抗アレルギー剤

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【発明の名称】	抗アレルギー剤
【発明者】	【氏名】谷政秀【氏名】舘野浩一【氏名】鮫ケ井靖雄【氏名】濱野厚【氏名】丹治藤治
【要約】	【課題】毒性や副作用が弱く、優れた抗アレルギー効果を発揮する抗アレルギー剤を提供すること。【解決手段】ロジオラ属に属し、抗アレルギー性物質をその植物体内に含む植物の植物体自体又はその抽出物を有効成分として含有する抗アレルギー剤を提供した。

【特許請求の範囲】
【請求項１】ロジオラ属に属し、抗アレルギー性物質をその植物体内に含む植物の植物体自体又はその抽出物を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
【請求項２】前記有効成分は、前記植物体を水、エタノール又はこれらの混合物で抽出することにより得られたものである請求項１記載の抗アレルギー剤。
【請求項３】前記植物は、ロジオラ・サカリネンシスである請求項１又は２記載の抗アレルギー剤。

【発明の詳細な説明】【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、抗アレルギー剤に関する。本発明の抗アレルギー剤は、抗アレルギー性食品等の食品、化粧品やアトピー性皮膚炎用のクリーム等の医薬部外品、医薬品及びアレルギー性の下痢などを予防する配合飼料用添加物等に利用可能である。
【０００２】
【従来の技術】現在、アレルギーを予防又は治療する手段としては、医薬品分野においては、ステロイド系のホルモン剤や非ステロイド系の多くの合成医薬品が開発されている。また、食品や飼料においては、アレルギーの原因となるアレルゲンの除去に関する開発、すなわち脱アレルゲン化の方向で研究が進んでいる。
【０００３】医薬品においては、薬剤の長期投与による副作用等の問題があり、食品あるいは飼料においては、あらゆる食品、飼料原料について脱アレルゲン化することは不可能であり、たとえ開発されたとしても、味覚上の問題や製品コストが高くなる等の欠点があった。
【０００４】さらに、魚油に含まれるＥＰＡやＤＨＡ等の不飽和脂肪酸の抗アレルギー効果や抗炎症効果が知られており、それらの摂取によってアレルギー体質を変えられる等の報告があるが、そのためには日常的に摂取することが必要であり、短期的に効果をもたらす成分との適切な組合せ及びその素材が求められていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的は、毒性や副作用が弱く、優れた抗アレルギー効果を発揮する抗アレルギー剤を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本願発明者らは、鋭意研究の結果、ロジオラ属植物が、優れた抗アレルギー効果を発揮する抗アレルギー性物質を植物体内に含むことを見出し、本発明を完成した。すなわち、本発明は、ロジオラ属に属し、抗アレルギー性物質をその植物体内に含む植物の植物体自体又はその抽出物を有効成分として含有する抗アレルギー剤を提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明に用いられるロジオラ属植物の好ましい例として、ロジオラ・サカリネンシス（Rhodiola sachalinensis）及びロジオラ・イシダエ（Rhodiola ishidae)等を挙げることができるが、これに限定されるものではない。ロジオラ・サカリネンシスは紅景天と呼ばれ、双子葉植物である景天科（べんけいそう科、Crassulaceae）に属する長年生草本植物である。紅景天の植生は、海抜１８００ｍから２３００ｍの山岳地帯であり、主にアジア（中国、日本、朝鮮北部）、ヨーロッパ及び北米に分布する。
【０００８】本発明においては、ロジオラ属植物の根、根茎、茎及び葉等、いずれの部位をも利用することができるが、好ましくは根又は根茎を利用する。また、根又は根茎等の細胞を常法によりカルス培養した培養細胞も利用することができる。
【０００９】本発明の抗アレルギー剤は、このような根、根茎、茎及び葉等や培養細胞等の植物体そのものであってもよいし、これから抽出した抽出物であってもよい。ロジオラ属植物に含まれる抗アレルギー性物質は、水系溶媒や水溶性の有機溶媒により植物体から抽出することができる。これらの溶媒としては、水、低級脂肪族アルコール（メタノール、エタノール、プロパノール）及びこれらの混合物が好ましい。また、酸やアルカリの水溶液も利用可能である。これらのうち、水、エタノール及びこれらの混合物が特に好ましい。なお、水又は低濃度のエタノール水溶液で抽出を行う場合には８０℃～沸点程度の加熱下に行う方が効率良く抽出を行うことができる。エタノール又は高濃度のエタノール水溶液（エタノール濃度６０％以上）の場合には、室温でも効率良く抽出を行うことができるし、室温から沸点までの任意の温度で抽出を行うこともできる。抽出時間は、用いる溶媒や抽出温度に応じて適宜選択されるが、通常、３時間～４８時間程度である。
【００１０】植物体そのものを用いる場合には、植物体を乾燥又は凍結乾燥したものを粉砕したものが飼料や各種組成物に添加しやすいので好ましい。また、抽出液は、そのまま製品に添加するか又は減圧乾燥法や凍結乾燥法等の既知の乾燥法により脱水濃縮し、乾燥物として利用することが飼料や各種組成物に添加しやすいので好ましい。乾燥時、乾燥物の形状を良くするためデキストリン等の賦形剤を加えることも可能であり、利用形態を考慮した既知の工程での製造が可能である。
【００１１】本発明の抗アレルギー剤は、経口投与、非経口投与のいずれにおいても効果を発揮する。非経口投与としては、皮膚に塗布する等の局所投与、静脈注射、皮下注射、筋肉注射、経腸投与、点眼、経鼻投与、腹腔内投与等を挙げることができる。
【００１２】本発明の抗アレルギー剤の有効投与量は、症状や使用目的に応じて適宜選択されるが、エタノール抽出物の乾燥物として、体重１ｋｇ、１日当り、経口投与の場合には、通常、０．１ｇ～２ｇ程度であり、非経口投与の場合には、１０ｍｇ～２５０ｍｇ程度である。
【００１３】本発明の抗アレルギー剤は、医薬品として用いる場合には、常法に従い、他の賦形剤と混合して所望の形態に製剤することができる。また、化粧品やアトピー性皮膚炎等に対するクリーム等の医薬部外品に添加したり、食品や配合飼料に添加することができる。化粧品やクリーム等に添加する場合の濃度は、特に限定されないが、エタノール抽出物の乾燥物として、通常、製品組成物１ｇ当り１０ｍｇ～５０ｍｇ程度が好ましい。また、食品や配合飼料に添加する場合には、エタノール抽出物の乾燥物として、通常、食品又は飼料１ｋｇ当り２ｇ～２０ｇ程度が好ましい。
【００１４】本発明の抗アレルギー剤は、下記実施例において具体的に示されるように、抗原刺激によるラット肥満細胞からのロイコトリエン（ＬＴＢ₄ ）やヒスタミンの放出抑制とプロスタグランジンに関与する炎症反応に対する著しい抑制効果を有する。また、下記実施例において具体的に記載されるように、本発明の抗アレルギー剤は、急性毒性が経口投与の場合は皆無であり、腹腔内投与の場合でも非常に低い。また、ステロイド剤等とは異なり、天然物であるので安全性は高い。
【００１５】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【００１６】実施例１抽出乾燥物の調製紅景天の根茎を乾燥し粉末としたサンプル１００ｇに、６倍量の７０％エタノールを加え、室温で２４時間抽出し、抽出液をろ過した後、その残渣に４倍量の７０％エタノールを加えさらに２４時間抽出し、抽出液をろ過し、さらにこの操作を繰返して３度の抽出操作を行った。３度の抽出濾液は混合し、減圧濃縮後、７０℃で減圧乾燥することにより１５ｇの乾燥物が得られた。この抽出乾燥物を抗アレルギー及び抗炎症試験に用いた。
【００１７】実施例２抽出乾燥物の調製実施例１と同じ紅景天の乾燥粉末１００ｇに、６倍量の９９．５％エタノールを加え、５０℃で振盪しながら１２時間抽出し、抽出液をろ過後、その残渣について同様な操作を行い、２度の抽出濾液を混合し、減圧濃縮後、凍結乾燥して乾燥物１６．５ｇを得た。
【００１８】実施例３抽出乾燥物の溶解性実施例１で得られた抽出乾燥物の各々０．５ｇを１０倍量の各種溶媒に溶解し、その溶解性を試験した。結果を下記表１に示す。なお、１０倍量の水に溶解した時のｐＨは４．２であった。
【００１９】
【表１】

【００２０】実施例４抗アレルギー効果抗アレルギー効果を確認する手段の１つとして、ラットの肥満細胞からのロイコトリエン（ＬＴＢ₄ ）やヒスタミン等の放出抑制効果を見る方法がある。そこで、実施例１で得られた紅景天の抽出乾燥物の抗アレルギー効果を確認するため、次の試験を行った。
【００２１】すなわち、実施例１で得られた紅景天の抽出乾燥物の１０％リン酸緩衝液（ＰＢＳ）を１２１℃、１５分間オートクレーブにて加熱後、遠心分離し、その上清をサンプルとした。ラットは、７週齢Splague Dawry 系雄性ラットを使用し、その腹腔内より肥満細胞を含む腹腔内細胞（以下、「ＰＥＣ」）を得て、Ｃａイオノフォアーの刺激によるＬＴＢ₄ 及びヒスタミンの放出に対する上記抽出サンプルの抑制効果を見た。この試験は具体的には次のように行った。
【００２２】すなわち、ラットをエーテル麻酔で致死させ、その腹腔内にTyrode液３０ｍｌを注入し、腹部を２分間マッサージした後、開腹し、Tyrode液を回収した。回収液は２００ｇ、５分間遠心し上清除去後、以下の実験にあわせTyrode液で細胞数を調製し、以下の実験に用いた。
【００２３】ＬＴＢ₄ の測定は、Tyrode液８５４μｌ、紅景天抽出液（１０％ＰＢＳ抽出液）１０μｌ、５０μＭ－Ｃａイオノフォア液１００μｌ、２５ｍＭ－ＣａＣｌ₂液３６μｌを混合したものを反応液として用意した。
【００２４】あらかじめ用意した２×１０⁶ 細胞／ｍｌのＰＥＣ１ｍｌを２００ｇ、５分間遠心し、上清除去後、反応液５０μｌを加え３７℃、２０分間培養した。培養後、アセトニトリル・メタノール混合液（６：５）５０μｌを添加し、反応を停止した。反応停止後、12,000 rpmで１０分間遠心分離して上清を得、ＨＰＬＣによるＬＴＢ₄ の定量に供した。
【００２５】ヒスタミンは、Tyrode液で１０⁶ 細胞／ｍｌに調製したＰＥＣ１ｍｌ、紅景天抽出物（１０％ＰＢＳ抽出液）２５０μｌ、５０μＭ－Ｃａイオノフォア２５０μｌ、２５ｍＭのＣａＣｌ₂ 液９０μｌ、及びTyrode液９１０μｌを混合し、３７℃、２０分間培養後、氷冷して反応を停止した。反応停止後、４℃、２００ｇ、５分間遠心し、その上清を蛍光分析法によるヒスタミンの定量に供した。
【００２６】結果を下記表２に示す。表２に示されるように、紅景天の抽出サンプルで処理したＰＥＣからのＬＴＢ₄ 及びヒスタミンの放出量は、対照（生理食塩水）と比べてＬＴＢ₄ では２％以下に、ヒスタミンでは約１０％以下に低下し、これらのアレルギー作用物質のＰＥＣからの放出を著しく抑制することが確認された。
【００２７】
【表２】

＊：対照区に対して有意差（P<0.05) 有り【００２８】実施例５抗炎症効果ラット肥満細胞を用いた実験系で、紅景天の抽出乾燥物がアレルギー反応を惹起するＬＴＢ₄ やヒスタミンの肥満細胞からの放出を抑制することが実施例４で認められた。そこで、アレルゲンによる実験的炎症反応を抑制するかどうかを確認するため、次の試験を行った。
【００２９】すなわち、実施例１で得られた紅景天の抽出乾燥物を１０％含有する生理食塩水を１２１℃、１５分間オートクレーブし、サンプル液として供試した。ラットは、６週齢のＳＤ系雄性ラットを用い、その腹腔内にサンプル液０．５ｍｌ～１ｍｌを投与後、３０分間放置し、右の後股足の甲の厚さをダイヤルゲージで測定した。次に１％λ－カラゲニン含有生理食塩水０．１ｍｌをラットの右後股足に皮下注射し、浮腫を惹起させ、λ－カラゲニン接種２、３、４、５時間後に、右の後股足の甲の厚さをダイヤルゲージで測定した。炎症率の算出は、λ－カラゲニン接種後の右後股足の甲の厚さから、接種前の厚さを引き、生理食塩水接種の場合の値を１００として、サンプル液の炎症率を算出した。
【００３０】結果を下記表３に示す。表３に示されるように、紅景天のエタノール抽出物は、λ－カラゲニンによる実験的炎症反応に対して著効が認められた。本試験は、プロスタグランジン生合成阻害剤であるインドメタシンのカラゲニン足浮腫に対する抑制作用と同様な効果を示し、実施例４の肥満細胞からのＬＴＢ₄ 放出抑制効果とともに紅景天の抗炎症能を証明するものである。
【００３１】
【表３】

【００３２】実施例６急性毒性（腹腔内投与）
実施例１で得られた紅景天の抽出乾燥物の腹腔内投与における急性毒性を調べた。すなわち、平均体重２３．７９ｇのＩＣＲ系マウスの雄（３２日齢）に、下記表４に示す各濃度水準当り６頭ずつを供試し、マウス腹腔内に紅景天抽出乾燥物の溶液を接種し、接種日から７日間観察し、死亡率及び生存率を算出した。プロビット法により算出したＬＤ₅₀は、3810 mg/kg体重であり、極めて低毒性であった。
【００３３】
【表４】

【００３４】実施例７急性毒性（経口投与）
実施例１で得られた紅景天のエタノール抽出乾燥物の経口投与における急性毒性を調べた。すなわち、平均体重２８．３１ｇのＩＣＲ系マウスの雄（５週齢）１０頭に、体重比に換算して5000 mg/kg体重となるようサンプルを調製し、141.55 mg/0.5 ml/ 頭ずつ胃ゾンデを用いて強制投与し、投与後の死亡数及び臨床所見を７日間観察した。その結果、5000 mg/kg体重の１用量で全頭生存し、死亡及び臨床的異常は認められず、無毒であった。
【００３５】
【発明の効果】以上のごとく、本発明によれば、低毒性で優れた抗アレルギー作用及び抗炎症作用を有する抗アレルギー剤が提供された。

【出願人】	【識別番号】５９６１１１６０１【氏名又は名称】株式会社ジャニフ・テック【識別番号】５９８０２１２６９【氏名又は名称】株式会社カルタン
【出願日】	平成１０年（１９９８）１月３０日
【代理人】	【弁理士】【氏名又は名称】谷川英次郎
【公開番号】	特開平１１－２１７３３３
【公開日】	平成１１年（１９９９）８月１０日
【出願番号】	特願平１０－３３９３５