| 【発明の名称】 |
白血病治療用カラム及びそれに用いる医療材料 |
| 【発明者】 |
【氏名】中村 修
【氏名】大庭 英樹
【氏名】シャライ・イムレ
【氏名】八木 史郎
【氏名】森脇 佐和子
【氏名】安田 誠二
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| 【要約】 |
【課題】血液を体外で環流することによって白血病細胞に直接白血病細胞凝集剤を接触させ、白血病患者の治療を迅速かつ効率よく行うための手段を提供する。
【解決手段】生理的に不活性な担体とそれに担持された白血病細胞凝集剤からなる白血病細胞除去用医療材料及びそれを不溶性材料筒状体に充填した白血病治療用カラムを用いる。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】 生理的に不活性な担体に担持された白血病細胞凝集剤を充填した不溶性材料筒状体からなる白血病治療用カラム。
【請求項２】 白血病細胞凝集剤が、キノコ由来又はトウアズキ種子由来のレクチンタンパク質である請求項１記載の白血病治療用カラム。
【請求項３】 生理的に不活性な担体が、多糖類系ゲル濾過剤粒状体である請求項１又は２記載の白血病治療用カラム。
【請求項４】 生理的に不活性な担体とそれに担持された白血病細胞凝集剤からなる白血病細胞除去用医療材料。
【請求項５】 白血病細胞凝集剤が、キノコ由来又はトウアズキ種子由来のレクチンタンパク質である請求項４記載の白血病細胞除去用医療材料。
【請求項６】 生理的に不活性な担体が、多糖類系ゲル濾過剤粒状体である請求項４又は５記載の白血病細胞除去用医療材料。
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【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、白血病患者の血液を通過させて、血液中の白血病細胞を除去し、白血病を治療するためのカラム及びそれに用いる白血病細胞除去用医療材料に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来の白血病患者の治療は、骨髄移植と再発防止のための抗ガン剤の投与が基本になっている。この際の抗ガン剤の投与は、白血病患者の血液中から白血病細胞が完全に消失するまで行われるが、通常の抗ガン剤は、強い副作用を有するため、この間過酷な闘病生活に耐えなければならないし、この抗ガン剤の投与によってガンの再発が完全に防止されるとは限らない。
【０００３】一方、最近、白血病細胞を選択的に認識して凝集させることができる白血病細胞凝集剤として、ある種の植物又は動物由来のレクチンタンパク質や化合物が見出され、白血病患者の治療剤として注目を浴びている（特開平９−２０６０９６号公報、特願平１０−３７６９１４号）。これらの白血病細胞凝集剤は、正常細胞よりも血液中の白血病細胞を選択的に認識することができるので、白血病細胞除去剤として非常に実用性の高いものということができる。
【０００４】ところで、一般に抗ガン剤を用いてガン患者の治療を行う場合には、抗ガン剤を経口的又は非経口的にガン患者に投与し、循環系器官を経由して患部に到達させ、ガン細胞と接触させる手法がとられる。
【０００５】しかしながら、このような手法では、抗ガン剤が患部以外の組織までも供給され、希釈されるため、有効量を確保するには、治療に必要とされる量よりもかなり多量に投与しなければならないし、また患部以外の組織に予想外の作用をもたらすリスクもある。
【０００６】したがって、このような抗ガン剤を実用に供する場合には、投与された抗ガン剤ができるだけ患部に集中し、ガン細胞に効果的に作用するような工夫がしばしば行われているが、まだ十分満足できるものは知られていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、血液を体外で環流することによって白血病細胞に直接白血病細胞凝集剤を接触させ、白血病患者の治療を迅速かつ効率よく行うための手段を提供することを目的としてなされたものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、白血病細胞に直接白血病細胞凝集剤を接触させ、白血病細胞を選択的に除去して、白血病患者を効率よく治療する方法について鋭意研究を重ねた結果、白血病細胞は、もっぱら血液中に存在することから、白血病患者の血液をいったん体外に取り出し、特定の器具及び材料を用いて白血病細胞凝集剤と接触させる処理を行い、白血病細胞のみを選択的にこれと反応させて除去したのち、処理した血液を再び体内に戻すことにより、その目的を達成しうることを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００９】すなわち、本発明は、生理的に不活性な担体とそれに担持された白血病細胞凝集剤からなる白血病細胞除去用医療材料及びそれを不溶性材料筒状体に充填した白血病治療用カラムを提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の白血病治療用カラムは、担体に担持された白血病細胞凝集剤とそれに充填するための不溶性材料筒状体から構成される。この白血病細胞凝集剤としては、キノコ由来のレクチンタンパク質、例えばヤナギマツタケ（Ａｇｒｏｃｙｂｅ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）の果肉から抽出されるレクチンタンパク質やマメ科植物種子由来のレクチンタンパク質、例えばトウアズキ（Ａｂｒｕｓ ｐｒｅｃａｔｏｒｉｕｓ）の種子から抽出されるレクチンタンパク質などを用いることができる。
【００１１】次に、これらの白血病細胞凝集剤を担持させる担体としては、生理的に不活性なもので、白血病細胞凝集剤と親和性を有するものであれば特に制限はなく、無機質、有機質のいずれでもよい。ここで、生理的に不活性とは、血液、リンパ液などの生理液と接触したときに、有害な物質の溶出や変質を生じ、それらの体内での生理液としての働きに悪影響をもたらすことがないという意味である。
【００１２】この担体として好適なのは、多糖類系ゲル濾過剤粒状体、例えばガラクタン又はその誘導体のゲル顆粒で、これは市販品［セファロース（商品名，アマシャム・ファルマシア・バイオテック社製）］として入手することができる。この担体は、粒径２５０〜３５０μｍの粒状体として用いられる。
【００１３】本発明においては、白血病細胞凝集剤を、この担体に化学的に結合させることにより担持したものを医療材料として用いる。すなわち、この医療材料は、両者を共有結合により化学的に結合したものである。
【００１４】このものは、例えば、多糖類系ゲル濾過剤粒状体を塩酸水溶液で膨潤させたのち、レクチンタンパク質を加え、室温下、１〜５時間かきまぜながら反応させることによって製造することができる。この際の反応は、多糖類系ゲル濾過剤中に存在する官能基、例えばイミドカーボネート基やシアネートエステル基とレクチンタンパク質中のアミノ基との間で進行し、イソウレア結合を形成し、これを介してレクチンタンパク質が多糖類に導入される。この反応において未反応のまま残った官能基は、例えばグリシンのようなアミノ酸を反応させてブロックされる。
【００１５】次に、本発明の白血病治療用カラムは、前記の担体と白血病細胞凝集剤との結合体を不溶性材料で作られた筒状体に充填することにより構成される。ここで、不溶性材料というのは、血液やリンパ液のような生理液と接触した場合に、これらの機能を妨げるような物質、例えば有害な物質を溶出することがない材料の意味であり、一般に人工臓器の材料として慣用されている材料、ガラス、プラスチック、金属などの中から任意に選ぶことができる。この筒状体の形状は、円筒体、角筒体、長円筒体のいずれでもよいが、通常は円筒体が用いられる。このカラムの大きさとしては、直径１０〜２０ｍｍ、好ましくは１０〜１５ｍｍ、長さ５０〜２００ｍｍ、好ましくは６０〜８０ｍｍの範囲が実用的である。
【００１６】本発明の白血病治療用カラムは、このような不活性材料筒状体の底面付近に網状板や多孔板を配置し、その上に少なくとも２０ｍｍの厚さまで白血病細胞凝集剤を担持した担体を充填することによって得ることができる。
【００１７】次に、添付図面に従って、本発明の構成及び作用をさらに詳細に説明する。図１は、本発明の白血病治療用カラムの構造の１例を説明するための断面略解図であり、カラム本体１は、ガラス製円筒体で構成され、頂部に細胞導入管２、底部に細胞排出管３が備えられている。この内部には、フィルター４上に、白血病細胞凝集剤を担持した担体の充填部５が形成されている。
【００１８】白血病患者の血管から抜き出された細胞は、細胞導入管２よりカラム中の充填部５に供給され、ここで白血病細胞凝集剤と接触し、白血病細胞のみが除去され、正常細胞を含んだ細胞懸濁液は細胞排出管３から取り出され、患者の体内へ戻される。このようにして、患者の血液の正常な機能をそこなうことなく、白血病細胞を除去することができるので、安全かつ確実に白血病患者の治療を行うことができる。
【００１９】図２は、本発明のカラムを用いて白血病患者の血液中から、白血病細胞が選択的に除去される状態を模式的に示したもので、白血病患者の血液由来の細胞をカラムに通すと、白血病細胞凝集剤、例えばレクチンタンパク質６を担持した担体７と接触し、白血病細胞８のみがレクチンタンパク質６と結合して除去され、正常細胞９のみを含んだ細胞懸濁液として排出される。
【００２０】このようにして、白血病患者の血液中の白血病細胞は、レクチンタンパク質と結合して除去されるが、処理終了後、これに使用したレクチンを認識する糖、例えばラクトースの溶液を通すことにより、白血病細胞を溶出させることができるので、これによってレクチンを再生、カラムを繰り返し利用することができる。
【００２１】
【実施例】次に、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、これらにより本発明は限定されるものではない。
【００２２】実施例１セファロース６ＭＢ（商品名，アマシャム・ファルマシア・バイオテク社製）１ｇを１ｍＭ塩酸水溶液１００ｍｌ中で１５分間膨潤後、１ｍＭ塩酸水溶液２００ｍｌでよく洗浄し、さらにカップリング緩衝液（０．５Ｎ ＮａＣｌを含む０．１Ｍ ＮａＨＣＯ3水溶液、ｐＨ８．５）２００ｍｌで洗浄した。次に、同じカップリング緩衝液５ｍｌ中に、ヤナギマツタケ（Ａｇｒｏｃｙｂｅ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）の果肉から抽出されたレクチンタンパク質３ｍｇを溶解後、これに前記のセファロース６ＭＢを加え、室温（２０℃）において、かきまぜながら２時間反応させることによりレクチンタンパク質とセファロース６ＭＢとの複合体２．５ｍｌを調製した。次いで、この複合体を０．５Ｎ ＮａＣｌを含む０．１Ｎ酢酸緩衝液（ｐＨ４．５）各１００ｍｌとカップリング緩衝液各１００ｍｌで交互に３回洗浄したのち、０．２Ｎグリシンを含む０．１Ｎ ＮａＨＣＯ3水溶液（ｐＨ８．５）中で、室温でかきまぜながら２時間反応させることにより未反応の官能基をブロックした。最後に、細胞懸濁用の緩衝液で十分に洗浄することにより、白血病細胞凝集用医療材料２．５ｍｌを得た。
【００２３】実施例２実施例１で得たレクチンタンパク質とセファロース６ＭＢとの複合体を、下部に８０μｍのメッシュシートを配置した径１２ｍｍ、長さ６０ｍｍのガラス製円筒状カラムに、２０ｍｍの高さまで充填し（充填層体積２．５ｍｌ）、白血病治療用カラムを製造した。次に、急性リンパ性白血病由来のＴ細胞系ジャーカット（Ｊｕｒｋａｔ）細胞を、リン酸塩緩衝生理的食塩水に懸濁し、細胞数を１．５×１０7個／ｍｌに調整した。この細胞懸濁液０．６ｍｌを２５℃において上記の白血病治療用カラムに通し、白血病細胞をレクチンタンパク質に結合させた後にリン酸塩緩衝生理的食塩水でカラムをよく洗浄した。次いで、このようにして白血病細胞を結合したカラムに、リン酸塩緩衝生理的食塩水に溶かした１００ｍＭのラクトース溶液を流し、流出液を１．５ｍｌごとに分画捕集した。各画分について、光学計により濁度（Ａ６００）を測定し、その結果をグラフとして図３に示す。以上の事実により、血液中の白血病細胞がカラム中のレクチンタンパク質に結合して除去され、次いでラクトースにより溶離されることが分かる。
【００２４】
【発明の効果】本発明の白血病治療用カラム及び医療材料を用いれば、白血病患者の血液中から白血病細胞のみを選択的に除去できるので、安全かつ確実に白血病患者の治療を行うことができる。
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| 【出願人】 |
【識別番号】３０１００００１１
【氏名又は名称】経済産業省産業技術総合研究所長
【識別番号】５９９１６８１５４
【氏名又は名称】中村 修
【識別番号】５９９１６８１６５
【氏名又は名称】大庭 英樹
【識別番号】５９９１６８１７６
【氏名又は名称】八木 史郎
【識別番号】５９９１６８１８７
【氏名又は名称】安田 誠二
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| 【出願日】 |
平成１１年１１月３０日（１９９９．１１．３０） |
| 【代理人】 |
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| 【公開番号】 |
特開２００１−１５８７４４（Ｐ２００１−１５８７４４Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１３年６月１２日（２００１．６．１２） |
| 【出願番号】 |
特願平１１−３４１１６４ |
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