| 【発明の名称】 |
殺菌剤組成物 |
| 【発明者】 |
【氏名】吉川 和俊
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| 【要約】 |
【課題】安全性が高く、環境に優しく、しかも殺菌力の強い殺菌剤を提供する。
【解決手段】水性媒体中に溶解したとき、ヨウ化物濃度が10ppm 〜2000ppm 、過酸化水素濃度が1ppm〜200ppm、大豆ペルオキシダーゼ活性が0.01U/ml〜2U/ml(ピロガロール法による測定) である殺菌液を供給する殺菌剤組成物。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】 水性媒体中に溶解したとき、ヨウ化物濃度が10ppm 〜2000ppm 、過酸化水素濃度が1ppm〜200ppm、大豆ペルオキシダーゼ活性が0.01U/ml〜2U/ml(ピロガロール法による測定) である殺菌液を供給することを特徴とする殺菌剤組成物。
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【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は病院、食品工場、畜舎等の環境殺菌剤及び医療機器、食品加工機器、調理器具、食器、手指等の殺菌剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】病院、食品工場、畜舎等の環境殺菌剤、医療機器、食品加工機器、調理器具、食器、手指等の殺菌剤としてこれまで種々の殺菌剤が開発されており、アルコール系、アルデヒド系、塩素系、4 級アンモニウム系、両性界面活性剤系、ビグアナイド系の殺菌剤を例示することができる。アルコール系殺菌剤は細菌芽胞に効果がない、揮発しやすいため残効性に乏しい、有機物の存在下で効力が低下する等の欠点を有し、アルデヒド系の殺菌剤には毒性が高い、細菌芽胞、カビに対する効果が弱い等の問題がある。塩素系殺菌剤は結核菌、細菌芽胞に対する効果が弱い、有機物の存在下で速やかに分解し効力を失う、金属、木、ゴム、布等に対する腐食性が強い、臭気が強い、環境中でトリハロメタンを生成する等の問題を有している。４級アンモニウム系殺菌剤は、結核菌、細菌芽胞に効果がない、カビ及びウィルスに対する効果が弱い、有機物の存在下で効力が低下する等の問題点がある。両性界面活性剤系殺菌剤は、細菌芽胞に効果がなく、結核菌、ウィルス、カビに対する効果が弱い。ビグアナイド系殺菌剤は、結核菌等の抗酸菌、細菌芽胞、ウィルスに効果が弱い、耐性菌が生じる、菌株により効力に違いがある等の問題がある。これまで人体や環境に対する安全性に優れ、細菌、カビ、ウィルス、原虫等の広範囲の微生物に対し強い効果を示す殺菌剤は見出されていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来技術における上記の問題点を解決し、安全性が高く、環境に優しく、しかも殺菌力の強い殺菌剤組成物を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記諸問題に鑑み鋭意研究を重ねた結果、安全性の高いヨウ化物、過酸化物及び大豆ペルオキシダーゼを適正な濃度で混合することにより広範囲の微生物に対する顕著な殺菌力が発現することを見出し、本発明を完成させた。
【０００５】
【発明の実施の形態】本発明はヨウ化物、過酸化物、大豆ペルオキシダーゼを必須成分とする殺菌剤組成物を提供する。以下、本発明を詳細に説明する。本発明の殺菌剤組成物は成分としてヨウ化物、過酸化物、大豆ペルオキシダーゼを含む。これらの他にpH調整剤、大豆ペルオキシダーゼのエンハンサー、大豆ペルオキシダーゼの安定化剤等を加えることも可能である。ヨウ化物としては、ヨウ化カリウム、ヨウ化ナトリウムが適しているが、水性媒体中でヨウ素イオンを生成する化合物であれば良く、これらに限定されるものではない。ヨウ化物の処理濃度範囲は10ppm 〜2000ppm であるが、好ましい濃度範囲は500ppm〜1000ppm である。過酸化物としては、過酸化水素、過炭酸ナトリウム及び過ホウ酸ナトリウムが適しているが、水性媒体中で過酸化水素を生成する化合物であれば良く、過酸化ナトリウム、過酸化メチル、過酸化エチル、過酢酸、ペルオキソ硫酸、ペルオキソリン酸等も使用可能である。過酸化物は、水性媒体中の過酸化水素濃度が1ppm〜200ppm、好ましくは10ppm 〜50ppm になるように添加する。
【０００６】ペルオキシダーゼとしては、大豆由来のペルオキシダーゼを用いる。本ペルオキシダーゼは熱安定性、pH安定性、保存安定性、経済性において優れている。本ペルオキシダーゼは、化学修飾、固定化して使用することも可能である。化学修飾に関しては、化学修飾剤としてポリエチレングリコール、メトキシポリエチレングリコール、ポリエチレングリコール−無水マレイン酸共重合体、ポリオキシアルキレン誘導体−無水マレイン酸共重合体、イソブチレン−無水マレイン酸共重合体、メトキシポリエチレングリコール−スクシニミジルスクシネート共重合体、無水酢酸等が例示されるがこれらに限定されるものではない。ペルオキシダーゼの固定化に関しては、担体結合法に用いられる固定化担体としては、カルボキシメチルセルロース、ジエチルアミノエチルセルロース等のセルロース誘導体、アガロース、デキストリン、キチン、キトサン、ポリアクリルアミドゲル、シリカゲル、アルミナ、セライト、ラテックス、多孔質ガラス、磁気粒子、Amberlite 、Diaion、DEAE-Sephadex 、DEAE−セルロース等のイオン交換樹脂を例示できるが、これらに限定されるものではない。包括法に用いられる固定化担体としては、コラーゲン、アガロース、アルギン酸、カラギーナン、ポリアクリルアミド、各種光架橋性樹脂、各種感光樹脂、コロジオン、硝酸セルロース、ジビニルベンゼンポリマー、リン脂質が例示されるがこれらに限定されるものではない。また、架橋法で用いられる架橋剤としては、マレインイミド誘導体、グルタルアルデヒド、ヘキサメチレンジイソチオシアナートが例示されるが、これらに限定されるのもではない。ペルオキシダーゼは上記の固定化担体等に公知の方法で固定化される。ペルオキシダーゼは使用条件に応じ、0.01U/ml〜2U/ml になるように水性媒体中に添加される。エンハンサーとしては、10−メチルフェノチアジン、p-ヒドロキシベンゼンスルホン酸が例示されるが、ペルオキシダーゼの活性を増強するものであればよく、これらに限定されるものではない。
【０００７】ペルオキシダーゼの安定化剤としては、塩化カリウム、フェノール、ヘマチン、ショ糖、グリセリン、エタノールを例示できるが、これらに限定されるものではない。各成分は殺菌力を必要とするまで、反応が進行しないような形で保存し、使用時に該成分はそれぞれが適切な濃度になるように水性媒体中で混合される。これは、各成分を別々に保存するか、ヨウ化物とペルオキシダーゼを過酸化物から分離することにより達成される。また、各成分を顆粒化、カプセル化し、水性媒体中で混合されるまで反応しないようにして各成分を混合した製剤形態で保存することも可能である。顆粒化に用いられる賦型剤としては無水硫酸ナトリウム、デキストリン、グルコース、乳糖等を例示できる。顆粒を水溶性ポリマーフィルム等で保護、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等で表面被覆することも可能である。
【０００８】
【実施例】本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１10mlの普通ブイヨン培地を入れた試験管に大腸菌(Escherichia coli)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus) 、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)またはサルモネラ菌(Salmonella enteritidis)を1 白金耳植菌し、37℃でOD610 が約1.0になるまで振とう培養を行った。それを50mMリン酸バッファー(pH6.0) で10倍に希釈し、試験菌液とした。ヨウ化カリウム16% 水溶液、過酸化水素0.6%水溶液及び大豆ペルオキシダーゼ40U/ml水溶液を0.01mlずつ上記リン酸バッファー1.97mlに加えた。試験菌液0.1ml と混合後、30℃で静置し、0.5 分、1 分、5 分、15分、30分及び60分後に処理液をサンプリングし、適宜希釈後、普通寒天培地に塗末し生菌数を測定した。大豆ペルオキシダーゼの代わりに同じ活性の西洋ワサビペルオキシダーゼを用いその他の成分は本発明殺菌液と同じである比較組成液、及び所定濃度の比較液にも同様に菌を接種し、経時的に生菌数を測定した。生菌数が検出限界(5/ml)以下になった時間を滅菌時間とした。結果を表１に示す。本発明殺菌液はいずれの菌に対しても0.5 分で滅菌し、最も強い効力を示した。
【０００９】
表１ 滅菌時間（分） 大腸菌 黄色ブドウ球菌 緑膿菌 サルモネネラ菌 本発明殺菌液 0.5 0.5 0.5 0.5 比較組成液 0.5 1 1 0.5 比較液１ 0.5 1 1 1 比較液２ 0.5 1 1 0.5 初発菌数：約106 /ml 比較液１：次亜塩素酸ナトリウム（有効塩素濃度150ppm）
比較液２：ヨードホール（有効ヨウ素濃度100ppm）
【００１０】実施例２10mlの普通ブイヨン培地を入れた試験管に大腸菌(Escherichia coli)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus) 、緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)またはサルモネラ菌(Salmonella enteritidis)を1 白金耳植菌し、37℃でOD610 が約1.0になるまで振とう培養を行った。それを50mMリン酸バッファー(pH6.0) で5 倍に希釈し、試験菌液とした。ヨウ化カリウム800mg 、過炭酸ナトリウム10mg、大豆ペルオキシダーゼ20U からなる粉末を50mMリン酸バッファー(pH6.0)100mlに溶解した。本殺菌液2ml と試験菌液0.05mlと混合後、30℃で静置し、0.5 分、1 分、5 分、15分、30分及び60分後に処理液をサンプリングし、適宜希釈後、普通寒天培地に塗末し生菌数を測定した。大豆ペルオキシダーゼの代わりに同じ活性の西洋ワサビペルオキシダーゼを用いその他の成分は本発明殺菌液と同じである比較組成液、及び所定濃度の比較液にも同様に菌を接種し、経時的に生菌数を測定した。生菌数が検出限界(5/ml)以下になった時間を滅菌時間とした。結果を表２に示す。本発明殺菌液はいずれの菌も0.5 分で滅菌し、最も強い効力を示した。
【００１１】
表２ 滅菌時間（分） 大腸菌 黄色ブドウ球菌 緑膿菌 サルモネネラ菌 本発明殺菌液 0.5 0.5 0.5 0.5 比較組成液 0.5 1 1 1 比較液１ 0.5 1 1 1 比較液２ 0.5 1 1 0.5 初発菌数：約106 /ml 比較液１：次亜塩素酸ナトリウム（有効塩素濃度150ppm）
比較液２：ヨードホール（有効ヨウ素濃度100ppm）
【００１２】実施例３ポテト・デキストロース寒天斜面培地に黒カビAspergillus niger を接種し、25℃、1 週間培養した。これに50mMリン酸バッファー(pH6.0) を入れ、攪拌することにより胞子の懸濁液を調製した。これをガーゼでろ過し菌糸の断片を除き、試験胞子液とした。ヨウ化カリウム16% 水溶液、過酸化水素0.6%水溶液及び大豆ペルオキシダーゼ100U/ml 水溶液を0.01mlずつ上記リン酸バッファー1.97mlに加えた。試験菌液0.1ml と混合後、30℃で静置し、0.5 分、1 分、5 分、15分、30分及び60分後に処理液をサンプリングし、適宜希釈後、ポテト・デキストロース寒天培地に塗末し生存胞子数を測定した。大豆ペルオキシダーゼの代わりに同じ活性の西洋ワサビペルオキシダーゼを用いその他の成分は本発明殺菌液と同じである比較組成液、及び所定濃度の比較液にも同様に胞子を接種し、経時的に生存胞子数を測定した。生存胞子数が検出限界(5/ml)以下になった時間を滅菌時間とした。結果を表３に示す。本発明殺菌液は0.5 分で黒カビを滅菌し、比較組成液以上の効果を示した。
【００１３】
初発胞子数：約106 /ml比較液１：次亜塩素酸ナトリウム（有効塩素濃度150ppm）
比較液２：ヨードホール（有効ヨウ素濃度100ppm）
【００１４】実施例４普通寒天斜面培地に枯草菌(Bacillus subtilis) 、セレウス菌(Bacillus cereus) を植菌し、30℃で7 日間培養して芽胞を形成させた。それを50mMリン酸バッファー(pH6.0) 中に懸濁し、熱処理（１００℃、５分）により栄養細胞を殺滅したものを試験菌液とした。ヨウ化カリウム16% 水溶液、過酸化水素0.6%水溶液及び大豆ペルオキシダーゼ100U/ml 水溶液を0.01mlずつ上記リン酸バッファー1.97mlに加えた。これを試験菌液0.5ml と混合後、30℃で静置し、0.5 分、1 分、5 分、15分、30分及び60分後に処理液をサンプリングし、適宜希釈後、普通寒天培地に塗末し生存芽胞数を測定した。大豆ペルオキシダーゼの代わりに同じ活性の西洋ワサビペルオキシダーゼを用いその他の成分は本発明殺菌液と同じである比較組成液、及び所定濃度の比較液にも同様に菌を接種し、経時的に生存芽胞数を測定した。生存芽胞数が検出限界(5/ml)以下になった時間を滅菌時間とした。結果を表４に示す。本発明殺菌液はいずれの菌の芽胞に対しても、比較組成液及び比較液以上の効力を示した。
【００１５】
表４ 滅菌時間（分） 枯草菌 セレウス菌 本発明殺菌剤 5 0.5 比較組成液 60 5 比較液１ >60 >60 比較液２ 60 1 初発芽胞数：約106 /ml 比較液１：次亜塩素酸ナトリウム（有効塩素濃度150ppm）
比較液２：ヨードホール（有効ヨウ素濃度100ppm）
【００１６】実施例５ヨウ化カリウム16% 水溶液、過酸化水素0.6%水溶液及び大豆ペルオキシダーゼ100U/ml 水溶液を0.1ml ずつ上記リン酸バッファー19.7mlに加えた。これをエコーウィルス液またはポリオウィルス液( 約4000TCD50/ml)5mlと混合後、30℃で静置し、0.5 分、1 分、5 分、15分、30分及び60分後に0.1Nチオ硫酸ナトリウムにより活性成分を不活性化した。処理液0.1ml をサンプリングし、HeLa細胞を培養した試験管5 本に添加した。 6 日間観察を続け、CPE(細胞変性作用) の阻止の有無を検定した。すべての試験管でCPE 阻止が観察された場合を殺ウィルス作用が認められたものと判断した。大豆ペルオキシダーゼの代わりに同じ活性の西洋ワサビペルオキシダーゼを用いその他の成分は本発明殺菌液と同じである比較組成液及び所定濃度の比較剤にも同様の処理を行った。結果を表５に示した。本発明殺菌液は、供試したウィルスに対し強い不活化活性を示した。
【００１７】
表５ ウイルス不活化時間（分） エコーウイルス ポリオウイルス 本発明殺菌液 0.5 0.5 比較組成液 １ 1 比較液 １ 1 比較液：次亜塩素酸ナトリウム( 有効塩素濃度150ppm) 【００１８】実施例６大豆ペルオキシダーゼまたは西洋ワサビペルオキシダーゼを50mMリン酸バッファー(pH6.0) に溶解し、10U/mlの酵素溶液を調製した。これを30℃で保存し、ピロガロール法により経時的に酵素活性を測定した。すなわち、ピロガロール45mM、リン酸バッファー11mM、過酸化水素7.4mM からなる反応液(pH6.0) に酵素液を添加後、20℃でインキュベートし420nm における吸光度の経時変化を測定し、直線部分の勾配から活性を求めた。結果を表６に示した。大豆ペルオキシダーゼは西洋ワサビペルオキシダーゼに比べ、保存安定性に優れていた。
【００１９】
表６ 残存活性（％） １カ月後 １カ月後 １カ月後 大豆ペルオキシダーゼ 100 100 100 西洋ワサビペルオキシダーゼ 90 85 70 【００２０】
【発明の効果】本発明によれば、安全性が高く、環境に優しく、しかも殺菌力の強い殺菌剤が提供される。
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| 【出願人】 |
【識別番号】０００００４４６６
【氏名又は名称】三菱瓦斯化学株式会社
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| 【出願日】 |
平成１２年６月２１日（２０００．６．２１） |
| 【代理人】 |
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| 【公開番号】 |
特開２００２−３３１６（Ｐ２００２−３３１６Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１４年１月９日（２００２．１．９） |
| 【出願番号】 |
特願２０００−１８６１７６（Ｐ２０００−１８６１７６） |
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