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【発明の名称】 細胞機能測定容器及び細胞機能測定方法
【発明者】 【氏名】小林 幸司

【氏名】稲垣 孝司
【要約】 【課題】血液試料の採取から、コントロール試料及び測定対象試料を単一の容器で容易にかつ効率よく調製し得る細胞機能測定容器を得る。

【解決手段】第１の管状容器２内に第２の管状容器３が配置されており、栓体４により、第１，第２の管状容器２，３の上端開口２ａ，３ａが閉成されており、第２の管状容器３と栓体４とにより連通機構が構成されており、血液試料８を第２の管状容器３内に導入した後に、上記連通機構を利用して第１，第２の管状容器２，３内を連通させ、その状態で上下転倒することにより、血液試料の一部が第２の管状容器３内から第１，第２の管状容器２，３間の隙間に流入され、該隙間において血液試料中の生理活性物質の産生を誘導する刺激物質５と血液試料とが反応される、細胞機能測定容器。
【特許請求の範囲】
【請求項１】 血液試料の細胞機能を測定するための細胞機能測定容器であって、上端に開口を有し、かつ有底の第１の管状容器と、第１の管状容器内に挿入されており、上端に開口を有しかつ有底であり、血液を採取するための第２の管状容器と、第１，第２の管状容器を閉成している栓体と、第１，第２の管状容器間の隙間に収納されており、血液試料と反応して生理活性物質の産生を誘導する刺激物質とを備え、前記第２の管状容器内に導かれた血液試料を前記第１，第２の管状容器間の隙間に分注することを可能とする連通機構をさらに備えることを特徴とする、細胞機能測定容器。
【請求項２】 請求項１に記載の細胞機能測定容器を用いた細胞機能測定方法であって、第２の管状容器内に血液試料を採取する工程と、前記連通機構を利用して第２の管状容器内に採取された血液試料の少なくとも一部を第１，第２の管状容器間の隙間に流入させて、第１の管状容器と第２の管状容器に血液試料を分離すると共に、第１の管状容器と第２の管状容器との間の隙間において血液試料を刺激物質と反応させる工程とを備えることを特徴とする、細胞機能測定方法。
【請求項３】 前記連通機構が、前記栓体と、第２の管状容器の内面において、上方開口端から下方に延びるように形成された第１の溝とで構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びる第２の溝が形成されており、かつ第１，第２の管状容器の隙間と第２の溝とを連通するように大径挿入部の下面に第３の溝が形成されており、第１の溝の下端は、小径挿入部が第２の管状容器に挿入された際に、小径挿入部の下端よりも下方に位置されている、請求項１に記載の細胞機能測定容器。
【請求項４】 前記連通機構が、栓体と、第２の管状容器の内面において、上方開口端から下方に延びるように形成された第１の溝とで構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びる第２の溝が形成されており、かつ第２の溝の上端が、第１，第２の管状容器の隙間と第２の溝とを連通するように大径挿入部の下面に形成された第３の溝に連ねられており、第１の溝の下端は、小径挿入部が第２の管状容器に挿入された際に、小径挿入部の下端よりも下方に位置されており、前記連通機構を利用して血液試料の一部を第２の管状容器内から第１，第２の管状容器間の隙間に流入させる工程が、栓体を回転させ、栓体の第２の溝を第２の管状容器の第１の溝と重なり合わせ、それによって第１，第２の管状容器間を連通させる工程と、前記栓体により閉成されている第１，第２の管状容器を上下逆転し、血液試料を第２の管状容器内から第１の管状容器内に流入させる工程と、上下逆転された細胞機能測定容器を再度上下逆転し、第１の管状容器と第２の管状容器に血液試料を分離すると共に、第１の管状容器と第２の管状容器との間の隙間において血液試料を刺激物質と反応させる工程とを備えることを特徴とする、請求項２に記載の細胞機能測定方法。
【請求項５】 前記連通機構が、前記栓体と、第２の管状容器の上方開口端に形成された切り欠き部で構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びかつ下方向に連続した溝が形成されている、請求項１に記載の細胞機能測定容器。
【請求項６】 前記連通機構が、栓体と、第２の管状容器の上方開口端に形成された切り欠き部で構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びかつ下方向に連続した溝が形成されており、前記連通機構を利用して血液試料の一部を第２の管状容器内から第１，第２の管状容器間の隙間に流入させる工程が、栓体を回転させ、栓体の溝を第２の管状容器の切り欠き部と重なり合わせ、それによって第１，第２の管状容器間を連通させる工程と、前記栓体により閉成されている第１，第２の管状容器を上下逆転し、血液試料を第２の管状容器内から第１の管状容器内に流入させる工程と、上下逆転された細胞機能測定容器を再度上下逆転し、第１の管状容器と第２の管状容器に血液試料を分離すると共に、第１の管状容器と第２の管状容器との間の隙間において血液試料を刺激物質と反応させる工程とを備えることを特徴とする、請求項２に記載の細胞機能測定方法。
【請求項７】 前記刺激物質がエンドトキシンである、請求項１、３または５に記載の細胞機能測定容器。
【請求項８】 第１の管状容器の内面及び／又は第２の管状容器の外面に、前記刺激物質が物理的若しくは化学的に固定化されていることを特徴とする、請求項１、３、５または７に記載の細胞機能測定容器。
【請求項９】 前記連通機構により第１の管状容器と第２の管状容器の間を移動することができない大きさの担体に、前記刺激物質が物理的若しくは化学的に固定化されていることを特徴とする、請求項１、３、５または７に記載の細胞機能測定容器。
【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血液試料の採取から血液試料を試薬等と反応させて得られた結果を測定するまでの工程を行い得る細胞機能測定容器並びに該細胞機能測定容器を用いた細胞機能測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】顆粒球、単球、マクロファージ、リンパ球等の白血球は、血液中あるいは各臓器もしくは器官における炎症反応や免疫反応などの種々の生体防御反応において様々な役割を担っている。これらの細胞は、感染症；肝炎や腎炎などの炎症性疾患；慢性関節リウマチや喘息などの免疫・アレルギー性疾患；癌などの様々の病態において重要な働きをしており、病態の変動と共にこれらの細胞の機能が抑制されたり、増強されたりすることが知られている。
【０００３】また、これらの疾患の治療に、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫増強剤、抗癌剤等の様々の薬剤が用いられており、その際にもこれらの細胞の機能が抑制されたり、または増強されたりすることも知られている。そのため、各種疾患の病態や薬剤の効果あるいは副作用を把握することにより、治療指針を決定したり、薬剤の投与量やタイミングを決定したりするために、これらの細胞の機能を調べることが重要である。
【０００４】従来、病院の検査室や検査センターでは、上記のような理由から、このような細胞機能を測定するために、顆粒球貧食機能試験、顆粒球殺菌能（活性酸素産生能）試験、リンパ球幼若化試験等が行われてきた。また、最近では、フローサイトメトリー装置と各種免疫担当細胞表面抗原に対する蛍光標識モノクローナル抗体とを用いた表面抗原試験等が行われるようになってきた。しかしながら、従来の試験法には、細胞分離、細胞培養及び顕微鏡測定等の特殊な技術が要求され、測定に時間がかかり、ＲＩ施設やフローサイトメーターなどの高価な装置が必要であった。
【０００５】また、血液中の単球やこの単球が組織に出て分化、成熟したマクロファージは、食作用を介した異物排除や、抗原提示を介した免疫の成立に関与し、また、サイトカイン、プロスタグランジンなどの種々の生理活性物質を分泌することによって、炎症反応や免疫反応を調節するなど、非常に多彩な機能を持っている。そのため、単球やマクロファージは、顆粒球やリンパ球と同様に、種々の病態においても重要な働きをしており、これらの細胞の機能を調べることは非常に重要である。特に、感染症などでは、単球やマクロファージは顆粒球やリンパ球と異なり、細胞数はあまり変動せず、その機能の増幅が主体であり、細胞機能変化を測定することはより重要である（「マクロファージ」徳永 徹著、講談社サイエンティフィック１９８６年初版発行）。
【０００６】腫瘍壊死因子α（以下、ＴＮＦ−αという）、インターロイキン−１β（以下、ＩＬ−１βという）、インターロイキン−６（以下、ＩＬ−６という）は、モノカインと呼ばれ、血液細胞では主に、単球やマクロファージを含む白血球によって産生され、種々の炎症反応や免疫反応に関与するサイトカインである。
【０００７】これまで、血液や血液から分離した白血球からの上記サイトカイン産生機能を調べる種々の方法が報告されている。例えば、特開平２−１９６９６１号公報、特開平３−２８５６９２号公報には、血液にリポ多糖（ＬＰＳ）やレクチンを反応させ、産生誘導されたＴＮＦ−αやＩＬ−１βなどのサイトカインを測定する方法が開示されている。また、特開平６−２０９９９２号公報、特開平７−６７９５５号公報には、特定の表面粗さを有する高分子材料や特定の化学構造を有する高分子材料と血液とを接触させ、ＴＮＦ−αの産生を誘導する方法が開示されている。また、特開平７−２９９７３２号公報、特開平７−１５１７５２号公報には、特定の表面粗さを有する高分子材料と血液とを接触させ、ＴＮＦ−αやＩＬ−１βの産生量を測定する生体反応検査方法が開示されている。また、特表平７−５００９０５号公報には、ヒト末梢血白血球からのＴＮＦ−αやＩＬ−１βなどのサイトカインの産生誘導量を測定することによって、試験物質の免疫活性能力を測定する方法が開示されている。
【０００８】しかしながら、従来、病院の検査室や検査センターで行われてきた細胞機能測定方法や上記の公開特許公報に開示の方法には、以下のような問題点があった。すなわち、これらの試験は、いずれも被験者から注射器で血液を採血後、ピペッティングなどの用手法の手段で血液を種々の反応容器に移し変える操作、白血球などを分離するための細胞分離、並びに機能測定のための細胞培養等の特殊な操作が必要であった。そのため、検査従事者が血液に触れ、肝炎、エイズなどの様々の感染症に感染する危険性があった。また、これらの操作中に、血液試料中に様々の雑菌や埃などが混入する恐れがあり、これらの汚染物あるいは操作による物理的刺激によって、血液中の細胞が不必要に刺激され、測定結果に悪影響を及ぼす恐れがあった。
【０００９】また、血液を採取し、特定の反応容器内において、白血球からのサイトカイン、特にＴＮＦ−αやＩＬ−１βの産生量を測定する従来法では、例えば注射器のような血液採取器や反応容器中に元々、グラム陰性菌由来のＬＰＳなどのエンドトキシンが混入していることがあった。エンドトキシンは、極微量で白血球からＴＮＦ−α及びＩＬ−１βの産生を誘導するため、例えば、製造工程での微量の埃の混入や使用する洗浄水からの汚染により、少量のエンドトキシンが上記血液採取器や反応容器に混入した場合、信頼できる測定結果を得ることは不可能であった。
【００１０】上述した問題のため、従来よりも、操作が簡単で危険性がなく、精度の良い細胞機能測定方法が望まれている。血液試料を採取し、細胞機能を測定するための細胞機能測定容器の一例が、ＷＯ９８／０７０３１号公報に記載されている。ここでは、血液細胞が産生する生理活性物質、例えばサイトカイン、ＴＮＦ−αやＩＬ−１βなどを測定するための細胞機能測定用キットが開示されている。この細胞測定用キットでは、上記生理活性物質の産生を誘導する材料、例えばエンドトキシン含量が血液細胞から生理活性物質を産生しない量とされているコントロールの第１の細胞機能測定用容器と、エンドトキシンが収納された第２の細胞機能測定用容器とが備えられている。
【００１１】そのため、第１の細胞機能測定用容器及び第２の細胞機能測定用容器のいずれにも、血液を採取し、反応させ、測定を行わねばならなかった。従って、操作が煩雑であった。
【００１２】また、従来、血液試料の分析に際しては、一般に、採血管が用いられており、採血管により血液試料を採取し、しかる後血清や血漿などを得た後に、測定のための反応容器に血清や血漿などの血液試料を分注し、分析装置等において分析する方法が一般的に用いられている。従って、血液試料の採取に採血管を用い、分析装置に血液試料を供給するために測定用の管状容器等が用いられていた。あるいは、上記のように、血液試料を他の物質と反応させて、その反応結果を測定する場合には、採血管から血漿や血清を取り出し、上記反応物質が収納された反応容器に血清や血漿等を分注し、反応させる必要があった。
【００１３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上述した従来技術の欠点を解消し、コントロール及び測定試料を１つの容器で調製することができ、かつ血液試料の採取から反応結果を得るまでの一連の工程を単一の容器で行うことを可能とする細胞機能測定容器及び細胞機能測定方法を提供することにある。
【００１４】
【課題を解決するための手段】本発明の広い局面によれば、血液試料の細胞機能を測定するための細胞機能測定容器であって、上端に開口を有し、かつ有底の第１の管状容器と、第１の管状容器内に挿入されており、上端に開口を有しかつ有底であり、血液を採取するための第２の管状容器と、第１，第２の管状容器を閉成している栓体と、第１，第２の管状容器間の隙間に収納されており、血液試料と反応して生理活性物質の産生を誘導する刺激物質とを備え、前記第２の管状容器内に導かれた血液試料を前記第１，第２の管状容器間の隙間に分注することを可能とする連通機構をさらに備えることを特徴とする、細胞機能測定容器が提供される。
【００１５】本発明の別の広い局面によれば、本発明に係る細胞機能測定容器を用いた細胞機能測定方法が提供される。この細胞機能測定方法は、第２の管状容器内に血液試料を採取する工程と、前記連通機構を利用して第２の管状容器内に採取された血液試料の少なくとも一部を第１，第２の管状容器間の隙間に流入させて、第１の管状容器と第２の管状容器に血液試料を分離すると共に、第１の管状容器と第２の管状容器との間の隙間において血液試料を刺激物質と反応させる工程とを備える。
【００１６】本発明に係る細胞機能測定容器の特定の局面では、前記連通機構が、栓体と、第２の管状容器の内面において、上方開口端から下方に延びるように形成された第１の溝とで構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びる第２の溝が形成されており、かつ第１，第２の管状容器の隙間と第２の溝とを連通するように大径挿入部の下面に第３の溝が形成されており、第１の溝の下端は、小径挿入部が第２の管状容器に挿入された際に、小径挿入部の下端よりも下方に位置されている。
【００１７】本発明に係る細胞機能測定方法の特定の局面では、連通機構が、栓体と、第２の管状容器の内面において、上方開口端から下方に延びるように形成された第１の溝とで構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面上下方向に延びる第２の溝が形成されており、かつ第２の溝の上端が、第１，第２の管状容器の隙間と第２の溝とを連通するように大径挿入部の下面に形成された第３の溝に連ねられており、第１の溝の下端は、小径挿入部が第２の管状容器に挿入された際に、小径挿入部の下端よりも下方に位置されている。そして、前記連通機構を利用して血液試料の一部を第２の管状容器内から第１，第２の管状容器間の隙間に流入させる工程が、栓体を回転させ、栓体の第２の溝を第２の管状容器の第１の溝と重なり合わせ、それによって第１，第２の管状容器間を連通させる工程と、前記栓体により閉成されている第１，第２の管状容器を上下逆転し、血液試料を第２の管状容器内から第１の管状容器内に流入させる工程と、上下逆転された細胞機能測定容器を再度上下逆転し、第１の管状容器と第２の管状容器に血液試料を分離すると共に、第１の管状容器と第２の管状容器との間の隙間において血液試料を刺激物質と反応させる工程とを備える。
【００１８】また、本発明に係る細胞機能測定容器の特定の局面では、前記連通機構が、前記栓体と、第２の管状容器の上方開口端に形成された切り欠き部で構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びかつ下方向に連続した溝が形成されている。
【００１９】本発明に係る細胞機能測定方法の特定の局面では、前記連通機構が、栓体と、第２の管状容器の上方開口端に形成された切り欠き部で構成されており、前記栓体は、第１の管状容器の上端開口を液密的に閉成する大径挿入部と、大径挿入部の下端に連ねられており、かつ第２の管状容器の上端開口を液密的に閉成するための小径挿入部とを有し、小径挿入部の外周面において上下方向に延びかつ下方向に連続した溝が形成されている。そして、前記連通機構を利用して血液試料の一部を第２の管状容器内から第１，第２の管状容器間の隙間に流入させる工程が、栓体を回転させ、栓体の溝を第２の管状容器の切り欠き部と重なり合わせ、それによって第１，第２の管状容器間を連通させる工程と、前記栓体により閉成されている第１，第２の管状容器を上下逆転し、血液試料を第２の管状容器内から第１の管状容器内に流入させる工程と、上下逆転された細胞機能測定容器を再度上下逆転し、第１の管状容器と第２の管状容器に血液試料を分離すると共に、第１の管状容器と第２の管状容器との間の隙間において血液試料を刺激物質と反応させる工程とを備える。
【００２０】本発明に係る細胞機能測定容器の特定の局面では、上記刺激物質としてエンドトキシンが用いられ、さらに特定の局面では、第１の管状容器の内面及び／又は第２の管状容器の外面に、刺激物質が物理的若しくは化学的に固定化されているか、連通機構により第１の管状容器と第２の管状容器の間を移動することができない大きさの担体に、刺激物質が物理的若しくは化学的に固定化されている。
【００２１】
【発明の実施の形態】以下、図面を参照しつつ本発明に係る細胞機能測定容器及び細胞機能測定方法の実施形態につき説明する。
【００２２】図１（ａ）は、本発明の一実施形態に係る細胞機能測定容器を示す縦断面図であり、図３はその外観を示す斜視図である。図４（ａ）は、栓体４と第２の管状容器３とを分離して示す斜視図であり、図４（ｂ）は、栓体を下方から見た斜視図であり、図５は第１の管状容器２を示す斜視図である。
【００２３】細胞機能測定容器１は、第１の管状容器２と、第１の管状容器２内に挿入されている第２の管状容器３と、弾性材料よりなる栓体４とを備える。第１の管状容器２は、上端に開口２ａを有する。第１の管状容器２は、有底であり、略円筒状の形状を有する。第１の管状容器２は、合成樹脂やガラスなどの適宜の材料で構成することができるが、後述の上下転倒操作等を考慮すると、破損を防止するためには、合成樹脂を用いて構成することが好ましい。また、第１の管状容器２は、外部から反応結果を目視により確認したり、分光光度計などを用いて測定するためには、透明性を有するものであることが望ましい。好ましくは、透明性に優れ、かつ水蒸気バリア性に優れたポリプロピレンが用いられる。
【００２４】第２の管状容器３は、第１の管状容器２よりも小径の略円筒状の有底の管状体により構成されている。第２の管状容器３は、上端に開口３ａを有する。第２の管状容器３は、ガラスあるいは合成樹脂などの適宜の材料で構成することができるが、破損を防止するためには、合成樹脂からなるものが好ましい。より好ましくは、ガスバリア性に優れたポリエチレンテレフタレートが用いられる。
【００２５】また、第２の管状容器３についても、外部から内部状態を観察することを可能とするためには透明であることが望ましい。栓体４は、合成ゴムあるいは天然ゴムなどの弾性材料からなり、上端に持ち手４ａを有する。持ち手４ａは、第１の管状容器２の外径よりも大きな径を有するように構成されており、それによって手で栓体４を回転したり、引き抜く操作を容易に行うことができるように構成されている。持ち手４ａの下端には、大径挿入部４ｂが連ねられており、大径挿入部４ｂの下端には、小径挿入部４ｃが連ねられている。大径挿入部４ｂは、第１の管状容器２の開口２ａに圧入されるような径を有するように構成されており、小径挿入部４ｃは第２の管状容器３の開口３ａに圧入し得るように構成されている。すなわち、第１の管状容器２及び第２の管状容器３の開口２ａ，３ａを閉成するように、栓体４が取り付けられている。
【００２６】図４（ａ）から明らかなように、第２の管状容器３の内面には、開口３ａから下方に延びるように、第１の溝３ｂが形成されている。他方、栓体４の小径挿入部４ｃには、上下方向に延びる第２の溝４ｄが形成されている。なお、第２の溝４ｄの下端は小径挿入部４ｃの下端には至らないように構成されている。また、図４（ｂ）に示すように、第２の溝４ｄの上端に連なるように、大径挿入部４ｂの下面には、第２の管状容器３の外周面よりも外側に延びる第３の溝４ｅが形成されている。図１においては、第２の溝４ｄが破線で示されている。第２の溝４ｄについては、小径挿入部４ｃが第２の管状容器３の内周面に圧接されているため変形している。図１に示す状態では、第１の溝３ｂは周方向において第２の溝４ｄと重なり合わない位置に配置されているため、図示されていない。
【００２７】従って、図１に示す初期状態では、第２の管状容器３内と、第１の管状容器２内との間は液密的に遮断されている。なお、上記第１の溝３ｂの下端は、図１に示す状態、すなわち小径挿入部４ｃが第２の管状容器３内に挿入された状態において、小径挿入部４ｃの下端よりも下方に位置されている。
【００２８】本実施例では、連通機構が、上記第１の溝３ｂと、栓体４とで構成されているが、本発明においては、第１の管状容器内に導かれた血液試料を、第１，第２の管状容器間の隙間に分注することを可能とする適宜の連通機構を用いることができ、特に本実施例の構造に限定されるものではない。
【００２９】例えば、図６に示したように、連通機構が、第２の管状容器３の上方開口端に形成された切り欠き部３ｃと、栓体４の小径挿入部４ｃの外周面において上下方向に延びており、かつ下方向に連続している溝４ｆとで構成されていてもよい。
【００３０】本実施形態の細胞機能測定容器１では、図１に示すように、第１の管状容器２と第２の管状容器３との間の隙間に、すなわち第１の管状容器２内に刺激物質５が収納されている。刺激物質５としては、測定する生理活性物質の種類に応じて、血液試料と反応して該生理活性物質の産生を誘導する適宜の刺激物質が用いられる。本実施形態では、刺激物質５としてエンドトキシンが収納されている。
【００３１】また、第２の管状容器３内には、血液抗凝固剤６が収納されている。血液抗凝固剤６としては、ヘパリン、クエン酸化合物、シュウ酸化合物などを用いることができ、特に、ヘパリンナトリウムが、細胞の生物学的反応を阻害しないので好ましい。また、第１の管状容器２内には、刺激物質５として、トロンビン等の血液凝固剤が収容されていてもよい。
【００３２】次に、刺激物質５としてエンドトキシンを用い、サイトカインの産生を誘導し、サイトカインを測定する細胞機能測定方法を図１及び図２を参照して説明する。
【００３３】まず、図１（ｂ）に示すように、採血針７を栓体４に突き刺し、血液試料８を第２の管状容器３内に導入する。この場合、第２の管状容器３内が減圧にされている場合には、血液試料８をより速やかに第２の管状容器３内に導入することができる。なお、第２の管状容器３内だけでなく、第１の管状容器２内も減圧されていてもよい。
【００３４】上記のようにして、第２の管状容器３内に血液試料８を採取する。第２の管状容器３内には、血液抗凝固剤６が収納されているので、血液試料８は凝固しない。
【００３５】次に、栓体４を軸方向まわりに回転し、第２の管状容器３に設けられている第１の溝３ｂと、栓体４に設けられている第２の溝４ｄとを重なり合わせる。しかる後、細胞機能測定容器１全体を図２（ａ）に示すように上下転倒する。この場合、第１の溝３ｂと第２の溝４ｄとが対向して流路が形成されている。この流路が第３の溝４ｅに連ねられているので、第２の管状容器３内と第１の管状容器２内とが連通する。従って、血液試料が第２の管状容器３内から上記流路を通り第１の管状容器２側に流入する。その結果、図２（ａ）に示されているように、血液試料４の液面は、第１の管状容器２と第２の管状容器３内とで同一となる。
【００３６】次に、再度細胞機能測定容器１を上下転倒する（図２（ｂ））。その結果、第１の管状容器２内には、血液試料８が残存し、第１の管状容器２と第２の管状容器３との間の隙間にも血液試料８が存在する。もっとも、第１の管状容器２と第２の管状容器３との間に収納されている血液試料８は、上述した刺激物質５と接触される。従って、血液試料中において、刺激物質５すなわちエンドトキシンによりサイトカインの産生が誘導される。
【００３７】従って、第２の管状容器３内にコントロールとしての血液試料を採取することができ、第１の管状容器２内に測定対象試料が採取される。上記のように、本実施形態の細胞機能測定容器１を用いれば、単一の細胞機能測定容器で、血液試料の採取から細胞機能の調製までを効率よく行うことができる。
【００３８】なお、上記実施形態では、刺激物質５としてエンドトキシンを用い、生理活性物質としてサイトカインを測定する方法を例にとり説明したが、本発明に係る細胞機能測定容器は様々な細胞機能測定方法に用いることができる。
【００３９】すなわち、測定対象物質としての生理活性物質については、サイトカインに限定されず、例えば、プロスタグランジンなどのアラキドン酸代謝物、活性酸素種、可溶性接着因子、可溶性レセプタ、顆粒内酵素などを挙げることができる。
【００４０】また、生理活性物質の産生を誘導する刺激物質についても、生理活性の種類に応じて適宜選択することができる。このような刺激物質の例としては、エンドトキシンの他、ＢＣＧ死菌やコリネバクテリウム属などの種々の微生物；合成リピドＡ；ピランコポリマー；レクチン（フィトヘマグルチニン、コンカナバリンＡ、ポークウィードマイトゲン等）；ＯＫ４３２（ピシバニール）；ＰＳＫ（クレスチン）；レンチナン；ザイモザン；ＬＰＳ（リポポリサッカライド）；カルシウムイオノフォア；ホルボルエステル；免疫グロブリン固定化担体；ホルミルメチオニルロイシルフェニルアラニン（ＦＭＬＰ）などのホルミルペプチド；種々のサイトカインなどが挙げられる。
【００４１】また、喘息、花粉症、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、消化管アレルギー、寄生虫アレルギーなどのアレルゲン検査に用いられる特定抗原（例えば、ハウスダスト；ダニ抗原；ブタクサ花粉抽出物、スギ花粉抽出物、イネ抽出物などの種々の花粉抗原；真菌抗原、アスカリス抽出物などの寄生虫抗原；卵白アルブミン、小麦、大豆、エビ、カニ、肉類などの食物抗原；ハチ毒など）も用いられる。
【００４２】また、上記に示した生理活性物質の産生を誘導する材料を種々の天然、合成高分子材料に公知の固定化方法（共有結合法、物理吸着法など）によって固定化した材料なども挙げられる。
【００４３】上記生理活性物質の産生を誘導する材料の形状としては、特に限定されず、例えば、液状、粒子状などが挙げられる。また、担体に固定化されていてもよい。上記液状の場合は、通常、上記生理活性物質の産生を誘導する材料を、希釈液として、例えば、リン酸緩衝液、ハンクス緩衝液などの緩衝液やＭＥＭ、ＲＰＭＩ−１６４０等の通常の培地、生理食塩液（例えば、大塚製薬社製）、注射用水（例えば、大塚製薬社製）などで希釈して用いる。
【００４４】上記生理活性物質の産生を誘導する材料の反応容器中の存在状態は、固体状であってもよく、また、液体状であってもよい。生理活性物質の産生を誘導する材料が水溶性材料の場合、容器の内壁面に塗布、または添加された後、粉末状にされてもよい。例えば、注射用水を用いて生理活性物質の産生を誘導する材料を希釈した場合は、生理活性物質の産生を誘導する材料を容器に入れた後、乾固した方が好ましい。生理活性物質の産生を誘導する材料が水不溶性の材料の場合には、上記生理活性物質の産生を誘導する材料の表面に気泡が残ると、転倒混和等により血液と接触させる際に過度の溶血を引き起こし、測定系に影響するおそれがあるため、水不溶性材料は、例えば、上記のような希釈液に浸しておくのが好ましい。
【００４５】担体に生理活性物質の産生を誘導する材料が固定化されて用いられる場合、固定化する担体が水溶性材料の場合は、容器の内壁に塗布、あるいは添加した後、粉末状にしてもよい。担体が水不溶性材料の場合は、材料の表面に気泡が残ると、過度の溶血を引き起こし、測定系に影響するおそれがあるため、例えば、上記のような希釈液に浸しておくのが好ましい。
【００４６】上記刺激物質は、より好ましくは第１の管状容器の内面若しくは第２の管状容器の外面あるいはこれらの両面に、物理的若しくは化学的に固定化される。刺激物質を容器表面に物理的に固定化する方法は、特に限定されるものではないが、例えば、エンドトキシンを炭酸緩衝液（ｐH９．５）に１０ｍｇ／ｍＬ濃度で溶解させたものを、固定化させる容器表面に１ｍL添加し、３７℃で１８時間程度静置した後、エンドトキシンフリー水で洗浄する方法等が挙げられる。
【００４７】また、上記刺激物質は、前記連通機構により第１の管状容器と第２の管状容器の間を移動することができない大きさの担体に、物理的若しくは化学的に固定化されていてもよい。上記担体としては、上記連通機構を構成する溝や切り欠き部の大きさよりも大きなものが用いられ、その素材としては合成樹脂等が挙げられる。この様な担体に刺激物質を物理的に固定化する方法としては、特に限定されるものではないが、例えば、エンドトキシンを炭酸緩衝液（ｐH９．５）に１０ｍｇ／ｍＬ濃度で溶解させたもの１０ｍLを、直径約２ｍｍのポリスチレンビーズ１ｇと混和し、３７℃で１８時間程度攪拌した後、エンドトキシンフリー水で洗浄する方法等が挙げられる。
【００４８】生理活性物質の産生を誘導する材料の反応容器中への添加量は、生理活性物質の産生を誘導する材料の種類によって適宜最適濃度を設定することが好ましい。また、第１の管状容器２内には、上記生理活性物質を測定するための測定試薬が収納されていてもよく、このような測定試薬としては、例えば上記生理活性物質に対するモノクローナル抗体もしくはポリクローナル抗体、ペルオキシターゼ、アルカリホスホターゼなどの酵素及びそれぞれの酵素の発色基質などを利用した酵素免疫測定試薬が挙げられる。
【００４９】上記実施形態では、第１の管状容器２内に刺激物質５を収納していたが、刺激物質５に加えて、刺激物質により産生された生理活性物質と反応する測定試薬を収納し、該測定試薬を利用して生理活性物質濃度を測定するように構成してもよい。
【００５０】
【発明の効果】本発明に係る細胞機能測定容器では、第１の管状容器に、血液を採取するための第２の管状容器が挿入されており、第１，第２の管状容器間の隙間に上記刺激物質が収納されており、上記連通機構を利用することにより、第２の管状容器内に導かれた血液試料の一部が第１，第２の管状容器間の隙間に移動されるので、血液試料を第２の管状容器内と、第１，第２の管状容器間の隙間とに分離することができる。また、第１，第２の管状容器間の隙間においては上記刺激物質と血液試料との反応により生理活性物質が産生される。従って、第２の管状容器内の血液試料をコントロールとして、第１の管状容器内において産生された生理活性物質を測定することが可能となる。
【００５１】すなわち、従来の細胞機能測定容器や細胞機能測定容器では、コントロール試料と測定試料とを調製するのに、少なくとも２本の容器を必要であったのに対し、本発明に係る細胞機能測定容器では、１本の細胞機能測定容器を用いるだけで、血液試料の採取からコントロール試料及び測定対象試料の調製までを容易にかつ効率よく行うことができる。
【００５２】本発明に係る細胞機能測定容器の特定の局面では、連通機構が、第２の管状容器の側面に形成された第１の溝と、栓体の小径挿入部の外周面に設けられた第２の溝及び大径挿入部の下面に設けられた第３の溝とにより構成されているので、第２の管状容器内に血液試料を採取した後、第２の管状容器に用いられた第１の溝と、栓体の小径挿入部の外周面に設けられた第２の溝とを重なり合うようにして流路を形成し、上下転倒するだけで、血液試料を第２の管状容器内と、第１，第２の管状容器間の隙間とに分離することができる。また、本発明に係る細胞機能測定容器の特定の局面では、連通機構が、栓体の小径挿入部の外周面に設けられた溝と、第２の管状容器の上方開口端に形成された切り欠き部で構成されているので、第２の管状容器内に血液試料を採取した後、第２の管状容器に形成された切り欠き部と、栓体の小径挿入部の外周面に設けられた溝とを重なり合うようにして流路を形成し、上下転倒するだけで、血液試料を第２の管状容器内と、第１，第２の管状容器間の隙間とに分離することができる。従って、第２の管状容器内の血液試料をコントロールとし、第１の管状容器内において刺激物質と反応された血液試料を測定対象試料として、細胞機能の測定を容易に行うことができる。
【００５３】本発明に係る細胞機能測定方法では、本発明に係る細胞機能測定容器において、連通機構を利用して、第２の管状容器に導かれた血液を、第２の管状容器内と、第１，第２の管状容器間とに分離することができ、第１，第２の管状容器間の隙間において刺激物質と血液試料とが反応して生理活性物質が産生される。従って、細胞機能の特定を１つの細胞機能測定容器を用いて行うことができる。
【００５４】また、本発明に係る細胞機能測定方法において、連通機構が、第２の管状容器の内面に形成された第１の溝と、栓体に形成された第２，第３の溝とにより構成されている場合には、第２の管状容器内に血液試料を採取し、栓体を回転させて、栓体の第２の溝と管状容器の第１の溝とを重なり合わせ、それによって第１，第２の管状容器間を連通し、しかる後細胞機能測定容器全体を上下逆転し、再度上下逆転された細胞機能測定容器を逆転させるだけで、血液試料を第１の管状容器と第２の管状容器内に分離することができると共に、第１，第２の管状容器間の隙間において、血液試料を刺激物質と反応させることができる。また、連通機構が、第２の管状容器の上方開口端に形成された切り欠き部と、栓体の小径挿入部の外周面に設けられた溝とにより構成されている場合には、第２の管状容器内に血液試料を採取し、栓体を回転させて、栓体の溝と管状容器の切り欠き部とを重なり合わせ、それによって第１，第２の管状容器間を連通し、しかる後細胞機能測定容器全体を上下逆転し、再度上下逆転された細胞機能測定容器を逆転させるだけで、血液試料を第１の管状容器と第２の管状容器内に分離することができると共に、第１，第２の管状容器間の隙間において、血液試料を刺激物質と反応させることができる。従って、第２の管状容器内のコントロール試料と、第１，第２の管状容器間の隙間において産生された生理活性物質含有測定対象試料とを測定することにより、細胞機能を容易に測定することができる。
【００５５】上記刺激物質としてエンドトキシンを用い、細胞機能測定試薬として酵素免疫測定試薬を用いた場合、エンドトキシンによりサイトカインの産生を誘導することができ、血液試料の様々な細胞機能を容易に測定することができる。
【００５６】また、刺激物質が、第１の管状容器の内面及び／又は第２の管状容器の外面、あるいは連通機構により第１の管状容器と第２の管状容器の間を移動することができない大きさの担体に、物理的若しくは化学的に固定化されている場合には、分注操作の際に、刺激物質が第２の管状容器内に混入する恐れがなく、血液試料の細胞機能をより高い精度で測定することができる。
【出願人】 【識別番号】０００００２１７４
【氏名又は名称】積水化学工業株式会社
【出願日】 平成１２年１１月２日（２０００．１１．２）
【代理人】
【公開番号】 特開２００１−１９４３６５（Ｐ２００１−１９４３６５Ａ）
【公開日】 平成１３年７月１９日（２００１．７．１９）
【出願番号】 特願２０００−３３６２６０（Ｐ２０００−３３６２６０）