| 【発明の名称】 |
組成物 |
| 【発明者】 |
【氏名】土屋 裕美
【氏名】三宅 俊雄
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| 【要約】 |
【課題】本発明は、α−グリコシル ルチンを有効成分とする、ビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤および劣化防止剤から選ばれる組成物を提供することを課題とする。
【解決手段】高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に糖転移酵素を作用させてα−グリコシル ルチンを生成せしめ、室温下、中性付近の水溶液条件で、ルチン換算で約１．０ｗ／ｖ％以上の高濃度に溶解含有させて得られるα−グリコシル ルチンを有効成分とする、ビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤および劣化防止剤から選ばれる組成物を提供することにより、前記課題を解決する。 |
【特許請求の範囲】
【請求項１】 １．０ｗ／ｖ％以上の高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に糖転移酵素を作用させてα−グリコシル ルチンを生成せしめ、室温下、中性付近の水溶液条件で、ルチン換算で約１．０ｗ／ｖ％以上の高濃度に溶解含有させて得られるα−グリコシル ルチンを有効成分とする、ビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤および劣化防止剤から選ばれる組成物。
【請求項２】 高濃度のルチンが、高濃度懸濁状ルチンであるか、または、アルカリ側ｐＨで溶解させた高濃度溶液状ルチンであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
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【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、α−グリコシル ルチンを有効成分とする、ビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤および劣化防止剤から選ばれる組成物に関し、更に詳細には、高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に糖転移酵素を作用させてα−グリコシル ルチンを生成せしめ、室温下、中性付近の水溶液条件で、ルチン換算で約１．０ｗ／ｖ％以上の高濃度に溶解含有させたα−グリコシル ルチンを有効成分とする、ビタミンＰ強化剤、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤および劣化防止剤から選ばれる組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】ルチンは、下記の化１で表される化学構造を有し、毛細血管の強化、出血予防、血圧調整などの生理作用を持つビタミンＰとして、また、黄色色素として古くから知られ、食品、医薬品、化粧品などに利用されている。
【０００３】
【化１】
【０００４】ビタミンＰは、生体内で、ビタミンＣの生理活性、例えば、生体結合組織の主成分であるコラーゲンの合成に必要なプロリンやリジンのヒドロキシル化反応に関与し、また、例えば、チトクロームＣのＦｅ＋＋＋を還元してＦｅ＋＋にするなどの酸化還元反応に関与し、更には、白血球増加による免疫増強作用に関与するなど、それらの反応を増強することが知られており、生体の健康維持、増進に重要な役割をなしている。
【０００５】ルチンの用途は、単に栄養素としてのビタミンＰ強化剤にとどまらず、その化学構造、生理作用から、単独でまたは他のビタミンなどと併用して、例えば、黄色着色剤、酸化防止剤、安定剤、品質改良剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物などに、また、ウィルス性疾患、細菌性疾患、循環器疾患、悪性腫瘍など感受性疾患の予防剤、治療剤すなわち抗感受性疾患剤に、更には、黄色着色剤、安定剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、メラニン生成抑制剤などの美肌剤、色白剤などとして化粧品にまで及び、その範囲は極めて広い。
【０００６】しかしながら、ルチンは水に難溶性で、室温では８Ｌの水にわずか１ｇ程度（約０．０１ｗ／ｖ％）しか溶けず、使用上困難を極めている。これを改善する方法としては、例えば、特公昭２５−１６７７号公報に示されるごとく、ルチンにアミノ基を有する脂肪族化合物を加えて水溶性を増大する方法、また特公昭２６−２７２４号公報に示されるごとく、ルチンにモノハロゲン酢酸を作用させ酢酸ソーダ化合物にして水溶性を増大する方法、また、特公昭２９−１２８５号公報に示されるごとく、ルチンにロンガリットを作用させ亜硫酸化合物にして水溶性を増大する方法などが知られていた。
【０００７】しかしながら、これらの方法は、いずれもアミノ化合物、モノハロゲン酢酸、亜硫酸化合物などが用いられ、生成物質に他の生理活性、毒性が懸念され、またその精製も困難である。
【０００８】そこで、本発明者等は、先に、特公昭５４−３２０７３号公報で、より安全性の高い水溶化の方法として、生合成反応を利用した糖転移酵素の作用によるα−グリコシル ルチンの製造法を提案した。この方法で得られるα−グリコシルルチンは、毒性の懸念もなく、原料のルチンと同じ生理活性を有し、水への溶解性も高く、取り扱い上極めて好都合で、より広範な用途が期待され、その実現が鶴首されている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】上記したように、α−グリコシル ルチンは、種々の長所を有しており、その工業化が待たれている。
【００１０】しかしながら、従来、その生合成反応における仕込濃度がルチンとして約０．１ｗ／ｖ％程度に過ぎず、製品のα−グリコシル ルチンに対する使用水量、精製処理水量、エネルギーコストなどが過大となり、その工業化を困難にしている。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記の欠点を解決するためになされたものであって、とりわけ、仕込時のルチン濃度を高めた反応法と反応後のα−グリコシル ルチンの精製法について鋭意研究した。
【００１２】その結果、高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に糖転移酵素を作用させることにより、望ましくは、ルチンを高濃度懸濁状、または、アルカリ側ｐＨで溶解させた高濃度溶液状で含有せしめ、その仕込濃度をルチンとして約１．０乃至２０．０ｗ／ｖ％、換言すれば、従来技術の約１０乃至２００倍にも高めた状態で糖転移酵素を作用させることにより、α−グリコシル ルチンがよく生成され、室温下、中性付近の水溶液条件で、ルチン換算で約１．０ｗ／ｖ％以上もの高濃度に溶解含有させうることを見いだし、その製造法を確立するとともに、この製造法により得られるα−グリコシル ルチン高含有物を含有せしめた飲食物、感受性疾患の予防剤、治療剤、化粧品などへの用途を確立して本発明を完成した。
【００１３】また、この反応により生成したα−グリコシル ルチンを精製するに際しては、その反応溶液と多孔性合成吸着剤とを接触させ、その吸着性の違いを利用することにより、容易に精製できることを見いだした。
【００１４】従って、本発明のα−グリコシル ルチンの製造法は、従来方法の欠点を一挙に解消し、使用水量、精製処理水量、エネルギーコストを大幅に低減できることが判明し、その工業化の実現を極めて容易にするものである。
【００１５】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１６】本発明に用いるルチンは、高度に精製されたルチンに限る必要はなく、ルチンと、例えば、シトロニン、ナリンジン、ヘスペリジンなどのフラボノイド配糖体との混合物、更には、ルチンを含有している各種植物由来の抽出物、またはその部分精製物などが適宜使用できる。
【００１７】植物組織としては、例えば、ソバの葉茎、エンジュのつぼみ（槐花）、エニシダのつぼみ、ユーカリの葉茎、イチョウの葉茎、柑橘類果実などが有利に利用できる。
【００１８】本発明に用いる澱粉質は、同時に用いる糖転移酵素によってルチンからα−グリコシル ルチンを生成することのできるものであればよく、例えば、アミロース、デキストリン、シクロデキストリン、マルトオリゴ糖などの澱粉部分加水分解物、更には、液化澱粉、糊化澱粉などが適宜選ばれる。
【００１９】従って、α−グリコシル ルチンの生成を容易にするためには、糖転移酵素に好適な澱粉質が選ばれる。
【００２０】例えば、糖転移酵素として、α−グルコシダーゼ（ＥＣ ３．２．１．２０）を用いる際には、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオースなどのマルトオリゴ糖、またはＤＥ約１０乃至７０の澱粉部分加水分解物などが好適であり、シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼ（ＥＣ ２．４．１．１９）を用いる際には、シクロデキストリンまたはＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約６０の澱粉部分加水分解物などが好適であり、α−アミラーゼ（ＥＣ３．２．１．１）を用いる際には、ＤＥ１以下の澱粉糊化物からＤＥ約３０のデキストリン、澱粉部分加水分解物などが好適である。
【００２１】また、反応時の澱粉質濃度は、ルチンに対して約０．５乃至５０倍の範囲が好適である。
【００２２】本発明でいうルチン高含有液とは、ルチンを、例えば、懸濁状で、または、ｐＨ７．０を越えるアルカリ側ｐＨで溶解させた溶液状で高濃度に含有する溶液が適しており、その濃度は、約０．５ｗ／ｖ％以上の高濃度、望ましくは、約１．０乃至２０．０ｗ／ｖ％含有している溶液を意味する。
【００２３】本発明に用いる糖転移酵素は、ルチンとこの酵素に好適な性質の澱粉質とを含有するルチン高含有液に作用させる時、ルチンを分解せずにα−グリコシル ルチンを生成するものであればよい。例えば、α−グルコシダーゼは、ブタの肝臓、ソバの種子などの動植物組織由来の酵素、または、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属などに属するカビ、またはサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属などに属する酵母などの微生物を栄養培地で培養し得られる培養物由来の酵素が、シクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼは、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、クレブシーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属などに属する細菌培養物由来の酵素が、α−アミラーゼは、バチルス属などに属する細菌、または、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属などに属するカビ培養物由来の酵素などが適宜選択できる。
【００２４】これらの糖転移酵素は、前記の条件を満足しさえすれば、必ずしも精製して使用する必要はなく、通常は、粗酵素で本発明の目的を達成することができる。必要ならば、公知の各種方法で精製して使用してもよい。また、市販の糖転移酵素を利用することもできる。使用酵素量と反応時間とは、密接な関係があり、通常は、経済性の点から約５乃至８０時間で反応を終了するように酵素量が選ばれる。また、固定化された糖転移酵素をバッチ式で繰り返し、または連続式で反応に利用することも適宜選択できる。
【００２５】本発明の反応法は、高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に糖転移酵素を作用させればよい。例えば、ルチンを高濃度懸濁状で反応せしめる場合には、約１．０乃至５．０ｗ／ｖ％の懸濁状ルチンと適量の澱粉質とを含有するルチン高含有液を、ｐＨ約４．５乃至６．５とし、糖転移酵素の作用しうるできるだけ高温、具体的には、約７０乃至９０℃に維持し、これに糖転移酵素を作用させると、ルチンがα−グリコシル ルチンに変換するにつれて懸濁状ルチンが徐々に溶解し、同時に、α−グリコシル ルチンが容易に高濃度に生成する。このようにして得られるα−グリコシル ルチン含有溶液は、ルチン換算で６０ｗ／ｗ％以上の大量のα−グリコシル ルチンと少量の未反応ルチンとを溶解含有しており、室温下、中性付近の水溶液条件で、その合計溶解量がルチン換算で約１．０乃至５．０ｗ／ｖ％にも達することが判明した。
【００２６】また、例えば、ルチンをｐＨ７．０を越えるアルカリ側で溶解させた高濃度溶液状で反応せしめる場合には、ｐＨ約７．５乃至１０．０の水に約１．０乃至５．０ｗ／ｖ％のルチンを加熱溶解し、これに適量の澱粉質を溶解して得られるルチン高含有液を、糖転移酵素の作用しうるできるだけ高ｐＨ、高温、具体的には、ｐＨ約７．５乃至１０．０、温度約５０乃至８０℃に維持し、これに糖転移酵素を作用させるとα−グリコシル ルチンが容易に高濃度に生成する。この際、アルカリ性溶液中のルチンは、分解を起しやすいので、これを防ぐため、できるだけ遮光、嫌気下に維持するのが望ましい。必要ならば、Ｌ−アスコルビン酸、エリソルビン酸などの抗酸化剤を共存させてもよい。
【００２７】このようにして得られるα−グリコシル ルチン含有溶液は、ルチン換算で６０ｗ／ｗ％以上の大量のα−グリコシル ルチンと少量の未反応ルチンとを溶解含有しており、室温下、中性付近の水溶液条件で、その合計溶解量がルチン換算で約１．０乃至５．０ｗ／ｖ％にも達することが判明した。更に、前記条件を組み合せる方法、例えば、約２．０乃至２０．０ｗ／ｖ％の懸濁状ルチンと適量の澱粉質とを含有するルチン高含有液をｐＨ約７．５乃至１０．０、温度約５０乃至８０℃に維持し、これに糖転移酵素を作用させると、α−グリコシル ルチンが容易に高濃度に生成溶解する。また、ルチンとして、例えば約０．１乃至１．０規定のカセイソーダ水溶液、カセイカリ水溶液、炭酸ソーダ水溶液、水酸化カルシウム水、アンモニア水などの強アルカリ性水溶液に約５．０乃至２０．０ｗ／ｖ％の高濃度に溶解させたものを用い、これに塩酸、硫酸などの酸性水溶液を加えて酵素の作用しうるｐＨに調整するとともに澱粉質を加え、直ちに糖転移酵素を作用させることは、α−グリコシル ルチンを容易に高濃度に生成させることとなるので極めて好都合である。この際、せっかく高濃度に溶解させたルチン溶液も、酸性水溶液でｐＨ調整することによりルチンが析出を起し易いので、そのｐＨ調整前に、澱粉質や少量のα−グリコシル ルチンなどを共存させてルチンの析出を抑制しつつ糖転移反応を開始することも有利に実施できる。このようにして得られるα−グリコシル ルチン含有溶液は、ルチン換算で６０ｗ／ｗ％以上の大量のα−グリコシル ルチンと少量の未反応ルチンとを溶解含有しており、室温下、中性付近の水溶液条件で、その合計溶解量がルチン換算で約５．０乃至２０．０ｗ／ｖ％にも達することが判明した。
【００２８】また、更に必要ならば、反応前のルチンの溶解度を高め、ルチンへの糖転移反応を容易にするために、ルチン高含有液に水と互いに溶解しうる有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、ｉｓｏ−プロパノール、ｎ−ブタノール、アセトール、アセトンなどの低級アルコール、低級ケトンなどを共存させることも適宜選択できる。
【００２９】以上述べたように、本発明の方法は、ルチンの仕込濃度を従来の約１０乃至２００倍にも高めて反応させることができ、α−グリコシル ルチンを容易に高濃度に生成しうることが判明した。すなわち、本発明の高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に糖転移酵素を作用させる方法は、高濃度にもかかわらず反応終了時点において、ルチン換算で６０ｗ／ｗ％以上の大量のα−グリコシル ルチンと少量の未反応ルチンとを溶解含有することとなり、室温下、中性付近の水溶液条件で、その合計溶解量がルチン換算で約１．０ｗ／ｖ％以上、望ましくは、約１．０乃至２０．０ｗ／ｖ％にもなり、従来技術の約１０乃至２００倍もの高濃度に高めうることが判明した。
【００３０】このようにしてα−グリコシル ルチンを生成せしめた反応溶液は、そのままでα−グリコシル ルチン製品にすることもできる。通常は、反応溶液を濾過、濃縮してシラップ状の、更には、乾燥、粉末化して粉末状のα−グリコシル ルチン製品にする。
【００３１】本製品は、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、嗜好物、飼料、餌料、抗感受性疾患剤、化粧品、プラスチック製品などの用途に有利に利用できる。更に、精製されたα−グリコシル ルチン製品を製造する場合には、多孔性合成吸着剤による吸着性の差を利用してα−グリコシル ルチンと澱粉質などの夾雑物とを分離して精製すればよい。
【００３２】本発明でいう多孔性合成樹脂とは、多孔性で広い吸着表面積を有し、かつ非イオン性のスチレン−ジビニルベンゼン重合体、フェノール−ホルマリン樹脂、アクリレート樹脂、メタアクリレート樹脂などの合成樹脂であり、例えば、市販されているＲｏｈｍ ＆ Ｈａａｓ社製造の商品名アンバーライトＸＡＤ−１、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８、アンバーライトＸＡＤ−１１、アンバーライトＸＡＤ−１２、三菱化成工業株式会社製造の商品名ダイヤイオンＨＰ−１０、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−３０、ダイヤイオンＨＰ−４０、ダイヤイオンＨＰ−５０、ＩＭＡＣＴＩ社製造の商品名イマクティＳｙｎ−４２、イマクティＳｙｎ−４４、イマクティＳｙｎ−４６などがある。
【００３３】本発明のα−グリコシル ルチンを生成せしめた反応液の精製法は、反応液を、例えば、多孔性合成吸着剤を充填したカラムに通液すると、α−グリコシルルチンおよび比較的少量の未反応ルチンが多孔性合成吸着剤に吸着するのに対し、多量に共存する澱粉質、水溶性糖類は吸着されることなくそのまま流出する。
【００３４】必要ならば、糖転移酵素反応終了後、多孔性合成吸着剤に接触させるまでの間に、例えば、反応液を加熱して生じる不溶物を濾過して除去したり、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、アルミン酸マグネシウムなどで処理して反応液中の蛋白性物質などを吸着除去したり、強酸性イオン交換樹脂（Ｈ型）、中塩基性または弱塩基性イオン交換樹脂（ＯＨ型）などで処理して脱塩するなどの精製法を組み合せて利用することも随意である。
【００３５】前述のようにして、多孔性合成吸着剤カラムに選択的に吸着したα−グリコシル ルチンと比較的少量の未反応ルチンとは、希アルカリ、水などで洗浄した後、比較的少量の有機溶媒または有機溶媒と水との混合液、例えば、メタノール水、エタノール水などを通液すれば、まず、α−グリコシル ルチンが溶出し、通液量を増すか有機溶媒濃度を高めるかすれば未反応ルチンが溶出してくる。
【００３６】このα−グリコシル ルチン高含有溶出液を蒸溜処理して、まず有機溶媒を溜去した後、適当な濃度にまで濃縮すればα−グリコシル ルチンを主成分とするシラップ状製品が得られる。更に、これを乾燥し粉末化することによって、α−グリコシル ルチンを主成分とする粉末状製品が得られる。
【００３７】この有機溶媒によるα−グリコシル ルチンおよび未反応ルチンの溶出操作は、同時に、多孔性合成吸着剤の再生操作にもなるので、この多孔性合成吸着剤の繰り返し使用を可能にする。
【００３８】また、本発明の多孔性合成吸着剤による精製は、澱粉質、水溶性糖類だけでなく、水溶性の塩類などの夾雑物も同時に除去できる特長を有している。このようにして得られるα−グリコシル ルチンは、次の特長を有している。
【００３９】（１）ルチンと比較してα−グリコシル ルチンは、水溶性が極めて大きい。
（２）ルチンと比較してα−グリコシル ルチンは、耐光性、安定性が大きい。
（３）α−グリコシル ルチンは、体内の酵素によりルチンとグルコースとに加水分解され、ルチン本来の生理活性（ビタミンＰ）を示す。また、ビタミンＣとの併用により、それらの持つ生理活性を増強することができる。
（４）澱粉質を含有する製品の場合には、α−グリコシル ルチンの効果を発揮するのみならず、澱粉質が賦形、増量効果や、甘味効果を発揮することができ、また、澱粉質を除去した精製製品の場合には、ほとんど賦形、増量することなくα−グリコシル ルチンの効果を発揮することができ、また、実質的に無味、無臭なので自由に調味、調香することができる。
【００４０】これらの特長から、α−グリコシル ルチンは安全性の高い天然型のビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、ウィルス性疾患、細菌性疾患、循環器疾患、悪性腫瘍など感受性疾患の予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、嗜好物、飼料、餌料、抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤など化粧品、更には、プラスチック製品などに有利に利用することができる。
【００４１】またα−グリコシル ルチンは、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの呈味を有する各種物質ともよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、普通一般の飲食物、嗜好物、例えば、調味料、和菓子、洋菓子、氷菓、飲料、スプレッド、ペースト、漬物、ビン缶詰、畜肉加工品、魚肉・水産加工品、乳・卵加工品、野菜加工品、果実加工品など広範に利用することができる。また、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のための飼料、餌料などにビタミンＰ強化剤、嗜好性向上などの目的で配合して利用することも好都合である。
【００４２】その他、タバコ、トローチ、肝油ドロップ、複合ビタミン剤、口中清涼剤、口中香錠、うがい薬、経管栄養剤、内服薬、注射剤、練歯みがき、口紅、リップクリーム、日焼け止めなど各種固状、ペースト状、液状の嗜好物、感受性疾患の予防剤、治療剤すなわち抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤などの化粧品などに配合して利用することも有利に実施でき、更には、紫外線吸収剤、劣化防止剤などとしてプラスチック製品などに配合して利用することも有利に実施できる。
【００４３】また、本発明でいう感受性疾患とは、α−グリコシル ルチンによって予防され、若しくは治療される疾患であり、それが、例えばウイルス性疾患、細菌性疾患、外傷性疾患、免疫疾患、リューマチ、糖尿病、循環器疾患、悪性腫瘍などであってもよい。α−グリコシル ルチンの感受性疾患予防剤、治療剤は、その目的に応じてその形状を自由に選択できる。例えば、噴霧剤、点眼剤、点鼻剤、うがい剤、注射剤などの液剤、軟膏、はっぷ剤、クリームのようなペースト剤、粉剤、顆粒、カプセル剤、錠剤などの固剤などである。製剤に当たっては、必要に応じて、他の成分、例えば、治療剤、生理活性物質、抗生物質、補助剤、増量剤、安定剤、着色剤、着香剤などの１種また２種以上と併用することも随意である。
【００４４】投与量は、含量、投与経路、投与頻度などによって適宜調節することができる。通常、α−グリコシル ルチンとして、成人１日当り、約０．００１乃至１０．０グラムの範囲が好適である。また、化粧品の場合も、大体、前述の予防剤、治療剤に準じて利用することができる。
【００４５】α−グリコシル ルチンを利用する方法としては、それらの製品が完成するまでの工程で、例えば、混和、混捏、溶解、浸漬、浸透、散布、塗布、噴霧、注入など公知の方法が適宜選ばれる。
【００４６】以下、本発明のα−グリコシル ルチンの無毒性を実験で説明する。
【００４７】（実験）７周齢のｄｄ系マウスを使用して、後述する実施例３の方法で調製したα−グリコシル ルチンを経口投与して急性毒性テストをしたところ、体重１ｋｇ当たり、５ｇまで死亡例は見られなかった。従って、本物質の毒性は極めて低い。
【００４８】また、後述する実施例２の方法で調製したα−グルコシル ルチンを用いて本テストを行ったところ、同様の結果を得、毒性の極めて低いことが判明した。
【００４９】以下、本発明の実施例について述べる。
【００５０】（実施例１）
＜α−グリコシル ルチン＞ルチン３重量部およびデキストリン（ＤＥ１８）１５重量部を８０℃の熱水９重量部に混合して懸濁状のルチン高含有液とし、これにバチルス・ステアロサーモフィルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）由来のシクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所販売）をデキストリングラム当り２０単位加え、ｐＨ６．０、７５℃に維持し攪拌しつつ６４時間反応させた。反応液をペーパークロマトグラフィーで分析したところ、ルチンの約８５％が、α−グルコシル ルチン、α−マルトシル ルチン、α−マルトトリオシル ルチン、α−マルトテトラオシル ルチン、α−マルトペンタオシル ルチンなどのα−グリコシル ルチンに転換していた。反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過し、濾液を濃縮してシラップ状の澱粉質を含有するα−グリコシル ルチン製品を、固形物当り原料重量に対して約９０％の収率で得た。
【００５１】本品は、ビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の黄色着剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、嗜好物、飼料、餌料、抗感受性疾患剤、化粧品、プラスチック製品などの用途に有利に利用できる。
【００５２】（実施例２）
＜α−グルコシル ルチン＞実施例１の方法に準じて調製したシラップ状の澱粉質を含有するα−グリコシル ルチン製品１重量部を水４重量部に溶解し、これにグルコアミラーゼ（ＥＣ３．２．１．３、生化学工業株式会社販売）をα−グリコシル ルチン製品固形物グラム当り１００単位加え、５０℃、５時間反応させた。反応液をペーパークロマトグラフィーで分析したところ、α−グリコシル ルチンは、α−グルコシル ルチンに転換していた。
【００５３】反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過し、濾液を多孔性合成吸着剤、商品名ダイヤイオンＨＰ−１０（三菱化成工業株式会社販売）のカラムにＳＶ２で通液した。その結果、溶液中のα−グルコシル ルチンと未反応ルチンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、グルコース、塩類などは吸着することなく流出した。次いで、カラムを水で通液、洗浄した後、エタノール水溶液濃度を段階的に高めながら通液し、α−グルコシル ルチン画分を採取し、減圧濃縮し、粉末化して、粉末状のα−グルコシル ルチンを固形物当り原料のルチン重量に対して約８０％の収率で得た。
【００５４】α−グルコシル ルチンを酸で加水分解したところ、ケルセチン１モルに対し、Ｌ−ラムノース１モル、Ｄ−グルコース２モルを生成し、また、α−グルコシル ルチンに、ブタの肝臓から抽出し部分精製したα−グルコシダーゼを作用させると、ルチンとＤ−グルコースとに加水分解されることが判明した。
【００５５】本α−グルコシル ルチンは、高度に精製された水溶性の高いビタミンＰ強化剤として、また、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、飲食物、嗜好物、抗感受性疾患剤、化粧品などに有利に利用できる。
【００５６】（実施例３）
＜α−グリコシル ルチン＞ルチン４重量部を水９０重量部にｐＨ９．５で加熱溶解し、別にデキストリンＤＥ８）２０重量部を水１０重量部に加熱溶解し、次いで、これら溶液を混合して溶液状のルチン高含有液とし、これにシクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り３０単位加え、ｐＨ８．２、６５℃に維持して攪拌しつつ４０時間反応させた。
【００５７】反応液をペーパークロマトグラフィーで分析したところ、ルチンの約９０％がα−グリコシル ルチンに転換していた。反応液を加熱して酵素を失活させ、濾過し濾液を多孔性合成吸着剤、商品名アバーライトＸＡＤ−７（Ｒｏｈｍ ＆Ｈａａｓ社製造）のカラムにＳＶ１．５で通液した。
【００５８】その結果、溶液中のα−グリコシル ルチンと未反応ルチンとが多孔性合成吸着剤に吸着し、デキストリン、オリゴ糖、塩類などは吸着することなく流出した。このカラムを水で通液、洗浄した後、５０ｖ／ｖ％メタノールを通液して、α−グリコシル ルチンおよびルチンを溶出し、これを濃縮し、粉末化して、粉末状α−グリコシル ルチン製品を原料のルチン重量に対して約１４０％の収率で得た。
【００５９】本品は、水溶性の高いビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤、劣化防止剤などとして、飲食物、嗜好物、飼料、餌料、抗感受性疾患剤、化粧品、プラスチック製品などの用途に有利に利用できる。
【００６０】（実施例４）
＜α−グリコシル ルチン＞ルチン１重量部を１規定カセイソーダ溶液４重量部で溶解し、これに０．０１規定塩酸溶液を加えて中和するとともにデキストリン（ＤＥ１０）５重量部を加え、直ちにシクロマルトデキストリン グルカノトランスフェラーゼをデキストリングラム当り１０単位加え、ｐＨ６．０、７０℃に維持しつつ４０時間反応させた。反応液をペーパークロマトグラフィーで分析したところ、ルチンの約８０％がα−グリコシル ルチンに転換していた。反応液を実施例３と同様に精製し、濃縮、粉末化して粉末状α−グリコシル ルチン製品を原料のルチン重量に対して約１２０％の収率で得た。
【００６１】本品は、実施例３の場合と同様に、水溶性の高いビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、安全性の高い天然型の黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、各種用途に利用できる。
【００６２】（実施例５）
＜α−グリコシル ルチン＞（１）α−グルコシダーゼ標品の調製マルトース４ｗ／ｖ％、リン酸１カリウム０．１ｗ／ｖ％、硝酸アンモニウム０．１ｗ／ｖ％、硫酸マグネシウム０．０５ｗ／ｖ％、塩化カリウム０．０５ｗ／ｖ％、ポリペプトン０．２ｗ／ｖ％、炭酸カルシウム１ｗ／ｖ％（別に乾熱滅菌して植菌時に無菌的に添加）および水からなる液体培地５００重量部にムコール ジャバニカス（Ｍｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ）ＩＦＯ ４５７０を温度３０℃で４４時間振盪培養した。培養終了後、菌糸体を採取し、その湿菌糸体４８重量部に対し、０．５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．３）に溶解した４Ｍ尿素液５００重量部を加え、３０℃で４０時間静置した後、遠心分離した。この上清を流水中で一夜透析した後、硫安０．９飽和とし、４℃で一夜放置して生成した塩析物を濾取し、０．０１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．３）５０重量部に懸濁溶解した後、遠心分離して上清を採取し、α−グルコシダーゼ標品とした。
【００６３】（２）α−グリコシル ルチンの調製ルチン５重量部を０．５規定カセイソーダ溶液４０重量部に加熱溶解し、これを５規定塩酸溶液でｐＨ９．５に調整し、別にデキストリン（ＤＥ３０）２０重量部を水１０重量部に加熱溶解し、次いで、これら溶液を混合して懸濁状のルチン高含有液とし、これに（１）の方法で調製したα−グルコシダーゼ標品１０重量部を加え、ｐＨ８．５に維持して攪拌しつつ５５℃で４０時間反応させた。反応液をペーパークロマトグラフィーで分析したところ、ルチンの約６０％がα−グリコシル ルチンに転換していた。反応液を実施例３と同様に精製し、濃縮、粉末化して粉末状α−グリコシル ルチン製品を原料のルチン重量に対して約１１０％の収率で得た。
【００６４】本品は、実施例３の場合と同様に、水溶性の高いビタミンＰ強化剤としてかりでなく、安全性の高い天然型の黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤などとして、各種用途に利用できる。
【００６５】（実施例６）
＜ハードキャンディー＞還元麦芽糖水飴（林原商事株式会社販売、登録商標マビット）１，５００重量部を加熱し、減圧下で水分約２％以下になるまで濃縮し、これにクエン酸１５重量部および実施例３の方法で得た粉末状α−グリコシル ルチン１重量部および少量のレモン香料を混和し、次いで常法に従って、成形、包装してハードキャンディーを得た。
【００６６】本品は、ビタミンＰを強化した黄色のレモンキャンディーであって、低う蝕性、低カロリーである。
【００６７】（実施例７）
＜フキの水煮＞フキを皮むきし、適当な長さに切断して、薄い食塩水に数時間浸し、これを実施例１の方法で得たシラップ状α−グリコシル ルチンと青色１号とを配合して調製した緑色着色料を含有する液で煮込んで、緑色の鮮かなフキの水煮を得た。
【００６８】本品は、各種和風料理の材料として色どりを添えるとともに、食物繊維としての生理効果をも発揮する。
【００６９】（実施例８）
＜求肥＞モチ種澱粉１重量部に水１．２重量部を混合し、加熱糊化しつつ、これに砂糖．５重量部、結晶性β−マルトース（林原株式会社製造、登録商標サンマルト）０．７重量部、水飴０．３重量部および実施例１の方法で得たシラップ状α−グリコシル ルチン０．２重量部を混和し、以後、常法に従って、成形、包装して求肥を製造した。
【００７０】本品は、風味、口当りとも良好な求肥で、きびだんご風の和菓子である。
【００７１】（実施例９）
＜混合甘味料＞はちみつ１００重量部、異性化糖５０重量部、黒砂糖２重量部および実施例５の方法で得た粉末状α−グリコシル ルチン１重量部を混合して混合甘味料を得た。
【００７２】本品はビタミンＰを強化した甘味料で健康食品として好適である。
【００７３】（実施例１０）
＜サンドクリーム＞結晶性α−マルトース（林原株式会社製造、登録商標ファイントース）１，２００重量部、ショートニング１，０００重量部、実施例４の方法で得た粉末状α−グリコシル ルチン１０重量部、レシチン１重量部、レモンオイル１重量部、バニラオイル１重量部を常法により混和してサンドクリームを製造した。
【００７４】本品は、ビタミンＰ強化、黄色着色したサンドクリームで、油脂の酸化が抑制され、口当り、溶け具合、風味とも良好である。
【００７５】（実施例１１）
＜錠剤＞Ｌ−アスコルビン酸２０重量部に結晶性β−マルトース１３重量部、コーンスターチ４重量部および実施例２方法で得た粉末状α−グルコシル ルチン３重量部を均一に混合した後、直径１２ｍｍ、２０Ｒ杵を用いて、打錠し錠剤を得た。
【００７６】本品は、Ｌ−アスコルビン酸とα−グルコシル ルチンとの複合ビタミン剤で、アスコルビン酸の安定性もよく、飲み易い錠剤である。
【００７７】（実施例１２）
＜カプセル剤＞酢酸カルシウム・一水塩１０重量部、Ｌ−乳酸マグネシウム・三水塩５０重量部、マルトース５７重量部、実施例２の方法で得たα−グルコシル ルチン２０重量部及びエイコサペンタエン酸２０％含有γ−シクロデキストリン包接化合物１２重量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒とした後、常法に従って、ゼラチンカプセルに封入して、一カプセル１５０ｍｇ入のカプセル剤を製造した。
【００７８】本品は、血中コレステロール低下剤、免疫賦活剤、美肌剤などとして、感受性疾患の予防剤、治療剤、健康増進用食品などとして有利に利用できる。
【００７９】（実施例１３）
＜軟膏＞酢酸ナトリウム・三水塩１重量部、ＤＬ−乳酸カルシウム４重量部をグリセリン１０重量部と均一に混合し、この混合物を、ワセリン５０重量部、木ロウ１０重量部、ラノリン１０重量部、ゴマ油１４．５重量部、実施例４の方法で得たα−グリコシル ルチン１重量部及びハッカ油０．５重量部の混合物に加えて、更に均一に混和して軟膏を製造した。
【００８０】本品は、日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして、更には外傷、火傷の治癒促進剤などとして有利に利用できる。
【００８１】（実施例１４）
＜注射剤＞実施例２の方法で得たα−グルコシル ルチンを水に溶解し、常法に従って、精製濾過してパイロゲンフリーとし、この溶液を２０ｍＬ容アンプルにα−グルコシル ルチン２００ｍｇになるように分注し、これを減圧乾燥し、封入して注射剤を製造した。
【００８２】本注射剤は、単体で、または、他のビタミン、ミネラルなどと混合して筋肉内又は静脈内に投与できる。また、本品は、低温貯蔵の必要もなく、使用に際しての生理食塩水などへの溶解性は極めて良好である。
【００８３】（実施例１５）
＜注射剤＞塩化ナトリウム６重量部、塩化カリウム０．３重量部、塩化カルシウム０．２重量部、乳酸ナトリウム３．１重量部、マルトース４５重量部及び実施例２の方法で得たα−グルコシル ルチン２重量部を水１，０００重量部に溶解し、常法に従って、精製濾過してパイロゲンフリーとし、この溶液を滅菌したプラスチック容器に２５０ｍＬずつ充填して注射剤を製造した。
【００８４】本品は、ビタミンＰ補給としてだけでなく、カロリー補給、ミネラル補給のための注射剤で、病中、病後の治療促進、回復促進などに有利に利用できる。
【００８５】（実施例１６）
＜経管栄養剤＞結晶性α−マルトース２０重量部、グリシン１．１重量部、グルタミン酸ナトリウム０．１８重量部、食塩１．２重量部、クエン酸１重量部、乳酸カルシウム０．４重量部、炭酸マグネシウム０．１重量部、実施例３の方法で得たα−グリコシル ルチン０．１重量部、チアミン０．０１重量部及びリボフラビン０．０１重量部からなる配合物を調製する。この配合物２４ｇずつをラミネートアルミ製小袋に充填し、ヒートシールして経管栄養剤を調製した。
【００８６】本経管栄養剤は、一袋を約３００乃至５００ｍＬの水に溶解し、経管方法により鼻腔、胃、腸などへの経口的又は非経口的栄養補給液としても有利に利用できる。
【００８７】（実施例１７）
＜浴用剤＞ＤＬ−乳酸ナトリウム２１重量部、ピルビン酸ナトリウム８重量部、実施例１の方法で得たα−グリコシル ルチン５重量部及びエタノール４０重量部を、精製水２６重量部及び着色料、香料の適量と混合し、浴用剤を製造した。
【００８８】本品は、美肌剤、色白剤として好適であり、入浴用の湯に１００乃至１０，０００倍に希釈して利用すればよい。本品は、入浴用の湯の場合と同様に、洗顔用水、化粧水などに希釈して利用することも有利に実施できる。
【００８９】（実施例１８）
＜乳液＞ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５重量部、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１重量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１重量部、ピルビン酸０．５重量部、ベヘニルアルコール０．５重量部、アボガド油１重量部、実施例３の方法で得たα−グリコシル ルチン１重量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸ナトリウム１重量部、１，３−ブチレングリコール５重量部、カルボキシビニルポリマー０．１重量部及び精製水８５．３重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合し乳液を製造した。
【００９０】本品は、日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして有利に利用できる。
【００９１】（実施例１９）
＜クリーム＞モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５重量部、実施例２の方法で得たα−グルコシル ルチン２重量部、流動パラフィン１重量部、トリオクタン酸グリセリル１０重量部及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２重量部、１，３−ブチレングリコール５重量部及び精製水６６重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合しクリームを製造した。
【００９２】本品は、日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして有利に利用できる。
【００９３】
【発明の効果】本文で述べたごとく、本発明は、α−グリコシル ルチンの製造に際して、高濃度のルチンと澱粉質とを含有するルチン高含有液に、糖転移酵素を作用させて糖転移反応を行うことにより、望ましくは、ルチンを高濃度懸濁状、または、アルカリ側ｐＨで溶解させた高濃度溶液状で含有せしめて糖転移反応を行うことにより、ルチンの仕込濃度を従来技術の約１０乃至２００倍にも高めて反応させることができ、α−グリコシル ルチンを容易に高濃度に生成し、室温下、中性付近の水溶液条件で、ルチン換算で約１．０ｗ／ｖ％以上もの高濃度溶液を生成しうることを見いだし、更に、この反応液の精製に際して、反応液を多孔性合成吸着剤と接触させてα−グリコシル ルチンを精製できることを見いだし、α−グリコシル ルチンの製造に要する使用水量、精製処理水量、エネルギーコストを大幅に低減できることとなり、その工業化の実現を極めて容易にするものである。
【００９４】このようにして得られるα−グリコシル ルチンは、水溶性良好、耐光性・安定性良好、体内の酵素によりルチンとグルコースとに加水分解されてルチン本来の生理活性を発揮するなどの特長を有しており、安全性の高い天然型のビタミンＰ強化剤としてばかりでなく、黄色着色剤、抗酸化剤、安定剤、品質改良剤、予防剤、治療剤、紫外線吸収剤、劣化防止剤などとして、飲食物、嗜好物、飼料、餌料、抗感受性疾患剤、美肌剤、色白剤など化粧品、更には、プラスチック製品などに有利に利用される。
【００９５】従って、飲食品、化粧品、医薬品、プラスチック産業に与える本発明の工業的意義は極めて大きい。
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| 【出願人】 |
【識別番号】０００１５５９０８
【氏名又は名称】株式会社林原生物化学研究所
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| 【出願日】 |
平成１年６月６日（１９８９．６．６） |
| 【代理人】 |
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| 【公開番号】 |
特開２０００−６０４８４（Ｐ２０００−６０４８４Ａ） |
| 【公開日】 |
平成１２年２月２９日（２０００．２．２９） |
| 【出願番号】 |
特願平１１−１０１４３９ |
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