トップ :: A 生活必需品 :: A01 農業;林業;畜産;狩猟;捕獲;漁業




【発明の名称】 植物ウイルスの接種方法
【発明者】 【氏名】佐藤 貞一

【氏名】小湊 正幸

【氏名】佐山 春樹

【氏名】石村 英二
【要約】 【課題】碁盤格子状に小さな鉢「セル」が数十〜数百連結した箱「トレイ」の該セルに、小量の床土（培養土）を入れ、播種機により播種を行い、成形苗の生産を行うトレイ育苗法において、該苗の根生葉が重なり合って、地面に平たく放射状に拡がった苗「ロゼット状態の苗」などに、極めて簡単に植物ウイルスを１００％感染させることが可能な、植物ウイルス接種法を提供する。

【解決手段】植物体の表面にブラシを当接し、該植物体の表面を被傷させ、その前または後において植物体の表面に植物ウイルス液を接触させる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】植物体の表面にブラシを当接し、該表面を被傷させることを特徴とする植物ウイルスの接種方法。
【請求項２】植物体の表面にブラシを当接し、該表面を被傷させ、その前または後において該表面に植物ウイルス液を接触させることを特徴とする植物ウイルスの接種方法。
【請求項３】植物体の表面に研磨剤の付着したブラシを当接し、該表面を被傷させ、その前または後において該表面に植物ウイルス液を接触させることを特徴とする植物ウイルスの接種方法。
【請求項４】外径が０．０５〜０．２５ｍｍである線状材を基面上に多数植え込んだブラシを用いる請求項１〜３いずれかに記載の植物ウイルスの接種方法。
【請求項５】植物体が、ロゼット状態の野菜苗、花卉苗または果樹苗である請求項１〜３いずれかに記載の植物ウイルスの接種方法。
【請求項６】植物ウイルス液として、着色料を添加した植物ウイルス液を用いる請求項１〜５いずれかに記載の植物ウイルスの接種方法。
【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、碁盤格子状に小さな鉢（以下「セル」という）が数十〜数百連結した箱（以下「トレイ」という）の該セルに、小量（八〜九分目）の床土（培養土）を入れ、播種機により播種を行い、成形苗の生産を行うトレイ育苗法において、根生葉が重なり合って、地面に平たく放射状に拡がった苗（以下「ロゼット状態の苗」という）に、極めて簡単に植物ウイルスを１００％感染させることが可能な、植物ウイルスの接種方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】本発明者らは、植物体の表面に植物ウイルス液を噴霧した後、研磨剤を付着させたロ−ラーを圧接回転せしめ、該表面を被傷せしめると共に該植物体に植物ウイルスを接種する方法を開発し、特許出願した（特開平４−３３０００５）。
【０００３】この方法によれば、綿棒、指、ガラス棒による接種法と比べ、接種に要する時間が著しく短縮され、またスプレーガンによる接種法に比べ、少ない植物ウイルス液（以下「接種液」ということがある）で高い感染率を得ることができる利点を有する。
【０００４】しかしながら、この方法は、上記トレイ育苗法において、育苗途中の植物体の表面に植物ウイルス液を噴霧した後、該表面に対し、図４に示すように、把手１３、柄１２およびロ−ラ１１からなり、柄１２の一端部に把手１３を連結し、また柄１２の他端部をロ−ラ１１の軸受けとし、該軸受けにロ−ラ１１を回転自在に連結した植物ウイルス接種器の該ロ−ラ１１を、圧接回転しても、苗トレイ４の上端部とセル１４の床土表面との間隔が大きい状態で生育する植物体に対しては、ロ−ラ１１の外周面が当接できないため、被傷せしめることができず、植物ウイルスの感染率が低くなる欠点を有していた。
【０００５】そして、根生葉が重なり合って、地面に平たく放射状に拡がる性質を有する苗（ロゼット状態の苗）は一般に育苗日数が比較的多くかかることから、灌水回数が多くなり、それにつれて苗トレイ４の各セル１４の床土１５表面がえぐりとられ、苗トレイ４の上端部と床土１５表面との間隔が大きくなり、育苗日数が多くなるにつれて円筒形ロ−ラ１１でセル穴１４内部の苗６ａの被傷作業が行いにくくなる。また、この方法は凹凸のある地面に植えた植物体に対して被傷せしめることが容易でない欠点を有する。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、凹凸のある地面に植えた植物体、特にトレイ育苗法により育苗されたロゼット状態の苗、に対して極めて簡単に被傷せしめ、植物ウイルスを１００％感染させることが可能な、植物ウイルスの接種方法を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、遂に本発明を完成した。
【０００８】すなわち本発明は、（１）植物体の表面にブラシを当接し、該表面を被傷させることを特徴とする植物ウイルスの接種方法であり、（２）また本発明は、植物体の表面にブラシを当接し、該表面を被傷させ、その前または後において該表面に植物ウイルス液を接触させることを特徴とする植物ウイルスの接種方法であり、（３）また本発明は、植物体の表面に研磨剤の付着したブラシを当接し、該表面を被傷させ、その前または後において該表面に植物ウイルス液を接触させることを特徴とする植物ウイルスの接種方法である。
【０００９】以下、本発明について詳細に説明する。
【００１０】本発明の対象とする植物としては、任意の植物が挙げられるが、弱毒ウイルス接種によりウイルス防除効果が可能な作物、例えばトマト、ピ−マン、メロン、テンサイ、カボチャ、タバコ、ホウレン草、レタスなどの野菜類、リンドウ、ペチュニア、ベニバナ、キンギョソウ、百日草などの花卉類が好ましい。
【００１１】また、本発明に用いるブラシとしては、把手あるいは柄のついた基面上に柔軟性があって弾力性に富む線条材を植え込んだものであれば任意のものが採用でき、例えば、塗装用ブラシ、歯磨き用ブラシ、洋服用ブラシ、たわし、あるいは柔軟性と弾力性に富む繊維状金属線を使用した剣山などが挙げられる。これらは、地床育苗、トレイ育苗など、それぞれの苗床の大きさ、形、面積などに応じて複数個連結使用することが好ましい。ブラシを複数連結して使用する場合は、同一の基面上に縦及び／又は横方向に必要個数固定し、各線状材の先端を揃えることが好ましい。
【００１２】また、本発明のブラシに用いられる線状材は、外径０．０５〜０．２５ｍｍで、長さ１〜５ｃｍのものが好ましい。
【００１３】植物体の表面に上記ブラシを当接すると、極めて簡単に該植物体の表面を被傷させることが可能となる。当接は、植物体の表面に対して当てるだけでもよいが、当てた状態で擦る手段がより好ましい。当接は、１回でも可能であるが、２〜４回行うことが該植物体の表面を完全に被傷させる上で好ましい。
【００１４】また本発明は、植物体の表面に研磨剤の付着したブラシを当接するときは、該植物体の表面に対し、より細かな傷を多量に形成できると共にウイルスの接種感染率を増大できるので好ましい。
【００１５】研磨材としては、けいそう土（セライト）、ベントナイト、５００〜６００メッシュのカ−ボランダムなどが挙げられるが、特にセライトは軽く撹拌するだけで液に均一に分散し、また電動スプレ−を用いても噴口が詰まらないので好ましい。これらの粒径は５〜３５ミクロンが好ましく、また添加量は、液に１〜３重量％加える。
【００１６】本発明を実施するには、植物体の表面にブラシを当接し、該表面を被傷させ、その前または後において該表面に植物ウイルス液を接触させる。
【００１７】発明に使用される植物ウイルスとしては、植物特に作物に感染すると壊疽、モザイク、糸葉、矮化、黄変などの激しいウイルス症状を起こし収穫量が大幅に減る原因となるキュウリモザイクウイルス、その他トマト栽培におけるタバコモザイクウイルス、キユウリの栽培におけるキユウリ緑斑モザイクウイルス、柑橘類の栽培における柑橘トリステザウイルス（文献：亀谷満朗、１９８９「農業および園芸」６４巻、第１５９〜１６４頁、および栃原比呂志、１９８６「農業技術」４１巻（１１）、第１〜６頁参照）、ダイズモザイクウイルス、タバコネクロシスウイルス、タバコ茎えそウイルス、タバコ輪点ウイルス、タバコ矮化ウイルス、アルファルファモザイクウイルス、トマト黄化えそウイルス、ジャガイモＹウイルス、および上記各ウイルスの弱毒ウイルスなどが挙げられる。
【００１８】上記植物ウイルスの弱毒ウイルスを、予め植物（苗）に接種感染しておくと、ウイルスの感染によって発生する上記植物ウイルス症状の被害を防ぐことができる利点を有する。
【００１９】植物ウイルスを接種する時期は、目的とする植物の生育中の適宜な時期でよいが、弱毒ウイルスを利用してウイルス症状の被害を防ぐことが目的であれば、外界圃場に植える前の幼苗の時期が好ましく、とくに鉢上げ前のトレイでの育苗時期が集約的、効率的に接種できるので好ましい。育苗トレイでの接種適期としては、（１）トマトなら子葉〜本葉２枚、（２）ピ−マンは子葉〜本葉２枚、（３）メロン、キュウリは子葉〜本葉１枚、（４）草丈、節間が短く苗がロゼット状態となる作物のペチュニア、トルコギキョウ、タバコでは４葉〜６葉、（５）リンドウは６葉〜８葉の頃が挙げられる。
【００２０】植物ウイルス液は以下の方法により調製することが好ましい。植物ウイルスの感染葉の搾汁液をガ−ゼで濾過し得られた液を滅菌水または適当な緩衝液（例えば、中性付近の０．１Ｍリン酸緩衝液）により、例えば感染葉の重量に対して５〜５０倍希釈して調製するか、或いは常法により得られた純化ウイルス液（例えばキュウリモザイクウイルス液）を滅菌水または適当な緩衝液により適宜の濃度、例えばウイルス濃度２５〜５００μｇ／ｍｌに希釈して調製する。
【００２１】上記植物ウイルス液に、必要によりさらに着色料を添加して懸濁する。着色料を添加すると、植物体の表面に植物ウイルス液を接触させた後、該ウイルス液が付着したか、否かの識別が容易となる利点を有する。着色料としては、合成着色料、天然着色料など任意の着色料が挙げられるが、食用植物の場合は、食品用着色料を用いることが安全性の面で好ましく、またその色は青色もしくは赤色が植物体の表面の色（緑色）に対して付着の確認が容易となるので好ましい。着色料の濃度（希釈濃度）は例えば合成着色料を使用するなら４００〜８００倍に薄める。
【００２２】植物ウイルス液を接触させる手段としては、噴霧、浸漬、塗布、散水など任意の方法が挙げられるが、小量均一噴霧で接種効果が高い噴霧手段がいちばん好ましい。噴霧手段としては、簡易ハンドスプレ−、動力噴霧機（例えば小型電動塗装噴霧機）、スプレ−ガンなどが挙げられる。但し、簡易ハンドスプレ−を用いる場合、研磨材により噴霧口が詰まる場合があるので注意を要する。小型電動塗装噴霧機は吐出量が５０〜５００ｍｌ／分程度であることが少量均一散布を行なううえで好ましい。接種液の散布量は、トレイ育苗の場合（縦３０、横６０ｃｍのトレイの場合）は５〜１５ｍｌ、地床育苗の場合は、３．３ｍ2当り１００〜３００ｍｌが好ましい。
【００２３】以下添付された図に従って、本発明をより具体的に説明する。図１は、植物体（ロゼット状態の苗６ａ）の表面に植物ウイルス液５を小型電動塗装噴霧器２により付着させる状態を示し、また図２は該植物体の表面にブラシ８を当接し、該植物体の表面を被傷させる状態を示す。ブラシ８の右側の苗は被傷した状態を示している。
【００２４】図１において、植物ウイルス液５を入れた小型電動塗装噴霧機２（例えば日本ワグナ−・スプレ−テック社製ミニペインタ−など）を用いて苗トレイ４のロゼット状態の苗６ａの表面に、予め着色料および研磨材を添加使用した植物ウイルス液５を噴霧し着色具合を見ながら満遍なく付着させる。
【００２５】次に図２に示すように、苗トレイ４の苗６ａを、研磨材が付着したブラシ８を縦方向と横方向に数回擦る。
【００２６】図３は、本発明の植物ウイルスの接種方法の概略説明図で、苗トレイ４のロゼット状態の苗６ａをブラシ８の毛１０で、各セル穴１４の内部の茎葉の隅々にいたるまで擦って接種していることを示す。ブラシ８のそれぞれの毛１０がもつ弾力性、柔軟性、自由自在な動きにより、各セル穴１４から苗トレイ４の表面にはみでない苗６ａの地際部の茎葉に至るまで、苗全体の茎葉に噴霧付着した植物ウイルス液を満遍なく擦り付けて接種することができる。また、苗トレイ４表面と床土１５表面との間隔（凹凸差）が大きい場合においても、ブラシ８の毛１０でセル穴１４内部の苗６ａを擦ることは容易である。図３において、９はブラシの把手（または柄）であり離れている苗に接種するときに手で掴んで用いる。
【００２７】
【実施例】以下、実施例を示して本発明についてさらに詳細に説明する。
【００２８】実施例１（１）弱毒ウイルス接種対象となる作物の苗の育成例先ず、トマト、ピ−マン、ペチュニア、タバコ用培養土としてホ−ネン社製の「セルトップミックス」とサカタのタネ社製の「ス−パ−ミックスＡ」を１：１に混合して作成し、リンドウ用培養土として細粒鹿沼土、細粒赤玉土、ピ−トモスを１：１：１に混合して作成し、それぞれの作物の苗に応じたヤンマ−農機社製の二種類の苗トレイ「ヤンマ−野菜トレイ２５−２００（セルの大きさ２５ｍｍ角×深さ４５ｍｍ）、ヤンマ−野菜トレイ３０−１２８（セルの大きさ３０ｍｍ角×深さ４５ｍｍ）」に充填し、それぞれの作物の種を播種した。発芽させたあと、作物の苗に応じた適当な温度と採光条件のもと液肥を注入したり灌水を行う通常の育苗管理を行い、それぞれの苗を弱毒ウイルスを接種する生育適期まで育てた。接種適期は発芽が揃って生育して根鉢になって葉が数枚になるころであり、トレイ苗として出荷する５〜１０日前が適当である。この接種時期の苗について生育を調べて苗が本発明の接種に適合するかを調べた結果を示す。
【００２９】
表１ 育苗 育苗 調査 ＊＊ 草 丈 作物 トレイ 日数 株数 葉 数 地際部上 トレイ表面上 （穴） （日） （株） （枚） （ｃｍ） （ｃｍ）
トマト ２００ ２０ １０ １．５ ５．２ ４．７＊（桃太郎エイト）
ピ−マン ２００ ３０ １０ １．２ ３．６ ３．０ （土佐かつら）
ペチュニア １２８ ４０ ２１ ６．７ ２．０ １．２ （タイタンパレ−ド）
タバコ ２００ ４０ １０ ５．７ １．５ ０．９（キサンチｎｃ）
リンドウ １２８ ７５ １４ ７．６ １．１ ０．４（エゾリンドウ系）
＊（）は播種した種の品種名、商品名などを示す。
＊＊葉数はトマト、ピ−マンは子葉除いた葉数を示し、リンドウは対葉であるが１枚ずつの葉数を示す。
【００３０】表１の結果から、トマトとピ−マンの苗はセル穴内部から苗トレイ表面上に突き出て子葉と本葉は苗トレイ表面約３ｃｍ以上にあり、従来法の植物ウイルス接種方法（特開平４−３３０００５）の円筒形ロ−ラによる擦り付け接種を行う場合、苗トレイ表面上で充分に苗の茎葉を擦ることができる。しかるに、苗がロゼット状態となるペチュニア、タバコ、リンドウはトレイ表面上の草丈が０．４〜１．２ｃｍでかなり低くく草丈の約半分はセル穴内部にあり、節間は極端に短く、葉数は折り重なって枚数が多く、従来の接種方法によるロ−ラではセル穴内部の茎葉に至るまで充分な擦り付けを行って接種することができない。
【００３１】（２）ロゼット状態の苗における弱毒ウイルス接種結果の比較キュウリモザイクウイルスの弱毒ウイルス（日本デルモンテ社製、「ＮＤＭ−１」）の純化液をリン酸緩衝液に濃度１００μｇ／ｍｌで希釈し、着色料（合成着色料、ブリリアントブル−ＦＣＦ）を５００倍で加えて接種液を作成した。１２８穴トレイで４０日育苗した６〜７枚期のペチュニアに、本発明では接種液を簡易ハンドスプレ−で苗に噴霧し、茎葉が青色に着色する具合を見ながら少量均一噴霧を行い、その噴霧直後、けいそう土（セライト）を毛先に付着させたブラシ（富士ブラシ製造販売社製、ペンキ用刷毛、毛の長さ３．６ｃｍ、ブラシ幅７ｃｍ、ブラシの毛の外径約０．１ｍｍ、毛の素材は山羊）を四つ並列に並べて、図３のごとく作成したブラシ（ブラシ幅３０ｃｍ）で縦方向と横方法にセル穴内部の茎葉に至るまで苗全体の茎葉を満遍なく計３回擦った。
【００３２】
【比較例】比較例１上記実施例１と同様に接種液を噴霧した直後、けいそう土（セライト）が付着したロ−ラ（ニトムズ社製 コロコロ、ロ−ラの長さ１６ｃｍ）で苗トレイの表面上に突き出ている苗の茎葉を計３回擦った。
【００３３】
【対照例】対照例１上記実施例１で得られる接種液を噴霧して、擦り操作は一切行わなかった。
【００３４】対照例２上記実施例１で得られる接種液にけいそう土（セライト）を２％混合し、その液に綿棒（ジョンソン・エンド・ジョンソン社製）を浸し、苗の葉の裏にあて板を差し当てて支えとし、それぞれ株の葉を６枚ずつ綿棒で擦り、綿棒は８株の接種を終える毎に交換した。以上の接種操作を行った８日目に、それぞれの１２８穴トレイから調査株をランダムに取り、弱毒ウイルスを検出した。
【００３５】上記実施例１、比較例、対照例１及び対照例２の結果をまとめて表２に示す。
【００３６】
表２ トレイ当り 調査 接種損傷 弱毒ウイルス検出 擦り器具 接種液量 接種時間 株数 株発生数＊検出株 感染率 （ｍｌ） （分） （株） （株） （株） （％）
本発明 ブラシ ８ ０．７５ １３ ０ １３ １００比較例 ロ−ラ ８ １．０８ １３ ４ １１ ８５対照例１ 無 し ８ ０．２１ １０ ０ ０ ０対照例２ 綿棒 １９ ２５．３３ １０ ０ １０ １００ ＊弱毒ウイルスの検出は接種後８日目に、それぞれの株から６枚の葉の葉片を取り、ビニ−ル小袋に入れて揉み潰し、燐酸緩衝液を７００μｌ／袋、注入し、セライトを入れて混ぜ、その液に綿棒を浸したあと直ちにササゲ（品種：黒種３尺）の初生葉に擦り付け、斑点が発生した場合ウイルスの検出とし、斑点が発生しない場合無検出とした。
数字はそのウイルス検出結果を示す。
【００３７】表２の結果から、先ず比較例のロ−ラによる接種は、育苗トレイ表面からはみでた苗の葉がセル穴の角の先端とロ−ラに挟まり、ロ−ラの回転により葉が少し裂ける程度の擦り傷が３１％（４株／１３株中）発生した。また、苗トレイのセル穴内部にある茎葉にはロ−ラは触れず、擦り操作が完全でなく感染率は８５％に止まった。対照例１の接種液の噴霧のみによる接種では、苗を擦る操作が無いので全く感染させることができなかった。対照例２では接種液を株当り六枚ずつ満遍なく綿棒で擦るので、接種液を多く必要とし、また接種時間を大幅に必要とした。これに対して本発明は、苗に付着した少量の噴霧液を１２８穴トレイの縦幅（約３０ｃｍ）に応じたブラシで単純に数回擦るだけなので接種時間が少なく、育苗トレイの凹凸に対してブラシの柔軟性のある毛先の自由自在な動きによりセル穴内部にある茎葉に至るまで十分に擦ることができ、苗の擦り傷は極めて軽微で、接種損傷株発生数は無く、弱毒ウイルスを１００％感染させることができた。従って、本発明は、少量の接種液量で、簡単な器具と簡便な方法により、迅速に、しかも集約的、効率的に擦り付け接種ができ、トレイ苗を満遍なく擦ることができ完全に植物ウイルスを感染させることができ、さらにブラシの柔軟性のある毛先の動きにより苗に損傷を与えずに接種できる。
【００３８】（３）弱毒ウイルス接種株の葉の部位別ウイルス増殖比較弱毒ウイルス接種後８日目の本発明と比較例のペチュニアを、上位葉、中位葉、下位葉にそれぞれ二枚ずつふり分け、その二枚ずつの葉をそれぞれ小袋に入れて揉み潰し、燐酸緩衝液を注入してセライトを混ぜ、その液に綿棒を浸したあと直ちにササゲ（品種：黒種３尺）の初生葉に一枚ずつに擦り付けて接種し、その四日後、それぞれの初生葉に斑点が発生した数を数え、本発明と比較例との弱毒ウイルス接種株の葉の部位別ウイルス増殖を、ペチュニアの株当りササゲ斑点発生数で比較した。表３に本発明と比較例の結果を示す。
【００３９】
表３ ペチュニアの葉のササゲ斑点発生数 調査株数 下位葉 中位葉 上位葉 合 計 （株） （ケ） （ケ） （ケ） （ケ）
本発明 １０ １９．０ ２２．８ ２０．０ ６１．８ 比較例 １０ １．６ １３．７ １６．１ ３１．４【００４０】表３より、ロ−ラを用いて接種した比較例のササゲの斑点発生数は、下位葉が少なく、中位葉から上位葉になるにつれて斑点の発生が多くなった。これはロ−ラでは苗トレイの凹部分のセル穴内部の茎葉に至まで擦ることができず、苗の下部分の葉は弱毒ウイルスが増殖しずらかったことを示す。これに対して、ブラシを用いて接種した本発明では、苗トレイの凹凸に対してブラシの柔軟性のある毛先の自由自在な動きによりセル穴内部にある茎葉を十分に擦り、下位葉、中位葉、上位葉のいずれからもほぼ同等の斑点が発生し、また、ペチュニア株当りササゲ斑点数の合計は比較例の倍となり、弱毒ウイルスがペチュニア体内に早く浸透して増殖したことを示す。
【００４１】
【本発明の効果】本発明は、少量の植物ウイルス液と、簡易噴霧具やブラシなどの簡単な器具を用いて、苗に均一噴霧したあと数回苗を擦るだけの簡便な方法により、迅速に、効率的かつ集約的に大量の苗の接種作業を短時間に行える効果を有する。また本発明は、トマト、ピ−マンのような育苗トレイ表面に葉が完全に突き出る作物のほか、ペチュニア、トルコキキョウ、タバコ、リンドウなどの節間が極度に短く葉が重なってロゼット状態になり育苗トレイの表面に葉が完全に出ていない苗においても、ブラシの柔軟性のある細い毛先の自由自在な動きにより、育苗トレイ表面の苗の先端の葉から、セル穴内部の地際部の茎葉に至るまで十分に擦って接種することができる効果を有する。また苗を傷付けることなく接種でき、そのうえ植物ウイルスを早く植物体内に浸透させ、ほぼ完璧に感染させることできる効果も合わせて奏するものである。また本発明は平坦な地面に植えた植物体に対して植物ウイルスを接種する場合ばかりでなく、凹凸のある地面に植えた植物体に対しての接種ムラなく、植物ウイルスを接種し感染させることができる。
【出願人】 【識別番号】０００１０４５５９
【氏名又は名称】日本デルモンテ株式会社
【出願日】 平成１１年１月１２日（１９９９．１．１２）
【代理人】
【公開番号】 特開２０００−２０１５３５（Ｐ２０００−２０１５３５Ａ）
【公開日】 平成１２年７月２５日（２０００．７．２５）
【出願番号】 特願平１１−４８４２