| 【発明の名称】 |
飲食物および薬品 |
| 【発明者】 |
【氏名】岡田 茂孝
【氏名】米谷 俊
【氏名】西村 隆久
【氏名】中江 貴司
【氏名】滝井 寛
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| 【要約】 |
【課題】
【解決手段】 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】生理活性フラボノイドの糖転移化合物を含むことを特徴とする飲食物および薬品【請求項２】生理活性フラボノイドがヘスペリジン、ディオスミン、ナリンジン、ネオヘスペリジン、ダイジン、ゲニスチンであることを特徴とする請求項１記載の飲食物および薬品 |
【発明の詳細な説明】【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は高血圧、アレルギー、ガン、高コレステロール症、高脂血症などを予防、または、治療するために、飲食物、または、薬品として利用する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】天然にはさまざまな生理活性を持ったフラボノイド化合物が数多く知られている。しかしながら、フラボノイド化合物の一つであるバイカレインは投与量の約３００万分の１しか吸収されないといったように体内への吸収効率が極めて悪いことが知られていた（Ｙ．Ｗａｋｕｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．，５７５，１３１−１３６（１９９２））。そのため、フラボノイド化合物の持つ生理活性が生体内で充分発揮されない。そこで、その吸収効率を上昇させる事が切望されていた。
【０００３】本発明の出願者は鋭意研究の結果、生理活性フラボノイドに糖が結合した生理活性フラボノイドの糖転移化合物とすることにより、生体への吸収効率が大きく改善されることを見出した。つまり、低吸収性の生理活性フラボノイド化合物であっても、糖転移化合物とすることにより、高率でしかも速やかに体内に吸収され、その効能を発揮することが初めて明らかになった。したがって、従来のものに比べ少量で顕著な効果が期待できる。
【０００４】これらフラボノイド類は、例えば、以下のような生理活性が知られている。ヘスペリジンやルチンは古くからビタミンＰとして血圧を下げる作用が知られている（神谷真太郎、新ビタミン学、（日本ビタミン学会）１９６９、ｐ４３９）。また、ヘスペリジンは抗アレルギー作用（松田英秋ｅｔ ａｌ．；薬学雑誌、１１１、１９３−１９８（１９９１）、Ｊ．Ａ．Ｄａ Ｓｉｌｖａ Ｅｍｉｍ ｅｔａｌ．；Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４６，１１８−７１２（１９９４））、ＬＤＬ−コレステロールを減少させ血中コレステロール値を改善する作用（Ｍ．Ｔ．Ｍｏｎｆｏｒｔｅ ｅｔ ａｌ．；Ｉｌ Ｆａｒｍａｃｏ，５０，５９５−５９９（１９９５））、抗癌作用（Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４，４６５３−４６５９（１９９４）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７，２４６−２５２（１９９７）Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１８，７６１−７６９（１９９７）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔａｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１８，９５７−９６５（１９９７））などの生理作用も報告されている。
【０００５】さらに、最近の研究では、ヘスペリジンは前駆脂肪細胞の分化を促進し、糖尿病などの症状を改善する作用も期待されている。ディオスミンは強い抗酸化活性に加えてヘスペリジンと共存させた薬剤が、静脈不全や痔疾などの治療薬として利用されている（Ｃ．Ｌａｂｒｉｄ；Ａｎｇｉｏｌｏｇｙ，４５，５２４−５３０（１９９４））。さらに、ヘスペリジン、ディオスミン単独およびその混合物が口腔ガン、食道ガン、大腸ガンなどを抑制することも報告されている（Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５４，４６５３−４６５９（１９９４）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７，２４６−２５２（１９９７）Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔａｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１８，７６１−７６９（１９９７）、Ｔ．Ｔａｎａｋａ，ｅｔ ａｌ．；Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１８，９５７−９６５（１９９７））。ナリンジンやネオヘスペリジンは柑橘類の苦味物質として知られており、苦味の付与を目的に食品・飲料などに用いられている。
【０００６】さらに最近では、イソフラボンが骨密度の向上に有効であること、乳ガンの発生を抑制することなどが明らかにされてきている（戸田ｅｔ ａｌ．；食品と開発）。そして、それを応用した飲食物、薬品を開発し、本発明を完成することができた。以下、この発明について詳細に述べる。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明においては、生理活性フラボノイド化合物およびその糖転移化合物の体内吸収を以下のようにして測定した。
【０００８】１週間予備飼育した５週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一昼夜絶食させ、所定濃度の生理活性フラボノイド化合物あるいは、その糖転移化合物の溶液３００μｌをゾンデを用いて胃に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法（Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２１，１１５７−１１６６（１９９３））により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれる生理活性フラボノイド化合物あるいは、その糖転移化合物を定量した。
【０００９】Ｊ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法とは以下のとおりである。採取された血液５００μｌにアセトニトリル１０００μｌを添加し、充分振とうした後、１５分間静置した。５５００ｒｐｍで２０分間遠心した後、その上清をとり、凍結乾燥した。凍結乾燥した試料をアセトニトリル／蒸留水（２０／８０；ｖ／ｖ、０．０１Ｍ ＮａＯＨ）溶液１００μｌで溶解し、ＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。カラム：ＯＤＳ、カラム温度：４０℃、溶離液：アセトニトリル／蒸留水（２０／８０；ｖ／ｖ）、流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ ２８０ｎｍ。またイソフラボン化合物を分析するＨＰＬＣの条件は以下のとおりである。カラム：ＯＤＳ、カラム温度：４０℃、溶離液：アセトニトリル／蒸留水（１５／８５；ｖ／ｖ）からアセトニトリル／蒸留水（４０／６０；ｖ／ｖ）のグラジェント、流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ ２８０ｎｍ。血液中の生理活性フラボノイド化合物あるいは、その誘導体濃度は濃度既知の生理活性フラボノイド化合物あるいは、その糖転移化合物を用いて検量線を作成し求めた。
【００１０】なお、実験動物としてはマウスのほか、ラットなどを用いることもできる。また、ＨＰＬＣの条件は測定する生理活性フラボノイド化合物およびその糖転移化合物により若干の違いはあるが、基本的な条件を示した（実施例において個別に説明する）。
【００１１】本発明において、生理活性フラボノイドとしてはヘスペリジン、ディオスミン、ナリンジン、ネオヘスペリジン、を用いたが、イソフラボンなども用いることができる。すなわち、フラボノール、フラバノン、アントシアニジン、カルコンなどいわゆるフラボノイド類にイソフラボンを含めたものを用いることができる。
【００１２】生理活性フラボノイドの糖転移化合物の製造には、酵素的な糖転移反応や化学反応を利用できる。糖転移反応は糖転移酵素であれば、いずれのものでも利用できる。例えば、サイクロデキストリン合成酵素、アミラーゼなどを用いて行なうことができ、フラボノイドの糖転移化合物を得ることができる（Ｔ．Ｋｏｍｅｔａｎｉ，ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５８，５１７−５２０（１９９４）．Ｔ．Ｋｏｍｅｔａｎｉ，ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５８，１９９０−１９９４（１９９４）．Ｔ．Ｋｏｍｅｔａｎｉ，ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６０，６４５−６４９（１９９６）．）。また、この時、酵素の起源などは問わない。
【００１３】
【実施例】（実施例１）１週間予備飼育した５週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一昼夜絶食させ、２０％（ｗ／ｖ）のヘスペリジンの糖転移化合物およびヘスペリジン溶液３００μｌをゾンデを用いて胃に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるヘスペリジンの糖転移化合物およびヘスペリジンを定量した。その結果、図１に示したように血中ヘスペリジンの糖転移化合物は投与後１５分でピークに達し、その後徐々に減少していった。一方、ヘスペリジンはヘスペリジンの糖転移化合物と同様の挙動を示したが、血中濃度はヘスペリジンの糖転移化合物の約１／２０以下であった。
【００１４】（実施例２）１週間予備飼育した５週齢のオスのラット（体重、約３００ｇ）を一昼夜絶食させ、麻酔下において５％（ｗ／ｖ）のヘスペリジンの糖転移化合物溶液およびヘスペリジン溶液３００μｌを十二指腸に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、門脈より経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるヘスペリジンの糖転移化合物およびヘスペリジンを定量した。その結果、ヘスペリジンの糖転移化合物投与区は投与後２０分で血中濃度７．０μｇ／ｍｌとなり、その後徐々に減少していった。ヘスペリジンの糖転移化合物投与区の血中濃度は５．５μｇ／ｍｌであった。この時、比較のため用いたヘスペリジンは血中には検出されなかった。
【００１５】（実施例３）１週間予備飼育した５週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一昼夜絶食させ、２０％（ｗ／ｖ）のディオスミンの糖転移化合物およびディオスミン溶液３００μｌをゾンデを用いて胃に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるディオスミンの糖転移化合物およびディオスミンを定量した。
【００１６】その結果、ディオスミンの糖転移化合物は投与後急速に吸収され、１５分後には血中濃度は最大となり、その後徐々に代謝されていった。これに対し、ディオスミンは極めて吸収されにくく、血中には微量しか検出されなかった。
【００１７】（実施例４）１週間予備飼育した５週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一昼夜絶食させ、２０％（ｗ／ｖ）のナリンジンの糖転移化合物およびナリンジン溶液３００μｌをゾンデを用いて胃に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるナリンジンの糖転移化合物およびナリンジンを定量した。
【００１８】その結果、ディオスミンの糖転移化合物は投与後急速に吸収され、１５分後には血中濃度は最大となり、その後徐々に代謝されていった。これに対し、ナリンジンは極めて吸収されにくく、血中には微量しか検出されなかった。
【００１９】（実施例５）１週間予備飼育した５週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一昼夜絶食させ、２０％（ｗ／ｖ）のネオヘスペリジンの糖転移化合物およびネオヘスペリジン溶液３００μｌをゾンデを用いて胃に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるネオヘスペリジンの糖転移化合物およびネオヘスペリジンを定量した。その結果、ネオヘスペリジンの糖転移化合物は投与後急速に吸収され、１５分後には血中濃度は最大となり、その後徐々に代謝されていった。これに対し、ネオヘスペリジンは極めて吸収されにくく、血中には微量しか検出されなかった。
【００２０】（実施例６）１週間通常の固形飼料で予備飼育したＳＨＲラットに１０％ヘスペリジンの糖転移化合物を含む同組成の飼料を与えて８週間飼育した。対照区のラットには通常の固形飼料を継続して与えた。また、もう一方の試験区には１０％ヘスペリジンを添加した同組成の飼料を与えた。８週間後、それぞれの試験区のラットの血圧を測定したところ、対照区に比し試験区のラットは約５％の血圧降下効果が見られ、ヘスペリジンの糖転移化合物添加試験区のラットの高血圧症状改善が明らかとなった。対照区のラットでは症状の改善効果は示されなかった。ヘスペリジン区では、殆ど改善は見られなかった。なお、３つの試験区の体重増加率や飼料摂取量には有意な差はなかった。
【００２１】（実施例７）１週間予備飼育した８週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一晩絶食させ、濃度が４％（ｗ／ｖ）のダイジン（ｄａｉｄｚｉｎ）の糖転移化合物溶液（３００μｌ）あるいは、濃度が４％（ｗ／ｖ）のダイジン溶液（３００μｌ）をゾンデを用いて胃に直接投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いて血液中に含まれるダイジンの糖転移化合物およびダイジンを定量した。その結果、図２に示したようにダイジンの糖転移化合物投与群では血中ダイジン量は投与後１５分でピークに達した。ここで言う血中ダイジン量とは一部のダイジンの糖転移化合物が生体内の酵素によりダイジンにまで分解されていたため、ダイジンとその配糖体の総和で示している。その濃度はダイジン投与群の約６倍の濃度であった。
【００２２】（実施例８）１週間予備飼育した８週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一晩絶食させ、濃度が４％（ｗ／ｖ）のゲニスチン（ｇｅｎｉｓｔｉｎ）の糖転移化合物溶液（３００μｌ）あるいは、濃度が４％（ｗ／ｖ）のゲニスチン溶液（３００μｌ）をゾンデを用いて胃に直接投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いて血液中に含まれるゲニスチンの糖転移化合物およびゲニスチンを定量した。その結果、図３に示したようにゲニスチンの糖転移化合物投与群では血中ゲニスチン量は投与後１５分でピークに達した。ここでいう血中ゲニスチン量とは一部のゲニスチンの糖転移化合物が生体内の酵素によりゲニスチンにまで分解されていたため、ゲニスチンとその配糖体の総和で示している。その濃度はゲニスチン投与群の２倍以上の濃度であった。
【００２３】（実施例９）１週間予備飼育した８週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を晩絶食させ、濃度が１０％（ｗ／ｖ）のヘスペリジンの糖転移化合物溶液（３００μｌ）あるいは、濃度が１０％のヘスペリジン溶液（３００μｌ）をゾンデを用いて胃に直接投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるヘスペリジンの糖転移化合物およびヘスペリジンを定量した。その結果、血中ヘスペリジンの糖転移化合物は投与後１５分でピークに達し、その後徐々に減少していった。一方、ヘスペリジンはヘスペリジンの糖転移化合物と同様の挙動を示したが、血中濃度はヘスペリジンの糖転移化合物の１／２０以下であった。
【００２４】（実施例１０）１週間予備飼育した２０週齢のオスのラット（体重、約３００ｇ）を一晩絶食させ、麻酔下において濃度が３％（ｗ／ｖ）のヘスペリジンの糖転移化合物溶液（５００μｌ）あるいは、濃度が３％（ｗ／ｖ）のヘスペリジン溶液（５００μｌ）を十二指腸に直接投与した。対照には蒸留水を投与した。投与後、門脈より経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるヘスペリジンの糖転移化合物およびヘスペリジンを定量した。その結果、ヘスペリジンの糖転移化合物投与区は投与後２０分で血中濃度８．５μｇ／ｍｌとなり、その後徐々に減少していった。ヘスペリジンの投与区の血中濃度は２．５μｇ／ｍｌであった。この時、比較のため用いた水投与区では、ヘスペリジンが血中には検出されなかった。
【００２５】（実施例１１）１週間予備飼育した８週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を一昼夜絶食させ、濃度が２％（ｗ／ｖ）のディオスミンの糖転移化合物溶液（３００μｌ）あるいは、濃度２％（ｗ／ｖ）のディオスミン溶液（３００μｌ）をゾンデを用いて胃に直接投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるディオスミンの糖転移化合物およびディオスミンを定量した。その結果、ディオスミンの糖転移化合物は投与後急速に吸収され、１５分後には血中濃度は最大となり、その後徐々に代謝されていった。これに対し、ディオスミンは極めて吸収されにくく、血中にはディオスミンの糖転移化合物投与区しに比べ約１／４０しか検出されなかった。
【００２６】（実施例１２）１週間予備飼育した８週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を晩絶食させ、濃度２％（ｗ／ｖ）のナリンジンの糖転移化合物溶液（３００μｌ）あるいは、濃度２％（ｗ／ｖ）ナリンジン溶液（３００μｌ）をゾンデを用いて胃に直接投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるナリンジンの糖転移化合物およびナリンジンを定量した。その結果、ナリンジンの糖転移化合物は投与後急速に吸収され、１５分後には血中濃度は最大となり、その後徐々に代謝されていった。これに対し、ナリンジンは極めて吸収されにくく、その濃度はナリンジンの糖転移化合物投与区に比べ、約１／３０しか検出されなかった。
【００２７】（実施例１３）１週間予備飼育した８週齢のオスのＳｔｄ．ｄｄＹマウス（体重、約３０ｇ）を１晩絶食させ、濃度が２％（ｗ／ｖ）のネオヘスペリジンの糖転移化合物溶液（３００μｌ）および濃度が２％（ｗ／ｖ）のネオヘスペリジン溶液（３００μｌ）をゾンデを用いて胃に直接投与した。投与後、経時的に採血した。得られた血液はＪ．Ａ．Ｂｏｕｔｉｎらの方法により、前処理したのち、ＨＰＬＣを用いてそれに含まれるネオヘスペリジンの糖転移化合物およびネオヘスペリジンを定量した。その結果、ネオヘスペリジンの糖転移化合物は投与後急速に吸収され、１５分後には血中濃度は最大となり、その後徐々に代謝されていった。これに対し、ネオヘスペリジンは極めて吸収されにくく、血中にはネオヘスペリジンの糖転移化合物投与区に比べ約１／１５しか検出されなかった。
【００２８】
【発明の効果】生理活性フラボノイドの糖転移化合物と生理活性フラボノイドを経口投与した場合を比較すると、生理活性フラボノイドの糖転移化合物は生体への吸収性が向上し、フラボノイドの薬効が速やかに発現できた。また、吸収性があがったため、投与量も少量で充分であった。
【００２９】
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| 【出願人】 |
【識別番号】００００００２２８
【氏名又は名称】江崎グリコ株式会社
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| 【出願日】 |
平成１１年６月２２日（１９９９．６．２２） |
| 【代理人】 |
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| 【公開番号】 |
特開２０００−７８９５６（Ｐ２０００−７８９５６Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１２年３月２１日（２０００．３．２１） |
| 【出願番号】 |
特願平１１−２１４１１８ |
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