混合物を室温まで温め、３０分間攪拌し、そしてヘキサン（２００ｍＬ）に添加した。上記層を分離し、そして上記有機層を２Ｎの塩酸（１００ｍＬで２回）、水（１００ｍＬ）、及び塩水（５０ｍＬ）で連続的に洗浄した。上記有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮して油を得た。上記粗生成物をヘプタン（４０ｍＬ）から結晶化し、２−（２，２−ジメチル−プロポキシカルボニル）−５−トリフルオロメチル−ベンゼンホウ素酸（３．０３７ｇ、６２％収率）を白色固体として得た：【０１４３】
【化２１】
【０１４４】Ｃ． （３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸 ２，２−ジメチル−プロピルエステルトルエン（１５ｍＬ）及び水（９ｍＬ）中の２−（２，２−ジメチル−プロポキシカルボニル）−５−トリフルオロメチル−ベンゼンホウ素酸（１．７２ｇ、５．６６ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オール（１．８０ｇ、５．６３ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（１．８２ｇ、１７．２ｍｍｏｌ）、及びトレトラキス（トリフェニル−フォスフィン）パラジウム（０）（１２ｍｇ、０．１９ｍｏｌ％）の二相溶液を還流で１００分間攪拌した。上記反応混合物を室温まで冷却し、水（４０ｍＬ）へ注ぎ、そしてジイソプロピルエーテル（７５ｍＬ）で抽出した。上記有機抽出物を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｄａｒｃｏ（商標）Ｇ−６０で処理し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、Ｃｅｌｉｔｅ（商標）で濾過し、そして濃縮した。上記粗生成物をシリカゲル（酢酸エチル／ヘキサン ２０／８０）のクロマトグラフィーにより精製し、（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸 ２，２−ジメチル−プロピルエステルを白色泡沫（２．３５ｇ、８４％収率）として得た：Ｒf：０．３２（酢酸エチル／ヘキサン ２５／７５）；
【０１４５】
【化２２】
【０１４６】調製法（３）（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸酢酸エチル（２５ｍＬ）中の（３Ｓ，４Ｒ）−ジシクロヘキシルアンモニウム−２−（３−べンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−ベンゾエート（２．３７ｇ、３．８９ｍｍｏｌ）、及び１Ｎの塩酸（２５ｍＬ）の混合物を室温で１時間攪拌した。上記混合物を酢酸エチル（２０ｍＬ）中に注ぎ、そして上記水層を除去した。上記有機層を水（６回５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮して（３Ｓ，４Ｒ）−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−安息香酸（１．６６ｇ、１００％収率）を得た：【０１４７】
【化２３】
【０１４８】調製法（３）の上記（３Ｓ，４Ｒ）−ジシクロヘキシルアンモニウム−２−（３−べンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−ベンゾエート出発物質を以下のように調製した：Ａ． ２−［１，３，６，２］ジオキサザボロカン−２−イル−４−トリフルオロメチル−安息香酸 ２，２−ジメチル−プロピルエステルテトラヒドロフラン（２５０ｍＬ）中の４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル（３５．８ｇ、１３８ｍｍｏｌ）の溶液にホウ酸トリイソプロピル（７３．０ｍＬ、３１６ｍｍｏｌ）を添加した。上記溶液を０℃まで冷却し、リチウムジイソプロピルアミド（７３．０ｍＬのテトラヒドロフラン／ヘプタン中の２．０Ｍ溶液、１４６．０ｍｍｏｌ）を２０分間にわたり１滴ずつ添加し、そしてその赤い溶液をさらに３０分間攪拌した。ヘキサン（２００ｍＬ）、続いて１Ｎの塩酸（２００ｍＬ）を添加した。上記混合物を１０分間攪拌し、そしてヘキサン（２００ｍＬ）中へ注いだ。上記有機層を１Ｎの塩酸（２回１５０ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。上記有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして約２００ｍＬまで濃縮した。イロプロピルアルコール（１００ｍＬ）、及びジエタノールアミン（１５．９５ｇ、１５１．７ｍｍｏｌ）を添加し、そして上記混合物を室温で１０時間攪拌した。上記固体を濾過し、そしてイソプロピルアルコール（１５ｍＬ）及びヘキサン（３０ｍＬ）の混合物で洗浄し、２−［１，３，６，２］ジオキサザボロカン−２−イル−４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル（３７．８３ｇ、７４％収率）を白色固体として得た。
【０１４９】
【化２４】
【０１５０】Ｂ． （３Ｓ，４Ｒ）−ジシクロヘキシルアンモニウム−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−ベンゾエートトルエン（４５ｍＬ）中の２−［１，３，６，２］ジオキサザボロカン−２−イル−４−トリフルオロメチル−安息香酸２，２−ジメチル−プロピルエステル（７．０４ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）及び１．５Ｎの塩酸（４５ｍＬ）の混合物を室温で４５分間攪拌した。上記水層を除去し、そして炭酸ナトリウム（２．７３ｇ、２５．８ｍｍｏｌ）、（３Ｓ，４Ｒ）−３−ベンジル−７−ブロモ−ベンゾピラン−４−オール（５．４７ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルフォスフィン）パラジウム（０）（２４．０ｍｇ、２０．８μｍｏｌ）、及び水（２０ｍＬ）を添加した。上記二相溶液を還流で１００分間攪拌し、室温まで冷却し、そして水（５０ｍＬ）中へ注いだ。上記層を分離し、そして上記有機層をＤａｒｃｏ（商標）Ｇ−６０で処理し、濾過し、そして濃縮した、上記粗エステルをイソプロピルアルコール（８０ｍＬ）中に溶解し、そして１０％水性水酸化ナトリウム（８．０ｍＬ）を添加した。上記溶液を還流で３時間熱し、室温まで冷却し、水（１２０ｍＬ）中へ注ぎ、そしてヘキサン（８０ｍＬ）及びイソプロピルエーテル（４０ｍＬ）で抽出した。上記水層をヘキサン（８０ｍＬ）及びイソプロピルエーテル（４０ｍＬ）で洗浄し、６Ｎの塩酸でｐＨ２に調整し、そしてメチル第三ブチルエーテル（２回７５ｍＬ）で抽出した。上記有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。上記粗生成物とメチル第三ブチルエーテル（４０ｍＬ）中に溶解し、そしてジシクロヘキシルアミン（４．１０ｍＬ、２０．６ｍｍｏｌ）を添加した。上記混合物を一晩攪拌し、そしてその固体を濾過し、そしてメチル第三ブチルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄し、（３Ｓ，４Ｒ）−ジシクロヘキシルアンモニウム−２−（３−ベンジル−４−ヒドロキシ−ベンゾピラン−７−イル）−４−トリフルオロメチル−ベンゾエート（７．３２ｇ、７０％収率）を得た：【０１５１】
【化２５】
【０１５２】調製法（４）３Ｓ，４Ｒ−７−（３−カルボキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３−フェニルメチル−２Ｈ−１−ベンゾピラン加水分解：１０ｍＬのメタノール中のより極性でない４Ｒ，３Ｓ Ｎ−α−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−トリプトファン−７−［（３−カルボメトキシフェニル）−３−フェニルメチル］−ベンゾピラン−４−イル］−エステル（８４０ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌｅ）の攪拌された溶液中に１０ｍＬの２ＭのＮａＯＨ溶液を添加した。上記混合物を８時間環流し、冷却し、そして１ＭのＨＣｌでｐＨ４まで酸性化した。上記濁ったエマルジョンを２０ｍＬの酢酸エチルで３回抽出し、そしてその混合された有機画分を塩水で洗浄し、そしてＭｇＳＯ4上で乾燥させた。濾過及びｉｎ ｖａｃｕｏでの溶媒除去により黄色泡沫を得た。クロマトグラフィー（シリカゲル−酢酸エチル：ヘキサン：酢酸−３５：７５：１）により２１０ｍｇの生成物を得た。
【０１５３】
【化２６】
【０１５４】メタノール中Ｃ＝１．００で［α］D25＝＋１１．１。Ｍ．Ｐ．＝２１０〜２１２℃。上記のより極性の３Ｒ，４Ｓトリプトファン−エステル（７００ｍｇ）のような加水分解はその３Ｒ，４Ｓエナンチオマーを与えた。
【０１５５】
【化２７】
【０１５６】メタノール中ｃ＝１．０１で［α］D25＝−１１．０。ｍｐ２０９〜２１１℃。
【０１５７】トランス−３−フェニルメチル−４−ヒドロキシ−７−（３−カルボキシフェニル）２Ｈ−１−ベンゾピラン上記トランス環アイソマーのような加水分解はその対応する酸を与えた。
【０１５８】
【化２８】
【０１５９】調製法４のための上記Ｎ−α−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−トリプトファン−７−［（３−カルボメトキシフェニル）−３−フェニルメチル］−ベンゾピラン−４−イル］−エステル出発物質を下記のように調製した：Ａ． ２，４−ジヒドロキシ−３−クロロプロピオフェノンレゾルシノール（２００ｇ、１．８２ｍｏｌ）及び３−クロロプロピオン酸（２００ｇ、１．８４ｍｏｌ）の攪拌された混合物にトリフルオロメタンスルフォン酸（１ｋｇ）を一塊添加した。上記溶液をゆっくり４５分間にわたり８０℃に熱し、その後１５分間にわたり室温まで冷却し、そしてクロロフォルム（４．０Ｌ）中へ注いだ。上記有機部分をゆっくり水（４．０Ｌ）中へ注ぎ、そしてその層を分離した。上記水層をクロロフォルム（２回２．０Ｌ）で抽出した。上記混合された有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過した。ｉｎ ｖａｃｕｏでの濃縮は橙色の半固体（２４４．１ｇ）を与え、それは次の段階で使用された原料であった。
【０１６０】
【化２９】
【０１６１】Ｂ． ７−ヒドロキシベンゾピラン−４−オン２Ｎの水酸化ナトリウム（１０．０Ｌ）の冷却された（５℃）溶液にステップ（Ａ）の化合物（２４４．１ｇ）を一塊加えた。上記溶液を湯煎を用いて２時間にわたり室温まで温め、その後５０℃まで再冷却し、そして６Ｍの硫酸（１．２Ｌ）でｐＨを２に調整した。上記混合物を３．０Ｌの酢酸エチルで３回抽出し、塩水（１回２．０Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過した。ｉｎ ｖａｃｕｏでの濃縮は黄褐色の固体を与えた。ヘキサンを用いた粉砕、及び濾過は１７３．７ｇ（５８％収率）の表題の化合物を提供した。Ｍ．Ｐ．１３６℃〜１３７℃。
【０１６２】Ｃ． ７−［（トリフルオロメチルスルフォニル）オキシ］−ベンゾピラン−４−オン−７８℃で塩化メチレン（３．０Ｌ）中の７−ヒドロキシベンゾピラン−４−オン（１７３．７ｇ、１．０５ｍｏｌｅ）の攪拌された溶液にトリエチルアミン（３２０ｇ、３．１６ｍｏｌｅ）及びジメチルアミノピリジン（２．５ｇ）を添加された。全ての溶解の後、トリフルオロメタンスルフォニック無水物（３２７ｇ、１．１６ｍｏｌｅ）を１滴ずつ２０分間にわたり添加し、上記原料を−７８℃で３０分間攪拌し、そしてその後２時間にわたり室温まで温めた。上記反応混合物を飽和した塩化アンモニウム溶液（２．５Ｌ）中に注ぎ、そしてその層を分離した。上記水層を２．０Ｌの塩化メチレンで２回抽出した。上記混合された有機画分を水（１回１．０Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、そして濾過した。ｉｎ ｖａｃｕｏでの濃縮は赤い油を与えた。ヘキサン：酢酸エチル（８：１）で溶出するシリカゲル（１ｋｇ）上でのクロマトグラフィーは、溶媒の除去の後に２１１．１ｇ（６９％収率）の表題の生成物を与えた。ｍｐ．４３〜４４℃。
【０１６３】Ｄ． ７−［（トリフルオロメチルスルフォニル）オキシ］−３−フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン１８３ｍＬのメタノール中の７−［（トリフルオロメチルスルフォニル）オキシ］−ベンゾピラン−４−オン（２７ｇ、９１．２ｍｍｏｌｅ）の攪拌された溶液にベンズアルデヒド（１１．１ｍＬ、１０９ｍｍｏｌｅ）、続いてピロリジン（９．１ｍＬ、１０９ｍｍｏｌｅ）を添加した。上記混合物を室温で一晩攪拌し、０℃まで冷却し、そして濾過した。上記固体を５０ｍＬの氷冷したメタノールで１回洗浄し、そしてその後ｉｎ ｖａｃｕｏで乾燥させた；３５．２ｇ、（７５％収率）の上記題名の生成物が回収された。ｍｐ．１３３〜１３５℃。
【０１６４】
【化３０】
【０１６５】Ｅ． ７−［（トリフルオロメチルスルフォニル）オキシ］−３−フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン５００ｍＬのＰａｒｒ振騰フラスコ中の２５０ｍＬの酢酸エチル中の７−［（トリフルオロメチルスルフォニル）オキシ］−３−フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン（２６．６ｇ、６９．２ｍｍｏｌｅ）の溶液に炭素触媒（１．３ｇ）上１０％パラジウムを添加した。上記混合物を水素取り込みが約３時間後に終わるまで４０ｐｓｉで水素化した。上記混合物を上記パラジウム触媒を除去するためにＣＥＬＩＴＥ（商標）で濾過し、そしてシリカゲル（ヘキサン−エーテル）でクロマトグラフィーされた；２５．１ｇ（９４％収率）の表題の生成物を得た。ｍｐ．５６〜５８℃。
【０１６６】
【化３１】
【０１６７】Ｆ． ７−（トリメチルスタンニル）−３−フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン２００ｍＬのジオキサン中の７−［（トリフルオロメチルスルフォニル）オキシ］−３−フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン（９．２０ｇ、２５．０ｍｍｏｌｅ）の攪拌された溶液に塩化リチウム（３．２０、７５．０ｍｍｏｌｅ）、Ｐｄ（ＰＰｈ3）、（１．１５ｇ、１．０ｍｍｏｌｅ）、ブチル化ヒドロキシトルエンの３の結晶、及びヘキサメチルジチン（９．０ｇ、２７．５ｍｍｏｌｅ）を添加された。上記混合物を環流まで１．５時間熱し、室温まで冷却し、そして１５０ｍＬの飽和した水性塩化アンモニウム溶液中へ注いだ。上記混合物を１５０ｍＬのジエチルエーテルで３回抽出し、そしてその混合された有機画分を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして濾過した。ｉｎ ｖａｃｕｏでの蒸発は黄色半固体を与え、それはシリカゲル（５：１ ヘキサン：エーテル）上でクロマトグラフィーされ、８．９０ｇ（８９％収率）の表題の生成物を与えた。ｍｐ．８４℃〜８６℃。
【０１６８】
【化３２】
【０１６９】Ｇ． ７−（３−カルボメトキシフェニル）−３−）フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オンジメチルフォルムアミド（ＤＭＦ）（３５ｍＬ）中の７−（トリメチルスタンニル）−３−フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン（７．０ｇ、１７．５ｍｍｏｌｅ）の攪拌された溶液にＰｄ（ＰＰｈ3）2Ｃｌ2（４９０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌｅ）、ＢＨＴの３の結晶、及びメチル−３−ヨードベンゾエート（５．０ｇ、１９．１ｍｍｏｌｅ）を添加した。上記混合物を環流で１．５時間攪拌し、室温で冷却し、そして１５０ｍＬの飽和した水性塩化アンモニウム溶液中に注いだ。上記混合物を１５０ｍＬのジエチルエーテルで３回抽出し、そして上記混合された抽出物を１００ｍＬの水で２回、そしてその後塩水で洗浄した。上記溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで蒸発して黄色油を提供した。シリカゲル（４：１ ヘキサン：エーテル溶出）上でのクロマトグラフィーは６．５１ｇの表題の化合物を粘性の油として提供した。
【０１７０】
【化３３】
【０１７１】Ｈ． ７−（３−カルボメトキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３−フェニルメチル−ベンゾピラン室温で３５ｍＬのメタノール中の７−（３−カルボメトキシフェニル）−３−）フェニルメチル−ベンゾピラン−４−オン（６．５０ｇ、１７．５ｍｍｏｌｅ）の攪拌された溶液にボロヒドリドナトリウム（９４０ｍｇ、２６．０ｍｍｏｌｅ）を一塊添加された。上記濃い色の混合物を室温で２時間攪拌し、その後飽和された水性塩化アンモニウム溶液（７５ｍＬ）中へ注ぎ、そして７５ｍＬのジエチルエーテルで３回抽出した。上記混合された抽出物を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮してオフイエロー色の油を得た。４：１のヘキサン：エーテルで溶出するシリカゲルでのクロマトグラフィーによりはじめに３．２６ｇのシス環アイソマーの表題の化合物、そしてその後１．９８ｇのトランスアイソマーの表題の化合物を粘性の油として得たし、総収率は８１％であった。シス環アイソマー：【０１７２】
【化３４】
【０１７３】トランス環アイソマー：【０１７４】
【化３５】
【０１７５】Ｉ． Ｎ−α−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−トリプトファン−７−［（３−カルボメトキシフェニル）−３−フェニルメチル］−ベンゾピラン−４−イル］−エステル７０ｍＬの塩化メチレン中の７−（３−カルボメトキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３−フェニルメチル−ベンゾピラン（２．５ｇ、６．７ｍｍｏｌｅ）の攪拌された溶液にＤＭＡＰ（８９７ｍｇ、７．３４ｍｍｏｌｅ、１．１当量）、ＤＣＣ（１．５１ｇ、７．３４ｍｍｏｌｅ、１．１当量）及びＮ−ｔ−Ｂｏｃ−Ｌ−トリプトファン（２．４ｇ、８．０１ｍｍｏｌｅ、１．２当量）を添加された。上記混合物を室温で１２時間攪拌し、濾過し、そして１ＭのＨＣｌ及び塩水で洗浄した。上記有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、そしてｉｎ ｖａｃｕｏで濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル−３：１ シクロヘキサン：エーテル）は８６０ｍｇのより極性でないジアステレオマー（Ｒｆ＝０．３）及び７００ｍｇのより極性の可動ジアステレオマー（Ｒｆ＝０．２）を提供した。より極性でない生成物（３Ｓ，４Ｒ）：【０１７６】
【化３６】
【０１７７】より極性の生成物（３Ｒ，４Ｓ）：【０１７８】
【化３７】
【０１７９】調製法（５）表（５）中の以下の化合物を上記調製法（４）中に示される手順に従って加水分解により調製した。
【０１８０】
【表６】
【０１８１】
【表７】
【０１８２】調製法（６）調製法（４）に従う対応するエステルの加水分解手順により、１５８〜１６０℃（シス）及び１７３〜１７５℃（トランス）の融点を有する、７−（４−ヒドロキシ−３−カルボキシフェニル）−４−ヒドロキシ−３−フェニルメチル−２Ｈ−１−ベンゾピランが形成された。
【０１８３】本発明はそのある特定の態様に関して記述され、そして例証されているが、当業者は手順及びプロトコールのさまざまな適用、変化、修飾、置換、欠損又は追加が本発明の本質及び範囲からはずれることなしになされうると理解されるであろう。それゆえ、本発明は以下の請求項の範囲により定義され、そして上記請求項は妥当であるとされるほど広く解釈されるということが意図される。
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| 【出願人】 |
【識別番号】３９７０６７１５２
【氏名又は名称】ファイザー・プロダクツ・インク
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| 【出願日】 |
平成１４年６月２６日（２００２．６．２６） |
| 【代理人】 |
【識別番号】１０００７７５１７
【弁理士】
【氏名又は名称】石田 敬 （外４名）
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| 【公開番号】 |
特開２００３−３４６３８（Ｐ２００３−３４６３８Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１５年２月７日（２００３．２．７） |
| 【出願番号】 |
特願２００２−１８５８５３（Ｐ２００２−１８５８５３） |
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